Спосіб зниження рівня циркулюючих імунних комплексів

Спосіб зниження рівня циркулюючих імунних комплексів, який включає використання біологічно активної речовини, який відрізняється тим, що як біологічно активну речовину використовують субкомпонент першого компонента комплементу Clq, додатково фіксують його на поверхні ліпосом і вводять парентерально у кровообіг Винахід належить до медицини, а більш конкретно - до імунологи і може бути використаний для зниження рівня циркулюючих імунних комплексів Відомо, ЩО при багатьох захворюваннях підвищується рівень циркулюючих імунних комплексів, що несприятливо впливає на перебіг захворювань як унаслідок безпосереднього ушкодження тканин, так і в зв'язку з імуносупресією (Л Йегер, Клиническая иммунология и аллергология, М Медицина , і990, т 1, 527 с ) ВІДОМІ способи, що знижують рівень циркулюючих імунних комплексів за рахунок стимуляції імунокомпетентних клітин, наприклад, введенням левамізолу До їх недоліків можна віднести те, що в багатьох випадках імунокомпетентні клітини набувають рефрактерності до дії стимуляторів Описані способи зниження рівня циркулюючих імунних комплексів шляхом екстракорпоральної сорбції, але вони характеризуються значною коштовністю і складністю застосування, яке пов'язано з необхідністю виготовлення колонки сорбенту і перфузм колонки кров'ю хворого (Лопаткин Н А , Ю М Лопухин Эфферентные методы медицина, 1989, М Медицина, 352 с ) Значно простіші і швидкі в застосуванні способи, що реалізуються шляхом введення в організм біологічно активних речовин Найбільше близьким до способу, що заявляється, є введення лактозильованого білка А стафілокока (Патент на винахід 29689 А -15 11 2000, Білозоров О П , Шуляк Л М , Мавров І І Сполука, що прискорює виведення імунних комплексів) Для його реалізації білок А ХІМІЧНИМ ШЛЯХОМ ковалентно зв'язують з лактозними групами в КІЛЬКОСТІ 5 і більше на одну молекулу білка А і отриману сполуку вводять у кровообіг Проте використання лактозильованого білка А стафілококу може викликати імунологічну реакцію на гетеролопчну речовину - білок А бактерійного походження і привести до небажаних ускладнень Усе це обмежує можливість його використання в КЛІНІЦІ В основу винаходу покладено задачу попередження ускладнень, пов'язаних з можливою імунологічною реакцією на введену чужеродну біологічно активну речовину, яка знижує рівень циркулюючих імунних комплексів Задача, яка покладена в основу винаходу, вирішується тим, що у відомому способі зниження рівня циркулюючих імунних комплексів з кровообігу, який включає використання біологічно активної речовини, згідно з винаходом в якості біологічно активної речовини використовують субкомпонент першого компонента комплементу Clq, додатково фіксують його на поверхні ліпосом і вводять його парентерально у кровообіг Ознаками винаходу, що відрізняють його від прототипу - введення лактозильованого білка А стафилококк є використання в якості біологічно активної речовини субкомпонента першого компонента комплемента Clq, який додатково фіксується на поверхні ліпосом з наступним введенням у 00 00 (О 00 48688 кровообіг Наявність причинно-слідчого зв'язку між істотними ознаками і досягнутими технічними результатами підтверджується даними експериментального дослідження , яке показало, що введення ліпосом, модифікованих згідно з описаним вище, не тільки знижує рівень циркулюючих імунних комплексів , але і не викликає небажаних імунологічних реакцій Для визначення спроможності Clq, зв'язаного з ліпосомами, виводити циркулюючі імунні комплекси, викликали у мишей імунокомплексну хворобу введенням внутришньочеревно 1 мг бичачого сироваткового альбуміну через день протягом 3 тижнів Потім внутришньовенно вводили тваринам Clq, зв'язаний з ліпосомами, в дозі 150 мкг, після чого через 20 і 40 хвилин визначали вміст циркулюючих імунних комплексів у крові твердофазним імуноферментним методом (Белозоров А П , Лаб дело,1989, п 3, с 24-26 ) Отримані показники порівнювали з вихідним рівнем циркулюючих імунних комплексів і показниками тварин, яким вводили фізіологічний розчин Для визначення циркулюючих імунних комплексів на полістиролові планшети фіксували очищений препарат Clq інкубацією протягом 18 часів при 4°С, ВІЛЬНІ сайти зв'язування забивали кінським сироватковим альбуміном, після чого вносили в лунки досліджувані зразки сироватки, розведені в 20 раз розчином, що містить 0,01 МЕДТА, 0,05% твін-20 і 0.05М забуференого фізіологічного розчину Після відмивання інкубували в лунках кон'югат проти IgG миші з пероксидазою хрону Після відмивання визначали пероксидазну активність субстратно-буферною сумішшю, яка вміщувала офенілендіамш (0,5мг/мл), 0.07М цитратний буфер із рН 4,9 і перекис водню У таблиці приведені результати, отримані при введенні мишам ліпосом (препарату ЛІПІН), проінкубованого з Clq, виділеним з сироватки людини (Белозоров А П , Лаб дело,1989, п 3, с 24 - 26) Контрольним тваринам внутришньовенно замість Clq, фіксованого на лтосомах, вводили фізіологічний розчин Отримані результати свідчать про вірогідне зниження рівня циркулюючих імунних комплексів через 20 хвилин після внутрішньовенного введення навантажених Clq ліпосом На відміну від засобів, які стимулюють імунокомпетентні клітини, запропонований метод включає додатковий шлях видалення циркулюючих Таблиця Вплив введення навантажених Clq ліпосом на рівень циркулюючих імунних комплексів у крові ( у одиницях оптичної густини Е 492) п Вихідний Дослід 5 1,30 ±0,02 Контроль 5 1,45 ±0,05 * вірогідність різниці середніх дослідних і контрольних груп вагу в умовах блокади функцій імунокомпетентних клітин В експериментах in vitro вивчали здібність ліпосом, нагруженних Clq, зв'язувати імунні комплекси Для цього отримували штучні імунні комплекси, до складу яких входили IgG людини і антитіла до IgG, мічені пероксидазою хрону Імунні комплекси витримували із Clq, фіксованим на ліпосомах (ЮОмкг на 2мл 5% суспензії ліпосом), протягом 15 хвилин, після чого осаджували ліпосоми ультрацентрифугуванням при 100 000д і визначали вільну і зв'язану з ліпосомами пероксидазну активність Було виявлено, що навантажені Clq ліпосоми активно зв'язують імунні комплекси Після 15 хвилин інкубації імунних комплексів, мічених пероксидазою хрону, в надосадку зоставалось вільними лише 4% від загальної КІЛЬКОСТІ імунних комплексів Ліпосоми без фіксованого Clq також виявляли здібність зв'язувати імунні комплекси, але вона була виражена менше, ніж у ліпосом, навантажених Clq Отримані дані дозволяють вважати, що механізм дії запропонованого способу включає вибіркову фіксацію імунних комплексів на Clq, зв'язаному з ліпосомами Цілком вірогідно, що при цьому проявляється підвищена спорідненість Clq, фіксованого на межі розділу фаз, до імунних комплексів (Белозоров А П , Характеристика взаимодействия IgG и IgA иммунных комплексов с твердофазным Clq /Вестник проблем биологии и мед -1998 - в 20 хвилин 40 хвилин 1,1 ±,03* 1,36 ±0,05 1,43 ±0,04 1,44 ±0,06 р < 0,05 імунних комплексів Це має пере 15 - с 26 - 28) Далі відбувається транспорт ліпосом у клітини печінки, що взагалі характерно для більшості ліпосом (Грегориадис Г Липосомы как носители лекарств Развитие и будущие концепции - В кн Липосомы в биологических системах М Медицина, 1983, с 36 - 39 ) при цьому до клітин печінки переносяться і фіксовані на ліпосомах імунні комплекси Протягом експериментів не було виявлено ознак небажаних імунологічних реакцій на введення ліпосом з адсорбованим на них Clq Можливість розвитку імунологічних реакцій на введення ліпосом з адсорбованим на них Clq виключається ще й тим, що Clq є звичайним компонентом крові людини і може знаходитися в ній або як вільна молекула, або як частина більш складного комплекса - першого компонента комплементу СІ Він може також зв'язуватись із специфічними рецепторами на поверхні імунокомпетентних клітин, що моделюється при фіксації Clq на ліпосомах Одночасно з цим необхідно відзначити, що в якості ліпосом використовували препарат ЛІПІН, дозволений для КЛІНІЧНОГО застосування і не викликаючий небажаних імунологічних реакцій після введення Таким чином, запропонований спосіб забезпечує спрямований транспорт імунних комплексів із 5 48688 крові в клітини печінки, де відбувається їхнє руйнування, і не викликає небажаних імунологічних ускладнень ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71