Спосіб оцінки ефективності лікування нефропатії на фоні артеріальної гіпертензії (в експерименті)

Спосіб оцінки ефективності лікування нефропатії на фоні артеріальної гіпертензії (в експерименті) шляхом проведення морфометричного ана 3 54578 4 морфометричного аналізу гістохімічних препаратів дять з використанням фотопластинок «для ядердо та після лікування бісопрололом та тіотриазоліних досліджень». Об'єктами морфометричного ном та оцінють ефективність препаратів при нораналізу були: площа ниркового тільця (НТ), підрамалізації показників. хована на напівтонких зрізах, забарвлених за Однак цей спосіб має певні недоліки: він має Hayat, за допомогою напівавтоматичного принизьку інформативність і малу чутливість, потрестрою обробки графічних зображень. Для морфобує тривалого виконання та незручний у викорисметричних досліджень ультраструктурних елементанні, не враховує вплив препаратів на стан нирок, тів використовують програму «Органела», немає морфологічних досліджень ультраструктури розроблену на базі лабораторії електронної мікронирок за умов лікування бісопрололом та тіотриаскопії Інституту проблем патології при НМУ імені золіном для з'ясування їх ефективності. О.О.Богомольця. Визначають об'ємну та кількісну Задача, яка вирішується способом, що заявщільність, площу і фактор форми цитотрабекул ляється, полягає у розробці способу корекції неф(ЦТ) та цитоподій (ЦП) подоцитів, а також об'єм та ропатії на фоні артеріальної гіпертензії в експерикількість останніх у одиниці об'єму ниркового тільменті шляхом призначення лікарського ця. Отримані дані оцінюють статистично за параметаболітного препарату тіотриазоліну та антигіметричним коефіцієнтом Ст'юдента та непараметпертензивного препарату бісопрололу та встановричним методом Колмогорова-Смірнова за ленні показника, що дозволить проконтролювати допомогою програмного забезпечення Statistica for ефективність корекції гіпертензивної нефропатії та Windows 6.0 (Microsoft Corporation, USA) і покращити структурно-функціональний стан нирок GraphPad Prizm 4 (GraphPad Software Inc., USA). за умов артеріальної гіпертензії. По кожному із показників обчислюють середнє Технічний результат, що досягається, полягає значення та стандартну похибку для кожної з піду підвищенні ефективності лікування нефропатії на дослідних тварин. На цій основі одержували об'єфоні артеріальної гіпертензії. днані показники для кожної групи тварин. Поставлена задача вирішується тим, що у віМікроскопічне дослідження нирки гіпертензивдомому способі, шляхом проведення морфометних щурів показало, що застосування бісопрололу ричних досліджень структури нирок до та після та тіотриазоліну у щурів III групи протягом 90 діб лікування бісопрололом та тіотриазоліном, згідно не запобігає розвитку комплексу патологічних змін корисної моделі, визначають площу ниркових тіу нирковій структурі. Звертає увагу наявність оселець, об'ємну та кількісну щільність, площу і факредкових набрякових змін у стромі нирок. Клубочтор форми цитотрабекул та цитоподій подоцитів; ки варіюють за розміром, розповсюджені гіпертоб'єм та кількість останніх у одиниці об'єму ниркорофовані гломерули з повнокровними капілярами. вого тільця до та після лікування протягом 90 діб, Це підтверджується і морфометричним аналізом. одержані результати порівнюють з контролем і при Встановлено, що, хоча середня площа зрізу клунормалізації показників оцінюють ефективність бочків, яка дорівнює (522,3 31,0)х102мкм2, і не лікування. досягає контрольної величини, вона значуще пеСпосіб здійснюється наступним чином: ребільшує показник у тварин без лікування (табл.). Досліди проводять на 45 експериментальних Аналіз розподілу клубочків за цим показником в щурах 6-ти місячного віку, які були розподілені на свою чергу свідчить, що після фармакотерапії бі3 групи: І група - 17 контрольних щурів нормотенсопрололом та тіотриазоліном в нирках щурів не зивної лінії WKY (Wistar-Kyoto rats), II група - 15 спостерігається дрібних, атрофованих клубочків, щурів лінії СІСАГ (спадково індукована стресом які були характерні для нелікованих тварин, а кільартеріальна гіпертензія), III група - 13 щурів лінії кість крупних форм збільшена. СІСАГ, які одержували бісопролол (20 мг/кг) та В окремих клубочках виявляються ділянки збітіотриазолін (50 мг/кг). Препарати розчиняють у льшення об'єму порожнини капсули, виявляються воді, застосовують per os протягом 90 діб, додаютакож ознаки її набряку, ущільнення та склерозучи одноразово щоденно до їжі. вання. Проте слід відмітити, що прояви периглоДля визначення якості лікування нефропатії на мерулярного склерозу та явища фібробластної фоні артеріальної гіпертензії тіотриазоліном та проліферації значно менші, ніж у тварин до лікубісопрололом на морфологічний стан нирок здійсвання бісопрололом та тіотриазоліном. У стінці нюють електрономікроскопічне дослідження шмаканальців спостерігаються ознаки гідропічної дисточків тканини нирок. Фіксацію матеріалу провотрофії, в інтерстиції - набрякові зміни, подібні до дять розчином 2,5 % глютарового альдегіду на змін у гіпертензивних щурів до терапії. какодилатному буфері з дофіксацією в 1 % розчині При електрономікроскопічному дослідженні осмієвої кислоти. Зневоднюють у спиртах 70 %, 80 структурних компонентів фільтраційного апарату %, 90 %, 100 % концентрації та ацетоні. Заливанефрону гіпертензивних щурів 6-місячного віку, які ють в суміш епон-аралдит, згідно загальноприйняотримували препарат бісопролол та тіотриазолін в тій методиці [2]. Напівтонкі та ультратонкі зрізи з якості гіпотензивного лікування протягом 90 діб, отриманих блоків виготовляють на ультратомах виявлено, що ультраструктурна характеристика LKB III (Швеція) та Reihart (Швеція). Напівтонкі нирок виявила кращу збереженість структурних зрізи забарвлюють метиленовим синім, толуїдинокомпонентів у порівнянні із гіпертензивними щуравим синім, основним фуксином та методом Hayat. ми до лікування. Ультратонкі зрізи контрастують 2 % розчином ураПривертає увагу краща збереженість будови нілацетату та цитратом свинцю. Препарати досліподоцитів та їх відростків, хоча і присутні окремі джують під електронними мікроскопами ЕВМгрупи клітин із ознаками дистрофічних змін. Подо100БР та ПЕМ-125К. Фотодокументування провоцити містять велике ядро круглої форми із інвагі 5 54578 6 націями нуклеоплазми та переважанням еухромаКраща збереженість ультраструктурної будови тину. Цитоплазма нерівномірної електронної щільспостерігається і у відростках подоцитів. Цитотраності, ознаки набряку не спостерігаються, в ній бекули майже не містять органел, цитоподії щільвизначаються органели з ознаками активних біоно прилягають основою до гломерулярної базальсинтетичних процесів. Спостерігається велика ної мембрани, у фільтраційних щілинах між якими кількість дрібних круглих мітохондрій в тілі подоцимістяться діафрагми. тів переважно однотипної ультраструктурної будоЗміни цитоподій подоцитів представлені вогви. нищевим злиттям ніжкових відростків на гломеруДо позитивного впливу бісопрололу та тіотрилярній базальній мембрані, при чому діафрагми у азоліну на енергетичний апарат подоцитів можна фільтраційних щілинах в таких випадках відсутні. віднести добру збереженість зовнішньої мембрани Слід відмітити, що відкладання міозину спостерімітохондрій, появу концентрично розташованих гається у значно меншій кількості у цитотрабекукрист, ділянок, де чітко розрізняються кристи та лах і цитоподіях, ніж у щурів СІСАГ до лікування. міжкристний простір. Зустрічаються також органеДілянки відшарування цитоподій взагалі не реєстли з ознаками набряку та гіпертрофії з локально руються. лізованим матриксом, проте у меншій кількості ніж Морфометричний аналіз показав, що площа у експериментальних тварин до лікування. Відміцитотрабекул та цитоподій в нирках лікованих гічаються поодинокі зруйновані мітохондрії із пропертензивних щурів дорівнюють 573±11х10-2 мкм2 світленим матриксом, залишками крист і розшарута 13,43±0,48х10-2 мкм відповідно, і статистично не ванням зовнішньої мембрани. Вміст відрізняються від аналогічних показників в контроелектонощільного матеріалу по типу мієліноподіблі (табл.). Статистично однотипними залишаються ного перетворення у подоцитах не виявлений в і показники об'ємної та кількісної щільностей цитожодному спостереженні. Ендоплазматична сітка та трабекул і цитоподій (табл.). Тобто, не дивлячись комплекс Гольджі функціонально активні, про що на присутність локальних пошкоджень ультраструсвідчать їх розширені канальці. Після терапії в ктури гломерул, можна припустити, що їх поширеподоцитах спостерігається більша, ніж у нелікованість не настільки значна, щоб позначитися на них тварин, кількість рибосом та полісом. кількісних показниках. Таблиця 1 Кількісні показники, що характеризують подоцити у нирках 6-ти місячних щурів з артеріальною гіпертензією та після лікування її бісопрололом (Б) та тіотриазоліном (Т). Контроль АГ Б+Т Контроль АГ Б+Т Площа НТ * 102 мкм2 608,7±29,1 375,5±37,8* 522,3±31,0* 608,7±29,1 375,5+37,8* 522,3±31,0* Об'ємна щільність ЦТ, % 11,12±1,9 9,70±1,1 10,39±2,42 3,19±0,39 4,16±0,23 3,74±0,35 У гломерулярній базальній мембрані щурів, які отримували бісопролол та тіотриазолін, спостерігаються позитивні зміни після лікування, для неї не характерні ділянки значного потовщення і розшарування структури, яке було притаманне щурам із АГ, спостерігається її нормальна трьохшарова будова і товщина, як у нормотензивних щурів. Структурні особливості гломерулярних гемокапілярів полягають у переважанні судин із збільшеним діаметром просвіту. Вони вистелені стоншеним ендотелієм, при чому зустрічаються як діафрагмовані, так і недіафрагмовані фенестри, що чергуються з вип'ячуваннями цитоплазми у вигляді мікроклазматозних виростів. Клітини мають овальні ядра з переважанням еухроматину, також зустрічаються ядра неправильної форми, яку надають численні інвагінації нуклеарної оболонки, в яких переважає гетерохроматин. У парануклерній зоні і в периферійних ділянках ендотеліоцитів розташовуються мітохондрії різної форми і величини та гетерогенні за своєю ультраструктурою. Частина мітохондрій містить добре структуровану зовнішню мембрану, чіткі кристи та електронопрозорий матрикс. Канальці гранулярної Кількісна щільність ЦТ, * 10-2/мкм3 1,35±0,14 1,31±0,39 1,16±0,57 63,9±8,7 65,1±7,6 55,9±5,3 Площа ЦТ 102 мкм2 585±16* 657±10 573±11 11,51±0,37 15,32±0,51* 13,43±0,48 Фактор форми ЦТ 0,53±0,02 0,58±0,01 0,59+0,01* 0,51±0,01 0,43±0,01 0,49±0,01 ендоплазматичної сітки і комплекса Гольджі розширені, лізосоми майже не зустрічаються. Явища набряку, які були характерними для гіпертензивних щурів, не спостерігаються у цій групі спостереження. Варіює і вміст просвіту у різних клубочкових гемосудинах, у деяких капілярах він прозорий, у інших - заповнений дрібнодисперсним матеріалом середньої електронної щільності. Подекуди у просвіті спостерігаються форменні елементи крові, відшарування частин ендотеліоцитів до просвіту капіляру майже не реєструється. Їх кількість незначна, в інших - периферійні зони містять достатню кількість мікропіноцитозних везикул, що є ознакою активного трансендотеліального транспорту речовин. Таким чином, сумісне застосування бісопрололу та тіотриазоліну здійснює позитивний вплив на фільтраційний апарат клубочка нирок за умов гіпертензивної нефропатії. Запропонований метод досить точний для оцінки ефективності лікування гіпертензивної нефропатії бісопрололом та тіотриазоліном в експерименті і може бути рекомендований для оцінки ефективності лікування іншими лікарськими засобами. 7 54578 8 Використана література: 4. Патент України №41328, А61КЗЗ/00, 1. Геруш О.В. Тіотриазолін і функціональний А61К36/00, G01N15/00. Спосіб оцінки ефективності стан нирок / О.В. Геруш, І.В. Геруш // «ХИСТ» Вселікування артеріальної гіпертензії (в експерименті) укр. мед. журн. молодих вчених. - 2005. - №7. / Р.С. Довгань, Л.О. Стеченко, Т.П. Куфтирева, I.С. С.87. Чекман - Національний медичний університет іме2. Карупу В.Я. Электронная микроскопия / В.Я. ні О.О. Богомольця. Опубл.12.05.2009, Бюл. № 9, Карупу // Киев: Вища школа, 1984.-208 с. 2009 р. 3. Мазур И.А. Метаболитотропные препараты / 5. Zhou X. Analogy oh cardiac and renal И.А. Мазур, И.С. Чекман, И.Ф. Беленичев и соавт. complications in essential hypertension and aged //. - Запорожье. - 2007. - 309 С; SHR- or L-NAME/SHR / X. Zhou, E. D. Frohlich // Medical chemistry. - 2007. – Vol.3-P.61-65. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601