Спосіб діагностики глютенової ентеропатії

Спосіб діагностики глютенової ентеропатії, що включає проведення гістологічного дослідження з використанням рутинного забарвлення матеріалу гематоксилін-еозином, визначення наявності міжепітеліальних лімфоцитів та проліферації ентероцитів крипт, який відрізняється тим, що додатково проводять імуногістохімічне дослідження біоптату слизової оболонки дванадцятипалої кишки з моноклональними антитілами до Т-лімфоцитів 3 кості міжепітеліальних лімфоцитів, фенотипу лімфоцитів, їх локалізації, індексу проліферації ентероцитів крипт ворсин слизової оболонки дванадцятипалої кишки, що дозволяє судити про наявність глютенової ентеропатії залежно від стадії патологічного процесу, а отже підвищити точність діагностики та призначати відповідний курс терапевтичних заходів, що сприяє зменшенню ускладнень, тобто дозволяє досягти очікуваного технічного результату. Поставлена задача рішається тим, що в способі діагностики глютенової ентеропатії, що включає проведення гістологічного дослідження з використанням рутинного забарвлення матеріалу гематоксилін-еозином, визначення наявності міжепітеліальних лімфоцитів та проліферації ентероцитів крипт, згідно корисної моделі, додатково проводять імуногістохімічне дослідження біоптату слизової оболонки дванадцятипалої кишки з моноклональними антитілами до Т-лімфоцитів та моноклональними антитілами Кі-67, обчислюють індекси експресії CD3+ лімфоцитів, CD8+ лімфоцитів, індекс проліферації Кі-67 ентероцитів, та при значенні індексів CD3+ і CD8+ від 30% до 70%, а індексу Кі-67 від 10% до 15% судять про наявність інфільтративної стадії глютенової ентеропатії, при величині індексів CD3+ і CD8+ 30-70% та індексу Кі-67 - 16-50% судять про наявність гіперпластичної стадії глютенової ентеропатії, при величині індексів CD3+ і CD8+ у межах 70 - 80% і індексу Кі67 у межах 50-70% судять про наявність атрофічної стадії глютенової ентеропатії, а при величині індексу експресії СD3+лімфоцитів у стромі 30-70%, індексу експресії СБ8+лімфоцитів у стромі 5-10% та індексу проліферації Кі-67 ентероцитів 10-30% судять про наявність хронічного дуоденіту. Між сукупністю суттєвих ознак заявляемого способу і технічним результатом, який може бути досягнутий, проявляється наступний причиннонаслідковий зв'язок: додаткове проведення імуногістохімічного дослідження слизової оболонки дванадцятипалої кишки з моноклональними антитілами та визначення індексів експресії CD8+ лімфоцитів і CD3+ лімфоцитів, індексу проліферації Кі-67 ентероцитів дозволяє при певних їх значеннях судити про наявність глютенової ентеропатії залежно від стадії патологічного процесу, що в свою чергу дозволяє значно покращити морфологічну діагностику глютенової ентеропатії та провести диференційну діагностику з хронічним дуоденітом, що сприяє розробці адекватних принципів патогенетичної терапії, профілактиці ускладнень, а також оцінки ефективності лікування. Спосіб діагностики глютенової ентеропатії полягає в наступному. Хворому з диспептичними розладами та анемією неясної етіології проводять відеоендоскопію з використанням технології високого оптичного збільшення і високого дозволу з режимом вузькоспектральної візуалізації, досліджують стан ворсинчастих структур слизистої оболонки дванадцятипалої кишки і проводять топічний забір гістологічного матеріалу змінених ділянок. Далі проводять гістологічне дослідження за допомогою світлової мікроскопії за стандартною 57532 4 методикою із забарвленням матеріалу гематоксиліном і еозином. При цьому можуть бути виявлені кілька типів патологічних процесів, які мають специфічну морфологічну картину. Потім проводять імуногістохімічне дослідження біоптату слизової оболонки дванадцятипалої кишки за стандартною методикою з використанням парафінових блоків і реактивів компанії DAKO з моноклональними антитілами до CD8+ лімфоцитів - Clone C8/144B, CD3+ лімфоцитів - Clone F7.2.38, моноклональними антитілами Кі-67 - Clone MIB-1 і системи візуалізації FLEX, - на аутостейнері фірми DAKO. Фотографування здійснюють цифровою камерою OLYMPUS С 5050Z, установленою на мікроскопі OLYMPUS CX 41. Оцінку рівня експресії CD8+ лімфоцитів, CD3+ лімфоцитів і індексу проліферації Кі-67 проводять з урахуванням інтенсивності забарвлення і розподілу моноклональних антитіл у процентному еквіваленті. Обчислюють Індекси експресії CD8+ лімфоцитів, CD3+ лімфоцитів та за їх величиною судять про наявність міжепітеліальних лімфоцитів та лімфоцитів у стромі. Обчислюють індекс проліферації Кі-67 ентероцитів та за його величиною судять про наявністьпроліферативної активності в ентероцитах крипт ворсин. На підставі одержаних результатів диференціюють і діагностують стадію глютенової ентеропатії і призначають відповідну терапію. При значенні індексів експресії CDS+лімфоцитів, CD3+ лімфоцитів від 30% до 70%, а індексу проліферації Кі-67 ентероцитів від 10% до 15% судять про наявність інфільтративної стадії глютенової ентеропатії. При величині індексів експресії СD8+лімфоцитів, CD3+ лімфоцитів від 30% до 70% та індексу проліферації Кі-67 ентероцитів від 16% до 50% судять про наявність гіперпластичної стадії глютенової ентеропатії. При величині індексів експресії СD8+лімфоцитів, CD3+ лімфоцитів у межах 70 80% і Індексу проліферації Кі-67 ентероцитів у межах 50-70% судять про наявність атрофічної стадії глютенової ентеропатії. При величині індексу експресії СD3+лімфоцитів у стромі від 30% до 70%, а індексу експресії СБ8+лімфоцитів у стромі від 5% до 10% і величині індексу проліферації Кі-67 ентероцитів 10-30% судять про наявність хронічного дуоденіту. Застосування даного способу діагностики дозволяє здійснювати належну оцінку морфологічного, фенотипового та проліферативного стану слизової оболонки дванадцятипалої кишки та скоректувати патогенетичну терапію залежно від одержаних результатів. Даний спосіб був використаний у 324 пацієнтів. У 197 пацієнтів було діагностовано хронічний дуоденіт різного ступеня активності запалення. Індекс експресії CD3+ лімфоцитів в стромі був у межах 30-70%. Індекс експресії CD8+ лімфоцитів у міжепітеліальній зоні і стромі був у межах 5%-10%. 5 Індекс проліферації Кі-67 в ентероцитах крипт був у межах 10-30%. У 127 було діагностовано глютеновая ентеропатія різної стадії залежно від загальноприйнятої класифікації Marsh. У 67 пацієнтів діагностована інфільтративна стадія глютенової ентеропатії. Індекс експресії CD8+лімфоцитів у міжепітеліальній зоні був у межах 30-70%, в стромі - у межах 5%-10%. Індекс проліферації Кі-67 ентероцитів склав 10-15%. Високий відсоток CD8+ лімфоцитів і низький індекс проліферації Кі-67 ентероцитів свідчать на користь інфільтративної стадії глютенової ентеропатії. У 38 пацієнтів була діагностована гіперпластична стадія глютенової ентеропатії, основною ознакою якої є не тільки наявність міжепітеліальних лімфоцитів, а й проліферація епітелію крипт. При цьому індекс проліферації Кі-67 ентероцитів склав 16-50%. Індекс експресії CDS+лімфоцитів у міжепітеліальній зоні був у межах 30-70%, а в стромі від 5% до 10%. У 22 пацієнтів діагностована атрофічна стадія глютенової ентеропатії. При цьому спостерігалась висока експресія CD8+ міжепітеліальних лімфоцитів, тобто індекс експресії CD8+ був від 70% до 80%, в стромі -30 - 50%, а індекс проліферації Кі67 ентероцитів склав 50 - 70%. Пацієнтам залежно від одержаних результатів була призначена відповідна терапія. Віддалені результати свідчать про ефективність проводимо!" діагностики. Грунтуючись на певних особливостях патогенезу і причинах утворення глютенової ентеропатії, у лікарській тактиці слід базуватися на своєчасній діагностиці інфільтративної і гіперпластичної стадій глютенової ентеропатії та проведенні необхідної терапії. Це дозволить, коли процес ще оборотний, уникнути виникнення ускладнень. Заявлений спосіб діагностики глютенової ентеропатії, підтверджується наступними прикладами. Приклад 1. Хвора А., вік 22 роки. Клінічна картина захворювання, попередні результати обстежень, вимагають проведення диференційної діагностики між хронічним дуоденітом і глютеновою ентеропатією. Після проведення діагностики запропонованим способом були одержані наступні результати. Результати гістологічного дослідження із забарвленням гематоксиліном і еозином: фрагменти слизистої дванадцятипалої кишки орієнтовані. Архітектоніка ворсин збережена. Співвідношення висоти ворсини до крипти 3:1 і вище. Ентероцити збережені. Візуалізуються одиничні міжепітеліальні лімфоцити. В стромі власної пластинки слизистої - помірно-виражена лімфоцитарна інфильтрація. Для диференційної діагностики хронічного дуоденіту і глютенової ентеропатії рекомендовано імуногістохімічне дослідження. Результат імуногістохімічного дослідження: індекс проліферації Кі-67 -10% в ентероцитах крипт норма, індекс експресії CD3+ - 50% міжепітеліальні лімфоцити, 5% в лімфоцитах строми, індекс експресії CD8+ -50% в епітелії, 5% - в лімфоцитах строми. 57532 6 Заключения: Гістологічні та імуногістохімічні ознаки відповідають інфільтративній стадії глютенової ентеропатії. З урахуванням одержаних даних пацієнту була призначена безглютенова дієта. Після проведеного лікування клінічні симптоми глютенової ентеропатії відсутні у 95% . Приклад 2. Хворий Я., вік 28 років. Клінічна картина захворювання у даного хворого, попередні результати обстежень, вимагають проведення диференційної діагностики змін у дванадцятипалій кишці з хронічним дуоденітом і глютеновою ентеропатією. Після проведення діагностики запропонованим способом були одержані наступні результати. Результати гістологічного дослідження із забарвленням гематоксиліном і еозином: фрагменти слизистої дванадцятипалої кишки орієнтовані. Архітектоніка ворсин збережена. Співвідношення висоти ворсини до крипти 3:1 і вище. Ентероцити збережені. Візуалізуються одиничні помірновиражена лімфоцитарна інфільтрація з домішкою нейтрофілів і еозинофілів, набряк строми ворсин, що є ознакою слабкоактивного хронічного дуоденіту. Для диференційної діагностики хронічного дуоденіту і глютенової ентеропатії рекомендовано імуногістохімічне дослідження. Результат імуногістохімічного дослідження: індекс проліферації КІ-67 -30% в ентероцитах крипт, індекс експресії CD3+ - 40% міжепітелІальнІ лімфоцити, 20% в лімфоцитах строми, індекс експресії CD8+ - 40% міжепітелІальнІ лімфоцити, 7% в лімфоцитах строми. Заключения: Гістологічні та імуногістохімічні ознаки відповідають гіперпластичній стадії глютенової ентеропатії на тлі слабковираженого хронічного дуоденіту. З урахуванням одержаних даних пацієнту була призначена безглютенова дієта. Після проведеного лікування клінічні симптоми глютенової ентеропатії відсутні у 82% . Приклад 3. Хворий У. вік 46 років. Клінічна картина захворювання і дані попередніх результатів вимагають проведення диференційної діагностики змін слизистої дванадцятипалої кишки з хронічним дуоденітом і глютеновою ентеропатією. Після проведення діагностики запропонованим способом були одержані наступні результати. Результати гістологічного дослідження із забарвленням гематоксиліном І еозином: Фрагменти слизистої дванадцятипалої кишки орієнтовані. Мають ознаки хронічного слабко активного дуоденіту з атрофією, співвідношення висоти ворсини до крипти 1:1, візуалізуються міжепітеліальні лімфоцити і десквамація ентероцитів, проліферація крипт ентероцитів, різке зменшення келихоподібних клітин, виражена лімфоцитарна інфільтрація в стромі з домішкою нейтрофілів і еозинофілів. Для диференційної діагностики хронічного дуоденіту і глютенової ентеропатії рекомендовано імуногістохімічне дослідження. Результат імуногістохімічного дослідження: індекс проліферації Кі-67 -60% в ентероцитах крипт, індекс експресії CD3+ - 60% міжепітеліальні лімфоцити, 10% в лімфоцитах строми, індекс експре 7 57532 сії CD8+ - 60% міжепітеліальні лімфоцити, 5% в лімфоцитах строми. Заключения: Патологічний процес відповідає атрофічній стадії глютенової ентеропатії. З урахуванням одержаних даних пацієнту було призначено безглютенова дієта. Після проведеного лікування клінічні симптоми глютенової ентеропатії відсутні у 68%. Застосування заявляемого способу дозволяє покращити диференційну діагностику глютенової Комп’ютерна верстка І. Скворцова 8 ентеропатії і сприяє розробці адекватних принципів терапії, а також профілактиці ускладнень і прогнозуванню рецидивів даної патології. Запропонований спосіб простий у застосуванні, є ефективним, не має побічної дії і може використовуватися для диференційної діагностики глютенової ентеропатії, дозволяє рекомендувати його до широкого поширення і використання в клінічній і патоморфологічній практиці. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601