Спосіб діагностики стану імунної системи

Винахід належить до медицини, а саме до імунології і може бути використаним для визначення порушень імунної системи у осіб що зазнають впливу несприятливих факторів навколишнього середовища. Відомий спосіб оцінки імунного статусу робітників, пов'язаних зі шкідливими леткими речовинами, який включає визначення показників клітинного (Т-лімфоцити, Т-хелпери) та гуморального (імуноглобуліни А та G ) імунітету і при комплексному зниженні величин даних показників на 10% відносно норми, робили висновок про порушення імунологічного статусу [1]. Недоліком даного способу являється - неможливість визначення активації імунокомпетентних клітин та їх функціонального стану, що перешкоджає об'єктивно оцінити імунний статус. Відомий спосіб кількісного визначення ступеню порушень імунного статусу у робітників промислових підприємств з несприятливою санітарно-промисловою та екологічною ситуацією шляхом визначення абсолютного вмісту лейкоцитів, лімфоцитів, Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів, N-кілерів, нейтрофільних гранулоцитів та імуноглобулінів А, G, М, розрахунку імунологічного індексу та визначення лімітуючого показника, за яким додатково визначають ступінь імунних порушень [2]. Недоліком даного способу являється - складність визначення лімітуючого показника та подальших розрахунків, що призводить до труднощів діагностики ступеню імунних порушень. Найбільш близьким до заявленого способу і прийнятого за прототип, являється спосіб діагностики імунологічного статусу шляхом визначення показників клітинного імунітету: абсолютної кількості лімфоцитів, процентного вмісту Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів, Т-хелперів та розрахунку інтегрального показника клітинного імунітету що характеризує функціональну активність клітинного імунітету за яким діагностують імунодефіцит та імунонапруженість [3]. До причин, що перешкоджають характеризувати рівень функціональної активності клітинного імунітету належить, відсутність визначення вмісту активованих лімфоцитів. В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб діагностики стану імунної системи після опромінення, шляхом визначення субпопуляцій імунної системи, що включає мічення клітин біологічно активними речовинами, інкубацію, аналіз оптичних характеристик, реєстрацію флюоресценції клітин за біофізичними показниками, аналіз параметрів клітинних структур за експресією активаційних антигенів, розрахунок індексу активації для визначення стану імунної системи, що забезпечить можливість виявити осіб групи ризику та своєчасно проводити їм відповідну імунокорекцію. Поставлена задача вирішується тим, що клітини периферичної крові мітять моноклональними антитілами до кластерів диференціації лімфоцитів, що включає, інкубацію, аналіз оптичних характеристик, реєстрацію флюоресценції клітин за біофізичними показниками, визначають процентний вміст лімфоцитів (CD45+14-) та субпопуляцій імунної системи, додатково визначають вміст активованих іммунокомпетентних клітин за експресією антигенів II класу гістосумісності (DR), рецепторів трансферину (CD 71) на лімфоцитах та інтерлейкіну - 2 (CD 25) на Т-хелперах і Т-супресорах, за даними показників розраховують індекс активації імунокомпетентних клітин, та діагностують стан імунної системи. Заявлений винахід здійснюється таким чином - в периферичній крові ліквідаторів аварії на Чорнобильській АЕС за допомогою методу проточної цитофлюориметрії визначають процентний вміст показників клітинного імунітету: лімфоцитів (CD45+14-), активованих Т-лімфоцитів (CD3+DR) та (CD 3+71+), Т-хелперів (CD 4+25+) та Тсупресорів (CD4-25+), В-лімфоцитів (CD3-DR+)Ta (CD3-71), По формулі ІА = (А1+А2+А3+А4+А5+А6)/А де, ІА - індекс активації; А1 - показник активованих Т-лімфоцитів (CD3+DR+); А2 - показник активованих Т-лімфоцитів (CD 3 +71+); А3 - показник активованих Т-хелперів (CD 4+25+); А4 - показник активованих Т-супресорів (CD 4-25+); А5 - показник активованих В-лімфоцитів (CD3-DR+); А6 - показник активованих В-лімфоцитів (CD3-71+); А - показник вмісту лімфоцитів (CD45+14-). Визначають індекс активації імунокомпетентних клітин, та діагностують стан імунної системи. При значенні індексу активації 0,5-1 діагностують норму, при значенні індексу активації > 1 напруженість імунітету, при значенні < 0,5 ослаблення специфічності імунітету, характерну для хронічних запальних процесів. Приклад 1 Учасник ліквідації аварії на Чорнобильській АЕС Г.М.Ф. 47 років, доза опромінення - 2,8Гр, діагноз дісциркуляторна енцефалопатія. Активовані Т-лімфоцити (CD3+DR+) - 5,63%; Активовані Т-лімфоцити (CD 3+71+) - 1,58%; Активовані Т-хелпери (CD 4+25+) - 3,39%; Активовані Т-супресори (CD 4-25+) - 0,20%; Активовані В-лімфоцити (CD3-DR+) - 35,0%; Активовані В-лімфоцити (CD3-71+) - 3,70%; Лімфоцити (CD45+14-) - 16,09% ІА- (5,63+1,58+3,39+0,20+35,0+3,70)/16,09=3,05 Висновок: індекс активації імунокомпетентних клітин становить 3,05, що говорить про напруженість імунної системи. Приклад 2 Учасник ліквідації наслідків аварії на Чорнобильській АЕС Н. А.А. 60p., доза опромінення -3Гр., діагноз дисциркуляторна енцефалопатія. Активовані Т-лімфоцити (CD3+DR+) - 8,79%; Активовані Т-лімфоцити (CD 3+71+) - 1,16%; Активовані Т-хелпери (CD 4+25+) - 1,54%; Активовані Т-супресори (CD 4-25+) - 0,49%; Активовані В-лімфоцити (CD3-DR+) - 8,27%; Активовані В-лімфоцити (CD3-71+) - 4,20%; Лімфоцити (CD 45+14-) - 52,46% IA=(8,79+1,16+1,54+0,49+8,27+4,20)/52,46=0,46 Висновок: індекс активації імунокомпетентних клітин становить 0,46, що говорить про ослаблення специфічності імунітету, характерну для хронічних запальних процесів. Приклад 3 Учасник ліквідації наслідків аварії на Чорнобильській АЕС К.А.Ф. 57p., доза опромінення - 3Гр., діагноз дисциркуляторна енцефалопатія. Активовані Т-лімфоцити (CD3+DR+) - 2,38%; Активовані Т-лімфоцити (CD 3+71+) - 0,41%; Активовані Т-хелпери (CD 4+25+) - 2,91%; Активовані Т-супресори (CD 4-25+) - 0,81%; Активовані В-лімфоцити (CD3-DR+) - 19,90%; Активовані В-лімфоцити (CD3-71+) - 0,59%; Лімфоцити (CD 45+14-) - 64,20% IA=(2,38+0,41+2,91+0,81+19,90+0,59)/64,20=0,42 Висновок: індекс активації імунокомпетентних клітин становить 0,42, що говорить про ослаблення специфічності імунітету, характерну для хронічних запальних процесів. Джерела інформації 1. Патент UA №5250, AG01N33/53, опубліковано 28.12.1994, Бюл. №7 2. Патент UA №38306, AG01N33/53, опубліковано 15.05.2001, Бюл. №4 3. Патент UA №17409, AG01N33/53, опубліковано 31.10.1997, Бюл. №5