Штам porcine teschovirus для удосконалення діагностики тешовірусних хвороб свиней

Реферат: Штам Porcine teschovirus для удосконалення діагностики тешовірусних хвороб свиней, депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за номером 488. UA 75115 U (12) UA 75115 U UA 75115 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до ветеринарної вірусології та біотехнології, являє собою штам тешовірусів свиней, який може бути використаний для виготовлення діагностичних препаратів. В Україні відомий виробничий штам "Дніпровський-34" вірусу ензоотичного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней для виготовлення імунобіологічних препаратів, який призначено для виготовлення вакцини та діагностичних наборів у реакції нейтралізації, реакції імунофлюоресценції та імуноферментному аналізі [Пат. 57372 Україна МПК (2011.01) C12N 7/00, А61К 39/125, А61Р 39/187 (2011.01), C12R 1/92 (2006.01). Штам Porcine teschovirus для виробництва ветеринарних імунобіологічних препаратів / Дерев'янко С.В., Бова Т.О., Сорока В.І., Бокун А.О., Божок Л.В., Бабіч Н.В.: Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН. - №и 2010 09325; заявл. 26.07.10; опубл. 25.02.11, Бюл. №4,-3 а]. Недоліком цього штаму є те, що в імунологічному відношенні він споріднений лише збуднику хвороби Тешена, який належить до 1-го серотипу тешовірусів свиней. Тешовіруси інших серотипів викликають енцефаломієліти, гастроентерити, пневмонії, порушення репродуктивної системи свиноматок (СМЕДІ: мертвонародження, муміфікація плодів, ембріональна смертність, безпліддя свиноматок) та інші хвороби. Тому застосування штаму "Дніпровський-34" тешовірусу 1-го серотипу обмежує діагностику тешовірусних хвороб свиней. В основу корисної моделі, що подається, поставлена задача одержати імунологічно домінуючий штам тешовірусів свиней нового серотипу для удосконалення діагностичних засобів. Поставлена задача досягнута шляхом виділення штаму "Т-3" Porcine teschovirus у культурі клітин СНЕВ із ректального змиву клінічно здорового 4-місячного поросяти. Штам "Т-3" Porcine teschovirus депоновано в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (вул. Донецька, 30, м. Київ) 03 листопада 2009 р. за реєстраційним номером 488. Штам "Т-3" тешовірусу свиней характеризується наступними ознаками та властивостями. Морфологічні ознаки. Віріони сферичної форми без зовнішньої ліпідопротеїдної оболонки, 6 розміром 28-30 нм, Mr 8,610 , мають ікосаедричний тип симетрії, плавучу густину в градієнті 3 густини хлористого цезію 1,34-1,35 г/см , коефіцієнт седиментації 150-160 S. Фізико-хімічні властивості. Вірус стійкий до дії ліпідорозчинників (ефіру, хлороформу), протеолітичного ферменту (трипсину), інгібіторів ДНК (актиноміцину D, 5-бром-2 дезоксиуридину), рН 2,0-11,0, до прогрівання в присутності двовалентних іонів магнію при 50 °C упродовж 1 години. Вірус інактивується 0,5 % розчином фенолу за 18 год., 3 % розчином гідроксиду натрію, 2 % розчинами формаліну, крезолової, сірчаної, азотної кислот за 1 год., при кип'ятінні - миттєво. Культуральні ознаки. Вірус культивується в перещеплюваних культурах клітин СНЕВ, ВНК21, РК-15, ПТП, у яких викликає цитопатичний ефект, що спостерігається в залежності від доз 3 вірусу через 24-72 годин, і накопичується в титрі 7,0-8,5 lg ТЦД50/см . In vivo вірус культивується на свинях. При інтрацеребральному зараженні накопичується в центральній нервовій системі в 3 титрі 3,5-4,5 lg ТЦД50/см . Патогенність. Механізм передачі аліментарний, поширений серед свинопоголів'я в Україні, не вірулентний для свиней. Стабільність біологічних властивостей. Штам вірусу стабільний і зберігає свої біологічні та антигенні властивості після 25-разового пасажування в культурі клітин СНЕВ. Антигенні властивості. У реакції віруснейтралізації антигенно не споріднений з жодним еталонним штамом тешо-, ентеровірусів свиней, константа нейтралізації гомологічною 3 сироваткою - 4,0 lg ТЦД50/см . Імуногенні властивості. Парантеральне введення вірусу стимулює утворення віруснейтралізуючих антитіл через 21 добу після введення в титрі 1:128. В організмі свиней також утворюються антитіла, які виявляються в реакціях зв'язування комплементу та преципітації, що забезпечує захист тварин при експериментальному зараженні. Умови зберігання. У нативному стані (вірусовмісна культуральна суспензія) вірус зберігається при температурі - 18 °C і нижче, у ліофілізованому при +2-8 °C упродовж 10 років і більше. Підтримання штаму проводиться шляхом репродукції на чутливих культурах клітин. Одержаний штам "Т-3" Porcine teschovirus використовується для виготовлення діагностичних засобів. Можливість здійснення корисної моделі підтверджується наступними прикладами. Приклад 1 Застосування штаму тешовірусу в наборі діагностикумів тешовірусних хвороб свиней у реакції нейтралізації. 1 UA 75115 U 5 10 15 20 25 30 Штам "Т-3" тешовірусу свиней накопичують у культурі клітин СНЕВ у титрі 7,5-8,5 lg 3 ТЦД50/см . Після очищення і концентрування вірус використовують для одержання гіперімунної сироватки на кролях з титром не менше 1:512. Для ідентифікації виділеного вірусу та виявлення віруснейтралізуючих антитіл у сироватках крові тварин у реакції нейтралізації використовують 100 ТЦД50 антигену та 10 нейтралізуючих доз гіперімунної кролячої сироватки до штаму "Т-3". До кожного із досліджуваних вірусів або 3 3 розведень сироватки крові об'ємом 0,5 см та вмістом у 0,1 см 100 ТЦД50 антигену (10 3 нейтралізуючих доз сироватки) додають по 0,5 см з вмістом у 0,1 см 10 нейтралізуючих доз сироватки (100 ТЦД50 антигену). Після витримки одержаної суміші при температурі 37 °C 3 3 упродовж 60-90 хв. по 0,2 см вносять в 2-4 пробірки, в які попередньо добавляють по 0,8 см підтримуючого середовища. Контрольні та дослідні пробірки інкубують при температурі 37 °C. Облік результатів здійснюють на 4-5 і 7-8 дні. Нейтралізація вірусу (сироватки) в указаних дозах свідчить про їх наявність у досліджуваному матеріалі. Приклад 2 Застосування штаму тешовірусу при виробництві набору діагностикумів тешовірусних хвороб свиней у реакції імунофлюоресценції. Ідентифікацію ізолятів вірусів проводять у мазках-відбитках мозочку, довгастого мозку, амонових рогів, нюхових луковиць, кори півкуль великого та грудної й поперекової відділів спинного мозку від загиблих або вимушено забитих у стадії парезу та паралічу хворих тварин. Мазки висушують на повітрі при кімнатній температурі, фіксують від 10 до 15 хв. при температурі 0-2 °C охолодженим до -15 °C ацетоном. На фіксовані препарати наносять робоче розведення позитивної сироватки до штаму "Т-3" тешовірусу свиней першого серотипу, на два негативної. Скельця інкубують упродовж 30 хв. при 37 °C у вологій камері. Препарати тричі промивають буферним розчином і вносять робоче розведення флюоресціюючого глобуліну. Потім предметні скельця витримують 25-30 хв. при 37 °C у вологій камері, промивають у трьох змінах буферу по 10 хв., ополіскують дистильованою водою і висушують на повітрі. Мікроскопія препаратів проводиться за допомогою люмінісцентного мікроскопа. У позитивних випадках виявляють специфічне світіння у вигляді яскраво-зеленої блискучої люмінесценції клітин при відсутності світіння на скельцях з негативною сироваткою. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 Штам Porcine teschovirus для удосконалення діагностики тешовірусних хвороб свиней, депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за номером 488. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2