Спосіб виготовлення біостимулюючого засобу з листків дуба

1. Спосіб виготовлення біостимулюючого засобу з листків дуба, зібраних по закінченні фази вегетації, що полягає в екстракції їх водою в спів 3 75870 4 Недоліком прототипу є низька концентрація в ються стрибкоподібно від декількох десятків до готовому продукті таніну і таніноподібних речовин, сотень разів, відбувається інтенсивне відділення що володіють радіопротекторною і антиокисною насамперед таніну і таніноподібних речовин з лисдією. тків дуба і крім того, підвищується водорозчинність В основу винаходу поставлено задачу в спомікроелементів, що знаходяться в розчині. собі виготовлення біостимулюючого засобу шляПриклад №1. хом зміни параметрів екстракції забезпечити одеПорівняльні дослідження прототипу і запропоржання засобу з більш високими біостимулюючим і нованого винаходу проводили шляхом вивчення радіопротекторним ефектами за рахунок підвиїхнього хімічного складу, біологічної активності і щення концентрації в готовому продукті таніну і технічних параметрів. таніноподібних речовин. Концентрації біоактивних агликонів і гликозиПоставлена задача вирішується тим, що в дів фенольних з'єднань визначали за гравіметричспособі виготовлення біостимулюючого засобу, з ною методикою, відносна кількість танінів і танінолистків дуба, зібраних по закінченні фази вегетації, подібних речовин оцінювали з використанням що полягає в екстракції їх водою в співвідношенні танінового тесту з FeCl3. 1:13-17 і упарюванні екстракту насухо, відповідно Біологічна активність засобу, що заявляється, і до винаходу екстракцію здійснюють шляхом досяпрототипу визначалася методом дріжджового кугнення критичних параметрів пари на лінії насильтивування на середовищі УЕРТ по швидкості чення протягом 2-3 хвилин. колонеутворення мікроорганізмів під впливом різЗначення критичного тиску знаходяться в мених концентрацій продуктів, що тестуються. Кільжах від 22,0 до 23,0кгс/см2, значення критичної кість мікроорганізмів визначали нефелометричним температури знаходиться в межах від 640 до 670К, методом. Були також проведені виміри тривалості а критичну масу визначають по формулі: їхнього виробництва і величини виходу кінцевого продукту. Результати експериментів приведені в Мкр п V, де таблицях 1-2. п - щільність водяних пар при критичних паЗ результатів досліджень видно, що кількість раметрах тиску і температури (кг/м3) таніну і таніноподібних речовин збільшилося на 7V - обсяг автоклава (м3). 8%, при цьому тривалість виготовлення знизилася Завдяки здійсненню зазначеного способу підна 30хв., а приріст клітинної маси збільшився на вищується концентрація таніну і таніноподібних 13-17%. Екстракцію проводили в автоклаві ємнісречовин у готовому продукті, що є основними тю 10л, при цьому маса сухих листків складала складовими біостимулюючого засобу. 0,1кг, маса джерельної води 1,95кг, що в сумі Подібний ефект досягається внаслідок того, 1,35кг відповідало критичній розрахунковій масі. що розчин у критичному стані на лінії насиченої Тиск в автоклаві знаходився в межах від 22,0 до пари цілком перетворюється в пару, при цьому 23,0кгс/см2 при температурі 640К до 650К. внаслідок збільшення теплопровідності, зменшення в'язкості, що в білякритичному стані збільшуТаблиця 1 Хімічний склад і технологічні характеристики прототипу і пропонованого засобу Прототип ++ Засіб, що заявляється, + Хімічний склад Сума фенольних Таніновий тест, % відсполук носно прототипу 4,23 100,0 4,5 107,1 Технологічні характеристики Тривалість виго- Вихід продукту товлення % 2г.30хв. 15,5 1г. 16,7 Осад % 1,2±0,1 0,5±0,1 + - у тривалість виготовлення засобу не входить час сушіння листків, оскільки вона залежить як від вологості листя, так і від умов сушіння /наприклад, вологості повітря/. ++ - усі виміри проводили в паралелях, величина довірчого інтервалу при дослідженнях хімічного складу була не більш 6% при Ρ=0,5%. Таблиця 2 Біостимулююча дія прототипу і засобу, що заявляється Найменування експерименту Контроль (дріжджі + середовище) Прототип 0,1% - розчин засобу 0,01% - розчин 0,001% - розчин Пропонований засіб 0,1% - розчин засобу 0,01%-розчин 0,001%-розчин Оптична щільність сумарна приріст 40 Приріст клітинної маси, % 65 55 53 25 15 13 62,5 37,5 32,5 72 61 58 7 6 5 80,0 52,5 45,5 5 75870 Приклад 2. У дослідах in vivo на білих безпородних мишах вивчали здатність засобу, що заявляється, індукувати утворення ендогенного інтерферону і фактора некрозу пухлини (ФНП). Препарат розводили дистильованою водою і вводили по 0,2мол перорально і внутрічеревно в концентрації 50 і 500γ на мишу. Через 6, 24, 48 і 72г. мишей декапитували й одержували плазму крові. Як контроль використовували плазму крові мишей, яким уводили відомий індуктор інтерферону - poly 1:C (50γ), індуктор ФНП - ліпополісахарид (LP8) "Sigma" - 10γ на мишу, фізіологічний розчин, а також прототип, розведений аналогічно засобу, що заявляється. Наявність інтерферону в плазмі крові визначали по пригніченню цитопатогенної дії тест-вірусу - вірусу везикулярного стоматиту (Штам Індіана) у дозі 100 ТЦД50 у культурі клітин, що перевиваються, L-929, вирощених у 96-ямкових культурних панелях. За титр інтерферону приймали величину, зворотну розведенню проби, при якому спостерігається 50% захист клітин від цитопатогенної дії тест-вірусу. Активність фактора некрозу пухлини в плазмі 6 визначали по цитолітичній дії на оброблених актиномицином-д (Serva), клітинах-мішенях 1-929, використовуючи спектрофотометричний тест із кристалічним фіолетовим. Цитотоксичний індекс розраховували по формулі: ЦІ (%)=ОПк-ОПо/ОПк 100%, де ОПк - оптична щільність у контрольних лунках, ОПо - оптична щільність у лунках з досліджуваними зразками. Як контроль при тестуванні ФНП використовували рекомбінантний - препарат ФНП - Рифналін виробництва НПО «Вектор», а також прототип, розведений аналогічно засобу, що заявляється. Результати досліджень приведені в таблицях 3 і 4. Таким чином, установлено, що засіб, що заявляється, володіє біостимулюючою активністю, викликає активну продукцію в організмі фактора некрозу пухлини, що робить його перспективним при комплексній терапії новоутворень. Крім того, відзначена здатність засобу викликати слабке і короткочасне утворення пізнього інтерферону. Таблиця 3 Наявність інтерфероноподібної активності в плазмі мишей при внутрічеревному введенні засобу, що заявляється Серія дослідів Прототип Засіб, що заявляється Poly I:C Фіз-н Концентрація препарату γ/мишу 50 500 50 500 50 6г.