Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до treponema pallidum (dia-sypн-о)

Реферат: Тест-система для одноетапного виявлення антитіл до Treponema pallidum (DIA-SYPH-o), в якій в складі імуносорбенту застосовуються рекомбінантні білки. Застосовується одноетапний аналіз антитіл до збудника сифілісу в сироватках крові з використанням рекомбінантних поліпептидів Тр17 і Тр47 аналогів білків Т. pallidum як в імуносорбенті, так і в кон'югаті, міченому пероксидазою, з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), що дає змогу визначати всі класи імуноглобулінів в досліджуваних зразках. UA 78416 U (12) UA 78416 U UA 78416 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для серологічної діагностики сифілісу. Відома тест-система для виявлення антитіл проти ВІЛ у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці сифілісу [1]. В основі тест-системи лежать рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів Treponema pallidum, засорбовані на твердій фазі полістиролових планшетів, а кон'югатом є моноклональні антитіла проти IgG людини, які взаємодіють з антитілами проти збудника сифілісу. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для одноетапного виявлення антитіл до Т. pallidum на основі рекомбінантних поліпептидів Тр17 і Тр47 аналогів білків Т. pallidum як в складі імуносорбенту, так і в кон'югаті, міченому пероксидазою, що дає змогу визначати всі класи імуноглобулінів в досліджуваних зразках. Поставлену задачу вирішують шляхом одноетапного аналізу з використанням рекомбінантних поліпептидів Т. pallidum в складі як імуносорбенту, так і кон'югату, міченого пероксидазою, з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), що дозволяє спростити процедуру постановки аналізу і скоротити час проведення аналізу. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до Т. pallidum в сироватці крові хворого С., 1990 року народження. Визначення проводять згідно з відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять у лунки планшета з фіксованими на ньому рекомбінантними поліпептидами Тр17 і Тр47 аналогів білків Т. pallidum досліджуваний матеріал від хворого для визначення наявності сифілісу та контрольні зразки (2 позитивних і 3 негативних) в буфері з кон'югатом - сумішшю рекомбінантних поліпептидів, мічених пероксидазою. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі 37 °С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають лунки вісім разів і вносять по 100 мкл розчину однокомпонентного проявника (субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 °С у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 50 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. При ОГ більше граничного значення досліджувана проба розцінюється як позитивна. Досліджений матеріал від хворого було ідентифіковано як позитивний на наявність сифілісу. Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи. Використовуючи пропоновану тест-систему і набір "РекомбиБест антипаллидум-суммарные АТ» [1], досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторах кожною тест-системою за описаною методикою. Обидві тест-системи показали однакові результати: з 20 позитивних сироваток всі зразки виявлено як позитивні, що складає 100 % чутливості. З 100 негативних сироваток виявилися справді негативними 100 (специфічність - 100 %). Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл до Т. pallidum. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Використана література 1. Инструкция по применению тест-системи "РекомбиБест антипаллидум-суммарные AT" Вектор-Бест, Новосибирск, 2011. 2. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 55 Тест-система для одноетапного виявлення антитіл до Treponema pallidum (DIA-SYPH-o), в якій в складі імуносорбенту застосовуються рекомбінантні білки, яка відрізняється тим, що застосовується одноетапний аналіз антитіл до збудника сифілісу в сироватках крові з використанням рекомбінантних поліпептидів Тр17 і Тр47 аналогів білків Т. pallidum як в імуносорбенті, так і в кон'югаті, міченому пероксидазою, з подальшим виявленням цього комплексу однокомпонентним проявником тетраметилбензидином (ТМБ), що дає змогу визначати всі класи імуноглобулінів в досліджуваних зразках. 1 UA 78416 U Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2