Спосіб одержання імунної сироватки проти поверхневих полісахаридів s. aureus

Реферат: Спосіб одержання імунної сироватки проти поверхневих полісахаридів S. aureus включає виготовлення антигенного препарату, імунізацію продуцентів антигеном і виділення із крові цільового продукту. Імунізацію проводять поверхневим полісахаридом, який підданий модифікації розчином NaOH протягом 16 годин. UA 79025 U (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ІМУННОЇ СИРОВАТКИ ПРОТИ ПОВЕРХНЕВИХ ПОЛІСАХАРИДІВ S. aureus UA 79025 U UA 79025 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до області медицини і імунології і може використовуватись в педіатрії, хірургії, травматології і інших відділеннях для діагностики наявності полісахаридної капсули у патогенних стафілококів. Збудників сепсису і тяжких інфекцій. У відомому способі (1) підвищення вмісту антитіл проти антигенів бактерій P. aeruginosa в сироватці крові проводять шляхом щеплення виготовленим антигенним препаратом чотирьох серотипів псевдомонад. Вміст антитіл в сироватці крові щеплених тварин не перевищує 1:2001:400. Крім того, одержана сироватка містить антитіла проти багаточисленних структурних антигенів бактерій, в тому числі внутрішніх, що знижує специфічність сироватки. Одержання і використання такої сироватки в імунологічних дослідженнях технічно і економічно нераціонально. Відомий спосіб (2) для підвищення в сироватці крові антитіл проти сальмонел полягає в щепленні телят бівалентною вакциною з вмістом інактивованих нативних бактерій S. Dublin та S. thyphimurium. Отриманий цільовий продукт - сироватка крові містить великий набір антитіл проти численних структурних антигенів і має невисоку специфічність, а вміст антитіл в сироватці не досягає захисного рівня, тому не забезпечує повного захисту тварин проти інфекційного захворювання. Відомий спосіб (3) одержання ешерихіозної сироватки оснований на імунізації продуцентів (кролів) нативними бактеріями штаму E. coli PCI. Штам є моноплазмідним варіантом культури E. coli C 600, одержаним шляхом генетичного схрещування двох різних штамів бактерій роду Escherichia coli. Це ускладнює технологію одержання цільового продукту, а титри специфічних антитіл при імунізації рідко досягають значення 1:80. В основу корисної моделі поставлена задача створити простий спосіб одержання імунної сироватки проти поверхневих полісахаридів S. aureus з підвищеним вмістом антитіл високої специфічності, придатних для діагностики наявності полісахаридної капсули у патогенних стафілококів. Поставлена задача вирішується тим, що у способі одержання імунних сироваток проти поверхневих полісахаридів S. aureus, що включає виготовлення антигенного препарату, імунізацію продуцентів антигеном і виділення із крові цільового продукту. Новим є те, що імунізацію проводять поверхневим полісахаридом, який підданий модифікації розчином NaOH протягом 16 годин. Для виготовлення поверхневого полісахариду бактерій S. aureus культуру вирощували на рідкому поживному середовищі - МПБ з інгібіторами синтезу протеїну А (пептон, маніт), а також стимуляторів утворення мікрокапсули (глюкози, цукрози, дріжджового екстракту). Культуру вирощували при 37 °C у вигляді шару товщиною 7 мм в плоских бактерійних матрацах 4 доби, центрифугували для осадження бактерій. Із супернатанту осаджували препарат 3 об'ємами етанолу. Діаліз проводили проти дистильованої води впродовж доби, нерозчинний препарат суспендували в фосфатному буфері та звільняли від нуклеїнових кислот і протеїнів. Отриманий первинний препарат розчиняли за допомогою 5 N НСl та нейтралізували 5 N NaOH, очищували тричі переосадженням за допомогою етилового спирту. Препарат діалізували і висушували [4]. Одержаний первинний препарат мав слабку імуногенність, в зв'язку з тим його було модифіковано за допомогою гідролізу і відщеплення кінцевих сахарів в розчині NaOH. Одержаними препаратами імунізували продуцентів - білих мишей тричі підшкірно дозою 0,1 мг і через 30 діб ревакцинували. Через 7 діб із крові імунізованих тварин виділяють цільовой продукт - сироватку проти патогенних стафілококів. Приклад 1. Нарощування антитіл проти поверхневого полисахариду в крові імунізованих тварин (табл. 1). Таблиця 1 Антигени: Початковий полісахарид Модіфікований полісахарид 50 Титри після 1 імунізації 1:40 Титри після 2 імунізації 1:60 Титри після 3 імунізації 1:80 Титри після ревакцинації 1:160 1:120 1:320 1:640 1:1280 Приклад 2. Титри антитіл проти поверхневих полісахаридів, отриманих відомими способами в сироватці крові проти (табл. 2). 1 UA 79025 U Таблиця 2 Антигени За способом 2 За способом 3 Початковий полісахарид Модифікований полісахарид 5 10 Титри антитіл після вакцинації 1:80-1:100 1:80-1:100 1:160-1:200 1:960-1:1280 Середнє геометричне титру антитіл в цільовому продукту 1:89,44 1:89,44 1:178,89 1:1108,81 Наведені в таблицях дані свідчать, що запропонований спосіб дозволяє одержати сироватку з високим вмістом специфічних антитіл проти, титр яких в 8-16 разів перевищує вміст антитіл в сироватці, одержаної відомими способами. Джерела інформації: 1. Патент РФ № 1066074. 2. АС СССР № 1197187, 1984 г. 3. АС СССР № 1412069 1986 г. 4. Деклараційний патент України № 53011, 2003 p. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Спосіб одержання імунної сироватки проти поверхневих полісахаридів S. aureus, що включає виготовлення антигенного препарату, імунізацію продуцентів антигеном і виділення із крові цільового продукту, який відрізняється тим, що імунізацію проводять поверхневим полісахаридом, який підданий модифікації розчином NaOH протягом 16 годин. Комп’ютерна верстка М. Ломалова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2