Спосіб одержання бактеріородопсину

Изобретение относится к биотехнологии. Цель изобретения - улучшение условий культивирования„ упрощение отделения выращенной биомассы и увеличение выхода бактериородопсина. Способ включает посев инокулята продуцента H a l o b a c t e r i u n . h a l o b i u n в питательную среду и последующее непрерывное культивирование при 37 С, освещении 0 , 2 - 0 , 4 ' 10 э р г / с м 2 - с, а э рации 1 л воздуха на 1 л среды в минуту, отделение биомассы, вьщеление из нее бактериородопсина. Способ з а ключается в выравнивании галофильных бактерий-продуцентов, иммобилизованных на базальтовых волокнах. #«**» Изобретение относится к биотехнологии и может быть применено в производстве бактериородопсина. Цель изобретения - улучшение условий культивирования, упрощение о т д е ления биомассы и увеличение выхода бактериородопсина. Способ заключается в посеве инокулята в питательную среду, последующем непрерывном культивировании, отделении биомассы и выделении бактериородопсина. Для посева и последующего культивирования используют инокулнт, иммобилизованный на базальтовых волокнах, его культивируют при аэрации и освещении, периодически заменяя в' культивационной емкости использован21-90 ную питательную среду на свежую и отделяя базальтовые волокна с выроненной на их поверхности культурой от среды культивирования. Переход к выращиванию бактерий в иммобилизованном состоянии, например, на пучках, обезжиренных базальтовых волокон, создает более благоприятные условия для роста, размножения и синтеза ими бактериородопсина, упрощает процесс отделения выроненной биомас. сы от использованной питательной среды (иммобилизованные клетки отделяются от культуральной жидкости вместе с волокнами). Способ осуществляют следующим образом. 1570291 мобилизованным на его поверхности Иммобилизованный на поверхности инокулятом,переносят в культивационобезжиренных базальтовых волокон, ную емкость и размещают там при помособранных в пучки по 600-800 штук, щи стеклянного груза (или другим споинокулят культуры продуцента бактесобом) в местах с уменьшенной скорориородопсина помещают в культивационстью тока питательной среды (среду ную емкость в местах с уменьшенной готовят на дистиллированной воде с таскоростью тока жидкости и культивирукими же ингредиентами, как и для'жидют при 37 С, освещении 0,3-0,А х кой питательной среды, используемой х 10 б эрг /см . с , аэрации с помощью-.4для приготовления иммобилизованного насоса I л воздуха на 1 л среды в миинокулята). Таким образом, готовят нуту, проводят замену использованной несколько пучков в зависимости от объ4 питательной среды на свежую через ема питательной среды. каждые 48-72 ч . После наращивания на пучках нужного количества биомассы Затем проводят культивирование их поочередно извлекают (в период за- 15 при 37°С и освещении (от ламп ЛБ-40) мены питательной среды) из культива0,2-0,4* 106 эрг/см 2 - с и аэрации ционной кюветы (емкости), освобождают при помощи насоса 1 л теплого (комнатот биомассы вручную в стерильных хиной температуры) воздуха на 1 л среды рургических перчатках и помещают в в минуту в течение 72 ч. Далее 'удалякультивационную емкость для продолже- 20 ют использованную питательную среду ния культивирования (клетки, остающичерез сливное отверстие в кювете, поеся на волокнах, служат инокулятом дают при помощи насоса свежую питадля последующего культивирования). тельную среду и продолжают культивирование еще 72 ч в указанном режиме. Пример. Смывом культуры На- 25 Потом снова производят удаление питаlobacterium halobium 353 П или Н. ha~ тельной среды, извлекают пучки с вы-;' lobium ET 1001 или Н. halobium Б.„МО рощенной на их поверхности биомассой выращиваемой при 37°С в течение 72 ч и отделяют ее вручную в стерильных со ск'оненной питательной среды, котохирургических перчатках, слегка зарая, готовится на дистиллированной вожав пучок в верхней его части и вытяде и состоит из следующих компонентов гивая его в таком положении вдоль вов расчете на 1 л среды: NaCl 250 г; локон. При этом биомасса отделяется MgSO4 20 г; КС1 2 г; NH4N05 2 г; в стерильный сосуд и используется цитрат На 3 г; пептон 5 г; дрожжевой для получения бактериородопсина по экстракт 5 г; агар-агар 20 г; глицеодному из известных способов, а пучрин 2,5 мл, рН 7,2•(устанавливают до- ,, ки базальтовых волокон с оставшимися бавлением NaOH или НС1), засевают на них клетками ~ инокулятом для про500 мл жидкой питательной среды "(тодолжения культивирования снова помего же состава, но без агар-агара) в щают в культивационную емкость для колбе емкостью 1000 мл. Затем в еревыращивания следующей порции биомасду в колбе опускают стерильный обезсы в предварительно поданной свежей жиренный (в смеси хлороформа и метапитательной среде. нола в соотношении ( 0 , 5 : I ) - ( 2 : 1 ) при перемешивании и медленном в течение • Выход бактериородопсина по извест1-2 мин добавлении водного раствора ному способу из клеток Н. halobium К Н до состояния нейтрализации смеси О 353П составляет 40,8 мг на I г биов объеме, соответствующем 1/5 объема массы, по предлагаемому способу смеси) состоящий из 600-800 шт. ба50 мг на 1 г биомассы. Для штамма зальтовых волокон толщиной 13 мкм и Н. halobium ET 1001 эти величины содлиной 15 см подвешенный на нити пу~ ставляют 50 и 60 мг, для штамма — чок и выращивают инокулят при 37°С Н. halobium ЇЦМ< - 35 и 46 мг. при комнатном освещении и покачиваВыход биомассы на литр питательной нии 100 циклов в минуту в течение среды увеличивается в предлагаемом 48 ч . Если необходимо получить больспособе не менее чем в 1,8 раза. шее количество инокулята выращивание продолжают, заменяя использованную і питательную среду на свежую через каждые 48 ч . По истечении указанного срока пучок базальтовых волокон с им Формула и з о б р е т е н и я Способ получения бактериородопсина, включающий посев и непрерывное 5 , 1570291 ' ' * • культивирование на питательной среде рования, упрощения отделения выраклеток продуцента Halobacterium h a l o щенной биомассы и увеличения выхода bium с последующим отделением биомасбактериородопсина, для посева и кульсы для выделения бактериородопсина, тивирования используют клетки продуо т л и ч а ю щ и й с я тем, что, цента, иммобилизованные на базальтос целью улучшения условий культививых волокнах. Редактор М. Стрельникова Составитель А. Карякин ТехредМ.Дидык Корректор О. Кравцова Заказ 1663/ДСП • Тираж 313 . Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР НИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101