Спіро[індолін-3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідро-4н-хромен-3-карбонітрил)]-2-он, який проявляє протизапальну та антиоксидантну активність

Спіро[індолін-3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8тетрагідро-4H-хромен-3-карбонітрил)]-2-он загальної формули (19) (21) a200707120 (22) 25.06.2007 (24) 25.08.2009 (46) 25.08.2009, Бюл.№ 16, 2009 р. (72) РЕДЬКІН РУСЛАН ГРИГОРОВИЧ, ЧЕРНИХ ВАЛЕНТИН ПЕТРОВИЧ, ШЕМЧУК ЛЕОНІД АНТОНОВИЧ, БЕРЕЗНЯКОВА АЛЛА ІЛЛІВНА, РЕПЕТЄВА ОЛЕНА ВАЛЕРІЇВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ (56) US 6 774 132 B1, 10.06.2004 EP 0 431 943 A2, 12.06.1991 UA 59345 C2, 15.09.2003 UA 72540 C2, 15.03.2005 JP 56-100887, 13.08.1981 3 дикалів і захищає клітини від їх ушкоджуючої дії [4]. Проте, відомостей про наявність протизапальної активності мелатоніну в літературі не описано. Структурні аналоги мелатоніну практично не досліджені за протизапальною активністю. В якості препаратів порівняння обрано класичний протизапальний засіб диклофенак натрію та відомий антиоксидант мексідол [5]. Головним недоліком препаратів порівняння є ерозійно-виразкові ураження і кровотеча у травному тракті та відсутність антиоксидантного ефекту (диклофенак натрію) або нудота, сухість у роті та алергічні реакції (мексідол). Найближчим за хімічною структурою до заявленої сполуки є похідні спіро[пирролідин-2,3'оксіндолу] [6], які в дозі 0,2-6моль/кг проявляють анальгетичну та протизапальну активність. Недоліком прототипу можна вважати відсутність у нього антиоксидантної активності. В основу винаходу поставлене завдання створення нової хімічної сполуки, що проявляє високу протизапальну та антиоксидантну активність при низькій токсичності і може бути використана як діюча речовина у складі фармацевтичних препаратів різних лікарських форм: таблеток, капсул, розчинів для перорального застосування, м'яких лікарських засобів тощо. Поставлена задача вирішується шляхом синтезу індивідуальної хімічної сполуки спіро[індолін3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідро-4H-хромен3-карбонітрил)]-2-он - похідного 2-оксіндолу як структурного аналогу мелатоніну, що містить спіроз'єднані 4//-піранове та 2-оксіндольне ядра, а також аміноетильний фармакофор, присутній в молекулі мелатоніну, структурно закріплений у пірановому циклі заявленої сполуки: Сполука проявляє протизапальну та антиоксидантну активність. Сполука, яка заявляється, синтезована однореакторним методом, заснованим на трьохкомпонентній конденсації ізатину з малонодинітрилом і відповідним 1,3-дикетоном в умовах основного каталізу. Спіро[індолін-3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8тетрагідро-4Н-хромен-3-карбонітрил)]-2-он - це біла дрібнокристалічна речовина, розчинна у диметилформаміді (ДМФА), диметилсульфоксиді (ДМСО), не розчинна у воді, етанолі та гексані. Будова сполуки підтверджена за допомогою елементного аналізу, ЯМР 1Н-, масс- та ІЧспектроскопії. Винахід ілюструється наступними прикладами: Приклад 1 87882 4 1,47г (0,01моль) ізатину розчиняли в 10мл етанолу і додавали 0,66г (0,01моль) малонодинітрилу та 1,12г (0,01моль) 1,3-циклогександіону заздалегідь розчиненого в 5мл етанолу і 1,3мл (0,01моль) триетаноламіну. Реакційну суміш перемішували, нагрівали до початку кипіння та залишали при кімнатній температурі до випадання осаду продукту. Осад, що випав, фільтрували, послідовно промивали киплячим н-гексаном та етанолом і сушили. Вихід 2,58г (84%). Т.пл. 290°С (з розкладенням). Спектр ЯМР 1Н, δ, м.д.: 1.90 т (2Н, СН2), 2.20 м (2Н, СН2), 2.57 т (2Η, СН2), 6.75 д (1Наром.), 6.85 т (1Наром.), 7.0 д (1Наром.), 7.12 т (1Наром.), 7.21 с (2Н, NH2, D2O мінливий), 10.35 с (1Н, NH, D2O мінливий). Масс-спектр, m/z (Івідносн., %): 307 (19.7) [M]+, 281 (7.9) [Μ - 26]+, 262 (26.6) [Μ - 45]+, 252 (11.2) [Μ - 55]+, 251 (100.0) [Μ - 56]+, 250 (28.4) [Μ - 57]+, 236 (7.6) [Μ - 71]+, 210 (16.0) [Μ - 97]+, 209 (36.4) [Μ 98]+, 195 (30.8) [Μ - 109]+, 194 (11.4) [Μ - 113]+, 179 (7.8) [Μ - 128]+, 151 (8.2) [Μ - 156]+, 127(7.0) [Μ 180]+. C17Η13Ν3Ο3 Μ.Μ=307,312 Знайдено, %: С 66.63; Η 4.18; Ν 13.82. Вирахувано, %: С 66.44; Η 4.26; Ν 13.67. ІЧ-спектр у KВr, см-1: 3319, 3347, 3407 (nNH), 2200 (nCN), 1593, 1636, 1708 (nCO), 1570(δΝΗ), 1425 (nCH2) Приклад 2 Визначення протизапальної активності заявленої сполуки (І) проводилось на моделі карагенінового набряку на 75 білих нелінійних щурахсамцях масою 180-200г. Препаратом порівняння був обраний вольтарен. За годину до початку експерименту щурам вводили в шлунок у вигляді водяної суспензії з додаванням твіну-80, нову сполуку та препарат порівняння вольтарен у дозі 8мг/кг або 26мкмоль/кг. Через годину субплантарно щурам впорскували по 0,1мл 1% розчину карагеніну. Протизапальну активність досліджуваних речовин оцінювали за ступенем антиексудативного ефекту, зокрема, здатністю інгібувати розвиток набряку лапки на момент максимального його прояву (через 3 години після введення карагеніну) за методом А.С.Захаревського [7] і розраховували протизапальну активність у відсотках відносно контролю. Також в якості критеріїв оцінки використовували ДЛ50, терапевтичний індекс (ТІ) - відношення середньої смертельної дози до середньої ефективної дози речовин; терапевтичний індекс за вольтареном - відношення терапевтичного індексу речовини, що випробовується до терапевтичного індексу вольтарену. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності заявленої сполуки спіро[індолін3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідро-4Н-хромен3-карбонітрил)]-2-ону (І) та вольтарену наведені у таблиці 1. 5 87882 6 Таблиця 1 Протизапальна активність та токсичність спіро[індолін-3,4-(2-аміно-5-оксо-5,6,7,8-тетрагідро-4Н-хромен-3-карбонітрил)]-2-ону та вольт арену Піддослідні групи тварин Карагеніновий набряк (контроль) Вольтарен Сполука (І) Відносний ТІ Об'єм лапки, від.од. Протизапальна ТІ=ДЛ50/ДЕ50 за вольтареактивність, % X Sx ном 2,26 ±0,07 363 45,38 1 1,06 ±0,07 53,10* 1583,3 197,91 4,36 1,07 ±0,10 52,66** Доза (ДЕ50), мг/кг ДЛ50, мг/кг 8 -« Примітки: n=5; * - p