6,9-діаміно-2-етоксіакридинію 4-хлор-n-(2`-нітрофеніл)антранілат, що проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та кардіопротекторну активність

6,9-Діаміно-2-етоксіакридинію нітрофеніл)антранілат формули: NH2 Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до синтезу 6,9-діаміно-2етоксиакридинію 4-хлор-N-(2'-нітрофеніл)антранілату, який проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та кардіопротекторну активність. Пошук нових засобів з широким спектром фармакологічної дії є актуальною проблемою сучасної медицини. Відомий цілий ряд лікарських засобів синтетичного походження, кожен з яких мас свою домінуючу дію: етакридину лактат (антимікробна дія), фурацилін та грізеофульвін (протигрибкова дія), індометацін та вольтарен (протизапальна дія), вітамін Ε (мембраностабілізуюча, антиоксидантна, кардіопротекторна дії) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Μ.: ΟΟΟ "Из дательство Новая Волна", 2007. - 1200 с: ил. - С. 951, 852, 913, 170, 171, 633]. До недоліків зазначених засобів можна віднести, зокрема, наявність у тій чи іншій мірі негативної побічної дії. У комплексному лікуванні виникає необхідність призначення хворому одночасно декілька лікарських засобів з моноспрямованою фармацевтичною дією, внаслідок чого загальна побічна дія підсилюється. За прототип вибраний - 6,9-діаміно-2етоксиакридинію 2-хлорбензоат, який проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та кардіопротекторну активність [Патент на винахід №10454 (Україна) МПК: С07Д219/08, А61К31/435. Заявлено 14.04.1994. Опубліковано 25.12.1996. Бюлетень №4]. 4-хлор-N-(2' OC2H5 + N H2N · H COO (13) 87909 , який проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та кардіопротекторну активність. (11) NO2 UA H C2 N (19) Cl 3 87909 4 Сполука за прототипом має широкий спектр 10мл етанолу (розчин №2). Потім розчин №1 та дії, проте ступінь фармацевтичної активності може №2 змішують. Осад, який випав, відфільтровують, бути реально підвищений. промивають водою та сушать. В основу винаходу поставлене завдання по Вихід 4,90г (90%), Тпл. 175-179°С, М.м. 545,97 створенню нової хімічної сполуки, що проявляє Бруто-формула: C28H24CIN5O5 Розраховано: С, % 61,60; Ν, % 12,83 підвищену антимікробну, протигрибкову, протизаЗнайдено: С, % 61,58; Ν, % 12,86 пальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та ІЧ-спектр у KBr, см-1: 3349, 3219, 2996, 2630, кардіопротекторну активність. 1649, 1590, 1530, 1500, 1362, 782 Поставлене завдання вирішується шляхом сиRf: 0,48 (етанол-ізопропанол-гексан 3:3:2). нтезу нової індивідуальної хімічної сполуки 6,9Приклад №2. Визначення антимікробної актидіаміно-2-етоксиакридиній 4-хлор-N-(2'вності заявленої сполуки проводилося за методом нітрофеніл)-антранілату формули двократних серійних розведень у рідких поживних середовищах [Навашин С.И., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М.: Медицина, 1982. - С. 40-42]. Для культивування бактерій використовувався амінопептид, попередньо розведений у два рази дистильованою водою, рН 7,2. Мікробне навантаження склало 105-106 мікробних тіл в 1мл середоякий проявляє антимікробну, протигрибкову, вища. протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксиДля випробування використовувалися 8 штадантну та кардіопротекторну активність. мів мікроорганізмів: 1 - Staphylococcus aureus, Речовина, яка заявляється, утворена взаємоштам АТСС 25923; 2 - Echerichia coli, штам АТСС дією 6,9-діаміно-2-етоксиакридина та 4-хлор-N-(2'7241; 3 - Bacillus subtilis, штам АТСС 25922; 4 нітрофеніл)антранілової кислоти у етанольному Pseudomonas aeruginosa, штам АТСС 27853; 5 середовищі. Salmonella choleraesuis; 6 - Salmonella dublin; 7 6,9-Діаміно-2-етоксиакридиній 4-хлор-N-(2'Salmonella thyphimurium; 8 - Salmonella thyphisuis, нітрофеніл)антранілат - порошок жовтого кольору, В якості критерію фармакологічної активності мало розчинний у воді і етанолі, легко розчинний в вибрано рівень мінімальної пригнічуючої концентДМСО та ДМФА. Будова сполуки підтверджена за рації (МПК) та рівень гострої токсичності (DL50) при допомогою елементного аналізу та ІЧвнутрішньо очеревинному введенні. спектроскопії, а індивідуальність - методом тонкоРезультати вивчення антимікробної активності шарової хроматографії. Винахід ілюструється ната токсичності 6,9-діаміно-2-етоксиакридинію 4ступними прикладами: хлор-N-(2'-нітрофеніл)антранілату (сполука №1), у Приклад №1. 2,53г (0,01 моль) 6,9-діаміно-2порівнянні з 6,9-діаміно-2-етоксиакридинію 2етоксиакридину розчиняють при нагріванні у 15мл хлорбензоатом (прототип) та етакридину лактатом етанолу (розчин №1); 2,90г (0,01моль) 4-хлор-Νнаведені у таблиці 1. (2'-нітрофеніл)антранілової кислоти розчиняють у Таблиця 1 Антимікробна активність і токсичність заявленої сполуки №1 у порівнянні з прототипом та етакридину лактатом Сполука №1 Прототип Етакридину лактат 1 3,0 3,9 31,2 2 3,9 3,9 31,2 МПК (мкг/мл) Штами мікроорганізмів 3 4 5 6 3,2 3,5 5,0 12,5 7,8 3,9 15,6 31,2 15,6 62,5 125 250 Як видно за даними таблиці 1, сполука №1 активніше етакридину лактату у відношенні до Staphylococcus aureus у 10,4 рази, у відношенні до Bacillus subtilis у 2,4 рази, у відношенні до Echerichia coli у 8 разів, у відношенні до Pseudomonas aeruginosa у 17,9 рази та у відношенні до мікроорганізмів роду Salmonella у 16-25 разів. Сполука №1 також перевищує за антимікробної активністю сполуку за прототипом: у відношенні до Staphylococcus aureus у 1,3 рази, у відношенні до Bacillus subtilis у 2,4 рази, у відношенні до Pseudomonas aeruginosa у 1,1 рази та у відношенні до мікроорганізмів роду Salmonella у 2,56,24 рази тощо. DL50, мг/кг 7 5,0 31,2 250 8 7,8 31,2 125 2200 1500 21 Крім того, заявлена сполука є дещо менш токсичною ніж прототип (в 1,47 рази) і значно менш токсичною ніж етакридину лактат. Приклад №3. Визначення протигрибкової активності проводилось за відомою методикою [Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Бригера, - 3-е изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - 462с.]. Для вирощування грибів використовувалось середовище Сабуро (рН=6,5-6,7). Навантаження складало 500-600 репродуктивних тілець штамів Candida albicans або Trichophyton rubrum в 1мл середовища. Протигрибкову дію оцінювали за мі 5 87909 6 німальною мікостатичною концентрацією (ММК), хлор-N-(2'-нітрофеніл)антранілату (сполука №1) у вираженою в мкг/мл. порівнянні з прототипом, фурациліном та грізеоРезультати вивчення протигрибкової активнофульвіном наведені в таблиці 2. сті та токсичності 6,9-діаміно-2-етоксиакридинію 4Таблиця 2 Протигрибкова активність та токсичність сполуки №1, у порівнянні з прототипом та референс препаратами Сполука Сполука №1 Прототип Фурацилін Грізеофульвін Штами грибків, ММК (мкг/мл) Candida albicans Trichophyton rubrum 25,0 30,0 250 125 64,0 50 Як видно за результатами дослідження, наведеними у таблиці 2, сполука №1 інгібує ріст Candida albicans у концентрації у 2,56 рази меншій ніж фурацилін і у 10 разів меншій ніж прототип. Крім того, сполука №1 у 26,7 рази менш токсична ніж фурацилін. Прототип не проявляє протигрибкову дію у відношенні Trichophyton rubrum. В результаті експерименту встановлено також, що заявлена сполука є менш токсичною, ніж наведені препарати порівняння та прототип. Таким чином, заявлена сполука перевищує прототип та препарати порівняння за широтою протигрибкової дії. Приклад №4. Вивчення протизапальної активності проводилося на моделі каррагенінового набряку [Яковлева Л.В., Зупанец И.А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поис DL50 (внутрішньоочеревино) мг/кг 2200 1500 82,5 ке противовоспалительных средств // Деп. в УкрНИИНТИ 07.07.87. - №1908. - Ук. 87]. В якості критеріїв фармакологічної активності вибрано ізоефективна доза (DE50), при якій фармакологічний ефект набуває 50% випадків у експериментальній групі тварин; рівень гострої токсичності (DL50); терапевтичний індекс ТІ (показник відношення DL50 ); відносний терапевтичній DE50 індекс. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності 6,9-діаміно-2-етоксиакридинію 4хлор-N-(2'-нітрофеніл)антранілату (сполука №1) у порівнянні з прототипом, індометацином та вольтареном наведені в таблиці 3. Таблиця 3 Протизапальна активність та токсичність сполуки №1 у порівнянні з прототипом, індометацином та вольтареном Сполука Сполука №1 Прототип Індометацин Вольтарен DE50, мг/кг 8,2 8,8 10,0 8,0 Як видно за даними таблиці 3, сполука №1 має виражену протизапальну активність, за широтою терапевтичного ефекту перевищує вольтарен у 5,96 разів, перевищує індометацин у 89,4 рази та перевищує прототип у 1,6 рази. Приклад №5. Вивчення мембраностабілізуючої, антиоксидантної та кардіо-протекторної активностей проводилося на моделі ізадринофуразолідонового ураження міокарду у щурів, яким внутрішньошлунково одноразово через зонд уводили ізадрин у дозі 200мг/кг, а через 1 годину внутрішньом'язово вводили ізодрин у дозі 40мг/кг. В якості критеріїв фармакологічної активності вибрано наступні показники: за антиоксидантною рівень малонового діальдегиду в міокарді експериментальних і контрольних груп тварин в реакції з тіобарбітуровою кислотою PВладимиров Ю.Л., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в DL50, мг/кг 2200 1500 30 360 Терапевтичний індекс (ТІ) 268,3 170,5 3 45 биологических мембранах. - М.: Наука, 1972. 157с.] за мембраностабілізуючою - рівень маркерного ферменту кардіоміолізу, аспартатамінотрансферази (АсАТ) в реакції з 2,4дінітрофенілгідразином [Руководство по кардиологии: Методы исследования сердечно-сосудистой системы / Под ред. акад. АМН СССР Е.И. Чазова. М.: Медицина, 1982. - Т. 2. - С. 506-521]. Кардіопротекторну активність розраховували як інтегральний показник середнього значення суми мембраностабілізуючої та антиоксидантної активності. Результати вивчення мембраностабілізуючої, антиоксидантної та кардіопро-текторної активностей 6,9-діаміно-2-етоксиакридинію 4-хлор-N-(2'нітрофеніл)-антранілату (сполука №1) у порівнянні з прототипом, вольтареном та вітаміном Ε наведені в таблиці 4. 7 87909 8 Таблиця 4 Мембраностабілізуюча, антиоксидантна та кардіопротекторна активності сполуки №1 у порівнянні з прототипом, вольтареном та вітаміном Ε Доза Мембраностабілізуюча Антиоксидантна Кардіопротекторна Відносна кардіопротектормг/кг % % % на активність по вітаміну Ε Сполука №1 8,2 64,3±5,3* 73,3±5,4* 70,3 2,8 Прототип 8,8 50,0±3,3* 57,8±2,8 53,9 2,2 Вольтарен 8,0 30,8±2,3** 35,2±2,4 33,0 1,3 Вітамін Ε 50,0 16,4+1,2 33,6+2,6 25,0 1,0 Сполука * - р