2-етоксі-6,9-діаміноакридинію 2-n-(3′-нітрофеніл)антранілат, який проявляє антимікробну, протизапальну,мембраностабілізуючу, антиоксидантну і кардіопротекторну активність

2-етоксі-6,9-діаміноакридинію 2-N-(3'-нітрофеніл)-антранілат, формули: 2-этокси-6,9-диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)-антранилат, проявляющий антимикробную, противовоспалительную, мембраностабилизирующую, антиоксидантную и кардиопротекторную активность. Данное изобретение относится к химикофармацевтической промышленности, а именно: к синтезу нового химического соединения: 2-этокси6,9-диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)-антранилата формулы: взаимодействия 2-этокси-6,9-диаминоакридина и 3'-нитро-2-N-фенилантраниловой кислоты в этанольной среде синтезируют новое соединение, обладающее антимикробной, противовоспалительной, мембраностабилизирующей, антиоксидантной и кардиопротекторной активностью. Поставленная задача решается путем синтеза нового химического соединения 1,2-этокси-6,9диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)антранилата, представляющего собой коричневый кристаллический порошок, плохо растворимый в воде, этаноле, хорошо растворимый в ДМСО, ДМФА. Структура соединения подтверждена элементным анализом и ИК-спектроскопически. Изобретение иллюстрируется следующим примером. Пример 1. 2,53 г (0,01 моль) 2-этокси-6,9-диаминоакридина растворяют при нагревании в 15 мл этанола: 2,58 г (0,01 моль) 3'-нитро-2-N-фенилантраниловой кислоты растворяют в 10 мл этанола. Затем растворы смешивают и оставляют при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой, суша т. Выход 4,84 г 95%. × Т пл 231-4°С C28H25N5 O5 M.м. 511,339 Найдено: С, % 65,67; Н, % 4,93; N, % 13,69. ИК-спектр в вазелиновом масле, см -1: 3367, 3287, 3206, 2916, 2850, 1653, 1616, 1568, 1480, 1438, 1350, 1315, 1265. Пример 2. Определение антимикробной активности проводилось методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Навашин С.И., Фомина И.П. Рациональная антибио , + N N H H2N H NO2 проявляющего антимикробную, противовоспалительную, мембраностабилизирующую, антиоксидантную и кардиопротекторную активность. Изыскание новых антимикробных и противовоспалительных средств является актуальной проблемой медицины. В качестве эталонных препаратов использованы этакридина лактат, индометацин, вольтарен (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988. - T. 1. С. 199, 413; Т. 2. - С. 37). В основу изобретения поставлена задача создания нового химического биологически активного соединения, обладающего широким спектром фармакологической активности, в котором путем , + N N H H2N H NO2 (13) A який проявляє антимікробну, протизапальну, мембраностабілізуючу, антиоксидантну та кардіопротекторну активність. 29047 COO COO (11) . . UA OC2 H5 OC2 H5 (19) NH2 NH2 29047 тикотерапия. - М.: Медицина, 1982. - С. 40-41). Для испытаний использовались 4 штамма микроорганизмов: - золотистый стафилококк, штамм АТСС 25923; - сенная палочка, штамм АТСС 7241; - кишечная палочка, штамм АТСС 25922; - палочка сине-зеленого гноя, штамм АТСС 27863. Для культивирования бактерий использовали аминопептид, предварительно разбавленный в два раза дистиллированной водой, рН 7,2. Микробная нагрузка бактерий составляла 105106 микробных тел в 1 мл среды. Результаты изучения антимикробной активности, токсичности 2-этокси-6,9-диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)антранилата (I), 2-амино-4нитробензоата 2-этокси-6,9-диаминоакридиния прототипа (II) (А. с. № 1697389, С07Д219/10, С07С222100, А61К31/435) и этакридина лактата представлены в табл. 1. Как видно из данных, приведенных в табл. 1, соединение I активнее этакридина лактата по отношению к стафилококку и кишечной палочке в 8 раз, по отношению к сенной палочке - в 4 раза и по отношению к синегнойной палочке - в 12,5 раза. Предлагаемое соединение I превосходит соединение ІІ (прототип) по отношению к стафилококку и кишечной палочке в 2 раза, а по отношению к синегнойной палочке - в 3,12 раза. Соединение I проявляет выраженный бактерицидный эффект, который отсутствует у прототипа и является в 204,7 раза менее токсичным, чем препарат сравнения и в 1,47 раза, чем прототип. Пример 3. Изучение противовоспалительной активности предлагаемого соединения I проводили на модели каррагенинового отека у мышей массой 18-20 г (Яковлева Л.В., Зупанец И.А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поиске противовоспалительных средств // Деп. в Укр. НИИНТИ 7.07.1987. № 1908. - 4 к. 87. - 6 с.) Для воспроизведения модели острого асептического воспаления мышам в одну из задних конечностей субплантарно вводили 0,05 мл 1% раствора каррагенина ("Sigma", США). Через 4 часа задние лапки животных ампутировали на уровне тазобедренного сустава и взвешивали. По разнице в весе отечных и неотечных лапок животных, по сравнению с контролем, рассчитывали антиэкссудативную активность, которую выражали в % угнетения отека. В качестве эталонного препарата использовали индометацин, как один из наиболее эффективных в настоящее время НПВС. Предлагаемое вещество и стандартные препараты вводили внутрижелудочно, однократно. В каждой серии опытов использовали по 6 животных. Результаты исследования представлены в табл. 2. Как видно из табл. 2 предлагаемое вещество I обладает выраженной противовоспалительной активностью и превосходит индометацин и вольтарен. По широте терапевтического действия предлагаемое соединение I превосходит индометацин в 159,3 раза, а вольтарен - в 10,6 раза, что делает его более биологически доступным для организма. Пример 4. Антиоксидантную, мембраностабилизирующую и кардиопротекторную активность определяли на модели изадрино-фуразолидонового поражения миокарда у крыс (Зупанец И.А. Поиск противовоспалительных и анальгезирующи х средств в ряду производных N-R-оксамоил-Д(+)-глюкозамина: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Киев, 1988. – 26 с.; Czarnecki C.M. Animal models of drag-induced cardiomyopathy // Comp. Biochem. Phisiol. - 1984. - Vol. 79 C, N 1. - P. 9-14). Данная модель характеризуется деструктивно-дистрофическими изменениями в миокарде, повышением активности перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. - М.: Медицина, 1984. – 272 с.; Розанов А.Я., Трещинский А.И., Хмелевский Ю.В. Ферментативные процессы и их коррекция при экстремальных состояниях. - Киев.: Здоровье, 1986. - С. 83, 194-196). Крысам массой 180-200 г внутрижелудочно, через зонд вводили фуразолидон в дозе 200 мг/кг. Через 1 час внутримышечно вводили изадрин – 40 мг/кг. Вышеперечисленный спектр фармакологической активности оценивали на четвертые сутки опыта (максимум изменений в миокарде) (Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Мохорт М.А. Методы скрининга и фармакологического изучения противовоспалительных, анальгезирующих и жаропонижающих ве ществ (методические рекомендации). - Киев, 1974. – 27 с.). Антиоксидантную активность предлагаемого соединения и аналогов по действию (вольтарен, витамин Е) определяли по уровню малонового диальдегида в миокарде опытных и контрольных групп животных по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Владимиров Ю.Л., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: На ука, 1972. – 157 с.). Мембраностабилизирующую активность - по уровню маркерного фермента кардиомиолиза - аспартатаминотрансферазы (АсАТ), который определяли спектрофотометрически по реакции c 2,4-фенилгидразином (Руководство по кардиологии: Методы исследования сердечно-сосудистой системы / Под ред. акад. АМН СССР Е.И. Чазова. - М.: Медицина, 1982. Т. 2. - С. 506-521). Кардиопротекторную активность рассчитывали как интегральный показатель среднего значения суммы мембраностабилизирующей и антиоксидантной активности. Предлагаемое вещество и стандартные препараты вводили внутрижелудочно за 1 час до моделирования изадриново-фуразолидонового поражения миокарда и затем ежедневно в течение 4-х дней в эффективных дозах по противовоспалительному действию. Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 3 и 4. Как видно из табл. 3 и 4 предлагаемое соединение в дозе 9,0 мг/кг обладает выраженной мембраностабилизирующей, антиоксидантной и кардиопротекторной активностью, превосходящей вольтарен и витамин Е в 2,1 и 3,9 раза, соответственно, по мембраностабилизирующей активности, 2 29047 в 2,0 и 2,1 раза - по антиоксидантной, в 2,0 и 2,8 раза - по кардиопротекторной активности. Таким образом, предлагаемое соединение 2этокси-6,9-диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)антранилат является малотоксичным веществом, обладает комплексным видом фармакологической активности: антимикробной, противовоспалительной, антиоксидантной, мембраностабили зирующей и кардиопротекторной. Превосходит этакридина лактат, индометацин, вольтарен, витамин Е. Предлагаемое вещество может найти применение в медицинской практике при воспалительных (инфекционных) поражениях миокарда: миокардитах, дистрофия х миокарда и других некоронарогенных заболеваниях сердечной мышцы. Таблица 1 Антимикробная активность и токсичность 2-этокси-6,9-диаминоакридиния 2-N-(3'-нитрофенил)антранилата Соединение 1 3,9 3,9 7,8 31,2 Соединение I ІІ* (прототип) Этакридина лактат МПК/МБК (мкг/мл) 2 3 3,9 3,9 3,9 3,9 3,9 7,8 15,6 31,2 ЛД50, мг/кг в/брюшинно в/желудочно 4 5,0 5,0 15,6 62,5 2000 4300 3000 21 * - по данным А. с. № 1697388, СССР Условные обозначения: 1 - золотистый стафилококк 2 - сенная палочка 3 - кишечная палочка 4 - палочка сине-зеленого гноя Таблица 2 Противовоспалительная активность, острая токсичность и широта терапевтического действия предлагаемого соединения (I) Изучаемое вещество, эталонные препараты Соединение І Индометацин Вольтарен Эффективная доза ЕД50 по противовоспалительной активности мг/кг 9,0 10,0 8,0 Острая токсичность ЛД50, мг/кг 4300 30 360 Широта терапевтического действия (ТИ) 477,8 3,0 45,0 Таблица 3 Мембраностабилизирующая, антиоксидантная и кардиопротекторная активность предлагаемого соединения (I) Изучаемые вещества и стандартные препараты Соединение I Вольтарен Витамин Е Доза, мг/кг Мембраностабилизирующая активность, % Антиоксидантная активность, % Кардиопротекторная активность, % 9,0 8,0 50,0 64,2±5,1* 30,8±2,3** 16,4±1,2 71,4±5,3* 35,2±2,4 33,6±2,6 68,8 33,0 25,0 * - р