Протипухлинні комбінації, які містять антитіла, що специфічно розпізнають cd38, і вінкристин

Реферат: Винахід стосується фармацевтичної комбінації, яка містить антитіло, що специфічно розпізнає CD38, і вінкристин. UA 105507 C2 (12) UA 105507 C2 UA 105507 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ОПИС Даний винахід стосується комбінацій моноклональних антитіл, спрямованих проти CD38, і вінкристину, які є терапевтично ефективними для лікування неопластичних захворювань. CD38 є трансмембранним глікопротеїном II типу масою 45 кДа, з довгим C-кінцевим позаклітинним доменом і коротким N-кінцевим цитоплазматичним доменом. Білок CD38 являє + собою біфункціональний екзофермент, що може каталізувати перетворення НАД у циклічну АДФ-рибозу (цАДФР), а також гідролізувати цАДФР в АДФ-рибозу. Експресія CD38 підвищена і бере участь у розвитку багатьох гематопоетичних злоякісних пухлинах. Моноклональні антитіла 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39, що специфічно розпізнають CD38, описані в заявці PCT WO 2008/047242. Зазначені антитіла до + CD38 здатні викликати загибель CD38 клітин трьома різними цитостатичними механізмами: індукцією апоптозу, антитілозалежною клітинною цитотоксичністю (ADCC) і комплементзалежною цитотоксичністю (CDC). Крім того, зазначені антитіла здатні + безпосередньо викликати апоптоз CD38 клітин, навіть за відсутності стромальних клітин або стромальних цитокінів. Вінкристин є алкалоїдом, використовуваним у хіміотерапії. Дотепер існує потреба в нових й ефективних лікарських засобах, які можуть використовуватися в терапії раку. Нещодавно було виявлено, і це і є предметом даного винаходу, що ефективність гуманізованих антитіл до CD38 може бути значно підвищена, якщо їх вводять у комбінації щонайменше з однією речовиною, яка є терапевтично активною при протираковій терапії і має механізм дії, ідентичний або відмінний від механізму дії гуманізованих антитіл до CD38, і яка обмежена в даному винаході вінкристином. Термін "антитіло", використовуваний у даній заявці, у найширшому розумінні і конкретно охоплює моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла) будь-якого ізотипу, такі як IgG, IgM, IgA, IgD і IgE, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла, химерні антитіла і фрагменти антитіл. Як правило, антитіло IgG складається з двох ідентичних важких ланцюгів і двох ідентичних легких ланцюгів, до яких приєднані дисульфідні зв'язки. Кожен важкий і легкий ланцюг містить константну область і варіабельну область. Кожна варіабельна область містить три сегменти, які називаються "областями, що визначають комплементарність" (CDR), або "гіперваріабельними областями", які насамперед відповідальні за зв'язування епітопа антигену. Вони звичайно називаються CDR1, CDR2 і CDR3 і нумеруються послідовно від N-кінця. Висококонсервативні частини варіабельних областей поза CDR називають "каркасними областями". Використовувані в даній заявці позначення "VH" або "VH" стосуються варіабельної області імуноглобулінового важкого ланцюга антитіла, включаючи важкий ланцюг Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' або F(ab')2 фрагмента. Посилання на "VL" або "VL" стосується варіабельної області імуноглобулінового легкого ланцюга антитіла, включаючи легкий ланцюг Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' або F(ab')2 фрагмента. Антитіло 38SB13 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 50, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 38, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 1, 2 і 3, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 4, 5 і 6. Антитіло 38SB18 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 52, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 40, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 7, 8 і 9, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 10, 11 і 12. Антитіло 38SB19 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 54, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 42, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 13, 14 і 15, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 16, 17 і 18. Антитіло 38SB30 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 56, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 44, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з 1 UA 105507 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 SEQ ID NO: 19, 20 і 21, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 22, 23 і 24. Антитіло 38SB31 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 58, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 46, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 25, 26 і 27, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 28, 29 і 30. Антитіло 38SB39 включає щонайменше один важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 60, і щонайменше один легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, що складається з SEQ ID NO: 48, при цьому зазначений важкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 31, 32 і 33, а зазначений легкий ланцюг включає три послідовних CDR з амінокислотними послідовностями, що складаються з SEQ ID NO: 34, 35 і 36. Клітинні лінії гібридом, продукуючих антитіла миші проти CD38 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39, депоновані в Американській колекції типових культур (10801 University Bid, Manassas, VA, 20110-2209, USA) 21 червня 2006 року під реєстраційними номерами PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 і PTA-7671, відповідно (як описано в WO 2008/047242). Термін "гуманізоване антитіло", використовуваний у даній заявці, стосується химерного антитіла, яке містить мінімальну послідовність, що походить з нелюдського імуноглобуліну. Ціль гуманізації полягає в зниженні імуногенності ксеногенного антитіла, наприклад, антитіла миші, при введенні людині, зі збереженням повної антигензв'язувальної афінності і специфічності антитіла. Гуманізовані антитіла або антитіла, пристосовані для введення іншим ссавцям без відторгнення, можуть бути одержані з використанням декількох методів, таких як зміна поверхні і CDR-пересаджування. У використовуваному в даній заявці способі зміни поверхні комбінація молекулярного моделювання, статистичного аналізу і мутагенезу використовується для зміни поверхневих залишків не-CDR варіабельних областей антитіла з метою імітації поверхні відомих антитіл цільового організму-хазяїна. Спосіб CDR-пересаджування включає заміну гіперваріабельних областей, наприклад, антитіла миші, людським каркасним доменом, наприклад, див. WO 92/22653. Гуманізовані химерні антитіла переважно містять константні області і варіабельні області, відмінні від гіперваріабельних областей (CDR), одержані по суті або винятково з відповідних областей людських антитіл, і CDR, одержані по суті або винятково зі ссавця, виключаючи людини. Підходи і способи зміни поверхні антитіл, а також інші способи зниження імуногенності антитіл в організмі різних хазяїнів розкриті в патенті США № 5639641, опис якого наведений в даному документі як посилання. Антитіла можуть бути гуманізовані за допомогою інших різних способів, включаючи CDR-пересаджування (EP 0239400; WO 91/09967; патенти США №№ 5530101 і 5585089), вініринг або зміну поверхні (EP 0592106; EP 0519596; Paldan E.A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805814; Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91: 969-973), перетасування ланцюгів (патент США № 5565332) і ідентифікацію гнучких залишків (PCT/US2008/074381). Антитіла людини можуть бути одержані різними способами, відомими з рівня техніки, включаючи способи фагового дисплея. Див. також патенти США №№ 4444887, 4716111, 5545806 і 5814318; і опубліковані міжнародні заявки WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 і WO 91/10741 (які повністю включені шляхом посилання в даний опис). Антитіла проти CD38 у фармацевтичній комбінації даного винаходу являють собою + гуманізовані антитіла, які розпізнають CD38 і викликають загибель CD38 клітин шляхом апоптозу, ADCC і CDC. В іншому варіанті здійснення гуманізовані антитіла винаходу здатні + викликати загибель зазначених CD38 клітин шляхом апоптозу навіть за відсутності стромальних клітин або стромальних цитокінів. Переважним варіантом здійснення такого гуманізованого антитіла є гуманізоване антитіло 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 або 38SB39 або їх епітопзв'язувальний фрагмент. CDR-ділянки антитіл 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39 ідентифікують за допомогою моделювання і передбачення їх молекулярних структур. Таким чином, в одному з варіантів здійснення, даний винахід стосується гуманізованих антитіл або їх епітопзв'язувального фрагмента, що включають один або більше CDR з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 і 36. У переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB13, який включає 2 UA 105507 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотною послідовністю SEQ ID NO: 1, 2 і 3, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 4, 5 і 6. В іншому переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB18, який включає щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 7, 8 і 9, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 10, 11 і 12. В іншому переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB19, який включає щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 13, 14 і 15, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 16, 17 і 18. В іншому переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB30, який включає щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 19, 20 і 21, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 22, 23 і 24. В іншому переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB31, який включає щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 25, 26 і 27, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 28, 29 і 30. В іншому переважному варіанті здійснення запропонований гуманізований варіант 38SB39, що включає щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де зазначений важкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 31, 32 і 33, і де зазначений легкий ланцюг включає три послідовні гіперваріабельні області з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO: 34, 35 і 36. В одному варіанті здійснення даний винахід забезпечує гуманізовані антитіла або їх фрагменти, які включають VH, що має амінокислотну послідовність, яка вибрана з групи SEQ ID NO: 66 і 72. У переважному варіанті здійснення запропоноване гуманізоване антитіло 38SB19, яке включає VH амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 66. В іншому переважному варіанті здійснення запропоноване гуманізоване антитіло 38SB31, яке включає VH амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 72. В іншому варіанті здійснення даний винахід забезпечує гуманізовані антитіла або їх фрагменти, які включають VL з амінокислотною послідовністю, що вибрана з групи SEQ ID NO: 62, 64, 68 і 70. У переважному варіанті здійснення запропоноване гуманізоване антитіло 38SB19, яке включає VL з амінокислотною послідовністю, що вибрана з групи SEQ ID NO: 62 і 64. В іншому переважному варіанті здійснення запропоноване гуманізоване антитіло 38SB31, яке включає VL з амінокислотною послідовністю, що вибрана з групи SEQ ID NO: 68 і 70. Було показано, що кожний з гуманізованих варіантів антитіл 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39 має конкретні переваги як протираковий засіб. Їх одержання, фізичні властивості і вигідні фармакологічні властивості описані в WO 2008/047242, опис якого наведений в даному документі як посилання в повному обсязі. У більшості випадків, дози, використовувані при лікуванні людей, залежать від факторів, які індивідуально відрізняються у індивідів, що проходять лікування, і складають 1-150 мг/кг при пероральному введенні або 1-150 мг/кг при внутрішньовенному введенні. Вінкристин (торгове найменування Онковін (Oncovin™)), також відомий як лейрокристин, є алкалоїдом барвінку, використовуваним для лікування раку, включаючи лейкоз, лімфому, рак молочної залози і легень. Вінкристин є інгібітором мітозу, що зв'язується з димерами тубуліну і інгібує збирання мікротубулінових структур (наприклад, мітотичного веретена). Інгібування збирання мітотичного веретена приводить до зупинення циклу клітинного поділу в метафазі. Вінкристин звичайно вводять внутрішньовенно. Одним з аспектів винаходу є фармацевтична композиція, яка включає антитіло до CD38 у комбінації щонайменше з вінкристином. Оскільки активність продуктів залежить від використовуваних доз, то можна використовувати більш низькі дози і підвищувати активність, зменшуючи прояви токсичності. Підвищена ефективність комбінації за винаходом може бути показана при визначенні терапевтичної синергії. Комбінація виявляє терапевтичну синергію, якщо вона терапевтично перевершує кращий засіб у дослідженні, використовуваний окремо в 3 UA 105507 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 максимально переносимій дозі або в найбільш високій протестованій дозі, при якій не виявляється токсичність на тваринах. Зазначена ефективність може бути визначена кількісно, наприклад, за допомогою log 10 знищених клітин, що визначають відповідно до наступної формули: log10 знищених клітин = T-C(дні)/3,32×Td, у який T-C позначає період затримки росту клітин, що являє собою середній період часу, виражений у днях, необхідний для того, щоб пухлини групи, яка проходить лікування (Т), і пухлини контрольної групи (С) досягли заданого розміру (наприклад, 1 г), а T d являє собою період часу, виражений у днях, необхідний для подвоєння об'єму пухлини у контрольних тварин [Corbett T.H. et al., Cancer, 40: 2660-2680 (1977); Schabel F.M. et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17: 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)]. Продукт вважається активним, якщо log10 знищених клітин більше або дорівнює 0,7. Продукт вважається дуже активним, якщо log10 знищених клітин більше або дорівнює 2,8. Комбінація виявляє терапевтичну синергію, якщо log10 знищених клітин перевищує значення log10 знищених клітин кращого компонента при його окремому введенні в максимальній переносимій дозі або в максимальній протестованій дозі. Ефективність комбінацій на солідних пухлинах можна визначити експериментально наступним чином. Тваринам, використовуваним в експерименті, звичайно мишам, білатерально підшкірно прищеплюють від 30 до 60 мг фрагмента пухлини на день 0. Тварин, що мають пухлини, довільно розподіляють у групи терапії, на основі розміру їх пухлини перед різним впливом, і в контрольні групи. Хіміотерапію починають, коли пухлини досягають заданого розміру після щеплення, залежно від типу пухлини, і ведуть щоденне спостереження за тваринами. Тварин у різних групах зважують щодня в ході терапії, поки не досягається максимальна втрата ваги і не відбувається наступне повне відновлення ваги. Потім у групах проводять зважування декілька разів на тиждень до закінчення експерименту. Пухлини вимірюють 1-5 разів на тиждень, залежно від періоду подвоєння розміру пухлини, поки пухлина не досягне ваги приблизно 2 г або поки тварина не загине (якщо це відбувається перш ніж пухлина досягне ваги 2 г). Тварин піддають розтину відразу після умертвіння або загибелі. Протипухлинну активність визначають відповідно до різних зареєстрованих параметрів. Результати, одержані з комбінаціями hu38SB19 і вінкристину, використовуваних у своїх оптимальних дозах, представлені нижче як приклади. Даний винахід також стосується, таким чином, фармацевтичних композицій, які містять комбінації за винаходом. Компоненти, з яких складається комбінація, можуть бути введені одночасно, практично одночасно, окремо або введення можна розподілити у часі так, щоб одержати максимальну ефективність комбінації; кожне введення при цьому може мати різну тривалість, від швидкого повного введення до безупинної перфузії. У результаті, у рамках даного винаходу, комбінації не обмежені тільки тими, котрі одержують шляхом фізичного об'єднання компонентів, але також і тими, котрі можуть застосовуватися для роздільного введення, яке може здійснюватися одночасно або з інтервалами. Композиції за винаходом, переважно, є композиціями, які можуть бути введені парентерально. Проте, зазначені композиції можуть бути введені перорально, підшкірно або внутрішньоочеревинно у випадку локалізованої місцевої терапії. Композиції для парентерального введення звичайно являють собою фармацевтично прийнятні стерильні розчини або суспензії, які при необхідності можуть бути одержані безпосередньо перед застосуванням. Для одержання неводних розчинів або суспензій можуть використовуватися натуральні рослинні олії, такі як маслинова олія, кунжутна олія, або рідкий парафін, або органічні складні ефіри, придатні для ін'єкцій, такі як етилолеат. Стерильні водні розчини можуть складатися з розчину продукту у воді. Водні розчини придатні для внутрішньовенного введення, якщо pН належним чином відрегульований, а розчин зроблений ізотонічним, наприклад, за допомогою достатньої кількості хлориду натрію або глюкози. Стерилізація може бути виконана за допомогою нагрівання або будь-яким іншим способом, що не робить несприятливого впливу на композицію. Комбінації можуть також знаходитися у формі ліпосом або у формі комплексів з носіями, такими як циклодестрини або поліетиленгліколі. Композиції для перорального, підшкірного або внутрішньоочеревинного введення, переважно, є водними суспензіями або розчинами. 4 UA 105507 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У комбінаціях за винаходом, використання компонентів яких може бути одночасним, роздільним або розподіленим у часі, кількість гуманізованого антитіла до CD38 найбільш переважно складає 10-90 % від ваги комбінації, при цьому зазначений вміст може змінюватися залежно від властивостей асоційованої речовини, необхідної ефективності і характеру раку, що підлягає лікуванню. Комбінації за винаходом можуть використовуватися особливо при лікуванні декількох типів ракових пухлин, включаючи (без обмеження) наступні: карциноми й аденокарциноми, включаючи карциноми й аденокарциноми сечового міхура, молочної залози, товстої кишки, голови і шиї, простати, нирки, печінки, легені, яєчника, підшлункової залози, шлунка, шийки матки, щитовидної залози і шкіри, включаючи також плоскоклітинну карциному; гематопоетичні пухлини лімфоїдного походження, включаючи множинну мієлому, лейкоз, гострий і хронічний лімфоцитарний (або лімфатичний) лейкоз, гострий і хронічний лімфобластний лейкоз, Bклітинну лімфому, T-клітинну лімфому, неходжкінську лімфому (наприклад, лімфому Беркітта); гематопоетичні пухлини мієлоїдного походження, включаючи гострий і хронічний мієлогенний (мієлоїдний або мієлоцитарний) лейкоз, а також промієлоцитарний лейкоз; пухлини мезенхімального походження, включаючи фібросаркому, остеосаркому і рабдоміосаркому; пухлини центральної і периферичної нервової системи, включаючи астроцитому, нейробластому, гліому і шваному; а також інші пухлини, включаючи меланому, тератокарциному, пігментну ксеродерму, кератоакантому і семіному, та інші ракові пухлини, що підлягають визначенню, у яких експресується CD38. Головним чином, вони можуть використовуватися для лікування лейкозу, лімфоми і ракових пухлин, резистентних до стандартно застосовуваних протиракових засобів, оскільки антитіла до CD38 за винаходом мають унікальний механізм дії. Таким чином, винахід також стосується застосування вищевказаних комбінацій для одержання лікарського засобу, призначеного для лікування раку. Приклад У даному прикладі продемонстрована ефективність комбінації антитіла до CD38/вінкристину за винаходом при інгібуванні росту пухлини in vivo. Вибраною моделлю пухлини була трансплантована лінія клітин T-клітинного гострого лімфобластного лейкозу людини (T-ALL), DND-41, що вживлюється мишам із ТКІД. 2+ 2+ Hu38SB19 наготовлювали у фосфатносольовому буфері без Ca і Mg , pН 7,4. Hu38SB19 вводили внутрішньовенно, у дні 18, 21, 24, 27 після вживляння пухлини. Вінкристин приготовляли в 5 %-ому розчині глюкози у воді. Вінкристин вводили внутрішньовенно, одночасно з hu38SB19, у дні 18, 21, 24, 27 після вживляння пухлини. Результати експерименту представлені в Таблиці. Період подвоєння розміру пухлини = 3,4 дні. Використовували наступні граничні точки: - Токсичність виявляли при дозуваннях, що викликають втрату маси тіла в ≥20 % або загибель у ≥10 %. - Протипухлинну ефективність визначали, обчислюючи log10 знищених клітин = (TC)/[3,32×(час подвоєння розміру пухлини в днях)] (T означає серединний час, за який оброблені миші досягали 750 мг, а C означає серединний час (26,9 днів), за який контрольні миші досягали такого ж розміру; тварин, що вижили, без пухлини виключали з обчислень і зводили в таблицю окремо). Протипухлинну активність не виявляли при log10 знищених клітин 100 днів після заключного впливу). - Терапевтичний синергізм: комбінація має терапевтичний синергізм, якщо вона більш активна, ніж кращий засіб у дослідженні окремо (щонайменше log10 знищених клітин 1). Токсичність для вінкристину окремо спостерігали при дозі 1,3 мг/кг/ін'єкцію, з 25,2 % втратою маси тіла в нижчій точці в день 27, тобто, вище 20 %-ого порога. Максимальна нетоксична доза (HNTD) для вінкристину складала 0,8 мг/кг/ін'єкцію (повна введена доза = 3,2 мг/кг). Дозу 0,8 мг/кг/ін'єкцію також визначали як дуже активну, з log 10 знищених клітин 4,4. Мінімальна доза 0,3 мг/кг/ін'єкцію залишалася активною з log10 знищених клітин 1,4. Що стосується hu38SB19, продукт добре переносився в дозі 40 мг/кг/ін'єкцію. Якої-небудь токсичності не спостерігали, що можна пояснити відсутністю перехресної активності антитіла з мишачим CD38. Значення log10 знищених клітин склало 0,5, що вказує на те, що hu38DB19 не було активно в даних умовах. 5 UA 105507 C2 5 Комбінація вінкристину в дозі 1,3 мг/кг/ін'єкцію і hu38SB19 у дозі 40 мг/кг/ін'єкцію була токсична, з 24,6 % втратою маси тіла в нижчій точці в день 27, тобто, була дуже схожа на те, що спостерігали у випадку одного вінкристину в такій же дозі. Доза 0,8 мг/кг/ін'єкцію вінкристину з 40 мг/кг/ін'єкцію hu38SB19, як вважали, була дозою HNTD. Варте уваги, що зазначена доза показала 5/6 TFS наприкінці дослідження (день 160). Аналогічно, при більш низькій дозі 0,5 мг/кг/ін'єкцію вінкристину з 40 мг/кг/ін'єкцію hu38SB19 одержали 5/6 TFS у день 160 після вживляння пухлини. При обох еквітоксичних дозах одного вінкристину жодного TFS не було зареєстровано. Таким чином, можна зробити висновок, що дана комбінація демонструє терапевтичний синергізм. 10 6 UA 105507 C2 7 UA 105507 C2 8 UA 105507 C2 9 UA 105507 C2 10 UA 105507 C2 11 UA 105507 C2 12 UA 105507 C2 13 UA 105507 C2 14 UA 105507 C2 15 UA 105507 C2 16 UA 105507 C2 17 UA 105507 C2 18 UA 105507 C2 19 UA 105507 C2 20 UA 105507 C2 21 UA 105507 C2 22 UA 105507 C2 23 UA 105507 C2 24 UA 105507 C2 25 UA 105507 C2 26 UA 105507 C2 27 UA 105507 C2 28