Комбіноване лікування меланоми, що включає введення кобіметинібу і вемурафенібу

Реферат: Винахід належить до галузі молекулярної біології, а саме до лікування патологічних станів, таких як рак, та стосується композиції, яка містять кобіметиніб і вемурафеніб, а також застосування зазначеної композиції для лікування неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF . UA 114923 C2 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ [0001] Дана заявка заявляє пріоритет за первинною заявкою США № 61/684,673, поданою 17 серпня 2012 г, за первинною заявкою США № 61/705,575, поданою 25 вересня 2012 г, за первинною заявкою США № 61/706,026, поданою 26 вересня 2012 г, за первинною заявкою США № 61/722,725, поданою 5 листопада 2012 г, а також за первинною заявкою США № 61/780,708, поданою 13 березня 2013 г, зміст яких включений в дану заявку за допомогою посилання у всьому своєму обсязі. ОБЛАСТЬ ТЕХНІКИ [0002] Даний винахід відноситься в загальному вигляді до області молекулярної біології і до шляхів передачі сигналів. Конкретніше, даний винахід відноситься до способів лікування патологічних станів, таких як рак. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ [0003] Рак залишається однією з найбільш смертельних погроз здоров'ю людини. У всьому світі кількість випадків виникнення меланоми збільшується більшою мірою, чим ступінь виникнення будь-якого іншого раку людини (Roberts et al., Br. J. Dermatol (2002) 146:7-17, Boyle et al., Ann oncol (2004) 15:5-6). Хоча щорічна частота захворюваності усередині популяції варіює, як правило, зростання захворюваності є великим в популяціях представників європеоїдної раси зі світлою шкірою (приблизно 3 - 7% в рік). Згідно наявним оцінкам, щороку у всьому світі виникатиме приблизно 132000 нових випадків меланоми і приблизно 37000 смертей, викликаних меланомою. У США в 2009 році було зафіксовано 68720 нових випадків виникнення меланоми і 8650 смертей, викликаних меланомою (Jemal et al., CA Cancer J Clin (2009) 59:225-49). Результат хвороби у пацієнтів, страждаючих від меланоми, у високому ступені залежить від стадії захворювання на момент постановки діагнозу. Метастатична меланома є однією з найбільш смертельно небезпечних варіантів раку. Не дивлячись на недавній успіх в розвитку нових терапій для лікування меланоми, переважна більшість пацієнтів, страждаючих від меланоми, зрештою стають жертвами даної хвороби. Внаслідок цього залишається значна незадоволена потреба в поліпшенні результату в даному сегменті популяції пацієнтів, страждаючих від меланоми. Вемурафеніб схвалений FDA (Food and Drug Administration, Управління США по нагляду у сфері харчових продуктів і лікарських засобів) для лікування пацієнтів, страждаючих від неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAFV600E, що було ® підтверджене із застосуванням тесту для визначення мутації BRAF V600 cobas 4800 BRAF ® V600 Mutation Test (див. ЗЕЛБОРАФ [вемурафеніб], інструкція по застосуванню). Прийом вемурафенібу викликав зменшення ризику смерті на 63% і зменшення ризику прогресу захворювання або смерті на 74% в порівнянні з прийомом дакарбазину (Chapman et al., NEJM (2011) 364 (26):2507-16). Більш того, при лікуванні вемурафенібом частота відповіді була незмінно вище 50% і медіана ЗВ (загальної виживаності) складала від 14 до 16 місяців (Flaherty et al., NEJM (2010) 363:809-819; Chapman et al., id.; Sosman et al., NEJM (2012) 366(8):707). КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ [0005] У даному винаході запропоновано комбіновані способи лікування патологічного стану, такого як рак, в яких інгібітор MEK об'єднаний з інгібітором BRAF, внаслідок чого забезпечується значна протипухлинна активність. Зокрема, в даному винаході представлені дані клінічного дослідження інгібітору BRAF в комбінації з інгібітором MEK на пацієнтах, страждаючих від V600 неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF . [0006] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи лікування (наприклад, терапевтичного лікування) пацієнта (взаємозамінно іменованого в даній заявці V600 "індивідуум"), страждаючого від раку, позитивного за мутацією BRAF , причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнту (i) першої композиції, що містить [3,4-дифтор2-[(2-фтор-4-йодфеніл)аміно]феніл][3-гідрокси-3-[(2S)-2-піперидиніл]-1-азетидиніл]метанон (Сполука II) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; та (ii) другої композиції, що містить {3-[5-(4-хлорфеніл)-1H-піроло[2,3-b]піридин-3-карбоніл]-2,4-дифтор-феніл}-амід пропан1-сульфонової кислоти (Сполука I) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0007] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи лікування (наприклад, терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або V600 метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнту (i) першої композиції, що містить сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки в дозі 60 мг (наприклад, одна таблетка 60 мг) в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; та (ii) другої композиції, що містить сполуку I або 1 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки в дозі 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг), двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0008] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в по суті аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози таким чином, що зазначена сполука є іммобілізованою в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози (АС ГПМЦ) у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 1:9 до приблизно 5:5, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 2:8 до приблизно 4:6, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні приблизно 3:7, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція містить суміш, причому приблизно 97 мас. % зазначеної суміші складає вищезгаданий твердий молекулярний комплекс і приблизно 3 мас. % зазначеної суміші складає діоксид кремнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція містить суспензію вищезгаданого твердого молекулярного комплексу у фармацевтично прийнятному носії. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція є таблеткою, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуки I запропоновано у формі таблетки 240 мг (тобто таблетки, що містить 240 мг Сполуки I). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу сполуку 1 ® запропоновано у формі таблетки, яка продається як ЗЕЛБОРАФ . [0009] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, містить одну або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказана таблетка містить покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 20 мг, у формі таблетки 40 мг або у формі таблетки 60 мг (тобто таблетки, що містить 60 мг Сполуки II). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 60 мг. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу таблетка 60 мг запропонована в упаковці для таблеток або в блістерній упаковці. [0010] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу введення доз може бути одночасним або послідовним, причому вказане введення можна здійснювати у формі об'єднаного складу або у формі окремих складів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію (що містить Сполуку II) вводять послідовно після другої композиції (що містить Сполуку I) (включаючи, але не обмежуючись ними, наступні варіанти: вводять одну або декілька таблеток, що містять Сполуку I, а потім одну або декілька таблеток Сполуки II; вводять одну або декілька таблеток Сполуки I, потім одну або декілька таблеток Сполуки II, а потім одну або декілька таблеток Сполуки I). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять перед другою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу композицію вводять перед першою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять одночасно з другою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять одночасно з другою композицією, після чого слідує введення першої Сполуки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша і друга композиції запропоновані у формі комбінованого препарату (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - у формі таблетки). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша і друга композиції приготовані в лікарську форму спільно (наприклад, у вигляді фармацевтичного складу). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу дозу 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки вводять приблизно 2 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 через 12 годин після першої дози 960 мг (наприклад, чотирьох таблеток по 240 мг) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з їжею або без неї. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з їжею. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально без їжи. [0011] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або V600 метастатична меланома є меланомою, позитивною за мутацією BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або метастатична меланома є метастатичною меланомою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або метастатична меланома є неоперабельною меланомою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). V600 [0012] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу мутацію BRAF визначають за допомогою способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК, наприклад, геномної ДНК), екстрагованої із зразка меланоми пацієнта, методом ПЛР V600 (полімеразної ланцюгової реакції) або секвенування; і (b) визначення експресії BRAF у зазначеному зразку. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений зразок меланоми є зафіксованим у формаліні і залитим парафіном. Згідно деяким варіантам реалізації V600 даного винаходу мутацію BRAF визначають за допомогою способу, що включає (a) виділення ДНК (наприклад, геномної ДНК) із зразка меланоми пацієнта; (b) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК), екстрагованої із зразка меланоми пацієнта, методом V600 ПЛР; і (c) визначення експресії BRAF у зазначеному зразку. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений зразок меланоми є зафіксованим у формаліні і залитим парафіном. [0013] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані способи збільшення тривалості відповіді на лікування (наприклад, терапевтичне лікування) у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми (наприклад, неоперабельної або V600 метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF ), причому зазначені способи включають введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0014] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані способи відстрочення або запобігання розвитку резистентності до лікування (наприклад, резистентності до лікування інгібітором BRAF) у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми (наприклад, від неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією V600 BRAF ), причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнту (i) Сполуки II або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0015] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані фармацевтичні препарати, що включають (i) першу композицію, що містить [3,4-дифтор-2-[(2-фтор-4йодфеніл)аміно]феніл][3-гідрокси-3-[(2S)-2-піперидиніл]-1-азетидиніл]метанон (Сполуку II), або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другу композицію, що містить {3-[5-(4хлорфеніл)-1H-піроло[2,3-b]піридин-3-карбоніл]-2,4-дифтор-феніл}-амід пропан-1-сульфонової кислоти (Сполуку I) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; у формі комбінованого препарату для одночасного або послідовного застосування при лікуванні V600 неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому Сполуку II вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів і Сполуку I вводять в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0016] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в по суті аморфній формі. Згідно деяким 3 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози таким чином, що зазначена Сполука є іммобілізованою в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 1:9 до приблизно 5:5, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 2:8 до приблизно 4:6, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні приблизно 3:7, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція містить суміш, причому приблизно 97 мас. % вказаної суміші складає вищезгаданий твердий молекулярний комплекс і приблизно 3 мас. % вказаної суміші складає діоксид кремнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція містить суспензію вищезгаданого твердого молекулярного комплексу у фармацевтично прийнятному носії. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція є таблеткою, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки 240 мг (тобто таблетки, що містить 240 мг Сполуки I). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку 1 запропоновано у формі таблетки, яка ® продається як ЗЕЛБОРАФ (ZELBORAF®). [0017] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція містить одну або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказана таблетка містить покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетиленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 20 мг, у формі таблетки 40 мг або у формі таблетки 60 мг. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 60 мг. [0018] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу введення доз може бути одночасним або послідовним, причому зазначене введення можна здійснювати у формі об'єднаного складу або у формі окремих складів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію (що містить Сполуку II) вводять послідовно після другої композиції (що містить Сполуку I) (включаючи, але не обмежуючись ними, наступні варіанти: вводять одну або декілька таблеток, що містять Сполуку I, а потім одну або декілька таблеток Сполуки II; вводять одну або декілька таблеток Сполуки I, потім одну або декілька таблеток Сполуки II, а потім одну або декілька таблеток Сполуки I). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять перед другою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу композицію вводять перед першою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять одночасно з другою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять одночасно з другою композицією, після чого слідує введення першої Сполуки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша і друга композиції запропоновані у формі комбінованого препарату (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - у формі таблетки). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша і друга композиції приготовані в лікарську форму спільно (наприклад, у вигляді фармацевтичного складу). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу дозу 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг) Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять приблизно через 12 годин після першої дози 960 мг (наприклад, чотирьох таблеток по 240 мг) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з їжею або без неї. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично 4 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з їжею. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально без їжі. [0019] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або V600E метастатична меланома є меланомою, позитивною за мутацією BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або метастатична меланома є метастатичною меланомою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельна або метастатична меланома є неоперабельною меланомою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). V600 [0020] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу мутацію BRAF визначають за допомогою способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК), V600 екстрагованої із зразка меланоми пацієнта, методом ПЛР; і (b) визначення експресії BRAF у зазначеному зразку. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначеним зразком меланоми є зразок, зафіксований у формаліні і залитий парафіном. [0021] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані способи вибору терапії для пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, що включають V600 визначення присутності мутації BRAF в зразку пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, і вибирання лікарського засобу для лікування раку на основі V600 присутності мутації BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу V600 встановлюють, що у зазначеному зразку експресується мутація BRAF , і вибирають лікування композицією, що міститьСполуку II, в комбінації з композицією, що містить Сполуку I. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт одержує лікування неоперабельної або метастатичної меланоми способом, що включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0022] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані способи оптимізації V600 терапевтичної ефективності, що включають визначення присутності мутації BRAF в зразку неоперабельної або метастатичної меланоми пацієнта і вибирання протиракового лікарського V600 засобу на основі присутності мутації BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного V600 винаходу встановлюють, що у вказаному зразку експресується мутація BRAF , і вибирають лікування першою композицією, що містить Сполуку II, в комбінації з другою композицією, що містить Сполуку I. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт одержує лікування неоперабельної або метастатичної меланоми способом, що включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0023] Згідно деяким варіантам реалізації будь-якого з винаходів, описаних в даній заявці, присутність (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - присутність або відсутність) V600 мутації BRAF визначають в результаті оцінки нуклеїнової кислоти BRAF. Згідно деяким V600 варіантам реалізації даного винаходу присутність мутації BRAF визначають із застосуванням методу, який вибирають з: полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) (включаючи, але не обмежуючись ними, кількісну ПЛР в реальному часі і алель-специфічну ПЛР), секвенування (включаючи, але не обмежуючись ними, секвенування методом Сенджера та/або піросеквенування), гібридизації із застосуванням алель-специфічних олігонуклеотидів, добудови праймера, алель-специфічного лігування або методик електрофоретичного розділення (включаючи, але не обмежуючись ними, аналіз одноланцюгового конформаційного поліморфізму (SSCP, single-strand conformation polymorphism) і гетеродуплексний аналіз), а також з аналізів із застосуванням 5′-нуклеаз. Згідно деяким варіантам реалізації даного V600 винаходу присутність мутації BRAF визначають із застосуванням ПЛР або секвенувань. V600 Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу присутність мутації BRAF визначають методом, що включає (a) здійснення аналізу геномної ДНК, екстрагованої із зразка меланоми пацієнта, методом ПЛР; і (b) визначення експресії полінуклеотиду мутанта BRAF в результаті 5 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 секвенування нуклеїнової кислоти, ампліфікованої методом ПЛР. Згідно деяким варіантам V600 реалізації даного винаходу присутність мутації BRAF визначають методом (a) гібридизації першого і другого олігонуклеотидів з щонайменше одним варіантом послідовності-мішені BRAF; причому зазначений перший олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і зазначений другий олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і містить щонайменше один внутрішній селективний нуклеотид, комплементарний виключно одному варіанту послідовності-мішені; (b) подовження другого олігонуклеотиду за допомогою полімерази нуклеїнової кислоти; причому зазначена полімераза здатна переважно подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид утворює пару основ з мішенню, і по суті менш здатна подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид не утворює пару основ з мішенню; і (c) виявлення продуктів подовження олігонуклеотиду, причому вказане подовження свідчить про присутність варіанту послідовності-мішені, до якої зазначений олігонуклеотид містить комплементарний селективний нуклеотид. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначеним зразком (зразок меланоми) є зразок, зафіксований у формаліні і залитий парафіном. Зазначений зразок може бути одержаний до початку лікування пацієнта протираковим лікарським засобом. Зазначений зразок може бути одержаний з первинної пухлини або з метастатичної пухлини. Зазначений зразок може бути одержаний, коли рак було діагностовано вперше, та/або, наприклад, після того, як пухлина метастазувала. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений зразок метастатичної пухлини одержаний з легенів, шкіри, лімфатичного вузла, кістки, печінки, товстої кишки, щитовидної залози та/або яєчника. [0024] Згідно іншому аспекту способи, описані в даній заявці, також включають лікування додатковим терапевтичним агентом. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу додатковий терапевтичний агент є протираковим лікарським засобом. [0025] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані набори, що включають (i) першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другу композицію, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений набір включає інструкції для здійснення будь-якого із способів, описаних в даній заявці. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказані інструкції призначені для способів лікування (наприклад, терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або V600 метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому вказані способи включають введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначені набори призначені для застосування при лікуванні неоперабельної V600 або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказана меланома є неоперабельною або метастатичною V600E меланомою, позитивною за мутацією BRAF . Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому раніше не піддавали лікуванню. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, є таблеткою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція, що містить Сполуку I, є таблеткою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як перша композиція, що містить Сполуку II, так і друга композиція, що містить Сполуку I, запропоновані у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку I, і друга композиція, що містить Сполуку II, запропоновані у вигляді одиничної дозованої форми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, і друга композиція, що містить Сполуку I, приготовані в лікарську форму спільно (наприклад, у вигляді фармацевтичного складу). [0026] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані вироби для застосування при лікуванні (наприклад, при терапевтичному лікуванні) раку (такого як неоперабельна або V600 метастатична меланома, позитивна за мутацією BRAF ). Зазначений виріб включає контейнер і етикетку або інструкцію по застосуванню, які знаходяться на контейнері або відносяться до контейнера. Відповідні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци, упаковки для таблеток, блістерні упаковки, дискові упаковки (dial pack) і т. д. Згідно 6 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 деяким варіантам реалізації даного винаходу вказаний виріб включає контейнер і таблетку, що містить 60 мг Сполуки II. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказаний виріб включає контейнер і таблетку, що містить 20 мг або 40 мг Сполуки II. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказаний виріб включає контейнер, що містить (a) першу композицію, що містить Сполуку II (наприклад, 60 мг Сполуки II), запропоновану у формі таблетки, і (b) другу композицію, що містить Сполуку I (наприклад, 960 мг Сполуки I), запропоновану у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказаний контейнер є упаковкою для таблеток або блістерною упаковкою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказаний виріб (наприклад, запропонований у формі упаковки для таблеток або блістерної упаковки) містить 21 таблетку композиції, що містить Сполуку II (наприклад, 60 мг Сполуки II); а також таблетки композиції, що містить Сполуку I (наприклад, 960 мг Сполуки I (наприклад, чотири таблетки по 240 мг)). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу на вказаній етикетці запропоновані інструкції для будь-якого із способів лікування, описаних в даній заявці. [0027] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані діагностичні набори, придатні для виявлення будь-якого одного або декількох біомаркерів, описаних в даній заявці. Відповідно, в даному винаході запропонований діагностичний набір, який містить один або V600 декілька реактивів для визначення експресії BRAF, такий як експресія біомаркера BRAF , в зразку пацієнта, страждаючого від раку. В деяких випадках набір додатково включає інструкції по застосуванню вказаного набору, у випадку якщо в неоперабельній або метастатичній V600 меланомі пацієнта експресується BRAF , для вибору лікування Сполукою II в комбінації із Сполукою I (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, причому вказане лікування включає введення (i) Сполуки II або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [0028] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані способи для просування або реклами лікарського засобу для лікування раку, що включають просування в цільовій аудиторії застосування Сполуки II для лікування (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією V600 BRAF , в комбінації з вемурафенібом, причому вказане лікування включає введення (i) Сполуки II або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [0029] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропоновані методи ведення бізнесу, що включають виведення на ринок застосування Сполуки II для лікування (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF , в комбінації із Сполукою I, причому вказане лікування включає введення (i) Сполуки II або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [0030] Дані та інші аспекти і переваги даного винаходу будуть очевидними з наступного докладного опису і формули винаходу, що додається. Слід розуміти, що одне, деякі або всі з властивостей різних варіантів реалізації даного винаходу, описаних в даній заявці, можуть бути об'єднані для утворення інших варіантів реалізації даного винаходу. СТИСЛИЙ ОПИС ФІГУР [0031] На фігурі 1 представлений план збільшення дози для клінічного дослідження Фази Ib, 7 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 що включає лікування комбінацією вемурафенібу і GDC-0973, які вводять згідно одному з наступних режимів введення тривалістю 28 днів: 14 днів підряд прийому досліджуваного препарату, після чого слідують лікарські канікули тривалістю 14 днів (14/14), 21 день підряд прийому досліджуваного препарату, після чого слідують лікарські канікули тривалістю 7 днів (21/7), або безперервний прийом щоденної дози (28/0). Тривалість кожного циклу лікування складає 28 днів. [0032] На фігурі 2 представлена схема введення доз для вемурафенібу і GDC-0973 або плацебо. Показано два цикли введення доз. [0033] На фігурі 3 представлені характеристики пацієнтів. [0034] На фігурі 4 представлені небажані явища, обумовлені прийомом вемурафенібу або GDC-0973, що виникли у всіх пацієнтів. [0035] На фігурі 5 представлені небажані явища, які привели до припинення терапії, зменшення дози і повного дострокового припинення прийому препарату. [0036] На фігурі 6 представлені зміни розміру пухлини від початкового рівня до якнайкращої відповіді у пацієнтів, чиє захворювання прогресувало при попередньому введенні вемурафенібу. [0037] На фігурі 7 представлені зміни розміру пухлині від початкового рівня до якнайкращої відповіді у пацієнтів, які раніше не проходили курс лікування вемурафенібом. [0038] На фігурах 8A і B представлено: A. Відповідь пацієнта, чиє захворювання прогресувало під час попереднього лікування вемурафенібом, після лікування вемурафенібом + GDC-0973 у формі зображення, одержаного методом ПЕТ (позитронно-емісійної томографії). B. Додаткові приклади відповідей у формі зображень ПЕТ пацієнтів, чиє захворювання прогресувало під час попереднього лікування вемурафенібом, які одержували лікування вемурафенібом + GDC-0973 (GDC). ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ [0039] Фармацевтичний препарат, що містить (i) першу композицію, яка містить [3,4-дифтор2-[(2-фтор-4-йодфеніл)аміно]феніл][3-гідрокси-3-[(2S)-2-піперидиніл]-1-азетидиніл]метанон (Сполуку II) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другу композицію, яка містить {3-[5-(4-хлорфеніл)-1H-піроло[2,3-b]піридин-3-карбоніл]-2,4-дифтор-феніл}-амід пропан1-сульфонової кислоти (Сполуку I) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; у формі комбінованого препарату для одночасного або послідовного застосування при лікуванні V600 неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому Сполуку II вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів і Сполуку I вводять в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0040] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0039], причому першу композицію вводять послідовно після другої композиції. [0041] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0039], причому першу композицію вводять одночасно з другою композицією. [0042] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0039], причому перша і друга композиції приготовані в лікарську форму спільно. [0043] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0042], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в по суті аморфній формі. [0044] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0042], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в аморфній формі. [0045] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0044], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози таким чином, що зазначена Сполука є іммобілізованою в аморфній формі. [0046] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0045], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у зазначеному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 1:9 до приблизно 5:5, відповідно. [0047] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований 8 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 фармацевтичний препарат за абзацем [0045], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у зазначеному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 2,8 до приблизно 4,6, відповідно. [0048] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0045], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у зазначеному комплексі знаходяться в співвідношенні приблизно 3:7, відповідно. [0049] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0045], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у зазначеному комплексі знаходяться в співвідношенні 3:7, відповідно. [0050] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0049], причому друга композиція містить суміш, що відрізняється тим, що приблизно 97 мас. % вказаної суміші складає твердий молекулярний комплекс за п. 7 і приблизно 3 мас. % вказаної суміші складає діоксид кремнію. [0051] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0049], причому друга композиція містить суспензію твердого молекулярного комплексу за п. 7 у фармацевтично прийнятному носії. [0052] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0049], причому друга композиція є таблеткою, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. [0053] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0052], причому перша композиція містить одну або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. [0054] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0052], причому Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. [0055] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0054], причому зазначена таблетка містить покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. [0056] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0055], причому Сполуку II запропоновано у формі таблетки 20 мг, у формі таблетки 40 мг або у формі таблетки 60 мг. [0057] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0056], причому другу дозу 960 мг Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки вводять приблизно через 12 годин після введення першої дози 960 мг Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки. [0058] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0057], причому як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з прийомом їжі або без нього. [0059] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0058], причому неоперабельна V600E або метастатична меланома є меланомою, позитивною за мутацією BRAF . [0060] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0059], причому неоперабельна або метастатична меланома є метастатичною меланомою. [0061] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований V600 фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0060], причому мутацію BRAF визначають за допомогою способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК), екстрагованої із зразка меланоми пацієнта, методом ПЛР; і (b) визначення V600 експресії BRAF у зазначеному зразку. [0062] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований 9 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 фармацевтичний препарат за абзацем [0061], причому зазначеним зразком меланоми є зразок, зафіксований у формаліні і залитий парафіном. [0063] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0062], причому неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню. [0064] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за будь-яким з абзаців з [0039] по [0063] для застосування у виробництві лікарського засобу для лікування неоперабельної або метастатичної меланоми, V600 позитивної за мутацією BRAF . [0065] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований фармацевтичний препарат за абзацем [0064], причому неоперабельну або метастатичну V600 меланому, позитивну за мутацією BRAF , раніше не піддавали лікуванню. [0066] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований набір, що включає (i) першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другу композицію, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки. [0067] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований набір за абзацем [0066] для застосування при лікуванні неоперабельної або метастатичної меланоми, V600 позитивної за мутацією BRAF . [0068] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований набір за абзацем [0067], причому неоперабельну або метастатичну меланому, позитивну за мутацією V600 BRAF , раніше не піддавали лікуванню. [0069] Згідно одному варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб для збільшення тривалості відповіді на лікування у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або V600 метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому зазначений спосіб включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0070] Згідно одному варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб відстрочення або запобігання розвитку резистентності до лікування (наприклад, резистентності до лікування інгібітором BRAF) у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому вказаний спосіб включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [0071] Згідно одному варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб лікування пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAFV600, причому вказаний спосіб включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0072] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0071], причому першу композицію вводять послідовно після другої композиції. [0073] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців [0069] по [0071], причому першу композицію вводять одночасно з другою композицією. [0074] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0073], причому перша і друга композиції приготовані в лікарську форму спільно. [0075] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб для вибору терапії для пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, V600 що включає визначення присутності мутації BRAF в зразку пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, і вибирання лікарського засобу для лікування V600 раку на основі присутності мутації BRAF . [0076] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0075], причому було встановлено, що у зазначеному зразку експресується мутація V600 BRAF , і причому вибирають лікування Сполукою II в комбінації із Сполукою I. 10 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0077] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0076], причому пацієнт одержує лікування неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF , способом, що включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0078] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб для V600 оптимізації терапевтичної ефективності, що включає визначення присутності мутації BRAF в зразку неоперабельної або метастатичної меланоми пацієнта і вибирання лікарського засобу V600 для лікування раку на основі присутності мутації BRAF . [0079] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0078], причому було встановлено, що у зазначеному зразку експресується мутація V600 BRAF , і причому вибирають лікування Сполукою II в комбінації із Сполукою I. [0080] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0079], причому пацієнт одержує лікування неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF , способом, що включає введення зазначеному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [0081] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьV600 яким з абзаців з [0075] по [0080], причому присутність мутації BRAF визначають в результаті оцінки нуклеїнової кислоти BRAF. [0082] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьV600 яким з абзаців з [0075] по [0081], причому присутність мутації BRAF визначають із застосуванням методу, який вибирають з: полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) (включаючи, але не обмежуючись ними, кількісну ПЛР в реальному часі і алель-специфічну ПЛР), секвенування (включаючи, але не обмежуючись ними, секвенування методом Сенджера та/або піросеквенування), гібридизації із застосуванням алель-специфічних олігонуклеотидів, добудови праймера, алель-специфічного лігування або методик електрофоретичного розділення (включаючи, але не обмежуючись ними, аналіз одноланцюгового конформаційного поліморфізму (SSCP) і гетеродуплексний аналіз), а також з аналізів із застосуванням 5'-нуклеаз. [0083] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьV600 яким з абзаців з [0075] по [0081], причому присутність мутації BRAF визначають із застосуванням ПЛР або секвенувань. [0084] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьV600 яким з абзаців з [0075] по [0081], причому присутність мутації BRAF визначають способом, що включає (a) гібридизацію першого і другого олігонуклеотидів з щонайменше одним варіантом послідовності-мішені BRAF; причому вказаний перший олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і вказаний другий олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і містить щонайменше один внутрішній селективний нуклеотид, комплементарний виключно одному варіанту послідовності-мішені; (b) подовження другого олігонуклеотиду за допомогою полімерази нуклеїнової кислоти; причому зазначена полімераза здатна переважно подовжувати вказаний другий олігонуклеотид, коли вказаний селективний нуклеотид утворює пару основ з мішенню, і по суті менш здатна подовжувати вказаний другий олігонуклеотид, коли вказаний селективний нуклеотид не утворює пару основ з мішенню; і (c) виявлення продуктів подовження олігонуклеотиду, причому вказане подовження свідчить про присутність варіанту послідовності-мішені, до якої вказаний олігонуклеотид містить комплементарний селективний нуклеотид. [0085] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0084], причому зазначеним зразком є зразок, зафіксований у формаліні і залитий парафіном. [0086] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0039] по [0085], що також включає лікування додатковим терапевтичним агентом. [0087] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0086], причому неоперабельну або метастатичну меланому, V600 позитивну за мутацією BRAF , раніше не піддавали лікуванню. 11 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55[0088] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0087], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в по суті аморфній формі. [0089] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0087], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в аморфній формі. [0090] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0089], причому Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози таким чином, що зазначена Сполука є іммобілізованою в аморфній формі. [0091] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0090], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 1:9 до приблизно 5:5, відповідно. [0092] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0090], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 2:8 до приблизно 4:6, відповідно. [0093] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0090], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 3:7, відповідно. [0094] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0090], причому кількості Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і ацетатсукцинату гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні 3:7, відповідно. [0095] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0089], причому друга композиція містить суміш, що відрізняється тим, що приблизно 97 мас. % вказаної суміші складає твердий молекулярний комплекс за п. 7 і приблизно 3 мас. % вказаної суміші складає діоксид кремнію. [0096] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0089], причому друга композиція містить суспензію твердого молекулярного комплексу за п. 7 у фармацевтично прийнятному носії. [0097] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0089], причому друга композиція є таблеткою, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. [0098] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0097], причому перша композиція містить одну або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. [0099] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0098], причому Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить моногідрат лактози, мікрокристалічну целюлозу, кроскармелозу натрію і стеарат магнію. [00100] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0098], причому вказана таблетка містить покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. [00101] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0098], причому Сполуку II запропоновано у формі таблетки 20 мг, у формі таблетки 40 мг або у формі таблетки 60 мг. [00102] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0101], причому другу дозу 960 мг Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки вводять приблизно через 12 годин після першої дози 960 мг Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки. [00103] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0102], причому як Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, так і Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки вводять перорально разом з їжею або без неї. 12 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [00104] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0103], причому неоперабельна або метастатична меланома є V600E меланомою, позитивною за мутацією BRAF . [00105] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0103], причому неоперабельна або метастатична меланома є метастатичною меланомою. [00106] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьV600 яким з абзаців з [0069] по [0105], причому мутацію BRAF визначають за допомогою способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК), екстрагованої із V600 зразка меланоми пацієнта, методом ПЛР; і (b) визначення експресії BRAF у зазначеному зразку. [00107] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за абзацем [0106], причому зазначений зразок меланоми є зафіксованим у формаліні і залитим парафіном. [00108] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0069] по [0108], причому неоперабельну або метастатичну меланому, V600 позитивну за мутацією BRAF , раніше не піддавали лікуванню. [00109] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований спосіб за будьяким з абзаців з [0039] по [0108], що також включає лікування додатковим терапевтичним агентом. I. ВИЗНАЧЕННЯ [00110] У даній заявці "пацієнт" (взаємозамінно використовується термін "індивідуум") є пацієнтом людиною. Пацієнт може бути "пацієнтом, страждаючим від раку", тобто особа, яка страждає від одного або декількох симптомів раку або яка схильна до ризику виникнення одного або декількох симптомів раку. Пацієнт може бути "пацієнтом, страждаючим від меланоми", тобто особа, яка страждає від одного або декількох симптомів меланоми або яка схильна до ризику виникнення одного або декількох симптомів меланоми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт може бути «пацієнтом, страждаючим від неоперабельної або метастатичної меланоми», тобто особа, яка страждає від одного або декількох симптомів неоперабельної або метастатичної меланоми або яка схильна до ризику виникнення одного або декількох симптомів неоперабельної або метастатичної меланоми. [00111] Термін "BRAF" в даній заявці відноситься, якщо не вказане протилежне, до будьякого нативного або модифікованого (нативним або синтетичним шляхом) поліпептиду BRAF. Термін "BRAF дикого типу", як правило, відноситься до поліпептиду, що містить амінокислотну послідовність білка BRAF, що існує в природі. [00112] Термін "варіант BRAF" в даній заявці відноситься до поліпептиду BRAF, який містить одну або декілька амінокислотних мутацій в нативній послідовності BRAF. В деяких випадках одна або декілька амінокислотних мутацій включають амінокислотну заміну або заміни. V600 [00113] У даній заявці "меланома, позитивна за мутацією BRAF " відноситься до меланоми пацієнта (наприклад, неоперабельній або метастатичній меланомі), в якій, як було V600 встановлено, експресується BRAF . V600E [00114] У даній заявці "меланома, позитивна за мутацією BRAF " відноситься до меланоми пацієнта (наприклад, неоперабельній або метастатичній меланомі), в якій, як було V600E встановлено, експресується BRAF . [00115] Мутація BRAF "V600" в даній заявці (взаємозамінно використовується термін V600 "BRAF ") відноситься до мутації в білку BRAF, при якій амінокислотний залишок валіну в положенні залишку 600 BRAF замінений іншим амінокислотним залишком. "V600" також відома як "V599" згідно попередній системі нумерації (Kumar et al., Clin. Cancer Res. 9:3362-3368, 2003). [00116] Мутація BRAF "V600E" в даній заявці відноситься до мутації в білці BRAF, при якій амінокислотний залишок валіну в положенні залишку 600 BRAF замінений глутаміновою кислотою. "V600E" також відома як "V599E" згідно попередній системі нумерації (Kumar et al., Clin. Cancer Res. 9:3362-3368, 2003). [00117] Термін "мутація" в даній заявці означає відмінність послідовності амінокислоти або нуклеїнової кислоти конкретного білка або нуклеїнової кислоти (гена, РНК) від білка або нуклеїнової кислоти дикого типу, відповідно. Білок мутанта або нуклеїнова кислота можуть експресуватися з одного алеля або можуть бути виявлені в одному алелі (гетерозиготні мутації) або в обох алелях гена (гомозиготні мутації) і можуть бути соматичними мутаціями або мутаціями зародкової лінії. У даному винаході мутації, як правило, є соматичними. Мутації включають перебудови послідовності, такі як інсерції, делеції, а також точкові мутації (зокрема поліморфізм окремих нуклеотидів/амінокислот). 13 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [00118] "Інгібувати" означає зменшувати або знижувати активність, функцію та/або кількість в порівнянні з еталоном. [00119] "Експресія" білка відноситься до перетворення інформації, закодованої в гені, в матричну РНК (мРНК), а потім в білок. [00120] У даній заявці зразок або клітина, в яких «експресується» білок, представляє інтерес V600 V600E (такий як BRAF , наприклад BRAF ) є зразком або клітиною, в яких, як було встановлено, присутня нуклеїнова кислота (наприклад, ДНК або мРНК), що кодує зазначений білок, або присутній сам зазначений білок, включаючи його фрагменти. Рак (наприклад, неоперабельна або метастатична меланома), в якому «експресується» білок, що представляє інтерес (такий як V600 V600E BRAF , наприклад BRAF ), є раком (наприклад, неоперабельною або метастатичною меланомою), в зразку якого, як було встановлено, присутня нуклеїнова кислота (наприклад, ДНК або мРНК), що кодує зазначений білок, або присутній сам зазначений білок, включаючи його фрагменти. [00121] "Популяція" пацієнтів відноситься до групи пацієнтів, страждаючих від раку, такої як пацієнти, що беруть участь в клінічному дослідженні, або пацієнти, яким онкологами згідно керівництву FDA була призначена терапія для конкретного показання, така як протиракова терапія неоперабельної або метастатичної меланоми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу вказане свідчення є неоперабельною або метастатичною меланомою, V600 позитивною за мутацією BRAF . [00122] Для способів згідно даному винаходу термін «інструктаж» пацієнта означає надання вказівок про вживану терапію, лікарський засіб, лікування, режими лікування і тому подібне будь-яким способом, але переважно у письмовій формі, такої як форма інструкцій по застосуванню або іншого рекламного матеріалу у письмовій формі. [00123] Для способів згідно даному винаходу термін «просування» означає пропозицію, рекламу, продаж або опис конкретного лікарського засобу, комбінації лікарських засобів або способу лікування будь-яким способом, зокрема у письмовій формі, такої як форма інструкцій по застосуванню. Просування в даній заявці відноситься до просування терапевтичного агента або агентів, таких як інгібітор MEK та/або інгібітор BRAF, для застосування при показанні, такому як лікування неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією V600 BRAF , причому таке просування схвалене Управлінням США по нагляду у сфері харчових продуктів і лікарських засобів (FDA), оскільки було продемонстровано, що застосування даних терапевтичних агентів в популяції суб'єктів пов'язане із статистично значущою терапевтичною ефективністю і прийнятною безпекою. [00124] Термін "маркетинг" в даній заявці використовують для опису просування, продажу або розповсюдження препарату (наприклад, лікарського засобу). Маркетинг, зокрема, включає упаковку, рекламу, а також будь-яку комерційну діяльність з метою комерціалізації препарату. [00125] Для цілей даної заявки пацієнт, страждаючий від раку, "який раніше одержував лікування", одержував попередню протиракову терапію. Пацієнт, страждаючий від неоперабельної або метастатичної меланоми, "який раніше одержував лікування", одержував попередню терапію неоперабельної або метастатичної меланоми. [00126] "Протираковим лікарським засобом" є лікарський засіб, ефективний для лікування раку. [00127] Термін "біомаркер" або "маркер" в даній заявці відноситься, як правило, до молекули, зокрема до гена, мРНК, білку, вуглеводній структурі або гліколіпіду, експресія або секреція якої в тканині або клітині або на тканині або клітині може бути виявлена відомими способами (або способами, розкритими в даній заявці) і є прогнозом або може бути використана для прогнозування (або сприяння прогнозуванню) сприйнятливості клітини, тканини або пацієнта до режимів лікування. [00128] "Зразок пацієнта" є результатом відбору аналогічних клітин, одержаних від пацієнта, страждаючого від раку. Джерелом зразка тканини або клітин може бути тверда тканина, така як тканина свіжого, замороженого та/або консервованого органу, або зразок тканини, або зразок, одержаний в результаті біопсії, або матеріал, одержаний шляхом аспірації; кров або будь-які компоненти крові; рідини організму, такі як спинномозкова рідина, амніотична рідина, перитонеальна рідина або тканинна рідина; клітини, відібрані у будь-який момент внутрішньоутробного розвитку або життя суб'єкта. Зразок тканини може містити сполуки, які в нормі не змішуються з даною тканиною в природі, такі як консерванти, антикоагулянти, буфери, фіксатори,живильні речовини, антибіотики або тому подібне. Приклади зразків пухлини в даній заявці включають, але не обмежуються ними, зразки, одержані при біопсії пухлини, циркулюючі пухлинні клітини, сироватку або плазму, циркулюючі в плазмі білки, асцитичну рідину, первинні культури клітин або лінії клітин, що походять від пухлин або демонструючі властивості, подібні 14 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 пухлини, а також консервовані зразки тканини, такі як зафіксовані у формаліні, залиті парафіном зразки пухлини або заморожені зразки пухлини. Згідно одному варіанту реалізації зазначений зразок є неоперабельною або метастатичною меланомою. [00129] "Ефективна відповідь" пацієнта або "сприйнятливість" пацієнта до лікування лікарським засобом і аналогічні формулювання відносяться до клінічної або терапевтичної користі, яку пацієнт, схильний до ризику виникнення раку або страждаючий від раку (наприклад, V600 від неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF ), одержує після введення протиракового лікарського засобу. Така користь включає будь-яку одну або декілька з наступних подій: продовження виживаності (зокрема загальної виживаності і виживаності без прогресу захворювання); приведення до об'єктивної відповіді (зокрема до повної відповіді або часткової відповіді); або ознаки поліпшення симптомів раку і т. д. [00130] "Виживаність" відноситься до пацієнта, який залишається живим, і включає загальну виживаність, а також виживаність без прогресу захворювання. [00131] "Загальна виживаність" відноситься до пацієнта, який залишається живим протягом певного періоду часу з моменту постановки діагнозу або початку лікування. [00132] "Виживаність без прогресу захворювання" відноситься до пацієнта, який залишається живим без прогресу раку або без погіршення його стану. [00133] "Продовження виживаності" означає збільшення загальної виживаності або виживаності без прогресу захворювання у пацієнта, який одержує лікування, в порівнянні з пацієнтом, який не одержує лікування (тобто в порівнянні з пацієнтом, який не одержує лікування лікарським препаратом) або в порівнянні з пацієнтом, у якого не експресується біомаркер на встановленому рівні, та/або в порівнянні з пацієнтом, якого лікують схваленим протираковим лікарським засобом, таким як вемурафеніб. [00134] "Об'єктивна відповідь" відноситься до вимірюваної відповіді, зокрема до повної відповіді (CR, complete response) або до часткової відповіді (PR, partial response). [00135] "Повна відповідь" або "CR" означає зникнення всіх ознак раку у відповідь на лікування. Вона не завжди означає, що рак був вилікуваний. [00136] "Часткова відповідь" або "PR" відноситься до зменшення розміру однієї або декількох пухлин або поразок або до зменшення розповсюдження раку в організмі у відповідь на лікування. [00137] "Лікування" відноситься як до терапевтичного лікування, так і до профілактичних або превентивних заходів. [00138] Термін "терапевтично ефективна кількість" відноситься до кількості терапевтичного агента для лікування або запобігання захворюванню або порушенню у ссавців. У разі раку терапевтично ефективна кількість терапевтичного агента може зменшувати кількість ракових клітин; зменшувати розмір первинної пухлини; інгібувати (тобто уповільнювати до деякої міри і переважно зупиняти) інфільтрацію ракових клітин в периферичні органи; інгібувати (тобто уповільнювати до деякої міри і переважно зупиняти) метастазування пухлини; інгібувати до деякої міри зростання пухлини; та/або полегшувати до деякої міри один або декілька симптомів, пов'язаних з порушенням. Залежно від ступеня, в якому лікарський засіб може запобігти зростанню та/або знищити існуючі ракові клітини, воно може бути цитостатичним та/або цитотоксичним. У разі протиракової терапії ефективність in vivo можна зміряти, наприклад, шляхом оцінки тривалості виживаності, часу до прогресу захворювання (TTP, time to progression), частоти відповіді (RR, response rate), тривалості відповіді та/або якості життя. [00139] Терміни "рак" і "раковий" відносяться до фізіологічного стану у ссавців або описують такий фізіологічний стан, який, як правило, характеризується неконтрольованим зростанням клітин. У дане визначення включені доброякісні і злоякісні пухлини. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу рак є неоперабельною або метастатичною меланомою, в якій V600 V600 експресується BRAF , або було встановлено, що в ній експрессируєтся BRAF . [00140] Термін "полінуклеотид" при використанні в однині або множині, як правило, відноситься до будь-якого полірибонуклеотиду або полідезоксирибонуклеотиду, який може бути немодифікованою РНК або ДНК або модифікованою РНК або ДНК. Таким чином, наприклад, полінуклеотиди, як визначено в даній заявці, включають, без обмеження, одно- і дволанцюжкову ДНК, ДНК, включаючи одно- і дволанцюжкові області, одно- і дволанцюжкову РНК, а також РНК, включаючи одно- і дволанцюжкові області, гібридні молекули, що містять ДНК і РНК, які можуть бути одноланцюжковими або, найчастіше, дволанцюжковими або можуть включати одно- і дволанцюжкові області. Крім того, термін "полінуклеотид" в даній заявці відноситься до трьохланцюжкової області, що містить РНК або ДНК або що містить як РНК, так і ДНК. Ланцюги в таких областях можуть походити від однієї і тієї ж молекули або від різних молекул. Зазначені області можуть включати область однієї або декількох молекул, але 15 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 найчастіше включають область лише деяких молекул. Одна молекула області потрійної спіралі часто є олігонуклеотидом. Термін «полінуклеотид» специфічно включає кДНК. Термін включає ДНК (зокрема кДНК) і РНК, які містять одну або декілька модифікованих основ. Таким чином, ДНК або РНК з скелетами, модифікованими для поліпшення стабільності або для інших цілей, є «полінуклеотидами» в тому значенні, яке даний термін має в даній заявці. Більш того, ДНК або РНК, що містять нетипові основи, такі як інозин, або модифіковані основи, такі як мічені тритієм основи, включені в термін "полінуклеотиди", як визначено в даній заявці. Як правило, термін "полінуклеотид" охоплює всі форми немодифікованих полінуклеотидів, модифікованих хімічним, ферментативним та/або метаболічним способом, а також хімічні форми ДНК і РНК, типові для вірусів і клітин, зокрема простих і складних клітин. [00141] "Цільова аудиторія" є групою людей або організацією, в якій конкретний лікарський засіб просувають або планують просувати, за допомогою маркетингу або реклами, особливо для конкретних варіантів застосування, лікування або показань, таку як пацієнт або пацієнти, популяції пацієнтів, читачі газет, медичної літератури і журналів, телевізійна аудиторія або користувачі інтернету, радіо- або інтернет-слухачі, терапевти, фармацевтичні компанії і т. д. [00142] "Інструкція по застосуванню" означає інструкції, які традиційно вкладають в серійну упаковку терапевтичних препаратів, що містять інформацію щодо показань, застосування, дози, введення, протипоказань, інших терапевтичних препаратів, які можна приймати в комбінації з упакованим препаратом, та/або попереджувальні написи щодо застосування таких терапевтичних препаратів і т. д. [00143] Термін "фармацевтичний склад" відноситься до стерильного препарату, який знаходиться у формі, що дозволяє ефективно виявлятися біологічній активності зазначеного лікарського засобу і що не містить додаткових компонентів, що є неприйнятно токсичними по відношенню до суб'єкта, якому буде введений зазначений склад. [00144] "Стерильний" склад є асептичним або таким, що не містить яких-небудь живих організмів та їх спор. [00145] "Набор" є будь-яким виробом (наприклад, упаковкою або контейнером), що містить щонайменше один реактив, наприклад, протираковий лікарський засіб (наприклад, засіб для лікування неоперабельної або метастатичної меланоми) або реактив (наприклад, праймер) для специфічного виявлення біомаркерного гена або білка. Виріб переважно просувають, поширюють або продають у вигляді одиниці для здійснення способів згідно даному винаходу. [00146] "Фармацевтично прийнятний носій" відноситься до компоненту у фармацевтичному складі, відмінного від активного компоненту, який є нетоксичним по відношенню до суб'єкта. Необмежуючий перелік типових фармацевтично прийнятних носіїв включає буфер, ексципієнт, стабілізатор або консервант. [00147] Фраза "фармацевтично прийнятна сіль" в даній заявці відноситься до фармацевтично прийнятних органічних або неорганічних солей сполуки. [00148] У даній заявці термін "по суті аморфний" матеріал означає матеріал, ступінь кристалічності якого складає не більше ніж приблизно 10%; "аморфний" матеріал означає матеріал, ступінь кристалічності якого складає не більше ніж приблизно 2%. [00149] Термін "молекулярно диспергований" в даній заявці відноситься до випадкового розподілу сполуки (наприклад, Сполуки I) в полімері. Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу сполука присутня в полімері в кінцевому стані частини зазначеного полімеру. Див., наприклад, M G, Vachon et al., J Microencapsulation, 14 281-301 (1997) і Vandelli et al. J Microencapsulation, 10- 55-65 (1993). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу сполука (наприклад, Сполука I) може диспергувати в матриці, утвореній полімером в твердому стані таким чином, що зазначена сполука є іммобілізованою в своїй аморфній формі. Те, що сполука є такою, що молекулярно диспергує в полімері, може бути підтверджене поряд способом, наприклад, в результаті утворення твердого молекулярного комплексу, що має одну температуру переходу в склоподібний стан. [00150] Термін "твердий молекулярний комплекс" в даній заявці означає тверду дисперсію, яка включає Сполуку I, що молекулярно диспергує в матриці полімеру. [00151] Термін "іммобілізувати", який застосовується в даній заявці відносно іммобілізації активної сполуки в матрицю полімеру, означає, що молекули сполуки взаємодіють з молекулами полімеру таким чином, що зазначені молекули сполуки утримуються у вищезазначеній матриці, і даний недолік рухливості перешкоджає утворенню центрів кристалізації. Згідно деяким варіантам реалізації полімер може запобігати утворенню міжмолекулярних водневих зв'язків або слабких дисперсійних сил між двома або декількома молекулами лікарських засобів Сполуки I. Див., наприклад, Matsumoro and Zografi, Pharmaceutical Research, Vol. 16. No. 11, p 1722-1728, 1999. 16 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 ІI. ПРОТИРАКОВІ ЛІКАРСЬКІ ЗАСОБИ [00152] Згідно одному аспекту даний винахід відображає застосування інгібіторів MEK та інгібіторів BRAF в комбінованій терапії для лікування патологічного стану пацієнта, такого як рак. Згідно іншому аспекту даній винахід має відношення до вибору пацієнтів, яких можна лікувати інгібіторами MEK і інгібіторами BRAF, внаслідок експресії одного або декількох біомаркерів, розкритих в даній заявці. [0100] Вемурафеніб [00153] Вемурафеніб є інгібітором деяких форм мутантів серин/треонінової кінази BRAF, що V600E доставляється пероральним шляхом, зокрема BRAF . Вемурафеніб доступний у формі таблетки 240 мг для перорального застосування. Вемурафеніб, також званий в даній заявці «Сполука I», має хімічне найменування {3-[5-(4-хлорфеніл)-1H-піроло[2,3-b]піридин-3-карбоніл]2,4-дифтор-феніл}-амід пропан-1-сульфонової кислоти. Дану сполуку розкрито в міжнародній заявці WO 2007/002325 (див. наприклад, стор. 80 і відповідну формулу на стор. 82). Сполука I має наступну хімічну структуру: [00154] Сполука I існує в природному, тобто термодинамічно стабільному, стані в кристалічній формі. Проте аморфна форма сполуки має більшу розчинність у воді в порівнянні з кристалічною формою і внаслідок цього характеризується покращеною швидкістю розчинення, а завдяки цьому - покращеною біодоступністю в порівнянні з кристалічною формою. Відповідно, згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I знаходиться в по суті аморфній формі і згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I знаходиться в аморфній формі. [0101] GDC-0973 [00155] GDC-0973 (також званий в даній заявці "кобіметиніб" або "Сполука II") є могутнім високоселективним інгібітором MEK1 і MEK2, що доставляється пероральним шляхом, центральних компонентів шляху передачі сигналів RAS/RAF. GDC-0973 має хімічне найменування [3,4-дифтор-2-[(2-фтор-4-йодфеніл)аміно]феніл][3-гідрокси-3-[(2S)-2-піперидиніл]1-азетидиніл]метанон. Хімічна структура GDC-0973 є наступною: [0100] II [00156] Сполуку II може бути приготовано із застосуванням способів, описаних в патенті США US2009/0156576 (вміст якого включений в дану заявку за допомогою посилання). Сполука II має наступний реєстраційний номер CAS: 934660-93-2. Додаткові терапевтичні агенти [00157] Комбінована терапія згідно даному винаходу може додатково включати лікування одним або декількома терапевтичними агентами. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу один або декілька терапевтичних агентів є одним або декількома протираковими лікарськими засобами. Комбіноване введення включає одночасне введення із застосуванням окремих складів або одного фармацевтичного складу, а також послідовне введення у будьякому порядку, причому переважно існує період часу, коли обидва (або всі) активні агенти одночасно проявляють свою біологічну активність. Терапевтичний агент у разі його введення зазвичай вводять в дозах, використовуваних для введення даного агента, або в деяких 17 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 випадках в зменшених дозах внаслідок комбінованої дії лікарських засобів. Приготування і режим введення доз таких терапевтичних агентів можуть здійснюватися згідно інструкції виробника або таким чином, як було визначено кваліфікованим практиком емпіричним шляхом. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу додатковий терапевтичний агент є хіміотерапевтичним агентом. III. КОМБІНОВАНІ ТЕРАПІЇ [00158] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи для лікування пацієнта, страждаючого від раку, які включають введення ефективної (наприклад, терапевтично ефективного) кількості інгібітору BRAF (наприклад, вемурафенібу) та інгібітору MEK (наприклад, GDC-0973). Способи включають будь-які способи лікування, описані в даній заявці. [00159] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи лікування (наприклад, терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від раку, позитивного за V600 мутацією BRAF , причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнту (i) першої композиції, що містить [3,4-дифтор-2-[(2-фтор-4-йодфеніл)аміно]феніл][3-гідрокси-3[(2S)-2-піперидиніл]-1-азетидиніл]метанон (Сполуку II), або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другої композиції, що містить {3-[5-(4-хлорфеніл)-1H-піроло[2,3b]піридин-3-карбоніл]-2,4-дифтор-феніл}-амід пропан-1-сульфонової кислоти (Сполуку I) або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки в дозі 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг), двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [00160] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи лікування (наприклад, терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або V600 метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнтові (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. [00161] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи для збільшення тривалості відповіді на лікування у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнтові (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу тривалість відповіді на комбіноване лікування збільшена щодо тривалості відповіді на лікування Сполукою I (наприклад, на монотерапевтичне лікування Сполукою I). [00162] Згідно одному аспекту в даному винаході запропоновані способи відстрочення або запобігання розвитку резистентності до лікування (наприклад, резистентності до лікування інгібітором BRAF) у пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, причому зазначені способи включають введення вказаному пацієнтові (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу розвиток резистентності до комбінованого лікування відстрочений в порівнянні з розвитком резистентності до лікування Сполукою I (наприклад, до монотерапевтичного лікування Сполукою I). [00163] Згідно іншому аспекту в даному винаході запропонована композиція для застосування при лікуванні (наприклад, при терапевтичному лікуванні) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, яка містить першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, причому зазначене застосування включає одночасне або послідовне введення другої композиції, що містить Сполуку I; причому першу композицію, що містить Сполуку II, вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів і другу композицію, що містить Сполуку I, вводять в дозі 960 мг двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. [00164] Згідно деяким варіантам реалізації будь-якого із способів лікування, розкритих в даній заявці, пацієнт не одержував попереднього лікування неоперабельної або метастатичної меланоми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів Raf. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не 18 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів MEK. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів Raf або інгібітором шляху передачі сигналів MEK. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт одержував попереднє ад'ювантне лікування. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів Raf і одержував попереднє ад'ювантне лікування. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів MEK і одержував попереднє ад'ювантне лікування. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт не одержував попереднього лікування інгібітором шляху передачі сигналів Raf або інгібітором шляху передачі сигналів MEK і одержував попереднє ад'ювантне лікування. [00165] За допомогою систем визначення стадії раку описують, як далеко рак розповсюдився анатомічно, а також роблять спробу віднести пацієнтів з аналогічним прогнозом захворювання і лікуванням в одну групу, відповідну певній стадії. Для сприяння визначенню стадії раку можуть бути проведені деякі аналізи, зокрема біопсія і тести медичної візуалізації, такі як флюорографічне обстеження легенів, мамограма, сцинтиграфія скелета, комп'ютерна томографія і аналіз методом МРТ (магнітно-резонансній томографії). Аналізи крові і клінічну оцінку також застосовують для оцінки загального здоров'я пацієнта і виявлення того, чи розповсюдився рак в певні органи. [00166] Для визначення стадії раку згідно методиці Американського об'єднаного онкологічного комітету (AJCC, American Joint Committee on Cancer) спочатку слід віднести рак, зокрема, солідні пухлини, до однієї з буквених категорій із застосуванням системи класифікації TNM. Рак класифікують за категоріями T (tumor size, розмір пухлини), N (palpable nodes, пальповані вузли) та/або M (metastasis, метастази). Категорії T1, T2, T3 і T4 описують збільшення розміру первинної поразки; N0, N1, N2, N3 указують на поразку лімфатичних вузлів, що прогресивно розповсюджується; і M0 і M1 відображає відсутність або присутність віддалених метастазів. [00167] Згідно другому способу визначення стадії, також відомому як Overall Stage Grouping або Roman Numeral Staging (загальне визначення стадії або стадії, які нумерують римськими цифрами), рак розділяють на стадії з 0 по IV на основі розміру первинних поразок, а також наявності розповсюдження раку у вузли і віддалених метастазів. Згідно даній системі випадки групують на чотири стадії, які позначають римськими цифрами від I до IV або класифікують як "рецидивуючі". У разі деяких варіантів раку стадію 0 позначають як "in situ" або "Tis" (tumor in situ, пухлина in situ), такі як внутрішньопротокова карцинома in situ або часточкова карцинома in situ у разі раку молочної залози. Аденоми високого ступеню злоякісності можна також класифікувати як стадію 0. Як правило, рак стадії I є невеликим локалізованим раком, який зазвичай є виліковним, тоді як рак стадії IV зазвичай є неоперабельним або метастатичним раком. Рак стадії II і III, як правило, є місцерозповсюдженим та/або демонструє поразку місцевих лімфатичних вузлів. Як правило, більш високі номери стадій свідчать про захворювання, що більш розповсюдилося, зокрема про більший розмір пухлини та/або про розповсюдження раку на довколишні лімфатичні вузли та/або органи, прилеглі до первинної пухлини. Дані стадії конкретно визначені; таке визначення відрізняється для кожного виду раку і відоме фахівцеві в даній області техніки. [00168] У багатьох реєстрах раку, таких як програма SEER (Surveillance, Epidemiology and End Results, течія, поширеність і результати злоякісних новоутворень) NCI (National Cancer Institute, Національного інституту раку), застосовують короткий звіт визначення стадії. Дану систему використовують для всіх типів раку. Згідно даній системі випадки раку підрозділяють на п'ять основних категорій: [00169] Раком in situ є рак на початковій стадії, який присутній виключно в тому шарі клітин, в якому він вперше з'явився. [00170] Локалізованим раком є рак, який обмежений органом, в якому він вперше з'явився, і свідоцтва про його розповсюдження відсутні. [00171] Місцево-поширеним раком є рак, який розповсюдився за межі первинної ділянки на довколишні лімфатичні вузли або органи і тканини. [00172] Віддаленим раком є рак, який розповсюдився з первинної ділянки на віддалені органи або віддалені лімфатичні вузли. [00173] Термін "невідомий рак" використовують для опису випадків, для яких відсутня достатня інформація для визначення стадії. [00174] Визначення стадій меланоми за системою TNM Американського об'єднаного онкологічного комітету (AJCC) є системою для визначення стадії меланоми. Згідно деяким 19 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіантам реалізації даного винаходу меланома являє собою неоперабельну меланому стадії IIIC. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу меланома є меланомою стадії M1a. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу меланома являє собою меланому стадії M1b. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу меланома являє собою меланому стадії M1c. [00175] Крім того, раку властиво повертатися через місяці або роки після того, як первинна пухлина була видалена. Рак, який рецидивує після того, як вся видима пухлина була видалена, називають рецидивуючим захворюванням. Захворювання, яке рецидивує в область первинної пухлини, є локально рецидивуючим; захворювання, яке рецидивує у формі метастазів, позначають як системно рецидивуюче захворювання. [00176] Згідно одному аспекту пацієнта, страждаючого від раку, лікують (наприклад, терапевтично лікують) додатковим протираковим лікарським засобом. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу додатковим протираковим лікарським засобом є хіміотерапевтичний агент. [00177] Терапевтичні агенти, які застосовують в даному винаході, будуть приготовані до складу, розділені на дози і введені шляхом, відповідним належній клінічній практиці. Фактори, що розглядаються в даному контексті, включають конкретне порушення, яке піддають лікуванню, конкретного пацієнта, який одержує лікування, клінічний стан пацієнта, причину порушення, ділянку доставки агента, спосіб введення, режим введення, міжлікарські взаємодії агентів, комбінування яких проводиться, а також інші фактори, відомі практикуючим лікарям. [00178] Терапевтичні склади можуть бути приготовані із застосуванням стандартних способів, відомих в даній області техніки, шляхом змішування активного компоненту, що має бажаний ступінь чистоти, з тими, що додаються в деяких випадках фізіологічно прийнятними носіями, ексципієнтами або стабілізаторами (див. Remington’s Pharmaceutical Sciences (20th edition), ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA). Відповідні носії, розчинники і ексципієнти добре відомі фахівцям в даній області техніки і включають матеріали, такі як вуглеводи, віск, водорозчинні та/або такі, що піддаються розбуханню полімери, гідрофільні або гідрофобні матеріали, желатин, масла, розчинники, вода і тому подібне. Вибір конкретного вживаного носія, розчинника або ексципієнта залежить від способу і мети, для досягнення якої застосовується сполука згідно даному винаходу. Розчинники, як правило, вибирають з розчинників, які визнаються фахівцями в даній області техніки безпечними для введення ссавцю. Як правило, безпечними розчинниками є нетоксичні водні розчинники, такі як вода та інші нетоксичні розчинники, які є розчинними або такими, що піддаються змішуванню з водою. Відповідні водні розчинники включають воду, етанол, пропіленгліколь, поліетиленгліколі (наприклад, ПЕГ 400, ПЕГ 300) і так далі, а також їх суміші. Композиції можуть також включати один або декілька буферів, стабілізуючих речовин, поверхнево-активних речовин, зволожуючих речовин, пом'якшувальних речовин, емульгаторів, речовин, що суспендують, консервантів, антиоксидантів, речовин для додання непрозорості, речовин, сприяючих ковзанню, технологічних добавок, забарвлюючих речовин, речовин, що підсолоджують, ароматизуючих добавок, смакових речовин та інших відомих добавок для забезпечення якнайкращого зовнішнього вигляду лікарського засобу (тобто сполуки або її фармацевтичної композиції) або полегшення виготовлення фармацевтичного препарату (тобто лікарського засобу). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу сполуку приготовано до складу сумісно з фармацевтично прийнятним носієм або ексципієнтом. [00179] Активні компоненти можна також поміщати в мікрокапсули, одержані, наприклад, методом коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад, в мікрокапсули з гідроксиметилцелюлози або желатину і полі(метилметакрилату), відповідно; у колоїдні системи для доставки лікарських засобів (наприклад, ліпосоми, мікросфери альбуміну, мікроемульсії, наночастки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі методики описані в керівництві Remington’s Pharmaceutical Sciences, див. посилання вище. [00180] Фармацевтично прийнятні солі описані в даній заявці і відомі в даній області техніки. Типові солі включають, але не обмежуються ними, сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромід, йодид, нітрат, бісульфат, фосфат, кислий фосфат, ізонікотинат, лактат, саліцилат, кислий цитрат, тартрат, олеат, танат, пантозенат, бітартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентізинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, форміат, бензоат, глутамат, метансульфонат "мезилат", етансульфонат, бензенсульфонат, п-толуенсульфонат і памоат (тобто 1,1'-метилен-біс-(2-гідрокси-3-нафтоат)). Фармацевтично прийнятна сіль може містити іншу молекулу, таку як іон ацетату, іон сукцинату або інші противоіони. Противоіон може бути будь-якою органічною або неорганічною групою, яка стабілізує заряд батьківської сполуки. Більш того, фармацевтично прийнятна сіль може містити в своїй структурі більше одного 20 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зарядженого атома. Коли багатозарядні атоми є частиною фармацевтично прийнятної солі, така сіль може мати декілька противоіонів. Внаслідок цього фармацевтично прийнятна сіль може містити один або декілька заряджених атомів та/або один або декілька противоіонів. У випадку якщо сполука є основою, бажана фармацевтично прийнятна сіль може бути приготована будьяким відповідним способом, доступним в даній області техніки, наприклад, обробкою вільної основи неорганічною кислотою, такою як хлористоводнева кислота, бромистоводнева кислота, сірчана кислота, азотна кислота, метансульфонова кислота, фосфорна кислота і тому подібне, або органічною кислотою, такою як оцтова кислота, малеїнова кислота, янтарна кислота, мигдалева кислота, фумарова кислота, малонова кислота, піровиноградна кислота, щавлева кислота, гліколева кислота, саліцилова кислота, піранозиділова кислота, така як глюкуронова кислота або галактуронова кислота, альфа-гідрокси кислота, така як лимонна кислота або винна кислота, амінокислота, така як аспарагінова кислота або глутамінова кислота, ароматична кислота, така як бензойна кислота або корична кислота, сульфонова кислота, така як п-толуолсульфонова кислота або етансульфонова кислота, або тому подібне. Кислоти, які, як правило, розглядають відповідними для утворення фармацевтично придатних або прийнятних солей основних фармацевтичних сполук, обговорюються, наприклад, в керівництвах P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: WILEY-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton Ра.; а також в переліку зареєстрованих лікарських засобів «Оранжева книга» («Orange Book» Управління США за наглядом у сфері харчових продуктів і лікарських засобів, округ Вашингтон, опублікована на веб-сайті організації). Якщо сполука згідно даному винаходу є кислотою, необхідну фармацевтично прийнятну сіль можна одержати будьяким відповідним способом, наприклад, обробкою вільної кислоти такою неорганічною або органічною основою, як амін (первинний, вторинний або третинний), гідроксид лужного металу або гідроксид лужноземельного металу або тому подібне. Ілюстративні приклади відповідних солей включають, але не обмежуються ними, органічні солі, одержані з амінокислот, таких як гліцин і аргінін, аміак, первинні, вторинні і третинні аміни і циклічні аміни, такі як піперидин, морфолін і піперазин, а також неорганічні солі, одержані з натрію, кальцію, калію, магнію, марганцю, заліза, міді, цинку, алюмінію і літію. Фармацевтично прийнятні солі, гідрати та інші тверді форми, такі як, наприклад поліморфні форми, вемурафенібу розкриті в міжнародній заявці на патент № PCT/US2012/025965. [00181] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 20 мг, у формі таблетки 40 мг та/або у формі таблетки 60 мг. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 60 мг. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, до складу ядра якої входять одна або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу до складу покриття таблетки входять одна або декілька з наступних речовин: частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетиленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, до складу ядра якої входять моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію, і до складу покриття якої входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетиленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить (a) 60 мг Сполуки II (активний компонент); і (b) ядро таблетки, до складу якого входять моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію, а також покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. [00182] Згідно варіанту реалізації даного винаходу Сполука I знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози (АС ГПМЦ). Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу Сполука I присутня в полімері в кінцевому стані частини вказаного полімеру. Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу Сполука I є молекулярно диспергованою в матриці АС ГПМЦ таким чином, що зазначена сполука є іммобілізованою в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полімер може запобігати утворенню міжмолекулярних водневих зв'язків або слабких дисперсійних сил між двома або декількома молекулами Сполуки I. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу співвідношення кількості мас. % Сполуки I в твердому молекулярному комплексі до кількості мас. % АС ГПМЦ у вказаному комплексі складає від 21 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 приблизно 1:9 до приблизно 5:5. Згідно варіанту реалізації даного винаходу зазначене співвідношення складає від приблизно 2:8 до приблизно 4:6. Згідно іншому варіанту реалізації даного винаходу зазначене співвідношення складає приблизно 3:7. [00183] Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу сполуку I запропоновано у вищезгаданому твердому молекулярному комплексі Сполуки I і АС ГПМЦ, змішаному з колоїдним діоксидом кремнію. Згідно певним варіантам реалізації зазначена суміш містить щонайменше 0,5 мас. % діоксиду кремнію. Згідно варіанту реалізації даного винаходу вказана суміш містить приблизно 97% комплексу і приблизно 3% діоксиду кремнію. [00184] Згідно іншим варіантам реалізації даного винаходу сполуку I запропоновано у формі композиції, що містить вищезгаданий твердий молекулярний комплекс, який змішують або не змішують з діоксидом кремнію, як описано вище, а також фармацевтично прийнятний носій. Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу вищезгаданий комплекс або суміш, що містить вказаний комплекс, суспендують в носії. Прикладом носія є гідроксипропілцелюлоза (ГПЦ). Згідно варіанту реалізації даного винаходу наповнювач містить приблизно 2 мас. % ГПЦ. Композиція може також містити додаткові речовини, такі як консервуючі речовини, солюбілізуючі речовини, стабілізуючі речовини, зволожуючі речовини, емульгуючі речовини, підсолоджуючі речовини, забарвлюючі речовини, аромати, солі для регулювання осмотичного тиску, буфери, речовини для покриття або антиоксиданти. Згідно певним варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі композиції, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I і АС ГПМЦ, змішаний з колоїдним діоксидом кремнію, гідроксипропілцелюлозою, кросповідоном (речовина для поліпшення розпадання таблеток), стеаратом магнію (пом'якшувальна речовина, яка може застосовуватися в операціях таблетування і капсулювання) та/або кроскармелозою натрію (речовина для поліпшення розпадання таблеток). Згідно варіанту реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі твердої желатинової капсули, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I і АС ГПМЦ, змішаний з колоїдним діоксидом кремнію, гідроксипропілцелюлозою, стеаратом магнію і кроскармелозою натрію. Згідно варіанту реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки. Згідно варіанту реалізації даного винаходу вказана таблетка містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. Вказаний комплекс може бути змішаним, наприклад, з колоїдним діоксидом кремнію, гідроксипропілцелюлозою, стеаратом магнію і кроскармелозою натрію. Таблетка може, наприклад, бути покритою плівковою оболонкою. До складу плівкової оболонки може входити, наприклад, полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетиленгліколь 3350, тальк і оксид заліза червоний. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки 240 мг. Композиції, що містять Сполуку I, а також способи одержання таких композицій описані в міжнародній заявці WO2010/114928 (яка включена в дану заявку за допомогою посилання у всьому своєму обсязі). [00185] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в по суті аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки знаходиться в твердому молекулярному комплексі, утвореному з ацетатсукцинатом гідроксипропілметилцелюлози таким чином, що вказана сполука є іммобілізованою в аморфній формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки і ацетатсукцинат гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні від приблизно 1:9 до приблизно 5:5, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполука I або фармацевтично прийнятна сіль зазначеної сполуки і ацетатсукцинат гідроксипропілметилцелюлози у вказаному комплексі знаходяться в співвідношенні приблизно 3:7, відповідно. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I включено в суміш, причому приблизно 97 мас. % зазначеної суміші складає твердий молекулярний комплекс і приблизно 3 мас. % зазначеної суміші складає діоксид кремнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I включено в суспензію твердого молекулярного комплексу у фармацевтично прийнятному носії, причому зазначений твердий молекулярний комплекс знаходиться у фармацевтично прийнятному носії. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перший компонент містить таблетку, що містить твердий молекулярний комплекс Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки і АС ГПМЦ. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I запропоновано у формі 22 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 таблетки 240 мг (тобто таблетки, що містить 240 мг Сполуки I). [00186] Введення терапевтичних агентів в комбінації, як правило, здійснюють протягом певного періоду часу (як правило, хвилин, годин, днів або тижнів залежно від вибраної комбінації). Комбінована терапія покликана охопити введення даних терапевтичних агентів послідовним чином (це означає, що кожен терапевтичний агент вводять в різний час, у будьякому порядку), а також введення терапевтичних агентів одночасним (синхронним) чином. Одночасне введення можна здійснювати у формі окремих фармацевтичних складів або в одній лікарській формі (наприклад, у вигляді одного фармацевтичного складу). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II вводять один раз на день, наприклад, вранці або увечері). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II вводять один раз на день у будь-який час дня. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу дозу 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг) Сполуки I вводять приблизно через 12 годин після першої дози 960 мг (наприклад, чотирьох таблеток по 240 мг) Сполуки I. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I вводять один раз вранці і один раз увечері. [00187] Таким чином, в даному винаході передбачено приготування сполуки I і II в одній лікарській формі (наприклад, сумісне приготування до складу двох або декількох активних компонентів). Відповідно, згідно одному варіанту реалізації даного винаходу фармацевтична композиція згідно даній заявці може містити більше одної активної сполуки (тобто перша композиція, що містить перший активний компонент, може бути спільно приготована в склад з другою композицією, що містить другий активний компонент). Такі молекули відповідним чином присутні в комбінації в кількостях, які є ефективними для досягнення поставлених цілей. [00188] Згідно іншому аспекту даного винаходу кожен з двох (або декілька) активних компонентів готують до складу окремо і вводять у вигляді окремих лікарських форм. Відповідно, згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу фармацевтичний препарат містить першу композицію, що містить (як активний компонент) Сполуку II; і другу композицію, що містить (як активний компонент) Сполуку I, причому першу композицію вводять в першій лікарській формі і другу композицію вводять в другій лікарській формі. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять послідовно після другої композиції. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять перед другою композицією. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу другу композицію вводять після другої композиції. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу першу композицію вводять одночасно з другою композицією. [00189] Терапевтичні агенти вводять пацієнту людині відповідно до відомих способів, таким як внутрішньовенне введення у формі болюсної або тривалої інфузії протягом певного періоду часу, а також наступними шляхами: внутрішньом'язовим, інтраперитонеальним, інтрацереброспінальним, підшкірним, внутрішньосуглобовим, внутрішньосиновіальним, внутрішньооболонковим, пероральним, місцевим шляхом або за допомогою інгаляції. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу введення є пероральним (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу введення здійснюють разом з їжею або без неї). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пероральне введення здійснюють разом з їжею. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пероральне введення здійснюють без їжі. [00190] Терапевтичні агенти можуть бути введені одним шляхом або різними шляхами. Наприклад, один терапевтичний агент в комбінації може бути введений внутрішньовенною ін'єкцією, тоді як інший терапевтичний агент-інгібітор в комбінації може бути введений пероральним шляхом. Як альтернатива, наприклад, обидва терапевтичні агенти можуть бути введені пероральним шляхом або обидва терапевтичні агенти можуть бути введені внутрішньовенною ін'єкцією залежно від конкретних терапевтичних агентів. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II і Сполуку I вводять пероральним шляхом. Сполука II і Сполука I можуть бути введені пероральним шляхом разом з їжею або без неї. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II вводять пероральним шляхом разом з їжею або без неї. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку I вводять пероральним шляхом разом з їжею або без неї. III. СПОСОБИ ДІАГНОСТИКИ [00191] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт згідно даній заявці проходить діагностичний аналіз, наприклад, перед та/або під час та/або після одержання терапії. [00192] Згідно деяким аспектам в даному винаході запропоновані способи для вибору терапії для пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної меланоми, що включають визначення присутності (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу V600 визначення присутності або відсутності) мутації BRAF в зразку пацієнта, страждаючого від 23 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 неоперабельної або метастатичної меланоми, і вибирання лікарського засобу для лікування раку на основі присутності (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - на основі V600 присутності або відсутності) мутації BRAF . Згідно одному варіанту реалізації встановлюють, V600 V600E що у зазначеному зразку експресується мутація BRAF (наприклад, мутація BRAF ), і вибирають лікування (наприклад, терапевтичне лікування) Сполукою II в комбінації із Сполукою I (наприклад, як описано в даній заявці). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта лікують (наприклад, терапевтично лікують) способом, що включає введення вказаному пацієнту (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Способи лікування включають будь-які способи лікування, описані в даній заявці. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [00193] Згідно іншим аспектам в даному винаході запропоновані способи для оптимізації терапевтичної ефективності, що включають визначення присутності (згідно деяким варіантам V600 реалізації даного винаходу - визначення присутності або відсутності) мутації BRAF в зразку неоперабельної або метастатичної меланоми пацієнта і вибирання лікарського засобу для лікування раку на основі присутності (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - на V600 основі присутності або відсутності) мутації BRAF . Згідно одному варіанту реалізації даного V600 винаходу встановлюють, що у зазначеному зразку експресується мутація BRAF (наприклад, V600E мутація BRAF ), і вибирають лікування Сполукою II в комбінації із Сполукою I (наприклад, як описано в даній заявці). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу пацієнт одержує лікування неоперабельної або метастатичної меланоми способом, який включає введення вказаному пацієнтові (i) Сполуки II або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) Сполуки I або фармацевтично прийнятної солі зазначеної сполуки в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Способи лікування включають будь-які способи лікування, описані в даній заявці. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [00194] Способи виявлення BRAF і мутантного BRAF відомі в даній області техніки і є комерційно доступними. Див., наприклад, Hailat et al, Diagn Mol Pathol. 2012 Mar; 21(1):1-8. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу мутацію BRAF V600E (також відому як V599E (T1796A)) виявляють із застосуванням способу, який включає визначення присутності одноосновної мутації (заміна T на A) в положенні нуклеотиду 1799 в кодоні 600 екзона 15. Виникнення даної мутації може також бути наслідком двоосновної мутації TG на AA в положеннях нуклеотидів 1799 - 1800. У залишку 600 білка BRAF також можуть виникати інші мутації. Дані мутації включають мутації V600K, V600D і V600R. [00195] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу присутність мутації V600 можна визначити в результаті оцінки присутності заміни основи в положенні 1799 нуклеїнової кислоти BRAF, наприклад, ДНК генома або мРНК. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу виявлені наступні мутації V600: V600K (заміна GTG на AAG), V600R (GTG на AGG), V600E (GTG на GAA) та/або V600D (GTG на GAT); у всіх випадках дані в дужках відносяться до положень нуклеотидів 1798 - 1800 BRAF. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид мутанта BRAF містить мутацію T1799A. [00196] Різні способи аналізу ДНК (такий як ДНК генома або кДНК) відомі в даній області техніки і включають, але не обмежуються ними, аналіз рівня експресії генів, полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) (зокрема кількісну ПЛР в реальному часі, алель-специфічну ПЛР), секвенування, секвенування РНК, FISH (флуоресцентну гібридизацію in situ, fluorescence in situ hybridization) та/або мікроматричний аналіз. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу метод аналізу нуклеїнової кислоти включає один або декілька з наступних варіантів аналізу: гібридизацію із застосуванням алель-специфічних олігонуклеотидів, добудову праймера, алельспецифічне лігування, секвенування (включаючи, але не обмежуючись ними, секвенування методом Сенджера, піросеквенування) або методики електрофоретичного розділення, 24 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 наприклад, аналіз одноланцюгового конформаційного поліморфізму (SSCP) і гетеродуплексний аналіз, а також аналізи із застосуванням 5'-нуклеаз, алель-специфічна ПЛР, шаблонспрямоване вбудовування барвника-термінатора (template-directed dye-terminator incorporation), алель-специфічний аналіз олігонуклеотидів на основі молекулярних маяків, аналіз одноосновного подовження. [00197] Аналіз ампліфікованої послідовності нуклеїнової кислоти можна здійснити із застосуванням різних методик, таких як методики на основі мікрочіпів, флуоресцентний поляризаційний аналіз і мас-спектрометрія на основі активованої для матриці лазерної десорбції/іонізації (MALDI, matrix-assisted laser desorption ionization). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу ампліфіковані нуклеїнові кислоти аналізують методом секвенування. Два додаткові способи, які можуть застосовуватися, є аналізи на основі інвазивного розщеплювання нуклеазами Flap і методики, в яких застосовується зонд, що замикає кільце. ® [00198] Тест COBAS 4800 BRAF V600 Mutation Test для виявлення мутації BRAF V600 є комерційно доступним; його дія заснована на технології ПЛР в режимі реального часу. Кожен специфічний до мішені олігонуклеотидний зонд в реакції помічений флуоресцентним барвником, який виступає як репортер, а також молекулою гасителя флуоресценції, яка поглинає (гасить) випускання флуоресценції від барвника-репортера в інтактному зонді. В ході кожного циклу ампліфікації зонд комплементарно зв'язується з одноланцюговою послідовністю ДНК в ампліконі і послідовно розщеплюється у напрямку 5'-3' нуклеазною активністю ДНКполімерази Z05. Після того, як барвник-репортер відділяється від гасителя флуоресценції в результаті здійснення даної нуклеазної активності, при збудженні барвника-репортера світлом відповідного спектру можна зміряти характеристичну довжину хвилі флуоресценції. Застосовують два різні барвники-репортери, щоб помітити зонд, специфічний до мішені BRAF дикого типу (WT, wild type), і зонд, специфічний до мутації BRAF V600E (MUT, mutation). Ампліфікацію двох послідовностей BRAF можна виявити незалежно в одній реакційній лунці за допомогою вимірювання флуоресценції при двох характеристичних довжинах хвиль у виділених оптичних каналах. [00199] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид (наприклад, ДНК) мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК генома), екстрагованої із зразка раку пацієнта (такого як ЗФЗП (зафіксований у формаліні і залитий парафіном) зразок раку пацієнта) методом ПЛР; і (b) визначення експресії полінуклеотиду мутанта BRAF у зазначеному зразку. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу експресію полінуклеотиду мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) гібридизацію першого і другого олігонуклеотидів з щонайменше одним варіантом послідовності-мішені BRAF; причому зазначений перший олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і зазначений другий олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і містить щонайменше один внутрішній селективний нуклеотид, комплементарний виключно одному варіанту послідовності-мішені; (b) подовження другого олігонуклеотиду за допомогою полімерази нуклеїнової кислоти; причому зазначена полімераза здатна переважно подовжувати вказаний другий олігонуклеотид, коли вказаний селективний нуклеотид утворює пару основ з мішенню, і по суті менш здатна подовжувати вказаний другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид не утворює пару основ з мішенню; і (c) виявлення продуктів подовження олігонуклеотиду, причому зазначене подовження свідчить про присутність варіанту послідовності-мішені, до якої зазначений олігонуклеотид містить комплементарний селективний нуклеотид. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид (наприклад, ДНК) мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК генома), екстрагованої із зразка раку пацієнта (такого як ЗФЗП зразок раку пацієнта), методом ПЛР; і (b) визначення експресії полінуклеотиду мутанта BRAF у зазначеному зразку. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид (наприклад, ДНК) мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) виділення ДНК (наприклад, ДНК генома) із зразка раку пацієнта (такого як ЗФЗП зразок раку пацієнта); (b) здійснення аналізу ДНК, екстрагованої із зразка раку пацієнта, методом ПЛР; і (c) визначення експресії полінуклеотиду мутанта BRAF у зазначеному зразку. [00200] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу експресію полінуклеотиду мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) виділення ДНК (наприклад, ДНК генома) із зразка раку пацієнта (такого як ЗФЗП зразок раку пацієнта); (b) гібридизацію першого і другого олігонуклеотидів з щонайменше одним варіантом послідовності-мішені BRAF в ДНК; причому зазначений перший олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним 25 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 одному або декільком варіантам послідовності-мішені і зазначений другий олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і містить щонайменше один внутрішній селективний нуклеотид, комплементарний виключно одному варіанту послідовності-мішені; (c) подовження другого олігонуклеотиду за допомогою полімерази нуклеїнової кислоти; причому зазначена полімераза здатна переважно подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид утворює пару основ з мішенню, і по суті менш здатна подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид не утворює пару основ з мішенню; і (d) виявлення продуктів подовження олігонуклеотиду, причому вказане подовження свідчить про присутність варіанту послідовності-мішені, до якої зазначений олігонуклеотид містить комплементарний селективний нуклеотид. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу експресію полінуклеотиду мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) гібридизацію першого і другого олігонуклеотидів з щонайменше одним варіантом послідовності-мішені BRAF; причому зазначений перший олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і зазначений другий олігонуклеотид є щонайменше частково комплементарним одному або декільком варіантам послідовності-мішені і містить щонайменше один внутрішній селективний нуклеотид, комплементарний виключно одному варіанту послідовності-мішені; (b) подовження другого олігонуклеотиду за допомогою полімерази нуклеїнової кислоти; причому зазначена полімераза здатна переважно подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид утворює пару основ з мішенню, і по суті менш здатна подовжувати зазначений другий олігонуклеотид, коли зазначений селективний нуклеотид не утворює пару основ з мішенню; і (c) виявлення продуктів подовження олігонуклеотиду, причому вказане подовження свідчить про присутність варіанту послідовності-мішені, до якої зазначений олігонуклеотид містить комплементарний селективний нуклеотид. [00201] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид (наприклад, ДНК) мутанта BRAF виявляють із застосуванням способу, що включає (a) здійснення аналізу нуклеїнової кислоти (наприклад, ДНК генома), екстрагованої із зразка раку пацієнта (такого як ЗФЗП зразок раку пацієнта), методом ПЛР; (b) визначення експресії полінуклеотиду мутанта BRAF в результаті секвенування нуклеїнової кислоти, ампліфікованої методом ПЛР. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу полінуклеотид (наприклад, ДНК) мутанта BRAF виявляють із застосуванням секвенування (наприклад, секвенування методом Сенджера або піросеквенування). [00202] Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу аналізують експресію білка V600 BRAF (наприклад, BRAF ). Такий аналіз білка можна здійснити із застосуванням методу імуногістохімії (ІГХ), наприклад, на зразках пухлини пацієнта або протеомним методом. [00203] Аналізують експресію одного або декількох біомаркерів, описаних в даній заявці, в зразку пацієнта. Джерелом зразка тканини або клітини може бути тверда тканина, така як тканина свіжого, замороженого та/або консервованого органу, або зразок тканини, або зразок, одержаний в результаті біопсії, або матеріал, одержаний шляхом аспірації; кров або будь-які компоненти крові; рідини організму, такі як спинномозкова рідина, амніотична рідина, перитонеальна рідина або тканинна рідина; клітини, відібрані у будь-який момент внутрішньоутробного розвитку або життя пацієнта. Зразок тканини може містити сполуки, які в нормі не змішуються з тканиною в природі, такі як консерванти, антикоагулянти, буфери, фіксатори, живильні речовини, антибіотики або тому подібне. Приклади зразків пухлини в даній заявці включають, але не обмежуються ними, біопсію пухлини, пухлинні клітини, сироватку або плазму, циркулюючі в плазмі білки, асцитичну рідину первинні культури клітин або лінії клітин, що походять від пухлин або демонструючі властивості, подібні пухлини, а також консервовані зразки тканини, такі як зафіксовані у формаліні, залиті парафіном зразки пухлини або заморожені зразки пухлини. Згідно одному варіанту реалізації даного винаходу зразок пацієнта є зафіксованим у формаліні і залитим парафіном (ЗФЗП) зразком раку (наприклад, зразком раку неоперабельної або метастатичної меланоми). Зазначений зразок може бути одержаний до початку лікування пацієнта лікарським засобом проти раку. Зазначений зразок може бути одержаний з первинної пухлини або з метастатичної пухлини. Зазначений зразок може бути одержаний, коли рак був діагностований вперше, та/або, наприклад, після того, як пухлина метастазувала. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений зразок метастатичної пухлини одержаний з легенів, шкіри, лімфатичного вузла, кістки, печінки, товстої кишки, щитовидної залози та/або яєчника. IV. ВИРОБИ 26 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [00204] Згідно іншому варіанту реалізації в даному винаході запропонований виріб для застосування при лікуванні раку (такого як неоперабельна або метастатична меланома, V600 позитивна за мутацією BRAF ). Зазначений виріб включає контейнер і етикетку або інструкцію по застосуванню, які знаходяться на контейнері або відносяться до контейнера. Відповідні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци, упаковки для таблеток, блістерні упаковки, дискові упаковки і т. д. Контейнери можуть бути вироблені з різних матеріалів, таких як стекло або пластик. У контейнер поміщені або в контейнері знаходяться композиції, що містять як активний агент протираковий лікарський засіб (наприклад, Сполуку II). Згідно певному варіанту реалізації даного винаходу композиція, що містить протираковий лікарський засіб, запропонована у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений виріб включає контейнер і таблетку, що містить 60 мг Сполуки II. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений виріб включає контейнер і таблетку, що містить 20 мг або 40 мг Сполуки II. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений виріб включає перший контейнер, що містить (a) першу композицію, яка містить Сполуку II (наприклад, 60 мг Сполуки II), запропоновану у формі таблетки, і (b) другу композицію, яка містить Сполуку I (наприклад, 960 мг Сполуки I), запропоновану у формі таблетки (наприклад, чотири таблетки по 240 мг). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений контейнер є упаковкою для таблеток або блістерну упаковкою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку I, і друга композиція, що містить Сполуку II, запропоновані у вигляді одиничної дозованої форми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, і друга композиція, що містить Сполуку I, приготовані в лікарську форму спільно (наприклад, у вигляді фармацевтичного складу). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу зазначений виріб (наприклад, запропонований у формі упаковки для таблеток або блістерної упаковки) містить 21 таблетку (наприклад, композиції, що містить Сполуку II (наприклад, таблетки, що містять по 60 мг Композиції II; і таблетки композиції, що містить Сполуку I (наприклад, таблетки, що містять 240 мг Сполуки I). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки 60 мг. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, до складу ядра якої входять одна або декілька з наступних речовин: моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу до складу покриття таблетки входять одна або декілька з наступних речовин: частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, до складу ядра якої входять моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію, і до складу покриття якої входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу Сполуку II запропоновано у формі таблетки, що містить (a) 60 мг Сполуки II (активний компонент); і (b) ядро таблетки, до складу якого входять моногідрат лактози, мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію і стеарат магнію, а також покриття таблетки, до складу якого входять частково гідролізований полівінілалкоголь, діоксид титану, поліетіленгліколь 3350 і тальк. [00205] Зазначений виріб може також включати другий контейнер та/або інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору або з погляду користувача, зокрема інші буфери, розчинники, фільтри, голки і шприци. [00206] Виріб згідно даному винаходу також включає інформацію, наприклад, у формі інструкції по застосуванню, що містить відомості про те, що, наприклад, Сполуку II призначено для лікування (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від V600 неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , в комбінації із Сполукою I, причому вказане лікування включає введення (i) першої композиції, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другої композиції, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки в дозі 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг), двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Лікування може, наприклад, збільшувати виживаність пацієнта, зменшувати ризик рецидиву раку у пацієнта та/або збільшувати вірогідність виживаності пацієнта. Вкладиш або етикетка можуть мати будь-яку форму, таку як паперова форма або форма електронного носія, такого як носій, інформацію на який записують магнітним способом (наприклад, гнучкий магнітний диск) або CD-ROM. Етикетка або вкладиш можуть також включати іншу інформацію щодо фармацевтичної композиції і лікарських форм, присутніх у вказаному наборі або виробі. Способи лікування включають будь-який із способів, розкритих в 27 UA 114923 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 даній заявці. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [00207] Даній винахід також має відношення до способу для виробництва виробу, що включає об'єднання в упаковці фармацевтичної композиції, що містить Сполуку II, та інструкції по застосуванню, яка свідчить про те, що зазначена фармацевтична композиція призначена для лікування (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від V600 неоперабельної або метастатичної меланоми, позитивної за мутацією BRAF , в комбінації з вемурафенібом, причому (i) першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другу композицію, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, вводять в дозі 960 мг двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Лікування може, наприклад, збільшувати виживаність пацієнта, зменшувати ризик рецидиву раку у пацієнта, збільшувати тривалість відповіді на лікування та/або збільшувати вірогідність виживаності пацієнта. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому раніше не піддавали лікуванню (тобто попередньому лікуванню неоперабельної або метастатичної меланоми). Способи лікування включають будь-які способи, розкриті в даній заявці. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше не піддавали лікуванню (наприклад, вемурафенібом або інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). [00208] Зазначений виріб може також включати інші матеріали, необхідні з комерційної точки зору або з погляду користувача, зокрема інші буфери, розчинники, фільтри, голки і шприци. V. НАБОРИ [00209] Даній винахід відноситься до наборів, що включають (i) першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; і (ii) другу композицію, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки; для застосування при лікуванні неоперабельної або метастатичної меланоми, причому Сполуку II вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів і Сполуку I вводять в дозі 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг) двічі на день щодня циклу тривалістю 28 днів. Зазначений набір може додатково включати інструкцію по застосуванню, що свідчить про те, що зазначена фармацевтична композиція призначена для лікування (наприклад, для терапевтичного лікування) пацієнта, страждаючого від неоперабельної або метастатичної V600 меланоми, позитивної за мутацією BRAF , в комбінації з вемурафенібом, причому (i) першу композицію, що містить Сполуку II або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, вводять в дозі 60 мг в дні 1 - 21 циклу тривалістю 28 днів; і (ii) другу композицію, що містить Сполуку I або фармацевтично прийнятну сіль зазначеної сполуки, вводять в дозі 960 мг (наприклад, чотири таблетки по 240 мг) двічі на день в дні 1 - 28 циклу тривалістю 28 днів. Лікування може, наприклад, збільшувати виживаність пацієнта, зменшувати ризик рецидиву раку у пацієнта, збільшувати тривалість відповіді на лікування та/або збільшувати вірогідність виживаності пацієнта. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому раніше не піддавали лікуванню (тобто попередньому лікуванню неоперабельної або метастатичної меланоми). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому раніше не піддавали лікуванню. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу неоперабельну або метастатичну меланому пацієнта раніше піддавали лікуванню (згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу - без попереднього лікування інгібітором BRAF). Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, є таблеткою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу друга композиція, що містить Сполуку I, є таблеткою. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу як перша композиція, що містить Сполуку II, так і друга композиція, що містить Сполуку I, запропоновані у формі таблетки. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку I, і друга композиція, що містить Сполуку II, запропоновані у вигляді одиничної дозованої форми. Згідно деяким варіантам реалізації даного винаходу перша композиція, що містить Сполуку II, і друга композиція, що містить Сполуку I, приготовані в лікарську форму спільно (наприклад, у вигляді фармацевтичного складу). Способи лікування включають будь-які способи, розкриті в даній заявці. 28