Комбінована фармацевтична композиція та метод лікування діабету та порушення обміну речовин

Реферат: Винахід стосується фармацевтичної композиції для лікування пацієнтів, що страждають на діабет та порушення обміну речовин, де композиція складається з а) активованої потенційованої форми антитіл С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну, у вигляді суміші гомеопатичних розведень - С12, С30 та С200, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази у вигляді суміші гомеопатичних розведень - С12, С30 та С200. UA 112757 C2 (12) UA 112757 C2 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ Даний винахід відноситься до галузі медицини і може використовуватися для лікування і профілактики діабету та порушень обміну речовин. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Цукровий діабет - це хронічне захворювання, яке іншими словами називається гіперглікемією (високий рівень цукру в крові). Постійне збільшення рівня глюкози в крові підвищує ризик виникнення пов'язаних з діабетом ускладнень, таких як ушкодження нирок, втрата зору, хвороби серця і виразка стопи. Існує два основних типи діабету: цукровий діабет І типу та цукровий діабет ІІ типу. Цукровий діабет І типу розвивається разом з гіперглікемією, внаслідок того, що підшлункова залоза не здатна виробляти інсулін. Цей тип діабету зазвичай виникає в дитячому або юнацькому віці. У випадку цукровоо діабету ІІ типу, підшлункова залоза здатна виробляти інсулін, однак він не може адекватно задовольняти потреби організму. Проблема полягає в тому, що організм не належним чином реагує на інсулін, що в свою чергу веде до зниження поглинання глюкози клітинами та в результаті призводить до аномально підвищеного рівня глюкози в крові. Після перевантажень підшлункової залози з плином років, підшлункова залоза може в кінцевому підсумку втратити здатність виробляти інсулін, тому в цей момент людині з діабетом ІІ типу може знадобитися інсулінотерапія. Інсулін, природний гормон, що виробляється підшлунковою залозою, переносить глюкозу з потоку крові всередину клітин. Таким чином, основна робота інсуліну полягає в регулюванні переміщення глюкози в клітини, що призводить до зниження рівня глюкози в крові. Дія інсуліну регулююється за допомогою активації рецептора-гетеротетрамера, що міститься в плазматичній мембрані. Інсуліновий рецептор представляє собою глікопротеїн, який складається з двох позаклітинних альфа-субодиниць і двох трансмембранних бета-субодиниць, пов'язаних дисульфідними зв'язками. Ullrich et al., Nature, 313:756-61, 1985. Альфа-субодиниці містять інсулін-зв'язуючий домен, а внутрішньоклітинна частина бета-субодиниці містить інсулін-регулюючий протеїн-тирозин кіназу (фермент, який каталізує передачу високоенергетичної групи від донора (зазвичай ATP) акцептору). Після вивільнення молекули інсуліну бета-клітинами підшлункової залози та її прибуття до клітини, вона зв'язується з інсуліновим рецептором на поверхні більшості клітин. Відразу після зв'язування інсуліну активується функція внутрішньої фосфотрансферази бета-субодиниці рецептора інсуліну, в результаті чого відбувається фосфорилювання тирозину ряду внутрішньоклітинних білків. Після активації рецептора інсуліну, фосфорилювання призводить до збільшення запасів глюкози і, отже, зниження рівня глюкози в крові. Ефективну регуляцію рівня глюкози в крові важко досягти протягом тривалого часу навіть з дотриманням найдосконалішого режиму інсулінотерапії мотивованими пацієнтами. Таким чином, існує постійна потреба в нових лікарських препаратах із бажаною терапевтичною ефективністю для лікування таких захворювань і порушень обміну речовин. Оксид азоту (NO) є газоподібною молекулою, яка, як показано у дослідженнях, сигналізує різні біологічні процеси. NO ендотеліального походження є однією з ключових молекул в регуляції судинного тонусу, а його зв'язок з судинними захворюваннями вже давно був визнаний. NO гальмує багато процесів, що, як відомо, беруть участь в утворенні атеросклеротичних бляшок, включаючи адгезію моноцитів, агрегацію тромбоцитів і проліферацію гладком'язових клітин судин. Іншою важливою роллю ендотеліального NO є захист судинної стінки від окислювального стресу, викликаного її власними продуктами метаболізму і продуктами окислення ліпідів і ліпопротеїнів. Ендотеліальна функція простежується на дуже ранніх стадіях атеросклерозу. Тому цілком можливо, що дефіцит наявного доступного NO може бути головною причиною прискорення атеросклерозу у людини. На додаток до виконання своєї ролі в ендотелії судин, наявний NO, як показано, модулює метаболізм ліпопротеїнів. Було досліджено, що між плазмовими концентраціями продуктів метаболізму NO та рівнем холестерину загальної плазми і ліпопротеїнів низької щільності [ЛПНЩ] існує негативна кореляція, в той час як ліпопротеїни високої щільності [ЛПВЩ] покращують функцію судин у гіперхолестериномічних об'єктів. Втрата NO має значний вплив на розвиток захворювання. Цукровий діабет пов'язаний з підвищенням частоти захворюваності та смертності, спричинених, перш за все, прискореним розвитком атеросклерозу. Крім того, звіти показують, що у діабетиків мають місце порушення функції легень. Було висловлено припущення, що резистентність до інсуліну призводить до запалення дихальних шляхів. Habib et al., Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs, Is There A Link? Pak J Physiol 2007;3(1). Оксид азоту синтезується в ендотелії з L-аргініну за допомогою синтази оксиду азоту (NOсинтази). NO-синтаза існує в різних ізоформах, в тому числі у конститутивній формі (кNO 1 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 синтаза) і індуцибельній формі (іNO-синтаза). Конститутивна форма зустрічється в нормальних ендотеліальних клітинах, нейронах і деяких інших тканинах. Терапевтична дія сильно розведених (або надмалих) форм антитіл, потенційованих за гомеопатичною технологією, була виявлена автором даного винаходу, д-р Олегом Івановичем Епштейном. Патентом США № 7582294 пропонується фармацевтична композиція для лікування доброякісної гіперплазії передміхурової залози, або простатиту шляхом прийому гомеопатично активованої форми антитіл до простато-специфічного антигену (ПСА). Патентом США № 7700096 пропонується гомеопатично потенційована форма антитіл до ендотеліальної NOсинтази. Гомеопатично потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази продається в Росії та інших країнах під торговою назвою Impaza®. СТИСЛЕ ВИКЛАДЕННЯ ВИНАХОДУ Особливість винаходу полягає в його віднесенні до фармацевтичних композицій, що приймаються пацієнтами, які страждають від діабету та інших порушень обміну речовин, а зазначена композиція включає а) активовану потенційовану форму антитіл до рецептора інсуліну людини, і б) активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Крім цього, винахід представляє фармацевтичну композицію, що приймається пацієнтами, які страждають від діабету та інших порушень обміну речовин, а зазначена композиція включає а) активовану потенційовану форму антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, і б) активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NOсинтази. З однієї сторони, фармацевтична композиція винаходу містить а) активовану потенційовану форму антитіл до рецептора інсуліну людини, і б) активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NO-синтази, де молекула рецептора інсуліну складається з щонайменше однієї альфа-субодиниці та однієї бета-субодиниці. З іншої сторони, фармацевтична композиція винаходу містить активовану потенційовану форму антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або активовану потенційовану форму антитіл до рецептора інсуліну людини у вигляді суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С200, імпрегнованих у твердий носій. Активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази у вигляді суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С200, також може послідовно імпрегнуватися у твердий носій. Беручи до уваги інший аспект винаходу, фармацевтична композиція винаходу містить активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NO-синтази у вигляді суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С200, імпрегнованих у твердий носій. Активована потенційована форма антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або активована потенційована форма антитіл до рецептора інсуліну людини у вигляді суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С200, також може послідовно імпрегнуватися у твердий носій. Як правило, активована потенційована форма антитіл до С-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини, або активована потенційована форма антитіл до рецептора інсуліну людини є моноклональним, поліклональним чи природним антитілом, однак, переважно поліклональним антитілом. Відповідно до одного аспекту винаходу, активована потенційована форма антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або активована потенційована форма антитіл до рецептора інсуліну людини готується шляхом послідовних сотенних розведень в поєднанні з вертикальним струшуванням кожного розведення. Як правило, активованапотенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази є моноклональним, поліклональним чи природним антитілом, однак, переважно поліклональним антитілом. Відповідно до одного аспекту винаходу, активована потенційована форма антитіл до ендотеліальної NO-синтази готується шляхом послідовних сотенних розведень в поєднанні з вертикальним струшуванням кожного розведення. Відповідно до іншого аспекту винаходу, метод лікування пацієнта, який страждає від діабету типу І, включає застосування пацієнтом комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Відповідно до іншого аспекту винаходу, метод лікування пацієнта, який страждає від діабету типу І, включає застосування пацієнтом комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Відповідно до іншого аспекту винаходу, метод лікування пацієнта, який страждає від діабету типу ІІ, включає застосування пацієнтом комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл 2 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 до рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Відповідно до іншого аспекту винаходу, метод лікування пацієнта, який страждає від діабету типу ІІ, включає застосування пацієнтом комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Беручи до уваги інший аспект винаходу, винахід представляє метод зниження рівня глюкози в крові ссавців, який включає застосування ссавцями комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Беручи до уваги інший аспект винаходу, винахід представляє метод зниження рівня глюкози в крові ссавців, який включає застосування ссавцями комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. З однієї сторони, винахід представляє метод лікування резистентності ссавців до інсуліну, який включає застосування ссавцями комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. З іншої сторони, винахід представляє метод лікування резистентності ссавців до інсуліну, який включає застосування ссавцями комбінації а) активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, та б) активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Відповідно до винаходу, передбачається застосування від однієї до двох одиничних лікарських форм активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини, або активованої потенційованої форми антитіл до рецептора інсуліну людини, та від однієї до двох одиничних лікарських форм активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази, при чому кожен прийом одиничної лікарської форми здійснюється від одного до чотирьох разів на день. Рекомендується приймати від однієї до двох одиничних лікарських форм активованої потенційованої форми антитіл двічі на день. ОПИС ФІГУР Фігура 1 - показано дію досліджуваних препаратів на рівень глюкози в плазмі крові щурів з цукровим діабетом, викликаним стрептозотоцином. Фігура 2 - показано дію досліджуваних препаратів на 14 день після введення ін'єкцій на показники кривої концентрація-час (ККЧ), отримані після проведення глюкозо толерантного тесту на щурах з цукровим діабетом, викликаним стрептозотоцином. Фігура 3 - показано дію досліджуваних препаратів на рівень глюкози в плазмі крові щурів зі спонтанним інсуліно-незалежним цукровим діабетом. Фігура 4 - показано дію досліджуваних препаратів на 28 день введення ін'єкцій на показники кривої концентрація-час (ККЧ), отримані після проведення глюкозо толерантного тесту на щурах зі спонтанним інсуліно-незалежним цукровим діабетом. Фігура 5 - показано динаміку рівнів глюкози та гліколятів гемоглобіну у пацієнтів з цукровим діабетом І типу на фоні прийому препарату IR Ab+NOS Ab. Фігура 6 - показано динаміку рівнів глюкози та гліколятів гемоглобіну у пацієнтів з цукровим діабетом ІІ типу на фоні прийому препарату IR Ab+NOS Ab. Детальний опис винаходу Головна ідея винаходу визначається з посиланням на додані формули винаходу. Що стосується формул винаходу, далі по тексту подається глосарій, в якому пояснюються відповідні визначення. Термін "антитіло" в контексті вказаного документа означає імуноглобулін, який специфічно приєднується до відповідної просторової і полярної структури іншої молекули, і тим самим вважається комплементарним їй. За визначеннями, вказаними в формулах винаходу, антитіла можуть включати в себе повний імуноглобулін або його фрагмент, можуть бути природними, поліклональними або моноклональними, і можуть включати в себе різні класи і ізотипи, наприклад, IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b і IgG3, IgM, і т.д. Їхні фрагменти можуть включати Fab, Fv і F (аb ') 2, Fab', та ін. Однина "антитіло" включає в себе множину "антитіла". Термін "активована-потенційована форма" або "потенційована форма", відповідно, використовується по відношенню до антитіл для позначення продукту гомеопатичного потенціювання будь-якого вихідного розчину антитіл. "Гомеопатичне потенціювання" позначає використання методів гомеопатії для надання вихідному розчину відповідної речовини 3 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 гомеопатичної потенції. Не обмежуючись наступним, "гомеопатичне потенціювання" може включати в себе багаторазові послідовні розведення у поєднанні із зовнішньою дією, зокрема із (механічним) струшуванням. Іншими словами, у відповідності з гомеопатичними методами вихідний розчин антитіл піддається послідовним повторюваним розведенням і багаторазовому вертикальному струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація вихідного розчину антитіл в розчиннику (як правило, це вода або водно-спиртовий розчин), складає від 0,5 до близько 5,0 мг/мл. Переважний порядок підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіл, полягає у використанні суміші з трьох водних або водно-спиртових розведень 12 30 первинного матричного розчину (материнська тинктура) антитіл, який розбавляють 100 , 100 і 200 100 разів, відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (C12, C30 і C200), або у використанні суміші з трьох водних або водно-спиртових розведень первинного 12 30 50 матричного розчину (материнська тинктура) антитіл, який розбавляють 100 , 100 і 100 разів, відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (C12, C30 і C50). Приклади гомеопатичного потенціювання описуються в патентах США № 7572441 та № 7582294, посилання на які в повному обсязі і в зазначених цілях вказуються в цьому документі. В той час як термін "активована потенційована форма" використовується у формулі винаходу, термін "надмалі дози" застосовується в прикладах. Термін "надмалі дози" став широко застосовуваним терміном в області дослідження і використання гомеопатичних розведень і потенційованих форм речовин. Термін "надмала доза" або "надмалі дози" розглядається, в першу чергу, як термін, що погоджується та асоціюється з терміном "активована потенційована форма", що використовується в формулі винаходу. Іншими словами, антитіло перебуває у "активованій потенційованій" формі за наявності трьох факторів. По-перше, "активована потенційована" форма антитіла є продуктом підготовчих операцій, загальноприйнятих в гомеопатії. По-друге, "активована потенційована" форма антитіла повинна мати біологічну активність, що визначається загальноприйнятими в сучасній фармакології методами. По-третє, біологічна активність, яка проявляється в "активованій потенційованій" формі антитіла, не може пояснюватися присутністю молекулярної форми антитіла в кінцевому продукті гомеопатичного процесу. Наприклад, активовану потенційовану форму антитіл можна отримати шляхом послідовних багаторазових розведень початкового, ізольованого антитіла в молекулярній формі у поєднанні із зовнішнім впливом, наприклад, механічним струшуванням. Зовнішній вплив на зменшення концентрації також може здійснюватися, наприклад, шляхом ультразвукових, електромагнітних та інших фізичних факторів. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, патенти США № 7229648 та № 4311897, посилання на які містяться в цьому документі в повному обсязі і в заявлених цілях, описує процеси, які в гомеопатії вважаються загальноприйнятими методами гомеопатичного потенціювання. Ця процедура призводить до рівномірного зменшення молекулярної концентрації вихідної молекулярної форми антитіла. Процедуру необхідно повторювати до отримання бажаної гомеопатичної потенції. Що стосується окремих антитіл, необхідна гомеопатична потенція може визначатися шляхом біологічного тестування проміжних розведень в необхідній фармакологічній моделі. Не обмежуючись нижче вказаним, "гомеопатичне потенціювання" може включати, наприклад, повторювані послідовні розведення в поєднанні з зовнішнім впливом, особливо вертикальним (механічним) струшуванням. Іншими словами, у відповідності з гомеопатичними методами вихідний розчин антитіл піддається послідовним повторюваним розведенням і багаторазовому вертикальному струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація вихідного розчину антитіл в розчиннику (як правило, це вода або водно-спиртовий розчин), складає від 0,5 до близько 5,0 мг/мл. Переважний порядок підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіл, полягає у використанні суміші з трьох водних або водно-спиртових розведень первинного матричного 12 30 200 розчину (материнська тинктура) антитіл, який розбавляють 100 , 100 і 100 разів, відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням C12, C30 і C200, або суміші з трьох водних або водно-спиртових розведень первинного матричного розчину (материнська тинктура) 12 30 50 антитіл, який розбавляють 100 , 100 і 100 разів, відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням C12, C30 і C50. Приклади отримання бажаної потенції описуються в патентах США № 7229648 та № 4311897, посилання на які в повному обсязі і в зазначених цілях вказуються в цьому документі. Процедура, яка застосовується до "активованої потенційованої" форми антитіл, більш детально описується далі в документі. Застосування гомеопатичних препаратів в лікуванні людини породило величезну кількість суперечок. Хоча даний винахід ґрунтується на прийнятих гомеопатичних процесах з отримання "активованої потенційованої" форми антитіл, для простеження його ефективності не слід покладатися виключно на гомеопатію, що застосовується по відношенню до людини. На 4 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 схваленій фармакологічній моделі дослідником було несподівано виявлено і наочно продемонстровано, що розчинник, отриманий в кінцевому рахунку шляхом декількох послідовних розведень початкової молекулярної форми антитіла, характеризується остаточною активністю, що немає нічого спільного з молекулярною формою антитіла в цільовому розведенні. "Активована потенційована" форма антитіл, представлена в дослідженні, пройшла тестування на біологічну активність у відношенні схвалених фармакологічних моделей активності у відповідних експериментальних умовах, або в природних умовах на відповідних моделях тварин. Експерименти, виконані та описані нижче в документі, представляють докази наявності біологічної активності у таких моделях. Клінічні дослідження, проведені на людині, також описані нижче в документі, зокрема свідчать, що активність, яка спостерігалася в моделі тварини, може застосовуватися в лікуванні людини. Дослідження, проведені на людині, також свідчать про здатність "активованої потенційованої" форми, мова про яку йде в цьому документі, лікувати окремі захворювання або порушення стану людини, які у медицині прийнято вважати патологічними станами. Крім того, вказана, "активована потенційована" форма антитіла включає в себе лише ті розчини або тверді препарати, біологічна активність яких не пояснюється наявністю молекулярної форми антитіла, що залишилася від первісного, вихідного розчину. Іншими словами, в той час як передбачається, що "активована потенційована" форма антитіла може містити сліди початкової молекулярної форми антитіл, жоден фахівець в даній області не може приписувати біологічну активність, яка спостерігалася в прийнятій фармакологічній моделі, решті молекулярних форм антитіл з будь-яким ступенем достовірності у зв'язку з вкрай низьким рівнем концентрації молекулярних форм антитіл, що залишилися після послідовних розведень. Хоча винахід не обмежується будь-якою конкретною теорією, біологічна активність "активованої потенційованої" форми антитіла цього винаходу не пов'язана з початковою молекулярною формою антитіла. Найкращою є "активована потенційована" форма антитіла в рідкому або твердому вигляді, в якому концентрація вихідної молекулярної форми антитіла нижча межі її виявлення прийнятими аналітичними методами, такими, наприклад, як капілярний електрофорез та високоефективна рідинна хроматографія. Найкращою є "активована потенційована" форма антитіла в рідкому або твердому вигляді, в якому концентрація вихідної молекулярної форми антитіла нижча числа Авогадро. У фармакології молекулярних форм терапевтичних речовин, звичайною практикою є створення кривої залежності дози-відповіді, в якій рівень фармакологічної відповіді вказується напроти концентрації активного препарату, який вводять об'єкту дослідження, або перевіряють в лабораторних умовах. Мінімальна кількість препарату, за якої відчутна будь-яка терапевтична відповідь, відома як порогова доза. Передбачається, що у вказаній біологічній моделі "активована потенційована" форма антитіл містить молекулярне антитіло, якщо воно існує, в концентрації, нижче порогової дози для молекулярної форми антитіла. Даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, що застосовується пацієнтом, який страждає від діабету та інших порушень обміну речовин; фармацевтична композиція містить а) активовану потенційовану форму антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або активованої потенційованої форми антитіл до рецептора інсуліну людини, та б) активовану потенційовану форму антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Як вказано вище в документі, вплив кожного з окремих компонентів фармацевтичної комбінації вже прослідковувався при індивідуальному застосуванні в медичних цілях. Однак, розробники цієї патентної заявки несподівано для себе виявили, що застосування комбінації компонентів корисне для лікування пацієнтів з діабетом та резистентністю до інсуліну, та в подальшому знижує рівень глюкози в крові. У той час як дії заявника не обмежуються цією теорією, гіпотезою "акселератора" припускається, що цукровий діабет (ЦД) І типу і цукровий діабет (ЦД) ІІ типу є однією і тією ж хворобою, яка характеризується резистентністю до інсуліну, розвиток якої в цукровий діабет (ЦД) І типу і цукровий діабет (ЦД) ІІ типу визначається генотипом пацієнта. Ця гіпотеза не заперечує ролі аутоімунних процесів, однак, вона ставить під сумнів її первинну роль. Гіпотеза "акселератора" розділяє цукровий діабет І та ІІ типу відповідно до швидкості прогресії: у випадку цукрового діабету І типу, швидкий розвиток патологічних змін визначає ранній початок прояви клінічних симптомів захворювання. Вперше гіпотеза була запропонована в 2001 році і в даний час підтверджується результатами 6 незалежних клінічних випробувань (див. Wilkin, T.J. The accelerator hypothesis: a review of the evidence for insulin resistance as the basis for type [I] as well as type II diabetes. // International Journal for Obesity. 2009: Vol. 33-p. 716726.). Ключову роль у патогенезі обох типів діабету відіграє резистентність до інсуліну, зниження якої призводить до клінічного перебігу обох типів діабету (див. Cellular mechanisms of insulin resistance. World Congress on Insulin Resistance Syndrome, 2009, Diabetes Care. 2010: Vol. 5 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 33, N8, pp. 103-108.). Загально відомою залишається роль бета-субодиниці рецептора інсуліну для сигнального шляху інсуліну. Після зв'язування інсуліну з рецептором і активації бетасубодиниці, шлях може розділитися на два різних напрямка: фосфатидилинозитол-3-кіназа (PI 3-K) або кіназа мітогенактивованого білка (MAP-K). Перший шлях вважається необхідним для здійснення метаболічної і антиапоптотичної дії інсуліну, а альтернативний шлях пов'язаний з його неметаболічною, проліферативною і мітогенною дією. У випадку резистентності до інсуліну, було показано, що лише метаболічна резистентність до інсуліну, пов'язана з активацією бета-субодиниці на шляху P13-K, відіграє важливу роль у розвитку цукрового діабету. (Див. Muntoni, S, Muntoni, S. Insulin Resistance: Pathophysiology and Rationale for Treatment, Ann. Nutr. Metab. 2011: Vol. 58, N1, pp. 25-36). Заявлена фармацевтична композиція забезпечує вплив на метаболічну резистентність до інсуліну. Згідно з цим аспектом винаходу фармацевтична композиція може бути як в рідкому, так і у твердому вигляді. Кожна з активованих потенційованих форм антитіл, включених в фармацевтичну композицію, отримується з початкових молекулярних форм антитіл за допомогою загальноприйнятого в гомеопатії процесу. Початкові антитіла можуть бути моноклональними або поліклональними антитілами, приготовленими у відповідності з відомими методами, про що говориться, наприклад, в Immunotechniques, G. Frimel, M., "Meditsyna", 1987, p. 9-33; "Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after" by Laffly E., Sodoyer R. - 2005-Vol. 14. - N 1-2. P.33-55, обидва джерела влючено повністю через посилання. Моноклональні антитіла можна отримати, наприклад, шляхом гібридомної технології. Початковий етап процесу включає імунізацію, що ґрунтується на принципах, розроблених в ході підготовки поліклональних імунних сироваток. Подальші етапи робіт пов'язані з отриманням гібридних клітин, які відповідають за створення клонів антитіл з ідентичною специфічністю. Їх ізоляція забезпечується використанням тих же методів, що і у випадку приготування поліклональних імунних сироваток. Також поліклональні антитіла можна отримати за допомогою активної імунізації тварин. З цією метою, окремим тваринам (наприклад, кролям) вводять серії ін'єкцій відповідного антигену, або ендотеліальної NO-синтази та С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або ендотеліальної NO-синтази та рецептора інсуліну людини. Імунна система тварин генерує відповідні антитіла, які збираються з тварин за відомою методикою. Ця процедура дозволяє приготувати моноспецифічну сироватку, багату на антитіла. При бажанні, сироватка, що містить антитіла, очищується, наприклад, з використанням афінної хроматографії, фракціонування з випаданням солі, або іонно-обмінної хроматографії. Сироватка, багата на антитіла, отримана в результаті очищення, може використовуватися в якості вихідного матеріалу для підготовки активованої потенційованої форми антитіл. Бажана концентрація початкового розчину антитіл в розчиннику (переважно це водна або водно-етил-спиртова суміш) коливається від 0,5 до 5,0 мг/мл. Переважний порядок підготовки кожного з компонентів комбінації препарату відповідно до цього винаходу полягає у використанні суміші трьох водно-спиртових розведень первинного 12 30 200 матричного розчину антитіл, розбавленого 100 , 100 і 100 разів, відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням C12, C30 і C200. Для підготовки твердої лікарської форми, твердий носій обробляється бажаним розведенням, отриманим за допомогою гомеопатичного методу. Для отримання твердої лікарської форми комбінації винаходу, вся маса носія імпрегнується кожним з розведень. Обидва методи імпрегнування підходять для підготовки бажаної лікарської форми комбінації. У кращому варіанті, вихідним матеріалом для підготовки активованої потенційованої форми, що містить комбінацію винаходу, є поліклональне антитіло тваринного походження до відповідного антигену, а саме, до C-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, або до рецептора інсуліну людини, та до ендотеліальної NO-синтази. Для отримання активованої потенційованої форми поліклональних антитіл до C-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини, антиген бажано ввести в якості іммуногену лабораторній тварині, переважно, кролю. Пептиди, які представляють особливий інтерес, можуть включати в себе щонайменше близько 3 амінокислот, як правило, щонайменше 10 по обидві сторони послідовності, переважно щонайменше 3 амінокислоти в С-кінцевій частині. Наступні послідовності рецептора інсуліну людини передбачаються в якості підходящих антигенів: Повна альфа-субодиниця рецептора інсуліну людини: Послідовність SEQ. ID. №: 1 His Leu Tyr 28 30 6 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr 31 35 40 45 Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu 46 50 55 60 Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp 61 65 70 75 Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu 76 80 85 90 Phe Arg Val Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn 91 95 100 105 Leu Thr Val Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu 106 110 115 120 Val Ile Phe Glu Met Val His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn 121 125 130 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val Arg Ile Glu Lys Asn Asn 136 140 145 150 Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp 151 155 160 165 Ser Val Glu Asp Asn Tyr Ile Val Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu 166 170 175 180 Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn 181 185 190 195 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly Gln Phe Val Glu Arg Cys Trp 196 200 205 210 Thr His Ser His Cys Gln Lys Val Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser 211 215 220 225 His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu 226 230 235 240 Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Val Ala Cys 241 245 250 255 Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Val Glu Thr Cys Pro Pro 256 260 265 270 Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Val Asn Phe Ser Phe 271 275 280 285 Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly 286 290 295 300 Cys His Gln Tyr Val Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys 301 305 310 315 Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro 316 320 325 330 Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys His Leu Leu Glu Gly Glu 331 335 340 345 Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys 346 350 355 360 Thr Val Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn 361 365 370 375 Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu 376 380 385 390 Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Val Ser 391 395 400 405 Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu 406 410 415 420 Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu 421 425 430 435 Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 436 440 445 450 Gly Lys Leu Phe Phe His Tyr Asn Pro Lys Leu Cys Leu Ser Glu 451 455 460 465 Ile His Lys Met Glu Glu Val Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu 466 470 475 480 7 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys 481 485 490 495 Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp 496 500 505 510 Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg 511 515 510 525 Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln 526 530 535 540 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 550 555 Trp Thr Val Val Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro 556 560 565 570 Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro 571 575 580 585 Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Val Lys Thr Leu Val Thr Phe Ser 586 590 595 600 Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Val 601 605 610 615 Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Val Pro Leu Asp Pro Ile Ser 616 620 625 630 Val Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro 631 635 640 645 Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Val Phe Trp Glu 646 650 655 660 Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu 661 665 670 675 Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu 676 680 685 690 Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser 691 695 700 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu 706 710 715 720 Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr 721 725 730 735 Leu His Asn Val Val Phe Val Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr 736 740 745 750 Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg 751 755 760 762 Фрагменти альфа-субодиниці рецептора інсуліну людини: Послідовність SEQ. ID. №: 2 Leu Gly Leu Tyr Asn 131 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val 136 140 144 Послідовність SEQ. ID. №: 3 Lys Gly Lys Thr Asn 191 195 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly 196 200 203 Послідовність SEQ. ID. №: 4 Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 441 445 450 Gly Lys Leu 451 453 Послідовність SEQ. ID. №: 5 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 550 555 Trp Thr Val Val Asp 556 560 Послідовність SEQ. ID. №: 6 8 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Asp Ile Ile Tyr Val 611 615 Gln Thr Asp Ala Thr 616 620 Послідовність SEQ. ID. №: 7 Tyr Glu Asp Ser 702 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile 706 710 715 719 Повна бета-субодиниця рецептора інсуліну людини: Послідовність SEQ. ID. №: 8 Ser Leu Gly 763 765 Asp Val Gly Asn Val Thr Val Ala Val Pro Thr Val Ala Ala Phe 766 770 775 780 Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Val Pro Thr Ser Pro Glu Glu His 781 785 790 795 Arg Pro Phe Glu Lys Val Val Asn Lys Glu Ser Leu Val Ile Ser 796 800 805 810 Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys 811 815 820 825 Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Val Ala Ala Tyr Val 826 830 835 840 Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Val Gly 841 845 850 855 Pro Val Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Val Val His Leu Met 856 860 865 870 Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Val Leu Tyr Glu 871 875 880 885 Val Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Val 886 890 895 900 Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly 901 905 910 915 Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu 916 920 925 930 Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Val Thr 931 935 940 945 Asp Tyr Leu Asp Val Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly 946 950 955 960 Pro Leu Ile Phe Val Phe Leu Phe Ser Val Val Ile Gly Ser Ile 961 965 970 975 Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro 976 980 985 990 Leu Tyr Ala Ser Ser Asn Pro Glu Tyr Leu Ser Ala Ser Asp Val 991 995 1000 1005 Phe Pro Cys Ser Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ser Arg 1006 1010 1015 1020 Glu Lys Ile Thr Leu Leu Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly 1021 1025 1030 1035 Met Val Tyr Glu Gly Asn Ala Arg Asp Ile Ile Lys Gly Glu Ala 1036 1140 1145 1050 Glu Thr Arg Val Ala Val Lys Thr Val Asn Glu Ser Ala Ser Leu 1051 1155 1160 1065 Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Gly 1066 1170 1175 1080 Phe Thr Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Lys 1081 1185 1190 1095 Gly Gln Pro Thr Leu Val Val Met Glu Leu Met Ala His Gly Asp 1096 1100 1105 1110 Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Ala Glu Asn Asn 9 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1111 1115 1120 1125 Pro Gly Arg Pro Pro Pro Thr Leu Gln Glu Met Ile Gln Met Ala 1126 1130 1135 1140 Ala Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala Lys Lys Phe 1141 1145 1150 1155 Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val Ala His Asp 1156 1160 1165 1170 Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr 1171 1175 1180 1185 Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val 1186 1190 1195 1200 Arg Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr 1201 1205 1210 1215 Ser Ser Asp Met Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Thr 1216 1220 1225 1230 Ser Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val 1231 1235 1240 1245 Leu Lys Phe Val Met Asp Gly Gly Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Asn 1246 1250 1255 1260 Cys Pro Glu Arg Val Thr Asp Leu Met Arg Met Cys Trp Gln Phe 1261 1265 1270 1275 Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Val Asn Leu Leu 1276 1280 1285 1290 Lys Asp Asp Leu His Pro Ser Phe Pro Glu Val Ser Phe Phe His 1291 1295 1300 1305 Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu 1306 1310 1315 1320 Phe Glu Asp Met Glu Asn Val Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys 1321 1325 1330 1335 Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly 1336 1340 1345 1350 Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His Ile Pro Tyr Thr His Met Asn 1351 1355 1360 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 1381 1382 Елементи С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини: Послідовність SEQ. ID. №: 9 Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro 1368 1370 1375 1377 Послідовність SEQ. ID. №: 10 Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1372 1375 1380 Pro Ser 1381 1382 Послідовність SEQ. ID. №: 11 Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr 1369 1370 1375 Послідовність SEQ. ID. №: 12 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 1381 1382 Послідовність SEQ. ID. №: 13 Asn 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 10 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1381 1382 Також передбачається використання рецептора інсуліну людини в якості антигену. Відповідна послідовність такого антигену виглядає наступним чином: Послідовність SEQ. ID. №: 14 Met Ala Thr Gly Gly Arg Arg Gly Ala Ala Ala Ala Pro Leu Leu 1 5 10 15 Val Ala Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ala Gly His Leu Tyr 16 20 25 30 Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr 31 35 40 45 Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu 46 50 55 60 Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp 61 65 70 75 Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu 76 80 85 90 Phe Arg Val Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn 91 95 100 105 Leu Thr Val Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu 106 110 115 120 Val Ile Phe Glu Met Val His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn 121 125 130 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val Arg Ile Glu Lys Asn Asn 136 140 145 150 Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp 151 155 160 165 Ser Val Glu Asp Asn Tyr Ile Val Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu 166 170 175 180 Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn 181 185 190 195 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly Gln Phe Val Glu Arg Cys Trp 196 200 205 210 Thr His Ser His Cys Gln Lys Val Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser 211 215 220 225 His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu 226 230 235 240 Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Val Ala Cys 241 245 250 255 Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Val Glu Thr Cys Pro Pro 256 260 265 270 Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Val Asn Phe Ser Phe 271 275 280 285 Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly 286 290 295 300 Cys His Gln Tyr Val Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys 301 305 310 315 Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro 316 320 325 330 Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys His Leu Leu Glu Gly Glu 331 335 340 345 Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys 346 350 355 360 Thr Val Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn 361 365 370 375 Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu 376 380 385 390 Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Val Ser 391 395 400 405 Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu 406 410 415 420 11 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu 421 425 430 435 Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 436 440 445 450 Gly Lys Leu Phe Phe His Tyr Asn Pro Lys Leu Cys Leu Ser Glu 451 455 460 465 Ile His Lys Met Glu Glu Val Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu 466 470 475 480 Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys 481 485 490 495 Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp 496 500 505 510 Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg 511 515 510 525 Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln 526 530 535 540 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 550 555 Trp Thr Val Val Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro 556 560 565 570 Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro 571 575 580 585 Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Val Lys Thr Leu Val Thr Phe Ser 586 590 595 600 Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Val 601 605 610 615 Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Val Pro Leu Asp Pro Ile Ser 616 620 625 630 Val Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro 631 635 640 645 Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Val Phe Trp Glu 646 650 655 660 Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu 661 665 670 675 Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu 676 680 685 690 Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser 691 695 700 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu 706 710 715 720 Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr 721 725 730 735 Leu His Asn Val Val Phe Val Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr 736 740 745 750 Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg Ser Leu Gly 751 755 760 765 Asp Val Gly Asn Val Thr Val Ala Val Pro Thr Val Ala Ala Phe 766 770 775 780 Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Val Pro Thr Ser Pro Glu Glu His 781 785 790 795 Arg Pro Phe Glu Lys Val Val Asn Lys Glu Ser Leu Val Ile Ser 796 800 805 810 Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys 811 815 820 825 Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Val Ala Ala Tyr Val 826 830 835 840 Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Val Gly 841 845 850 855 Pro Val Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Val Val His Leu Met 856 860 865 870 12 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Val Leu Tyr Glu 871 875 880 885 Val Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Val 886 890 895 900 Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly 901 905 910 915 Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu 916 920 925 930 Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Val Thr 931 935 940 945 Asp Tyr Leu Asp Val Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly 946 950 955 960 Pro Leu Ile Phe Val Phe Leu Phe Ser Val Val Ile Gly Ser Ile 961 965 970 975 Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro 976 980 985 990 Leu Tyr Ala Ser Ser Asn Pro Glu Tyr Leu Ser Ala Ser Asp Val 991 995 1000 1005 Phe Pro Cys Ser Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ser Arg 1006 1010 1015 1020 Glu Lys Ile Thr Leu Leu Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly 1021 1025 1030 1035 Met Val Tyr Glu Gly Asn Ala Arg Asp Ile Ile Lys Gly Glu Ala 1036 1140 1145 1050 Glu Thr Arg Val Ala Val Lys Thr Val Asn Glu Ser Ala Ser Leu 1051 1155 1160 1065 Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Gly 1066 1170 1175 1080 Phe Thr Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Lys 1081 1185 1190 1095 Gly Gln Pro Thr Leu Val Val Met Glu Leu Met Ala His Gly Asp 1096 1100 1105 1110 Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Ala Glu Asn Asn 1111 1115 1120 1125 Pro Gly Arg Pro Pro Pro Thr Leu Gln Glu Met Ile Gln Met Ala 1126 1130 1135 1140 Ala Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala Lys Lys Phe 1141 1145 1150 1155 Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val Ala His Asp 1156 1160 1165 1170 Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr 1171 1175 1180 1185 Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val 1186 1190 1195 1200 Arg Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr 1201 1205 1210 1215 Ser Ser Asp Met Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Thr 1216 1220 1225 1230 Ser Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val 1231 1235 1240 1245 Leu Lys Phe Val Met Asp Gly Gly Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Asn 1246 1250 1255 1260 Cys Pro Glu Arg Val Thr Asp Leu Met Arg Met Cys Trp Gln Phe 1261 1265 1270 1275 Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Val Asn Leu Leu 1276 1280 1285 1290 Lys Asp Asp Leu His Pro Ser Phe Pro Glu Val Ser Phe Phe His 1291 1295 1300 1305 Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu 1306 1310 1315 1320 13 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Phe Glu Asp Met Glu Asn Val Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys 1321 1325 1330 1335 Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly 1336 1340 1345 1350 Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His Ile Pro Tyr Thr His Met Asn 1351 1355 1360 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 1381 1382 Примірний порядок підготовки вихідних поліклональних антитіл до C-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини виглядає наступним чином. За 7-9 днів до забору крові, для підвищення рівня поліклональних антитіл в потоку крові кролів, їм вводять 1-3 внутрішньовенних ін'єкцій бажаного антигену. Після імунізації, зразки крові використовуються для тестування рівня антитіл. Як правило, максимальний рівень імунної реакції розчинного антигену досягається протягом 40-60 днів після першої ін'єкції антигену. На завершення першого циклу імунізації, кролям відводиться 30-денний реабілітаційний період, після чого з допомогою 1-3 внутрішньовенних ін'єкцій проводиться повторна імунізація. Для отримання антисироватки з вмістом потрібних антитіл, кров імунізованих кролів збирається і поміщається в 50 мл центрифужну пробірку. Згустки, сформовані на краях пробірки, знімаються дерев'яною лопаткою, а стержень поміщають в згусток посередині пробірки. Після цього кров поміщають в холодильник при температурі близько 40 °C на одну ніч. На наступний день, згусток на лопатці видаляється, а рідина, що залишилася, центрифугується протягом 10 хвилин при 13000 обертах на хвилину. Супернатант і є цільовою антисироваткою. Зазвичай, отримана антисироватка жовтого кольору. 20 % NaN3 (вагова концентрація) додаються в антисироватку для отримання остаточної концентрації в 0,02 %, після чого до використання її зберігають в замороженому стані при температурі - 20 °C, або при температурі 70 °C без додавання NaN3. Для виділенняцільових антитіл до С-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини з антисироватки, підходить наступна послідовність твердофазової абсорбції: 10 мл антисироватки кроля розбавляють вдвічі з 0,15 М NaCl, після чого додають 6,26 г Na2SO4, перемішують і витримують протягом 12-16 годин при температурі 4 °C. Осад видаляють центрифугуванням, розводять у 10 мл фосфатного буфера і діалізують у тому ж буфері протягом однієї ночі при кімнатній температурі. Після видалення осаду, розчин наносять на ДЕАЕ-целюлозну колонку, збалансовану фосфатним буфером. Частка антитіла визначається шляхом вимірювання оптичної щільності елюату при 280 нм. Виділені неочищені антитіла очищуються за допомогою афінної хроматографії шляхом приєднання отриманих антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, що знаходиться на нерозчинному матриксі хроматографічного середовища, з подальшим елююванням концентрованими водними розчинами солей. Отриманий в результаті буферний розчин, використовується в якості вихідного розчину для процесу гомеопатичного розведення для отримання активованої потенційованої форми антитіл. Бажана концентрація вихідного розчину матриці з очищеними від антигену поліклональними антитілами кроля до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини становить 0,5-5,0 мг/мл, переважно 2,0-3,0 мг/мл. Поліклональні антитіла до ендотеліальної NO-синтази можна отримати шляхом застосування подібного процесу з використанням ад'юванта. Як правило, для отримання поліклональних антитіл до ендотеліальної NO-синтази в якості іммуногена (антигена) для імунізації кролів використовується вся молекула бичачої ендотеліальної NO-синтази: Послідовність SEQ. ID. №: 15 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly 16 20 25 30 Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala 31 35 40 45 Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr 46 50 55 60 Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn 61 65 70 75 14 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Trp Glu Leu GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gln Ser 76 80 85 90 Gln Gln Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu GLys er Leu 91 95 100 105 Val Leu Pro Arg Lys Leu Gln Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro 106 110 115 120 Pro Ala Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln 121 125 130 135 Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Glu 136 140 145 150 Arg Leu Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ser Thr Gly Thr Tyr 151 155 160 165 His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp 166 170 175 180 Arg Asn Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu 181 185 190 195 Gln Val Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gln Glu Met Phe 196 200 205 210 Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn 211 215 220 225 Leu Arg Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Ala Pro Gly Arg 226 230 235 240 Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly 241 245 250 255 Tyr Arg Gln Gln Asp GLys er Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val 256 260 265 270 Glu Ile Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn 271 275 280 285 Gly Arg Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu 286 290 295 300 Ala Pro Glu Leu Phe Val Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val 301 305 310 315 Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu 316 320 325 330 Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile 331 335 340 345 Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met 346 350 355 360 Ser Thr Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr 361 365 370 375 Asn Ile Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg 376 380 385 390 Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn 391 395 400 405 Leu Ala Val Leu His Ser Phe Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val 406 410 415 420 Asp His His Ala Ala Thr Val Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn 421 425 430 435 Glu Gln Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile 436 440 445 450 Val Pro Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu 451 455 460 465 Met Val Asn Tyr Ile Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp 466 470 475 480 Pro Trp Lys GLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys 481 485 490 495 Lys Thr Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser 496 500 505 510 Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu 511 515 510 525 15 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu 526 530 535 540 Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met 541 545 550 555 Asp Glu Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Val Leu 556 560 565 570 Val Val Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly 571 575 580 585 Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn 586 590 595 600 Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe 601 605 610 615 Asn Ser Val Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg 616 620 625 630 Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly 631 635 640 645 Thr Leu Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLy Ser Arg Ala Tyr Pro 646 650 655 660 His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu 661 665 670 675 Leu Gly Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu 676 680 685 690 Cys Gly Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala Phe 691 695 700 705 Gln Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Glu Ala Lys Ala 706 710 715 720 Ala Ala Gln Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln 721 725 730 735 Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro 736 740 745 750 Gly Leu Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Val 751 755 760 765 Leu Ser Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr 766 770 775 780 Ile Leu Val Arg Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr 781 785 790 795 Gln Pro Gly Asp His Ile Gly Ile Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly 796 800 805 810 Leu Val Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Pro Pro 811 815 820 825 Thr Glu Ser Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys GLys er Pro Gly 826 830 835 840 Gly Pro Pro Pro Ser Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys 841 845 850 855 Thr Leu Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro 856 860 865 870 Pro Ser Pro Arg Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu 871 875 880 885 Pro Ser Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Ser Gln Asp Pro Arg 886 890 895 900 Arg Tyr Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu 901 905 910 915 Val Leu Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu 916 920 925 930 Leu Thr Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser 931 935 940 945 Ser Ala Pro Asn Ala His Pro Gly Glu Val His Leu Thr Val Ala 946 950 955 960 Val Leu Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr 961 965 970 975 16 UA112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Gly Val Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Thr Gly Asp Pro 976 980 985 990 Val Pro Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro 991 995 1000 1005 Asp Pro Tyr Val Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile 1006 1010 1015 1020 Ala Pro Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu 1021 1025 1030 1035 Ser Lys Gly Leu Gln Pro Ala Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys 1036 1040 1045 1050 Arg Cys Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asp 1051 1055 1060 1065 Ala Gln Glu Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser 1066 1070 1075 1080 Arg Glu Pro Asp Ser Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg 1081 1085 1090 1095 Thr Glu Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg 1096 1100 1105 1110 Gly His Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Ser Val 1111 1115 1120 1125 Leu Gln Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu 1126 1130 1135 1140 Leu Asp Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln 1141 1145 1150 1155 Arg Tyr His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu 1156 1160 1165 1170 Val Thr Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg 1171 1175 1180 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Поліклональні антитіла до ендотеліальної NO-синтази можна також отримати використанням всієї молекули ендотеліальної NO-синтази наступної послідовності: Послідовність SEQ. ID. №: 16 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly 16 20 25 30 Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Ser Leu 31 35 40 45 Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Thr 46 50 55 60 Gln Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn Trp Glu 61 65 70 75 Val GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gln Ala Gln Gln 76 80 85 90 Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu GLys er Leu Val Phe 91 95 100 105 Pro Arg Lys Leu Gln Gly Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Pro 106 110 115 120 Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln Tyr Tyr 121 125 130 135 Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Gln Arg Leu 136 140 145 150 Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gln Leu 151 155 160 165 Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp Arg Asn 166 170 175 180 Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu Gln Val 17 з UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 181 185 190 195 Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gln Glu Met Phe Thr Tyr 196 200 205 210 Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn Leu Arg 211 215 220 225 Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Cys Pro Gly Arg Gly Asp 226 230 235 240 Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly Tyr Arg 241 245 250 255 Gln Gln Asp GLy Ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val Glu Ile 256 260 265 270 Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn Gly Arg 271 275 280 285 Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu Pro Pro 286 290 295 300 Glu Leu Phe Leu Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val Pro Leu 301 305 310 315 Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu Arg Trp 316 320 325 330 Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile Gly Gly 331 335 340 345 Leu Glu Phe Pro Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met Ser Thr 346 350 355 360 Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr Asn Ile 361 365 370 375 Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg Thr Thr 376 380 385 390 Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn Val Ala 391 395 400 405 Val Leu His Ser Tyr Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val Asp His 406 410 415 420 His Ala Ala Thr Ala Ser Phe Met Lys His Leu Glu Asn Glu Gln 421 425 430 435 Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile Val Pro 436 440 445 450 Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu Met Val 451 455 460 465 Asn Tyr Phe Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp Pro Trp 466 470 475 480 Lys GLys er Ala Ala Lys Gly Thr Gly Ile Thr Arg Lys Lys Thr 481 485 490 495 Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser Leu Met 496 500 505 510 Gly Thr Val Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu Tyr Gly 511 515 510 525 Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu Gly Arg 526 530 535 540 Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met Asp Glu 541 545 550 555 Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Val Leu Val Val 556 560 565 570 Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser 571 575 580 585 Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser 586 590 595 600 Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe Asn Ser 601 605 610 615 Ile Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg 616 620 625 630 Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu 18 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 631 635 640 645 Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe 646 650 655 660 Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly 661 665 670 675 Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu Cys Gly 676 680 685 690 Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gln Ala Ala Phe Gln Ala 691 695 700 705 Ala Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Asp Ala Lys Ala Ala Ala 706 710 715 720 Arg Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln Arg Tyr 721 725 730 735 Arg Leu Ser Ala Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro Gly Leu 736 740 745 750 Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Ile Arg Ser 751 755 760 765 Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr Ile Leu 766 770 775 780 Val Arg Leu Asp Thr Gly Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr Gln Pro 781 785 790 795 Gly Asp His Ile Gly Val Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Val 796 800 805 810 Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu 811 815 820 825 Pro Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro 826 830 835 840 Pro Pro Gly Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu 841 845 850 855 Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro Pro Ser 856 860 865 870 Pro Gln Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg 871 875 880 885 Glu Gln Gln Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gln Asp Pro Arg Arg Tyr 886 890 895 900 Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Val Leu 901 905 910 915 Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr 916 920 925 930 Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser Ser Ala 931 935 940 945 Pro Ser Thr His Pro Gly Glu Ile His Leu Thr Val Ala Val Leu 946 950 955 960 Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Val 961 965 970 975 Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Pro Gly Asp Pro Val Pro 976 980 985 990 Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp Pro 991 995 1000 1005 Ser Leu Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile Ala Pro 1006 1010 1015 1020 Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu Ser Lys 1021 1025 1030 1035 Gly Leu Gln Pro Thr Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys Arg Cys 1036 1040 1045 1050 Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asn Ala Gln 1051 1055 1060 1065 Gln Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser Arg Glu 1066 1070 1075 1080 Pro Asp Asn Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg Thr Glu 19 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1081 1085 1090 1095 Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg Gly His 1096 1100 1105 1110 Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Asn Val Leu Gln 1111 1115 1120 1125 Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu Leu Asp 1126 1130 1135 1140 Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln Arg Tyr 1141 1145 1150 1155 His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu Val Thr 1156 1160 1165 1170 Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu 1171 1175 1180 1185 Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr 1186 1190 1195 1200 Asn Ser Pro 1201 1203 Наступна послідовність фрагмента ендотеліальної NO-синтази вважається найбільш підходящими антигенами: Послідовність SEQ. ID. №: 17 Pro Trp Ala Phe 1192 1195 Послідовність SEQ. ID. №: 18 Gly Ala Val Pro 1189 1192 Послідовність SEQ. ID. №: 19 Arg 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Послідовність SEQ. ID. №: 20 Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1194 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Послідовність SEQ. ID. №: 21 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp 1186 1190 1195 1196 Послідовність SEQ. ID. №: 22 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Активовану потенційовану форму кожного компонента композиції можна приготувати з вихідного розчину шляхом гомеопатичного потенціювання, використовуючи метод пропорційного зменшення концентрації послідовним розведенням 1 частини кожного попереднього розчину (починаючи з вихідного розчину) в 9 частинах (для десятинних розведень), або в 99 частинах (для сотенних розведень), або в 999 частинах (для тисячних розведень) нейтрального розчинника, в поєднанні з зовнішнім впливом. Як правило, для кожного подальшого розведення для отримання необхідного рівня активності, або фактору розведення, використовуються окремі контейнери. Цей метод вважається загальноприйнятим в гомеопатії. Див, наприклад, V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, p. 14-29, посилання на який містяться в цьому документі. Наприклад, для приготування 12-сотенного розведення (позначається як C12), одна частина вихідного матричного розчину антитіл, наприклад, до C-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини, з концентрацією 3,0 мг/мл розводиться у 99 частинах нейтрального водного або водно-спиртового розчинника (переважно, 15 %-етиловий спирт), а потім вертикально струшується багато разів (10 і більше) для отримання першого сотенного 20 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 розведення (позначається як C1). 2-ге сотенне розведення (C2) отримують з 1-го сотенного розведення C1. Для приготування 12-го сотенного розведення С12 ця процедура повторюється 11 разів. Таким чином, 12-е сотенне розведення С12 представляє собою розчин, отриманий з допомогою 12 послідовних розведень однієї частини вихідного матричного розчину антитіл до C-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини з концентрацією 3,0 мг/мл у 99 частинах нейтрального розчинника в різних контейнерах, що еквівалентно сотенному гомеопатичному розведенню С12. Аналогічні процедури з відповідним коефіцієнтом розбавлення виконуються для отримання розведень C30 і C200. Проміжні розведення можуть застосовуватися на бажаній біологічній моделі для перевірки активності. Кращими активованими потенційованими формами обох антитіл, що містять комбінацію винаходу, вважається суміш розведень C12, C30 та C200. При використанні суміші різних гомеопатичних розведень (в основному сотенних) активної речовини в якості компонентів біологічно активної рідини, кожен компонент композиції (наприклад, C12, C30, C200) готується окремо, відповідно до описаної вище процедури, до отримання передостаннього розведення (наприклад, до отримання C11, C29 і C199, відповідно), а потім одна частина кожного компонента поміщається в один контейнер, відповідно до складу суміші, і змішується з необхідною кількістю розчинника (наприклад, з 97 частинами для отримання сотенного розведення). Активна речовина може використовуватися як суміш різних гомеопатичнихрозведень, наприклад, десяткових та/або сотенних (D20, C30, C100 або C12, C30, C50 і т.д.), ефективність якої визначається експериментально шляхом тестування розведень на відповідних біологічних моделях, наприклад, на моделі, наведеній в цьому документі в прикладах. В процесі зниження потенціювання та концентрації, вертикальні струшування можуть замінятися зовнішнім впливом ультразвуку, електромагнітних полів або будь-якими іншими процесами зовнішнього впливу, які використовуються в гомеопатії. Як правило, фармацевтична композиція винаходу знаходиться у вигляді рідини чи твердої лікарської форми. Найкращою рідкою формою фармацевтичної композиції вважається суміш у співвідношенні 1:1 активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини і активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Відповідним носієм у рідкому стані є вода або водно-етил-спиртова суміш. Тверду лікарську форму фармацевтичної композиції винаходу можна отримати шляхом імпрегнування твердого, фармацевтично прийнятного носія сумішшю активованої потенційованої форми водних або водно-спиртових розчинів активних компонентів, які змішуються, як правило, у співвідношенні 1:1 і використовуються в рідкій лікарській формі. Крім того, носій можна імпрегнувати послідовно в кожному відповідному розведенні. Обидва методиімпрегнування вважаються прийнятними. Як правило, фармацевтична композиція в твердій лікарській формі готується з гранул фармацевтично прийнятного носія, попередньо насичених водними або водно-спиртовими розведеннями активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бетасубодиниці рецептора інсуліну людини і активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Тверда лікарська форма може відповідати будь-якій формі, прийнятій у фармацевтичній сфері, в тому числі у вигляді таблеток, капсул, пастилок для розсмоктування та в іншій формі. У якості неактивних фармацевтичних інгредієнтів можна використовувати глюкозу, сахарозу, мальтозу, крохмаль, ізомальтози, ізомальт та інші моно-, оліго- і полісахариди, які застосовуються у виробництві фармацевтичних препаратів, а також технологічні суміші вищевказаних неактивних фармацевтичних інгредієнтів з іншими фармацевтично прийнятними наповнювачами, наприклад з ізомальтом, кросповідоном, цикламатом натрію, натрію сахарином, безводною лимонною кислотою і т.д.), включаючи змащувальні, розпушуючі, зв'язуючі речовини і барвники. Найкращими носіями є лактоза і ізомальт. Фармацевтична лікарська форма може додатково включати стандартні фармацевтичні наповнювачі, наприклад, мікрокристалічну целюлозу, стеарат магнію. Для приготування твердих лікарських форм для перорального застосування, 100-300 мкм гранули лактози імпрегнують водними або водно-спиртовими розчинами активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини і активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази в співвідношенні 1 кг розчину антитіл до 5 або 10 кг лактози (1:5-1:10). Для здійснення імпрегнування, гранули лактози піддаються насиченню та зрошенню в псевдозрідженому киплячому шарі відповідного устаткування (наприклад, "Hüttlin Pilotlab" виробництва Hüttlin GmbH) з наступним просушуванням в потоці повітря, нагрітому при температурі нижче 40 °C. Передбачувану кількість висушених гранул (від 10 до 34 вагових частин), насичених 21 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 активованою потенційованою формою антитіл, поміщають в змішувач і змішують з 25 до 45 ваговими частинами "ненасиченої" чистої лактози (використовується в цілях скорочення витрат, спрощення і прискорення технологічного процесу без зниження ефективності лікування), разом з 0,1 до 1 вагової частини стеарату магнію, і від 3 до 10 вагових частин мікрокристалічної целюлози. Отримана таблетмаса рівномірно змішується і таблетується шляхом прямого сухого пресування (наприклад, в таблетковому пресі Korsch-XL 400) для отримання круглих таблеток масою від 150 до 500 мг, переважно 300 мг. Після таблетування, отримані 300 мг таблетки насичуються водно-спиртовим розчином (3,0-6,0 мг/таблетку) суміші з активованої потенційованої форми антитіл до С-кінцевого фрагмента бета-субодиниці рецептора інсуліну людини і активованої потенційованої форми антитіл до ендотеліальної NO-синтази. Кожен компонент комбінації, який використовується для імпрегнування носія, перебуває у вигляді суміші сотенних гомеопатичних розведень, бажано, C12, C30 і C200. Хоча винахід не обмежується будь-якою конкретною теорією, однак, вважається, що активована потенційована форма антитіл, описана в цьому документі, не містить молекулярної форми антитіл в тій кількості, яка необхідна для виявлення такою молекулярною формою біологічної активності. Біологічна активність комбінованого препарату винаходу повністю продемонстрована в наведених прикладах. Фармацевтична композиція винаходу може використовуватися та застосовуватися пацієнтами, що мають будь-який тип діабету. Зазначена фармацевтична композиція може використовуватися в лікуванні цукрового діабету в якості монотерапії гіперглікемії і в якості комплексної терапії як доповнення до терапії з заміщення інсуліну; та/або з пероральними цукрознижувальними препаратами, такими як бігуаніди (метформін); сульфонілсечовини (глібенкламід, гліпізид, гліклазид, гліквідон, глімепірид); тіазолідиндіони (розиглітазон), інгібітори альфа-глюкозидази (акарбоза) і т.д.; а також як доповнення до супровідної терапії цукрового діабету з метою усунення ускладнень, пов'язаних з діабетом. Як показано в наведених прикладах, використання комбінації винаходу пацієнтами покращує рівень глюкози в крові. Приклади Приклад 1. У процесі двох експериментальних досліджень вивчався вплив антитіл до С-кінцевого фрагмента β-субодиниці рецептора інсуліну, офінно-очищених на антигені, в над малій дозі, 12 30 200 отриманій шляхом максимального розведення вихідного матричного розчину 100 , 100 , 100 раз (НМД анти-РІ - ULD anti-IR), вплив антитіл до ендотеліальної NO-синтази, афінно-очищених на антигені, в над малій дозі, отриманій шляхом максимального розведення вихідного 12 30 200 матричного розчину 100 , 100 , 100 раз (НМД анти-еNOC – ULD anti-eNOS), а також вплив поєднання над малих доз антитіл до С-кінцевого фрагмента β-субодиниці рецептора інсуліну та над малої дози антитіл до ендотеліальної NO-синтази (ULD anti-IR+ULD anti-eNOS). За критеріями Всесвітньої організації охорони здоров'я (ВООЗ), цукровий діабет (I і II типу) характеризується підвищенням рівня глюкози в крові (гіперглікемія) і порушенням толерантності до глюкози. Останнє може бути результатом аномальної секреції інсуліну і/або зниженням чутливості периферичних тканин до інсуліну. Тест на толерантність до глюкози, який ґрунтується на динамічній оцінці здатності тканин організму використовувати глюкозу, вважається дієвим методом оцінки порушення толерантності тіла до глюкози. Дослідження 1. У дослідження були включені 150 самців щурів лінії Wistar (вага на початку дослідження 250-300 г, вік 3,5-4 місяці). 10 щурів залишалися здоровими. Решті внутрішньовенно вводили стрептозотоцин в дозі 50 мг/кг (для створення експериментальної моделі цукрового діабету). За 72 години після введення ін'єкції стрептозотоцину, щурі, рівень глюкози яких в плазмі крові становив не менше 12 ммоль/л були відібрані та розділені на 7 груп (20 щурів у кожній), які протягом 21 дня приймали дистильовану воду (5 мл/кг/день, один раз в день внутрішньошлунково), інсулін® (8 од/кг/день, підшкірно), Розиглітазон® (8 мг/кг/день, два рази на день, внутрішньошлунково), ULD anti-IR (2,5 мл/кг/добу в обсязі 5 мл/кг/день, один раз в день, внутрішньошлунково), ULD anti-IR+ULD anti-eNOS (5 мл/кг/день, один раз в день, внутрішньошлунково), а також поєднання Розиглітазону® та інсуліну®, або ULD anti-IR+ULD anti-eNOS з інсуліном®, відповідно до режимів, що відповідають кожному препарату (про що говориться вище). Здорові щурі отримували дистильовану воду в тому ж обсязі. На 7, 14 і 21 день введення ін'єкцій препаратів щурам, з допомогою ферментного методу (метод глюкозооксидази), використовуючи набори "Глюкоза-ФКД" (Росія) було натще виміряно рівень глюкози в плазмі крові. 22 UA 112757 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Пероральний тест на толерантність до глюкози (ПТТГ) був виконаний на 14 день дослідження (14 день застосування препарату) за стандартною методикою (Дю Виньо і Карр, 1925). Щурів не кормили, давали лише воду протягом 18 годин. За 60 хв до початку випробування їм в останній раз дали препарати дослідження. Здорові щурі приймали в тому ж обсязі дистильовану воду. Глюкоза приймалась перорально у вигляді 50 % розчину глюкози в воді за масовою часткою (1 г/кг ваги щура). Сироватка глюкози зі зразку крові з хвостової вени вимірювалась за допомогою набору "Глюкоза-ФКД" (ТОВ "Фармацевтична та клінічна діагностика", Росія, www.fkd.ru) на 0, 30, 60, 90, 120 хв. Після цього протягом довгого часу вимірювалась середня концентрація глюкози в крові відносно площі під фармацевтичною кривою (AUC). Ін'єкції стрептозотоцину призвели до істотного збільшення глюкози в плазмі крові щурів в порівнянні зі здоровими щурами (18 ммоль/л в порівнянні з 3,5 ммоль/л, p