Штам yersinia enterocolitica iecvm серовар о:9 для виготовлення антигену та сироватки для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин

Реферат: Штам Yersіnia enterocolitica IECVM серовар О:9 виділений із лімфатичних вузлів великої рогатої худоби (ВРХ) для виготовлення антигену та позитивної сироватки для прижиттєвої серологічної діагностики ієрсиніозу тварин. UA 105646 U (12) UA 105646 U UA 105646 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної мікробіології, зокрема до підбору виробничого штаму Yersinia enterocolitica IECVM серовар 0:9 для виготовлення антигену та сироватки для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин. Існує штам Yersinia enterocolitica 075-2Д серовар О:5, що використовується для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки ("Штам бактерій Enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант 05 для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки", Патент UA 23708 U, МПК C12N1/2, A61K 39/02, опубл. 11.06.2007 p.), що використовується для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки. Також відомий штам Yersinia enterocolitica О:37 серовару (Авторське свідоцтво SU 1789558 А1, МПК C12N1/20, А61К39/40 // (C12N1/20, C12R1:01, опубл. 23.01.1993 p.), який застосовують для отримання діагностичної аглютинуючої моноваріантної сироватки. Однак, найбільш актуальним в епізоотологічному плані є серовар О:9. Ієрсинії цього серовару не тільки спричиняють захворювання у сільськогосподарських тварин та людей, але і являються головною причиною виникнення фальш позитивних результатів при проведенні серологічної діагностики бруцельозу тварин. Тому відбір типового стабільного штаму Yersinia enterocolitica серовар О:9 для виготовлення біопрепаратів є важливим та актуальним напрямком роботи на сьогоднішній день. В основу корисної моделі поставлено задачу одержати штам Yersinia enterocolitica серовар О:9 для виготовлення антигену та сироватки для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин шляхом селекціювання культур ієрсиній. Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар О:9 був селекційований та типований в УНДІЕВ в 1984 році з групи культур ієрсиній, ізольованих від великої рогатої худоби (ВРХ). Штам належить до типу Proteobacteria класу Gammabacteria порядку Enterobacterialies родини Enterobacteriaceae роду Yersinia виду Yersinia enterocolitica серовару О:9. Штам виділений із лімфатичних вузлів ВРХ та зареєстрований в музеї лабораторії вивчення бруцельозу ННЦ «ІЕКВМ» (паспорт № 148). Штам має наступні морфологічно-тинкторіальні властивості: в мазках, офарблених за Грамом, має вигляд грамнегативних паличок із закругленими кінцями (0,5-0,8 мкм, 1,0-1,5 мкм). Поліморфізм не виражений. Спор та капсул не утворює. Культуральні властивості. На МПБ штам дає помірне помутніння, невеликий осад. На ΜΠΑ росте у вигляді дрібних прозорих колоній сірувато-блакитного кольору. На агарі Ендо росте у вигляді дрібних лактозонегативних прозорих колоній. На напіврідкому ΜΠΑ росте у вигляді білуватого кільця у поверхні середовища. Оптимальне рН середовища 7,2-7,4; оптимальна температура культивування 28(±0,5) °С. Може рости в діапазоні температур 4-40 °С. Біохімічні властивості. Штам утилізує та ферментує глюкозу. Штам утилізує маніт, мальтозу, сорбіт та сахарозу; не утилізує лактозу, рафінозу, рамнозу, арабінозу та дульцит. Штам не утворює H2S та індол. Штам не утилізує цитрат та ацетат, утилізує сечовину. Штам дає негативну реакцію Фогеса-Проскауера та позитивну реакцію - із метиловим червоним. Не має фенілаланіндезамінази. Каталазопозитивний. Рухливий. Штам не має гемолітичних властивостей. Штам має термостабільний О-антиген. Корисну модель ілюструють наступні приклади. Приклад 1. Виготовлення гіперімунної специфічної сироватки на кролях. Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар О:9 вирощували на ΜΠΑ за температури 28(±0,5) °С впродовж 48 год. Бакмасу штаму змивали з поверхні агару стерильним фізіологічним розчином, стандартизували за оптичним стандартом каламутності до 20 млрд. 3 КУО/см та інактивували на водяній бані за температури 100 °С протягом 60 хв. Одержані суспензії охолоджували і центрифугували за 3000 об./хв. впродовж 20-25 хв. Надосадову рідину видаляли, а осад тричі відмивали стерильним фізрозчином в тому ж режимі з додержанням 3 правил асептики. З осаду виготовляли суспензію бактерій із концентрацією 2 млрд. КУО/см , яку контролювали на повноту інактивації та стерильність за стандартними методиками. Інокуляцію виготовлених суспензій проводили дорослим кролям внутрішньовенно чотири 3 рази з інтервалом 4 дні в дозах 0,5; 1,0; 1,5 та 2,0 см . Через 7 днів після останньої ін'єкції здійснювали відбір крові шляхом тотального знекровлення кролів. Сироватку піддавали консервації 5 % розчином фенолу шляхом додавання його при постійному помішуванні в співвідношенні 1:10. Після змішування з фенолом сироватку витримували за температури (4-8) °С впродовж 14 діб. Після цього прозорий прошарок сироватки відбирали та фільтрували через стерилізуючий фільтр Зейтца. Перевірку на стерильність здійснювали згідно з ДСТУ4483. На активність, специфічність одержану сироватку 1 UA 105646 U 5 10 15 20 досліджували в РА з гомо- і гетерологічними ієрсиніозними антигенами. Результати досліджень відображено в таблиці. Як видно з даних таблиць, отримана сироватка була активною (реакція на # в розведенні 1:1600) та специфічною (позитивна реакція із гомологічним антигеном та негативна реакція із гетерологічними антигенами). Приклад 2. Виготовлення ієрсиніозного антигену серовару О:9. Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар 0:9 вирощували на МПБ за температури 28(±0,5) °С впродовж 24 год. Одержану бульйонну культуру перевіряли на чистоту шляхом мікроскопії мазків (фарбування за Грамом) та висівали на ΜΠΑ (культивування за (26±2) °С протягом 48 год.). Агарову культуру змивали стерильним фізрозчином та стандартизували до концентрації 20 3 млрд. КУО/см за оптичним стандартом каламутності. До одержаного об'єму суспензії додавали (0,4-0,5) % формальдегіду, режим інактивації - 24 год. за 37 °С. Одержані антигени перевіряли на повноту інактивації за стандартними методиками. Стерильність антигенів визначали згідно з ДСТУ 4483. Активність та специфічність одержаного антигену перевіряли в ΡА із гомо- і гетерологічними ієрсиніозними сироватками. Результати досліджень відображено в таблиці. Як видно з даних таблиць, отриманий антиген був активним (реакція на # із гомологічною сироваткою в розведенні 1:400) та специфічним (позитивна реакція із гомологічною сироваткою та негативна реакція із гетерологічними сироватками та негативною сироваткою). Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар О:9 є специфічним, стабільним та має високу антигенну та імуногенну активність. Він може бути застосований як виробничий штам для виготовлення вітчизняних тест-систем для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин. Таблиця 1 Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар О:9 для виготовлення антигену та сироватки для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин Ієрсиніозні антигени 1:50 Y. enterocolitica серовар О:3 Y. enterocolitica серовар О:5 Y. enterocolitica серовар О:6.30 Y. enterocolitica серовар О:8 Y. enterocolitica серовар О:9 # 1:100 Сироватка Y. enterocolitica серовар О:9 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 # #І # # #І ++ 25 Таблиця 2 Штам Yersinia enterocolitica IECVM серовар О:9 для виготовлення антигену та сироватки для серологічної діагностики ієрсиніозу тварин Контрольні сироватки (розведення 1:400) Y, enterocolitica серовар О:3 Y. enterocolitica серовар О:5 Y. enterocolitica серовар О:6.30 Y. enterocolitica серовар О:8 Y. enterocolitica серовар О:9 Негативна сироватка Антиген Y. enterocolitica серовар О:9 # ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Штам Yersіnia enterocolitica IECVM серовар О:9 виділений із лімфатичних вузлів великої рогатої худоби (ВРХ) для виготовлення антигену та позитивної сироватки для прижиттєвої серологічної діагностики ієрсиніозу тварин. 2 UA 105646 U Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3