Спосіб одержання ферментного препарату в лікарській формі “сугаст-2″

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к лекарственным препаратам, полученным на основе активных органических ингредиентов или экстрактов животного происхождения и может быть использовано в лечебных целях. В настоящее время при недостаточной функции желудочных желез, ахилий, диспепсии, гипо- и амагидных гастритах в качестве лечебного препарата - широко применяют препараты желудочного сока. Натуральный желудочный сок содержит фермент пепсин, свободную соляную кислоту pH 0,8 - 1,2. Известен способ получения препарата желудочного сока (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Ч.2. - М.: Медицина, 1988. - С.61), включающий мнимое кормление животных, забор сока через фистулу. Получаемый сок представляет собой бесцветную или слегка опалесцирующую жидкость кислого вкуса со слабым специфическим запахом, консервируется салициловой кислотой (0,03 - 0,04%). Известный способ получения препарата желудочного сока обусловлен низкой технологичностью процесса, слабой биологической активностью, в силу низкого содержания в препарате биологически активных веществ (пепсина, гастромукопротеина) и крайне малым сроком хранения (через 3 месяца активность препарата снижается в 2 раза, а через 6 месяцев исчезает полностью). Сказывается агрессия кислоты на неустойчивый фермент пепсин. Наиболее близким к заявляемому способу получения ферментного препарата в лекарственной форме по достигаемому результату является способ получения сухого желудочного сока (А.с. СССР №300040, кл. A61K17/00, опубл. 1971) из слизистых оболочек желудка животных экстракцией соляной кислотой, который обрабатывают активированным углем при температуре плюс 45°C в течение 30 минут, высаливают и сушат. В соответствии с указанным способом отделение слизистой оболочки от желудков убойных животных, взятых, например, в качестве сырья из отходов мясоперерабатывающего производства, вместо использования живых фистульных животных имеет те хнологические преимущества. Кроме того, способ обеспечивает получение сухого желудочного сока, что позволяет увеличить срок его хранения. Однако тепловая обработка сырья, ровно как и совокупность применяемых для его получения операций над слизистой оболочкой, снижают биологическую активность. Особенно операция высаливания снижает содержание в препарате биологически активных веществ (пепсина, гастромукопротеина). Кроме того, лекарственная форма полученного препарата не позволяет применять в качестве лечебного средства в виде, готовом к употреблению. В основу изобретения поставлена задача - получение биологически активного препарата в лекарственной форме, готового к употреблению. Достижение задачи обеспечивается тем, что в способе получения ферментного препарата в лекарственной форме "Сугаст-2" путем измельчения слизистой оболочки желудка животных, инкубации в растворе соляной кислоты, фильтрации и сушки, после фильтрации проводят диализ экстракта в течение 8 9 часов, далее проводят пристеночное замораживание диализата в течение 10 - 40 минут при температуре минус 16 - 20°C, выдерживают в морозильной камере 15 - 20 минут при температуре минус 19 - 20°C, суша т, а затем сухой порошок и 0,3 - 0,31% раствора хлористоводородной кислоты дозируют в отдельные флаконы в соотношении 1 : 20. Повышение биологической активности ферментного препарата "Сугаст-2" обеспечивается дополнительными операциями над слизистой оболочкой, а именно диализацией композитной дозации сырья и обозначением технологического режима дифференцированных значений температуры, количественного содержания вводимых ингредиентов, концентрации и временных параметров. Достижение технического результата обусловлено также изменением последовательности известных операций, режима тепловой обработки сырья и получением ферментного препарата в лекарственной форме. Операцию диализа используют в способе для нейтрализации свободных электролитических связей, агрессивных по отношению к ферментам. Низкотемпературный режим осуществления операции обусловлен, преимущественно, температурой проточной воды, окружающий на момент ее осуществления органический ингредиент. Длительность операции диализа при окружении ферментов проточной водой, менее 8 часов нецелесообразна. Это обусловлено наличием остатков свободных электростатических связей. Длительность диализа, превышающая 9 часов нецелесообразна, также, поскольку удлиняет технологический процесс без повышения качества получаемого препарата. Периферийное замораживание, закаливание и естественная сушка, представляющие собой процесс лиофилизации, обеспечивает ступенчатую низкотемпературную обработку фермента, что позволяет существенно повысить содержание пепсина в препарате при одновременном отторжении влаги от периферии к центру и является безагрессивным. Изменение температурных режимов на этапах лиофилизации управляет состоянием ферментов в зависимости от содержания остаточных в них объемов воды и определяется экспериментальным путем (см. примеры №1 - №3). Кроме того, композитная дозация сухой массы с 0,30 - 0,31%-ным раствором хлористоводородной кислоты в соотношении 1 : 20 в отдельные флаконы позволяет (при последующем смешивании дозированных объемов) получить ферментный препарат в лекарственной форме. При раздельном хранении компонентов исключается агрессия кислоты на неустойчивый фермент пепсин. Концентрация раствора хлористоводородной кислоты менее 0,30% не приемлема, это обусловлено недостаточностью активации фермента-пепсина. Использование концентрации хлористоводородной кислоты выше 0,31% вызывает раздражение слизистой оболочки пациента. Аналогичную зависимость имеет соотношение масс дозируемых компонентов. Композитная дозация ферментного препарата предусматривает выявление высокого содержания пепсина и гастромукопротеина, определяющих степень биологической активности, в течение длительного срока хранения препарата. Введение 6н, раствора хлористоводородной кислоты и бензойной кислот в измельченную слизистую оболочку от желудков убойных животных способствует активации находящегося в пассивном состоянии профермента пепсиногена и переводу последнего в активный пепсин. Кислотность и количество раствора хлористоводородной кислоты существенно влияет на биологическую активность 10 препарата. В частности, снижение предполагаемой кислотности раствора или использование в количестве меньшем 73мл на 1кг слизистой массы снижает степень активации пассивного пепсиногена, а увеличение 15 кислотности раствора равно, как и введение его в количестве большем 75мл на 1кг слизистой массы способствует дестр укции ее биологической основы и снижает в препарате содержание гастромукопротеина и 20 пепсина. Бензойная кислота, вводимая в измельченную слизистую оболочку в количестве 1,0 - 1,2г на 1кг, выполняет функцию консерванта, предотвращая рост бактерий и гниение препарата. Введение ее в количестве меньшем 1г на 1кг слизистой массы нецелесообразно. Это обусловлено невоспроизводимостью функций консерванта, а следовательно трудностями в повышении 30 биологической активности препарата. Введение ее в количестве, большем 1г на 1кг слизистой массы нецелесообразно также, ибо отмечается снижение содержания гастромукопротеина и пепсина. Изложенное выше подтверждает наличие причинно-следственных связей между совокупностью существенных признаков заявляемого изобретения и достигаемыми результатами. В результате изобретение является новым, так как не является частью уровня техники и имеет изобретательский уровень, так как не следует из уровня те хники. Предлагаемый способ получения лекарственного желудочного препарата "СУГАСТ-2" был экспериментально исследован. Для оптимизации технологических режимов проводимых операций было проведено 24 опыта. Результаты исследований отражены 50 в табл.1. В качестве исходного сырья были использованы отходы мясоперерабатываемой отрасли - желудки убойных свиней. 6H раствор хлористоводородной кислоты и бензойная кислота. Примеры осуществления способа. Пример 1. Слизистую оболочку свиных желудочков измельчают на электромясорубке, помещают в эмалированную ванну и к ней приливают 6н, раствор хлористоводородной кислоты из расчета 74мл на 1кг измельченной слизистой оболочки и бензойная кислота в количестве 1,1кг слизистой массы. В течение 30мин проводят гомогенизацию полученной массы. Затем гомогенизат помещают в бочку из пищевого полиэтилена. Бочку размещают в ванне из дюралюминия, заполнявшейся в дальнейшем водой. С помощью электронагревателя и терморегулятора, температуру воды поддерживают на уровне 44°C в течение 48 часов. Автолизат отстаивают в течение 24 часов, после чего прозрачный надосадочный слой сливают сифоном, а остальную часть фильтруют самотеком через мелкопористую ткань. Отфильтрованную массу погружают в нелакированные, целлофановые мешки. Затем проводят в течение 9 часов диализ, размещая мешки под проточной водой, Диализат подвергают 24 часовому отстою. Надосадочную жидкость осторожно сливают сифоном, затем вводят ванилин из расчета 50мг на 1л диализата. После разливки диализата в стерильные флаконы по 100мл в каждый проводят сушку. На первом этапе лиофилизации выполняли при температуре 18°C в течение 25мин периферийное (простеночное) замораживание. На втором - при T -20°C в течение 17,5мин в холодильной камере - закаливание диализата. Затем препарат помещают в сушильную камеру типа ТТ-15 при T 37°C в течение 65час и P - 1атм. После этого осуществляют композитную дозацию, согласно которой дозируют в отдельные флаконы по 10г сухого порошка и 200мл 0,3% - ной хлористоводородной кислоты, что составило соотношение между ними 1 : 20. После отбора проб устанавливают содержание пепсина и гастромукопротемна в полученном препарате: пепсина 37,0мг, гастромукопротеина 36,9мг на 1г препарата. Пример 2. Слизистую оболочку свиных желудков измельчают на электромясорубке, помещают в эмалированную ванну и к ней приливают 6н, раствор хлористоводородной кислоты из расчета 73мл на 1кг измельченной слизистой оболочки и бензойная кислота в количестве 1,0г на 1кг слизистой массы. В течение 29мин проводят гомогенизацию полученной массы. Затем гомогенизат помещают в бочку, выполненную из пищевого полиэтилена. Бочку размещают в ванне из дюралюминия, заполнявшейся в дальнейшем водой. С помощью электронагревателя и терморегулятора температуру воды поддерживают на уровне 43°C в течение 24час, после чего прозрачный надосадочный слой сливают сифоном, а остальную часть фильтруют самотеком через мелкопористую ткань. Отфильтрованную массу погружают в нелакированные целлофановые мешки, затем проводят в течение 8, 9 час диализ, размещая мешки под проточной водой. Диализат подвергают 24 часовому отстою. Надосадочную жидкость осторожно сливают сифоном, затем вводят ванилин из расчета 50мг на 1л диализата. После разлива диализата в стерильные флаконы по 100мл в каждый, начинают лиофильную сушку. На первом этапе лиофилизации выполняют периферийное замораживание при T - 16°C в течение 10мин. На втором - закаливание диализата при T -20°C в течение 15мин в холодильной камере. После этого препарат помещают в сушильную камеру типа ТТ-15 при T 36°C в течение 60 часов и P - 1атм. Затем проводят позитную дозацию заполняют флаконы отдельно сухим порошком и 0,30% - ным раствором хлористоводородной кислоты, взятыми в соотношении 1 : 20/на 1г сухого порошка 200мл раствора. После отбора проб устанавливают содержание пепсина и гастромукопротеина в полученном препарате: пепсина 26,9мг, гастромукопротеина 40,6мг на 1г препарата. Пример 3. Слизистую оболочку свиных желудков измельчают на электромясорубке, помещают в эмалированную ванну и к ней приливают 6н, раствор хлористоводородной кислоты из расчета 75мл на 1кг измельченной слизистой оболочки и бензойная кислота в количестве 1,2г на 1кг слизистой массы. В течение 31мин проводят гомогенизацию. Затем гомогенизат помещают в бочку, выполненную из пищевого полиэтилена, которую устанавливают в дюралюминиевую ванну, заполнявшуюся водой. С помощью электронагревателя и терморегулятора температуру вод поддерживают на уровне 45°C в течение 2,1 суток. Автолизат отстаивают в течение 24 часов, после чего прозрачный надосадочный слой сливают сифоном, а остальную часть фильтруют самотеком через мелкопористую ткань. Отфильтрованную массу погружают в нелакированные, обработанные антиблоком, целлофановые мешки. Затем проводят в течение 9,1 часа диализ, размещая мешки под проточной водой. Диализат подвергают 24 часовому отстою, затем вводят ванилин из расчета 50мг на 1л диализата. После разлива диализата по 100мл в стерильные флаконы проводят лиофильную сушку. На первом этапе лиофилизации выполняют периферийное замораживание при T -20°C в течение 40мин. На втором - закаливание при T -20°C в течение 20мин в холодильной камере. После этого препарат помещают в сушильную камеру ТТ-15 при T 38°C в течение 70 час и P - 1атм. Композитная дозация проводится отдельно сухим порошком и 0,31% - ным раствором хлористоводородной кислоты в отдельные флаконы в соотношении 1 : 20 (на 1г сухого порошка 200мл раствора). После отбора проб устанавливают содержание пепсина и гастромукопротеина: пепсина 40,0мг, гастромукопротеина 35,72мг на 1г препарата. Остальные примеры (№4 - 23) показали, что изменения технологических режимов предлагаемых операций существенно снижают биологическую активность лечебного препарата "СУГАСТ-2". Это информирует о том, что технологические режимы в соответствии с примерами №1 - 3 показывают наиболее оптимальные результаты (см.табл.2), и подтверждают экспериментальным путем заявляемые пределы. Приведенные данные подтверждают испытаниями заявляемого способа получения лекарственного желудочного препарата "СУГАСТ-2". Предлагаемый способ позволяет получить ферментный препарат в лекарственной форме "СУГАСТ-2", содержащего активных ингредиентов больше, чем в препарате, полученном известным способом. Содержание активных веществ представлено в табл.1. Как видно из табл.1 препарат, полученный предлагаемым способом, содержит активного фермента пепсина в 2 раза больше, чем препарат полученный известным способом, в препарате также больше гастромукопротеина и значительно меньше электролитов, что способствует лучшей сохранности белковых веществ, в том числе пепсина. Установлено, что препарат "СУГАСТ-2", готовый к употреблению, т.е. разведенный раствором хлористоводородной кислоты (в соотношении 1 : 20) содержит в 25 - 40 раз больше гастромукопротеина. По решению фармакологического комитета Минздрава СССР предлагаемый препарат "СУГАСТ-2" проходил клинические испытания на кафедре гастроэнтерологии Украинского института усовершенствования врачей, в Центральном НИИ гастроэнтерологии (г.Москва), Центральном больнично-поликлиническом филиале клинической больницы №6 (г.Москва), кафедре факультетской терапии Пермского мединститута, кафедре терапии факультета усовершенствования врачей II Московского мединститута и кафедре внутренних болезней №1 Московского мединститута. В связи с тем, что эти клинические испытания показали высокую лечебную эффективность препарата "СУТАСТ-2", фармакологический комитет Минздрава СССР разрешил его медицинское применение в качестве ферментного средства (выписка из постановления прилагается). Предлагаемый препарат может быть освоен фармакологической промышленностью и успешно применяться в медицине в терапевтических целях. Он применяется при недостаточной функции желудочных желез (ахилии, хронических гастрита х, диспепсии и т.п.), а также малокровии. Способ применения: по 1 столовой ложке во время еды 1 - 3 раза в день, в течение 3 - 4 недель. Упаковка лекарственной формы содержит флакон лиофилизата и флакон растворителя. Осуществление изобретения возможно связать с утилизацией отходов мясоперерабатывающей промышленности без использования фистульных животных. Оно является промышленно применимым, ибо рекомендовано к использованию в здравоохранении. Просим заявляемому техническому решению предоставить правовую о храну, т.к. оно является новым, имеет изобретательский уровень и промышленно применимо.