Спосіб прогнозування перебігу пострадіаційних ушкоджень шкіри в експерименті

опис до По в G 01 N 33/48 4 Спосіб прогнозування перебігу пострадіаційних ушкоджень* в експерименті. Винакід відноситься до медицини а саме до радіаційної меди , цини, і може бути використаний для прогнозування перебігу місце вих променевих ушкоджень в експерименті . Відомо, що місцеві променеві ушкодження шкіри після масивно го гама- і рентгенівського опроміненнів є найчастішими ускладненнями даного виду терапії злоякісних пухлин . Тому дуже важливою є рання та ефективна диагностика подібних станів у хворих . Особливостями пострадіаційних ушкоджень взагалі й шкіри особисто, є довгий перебіг між впливом ушкоджуючого фактору й кліничними ознаками ускладнення С латентний період , торпідний пе) ребіг, наклонність до рецидиювання , взаємний перехід й сполучення різних нозалогічних Форм Ці . особливості перебігу пос традіаційних променевих ушкоджень ШКІРИ обумовлюють необхідність прогнозування перебігу захворювання, що дозволить забеспечити своєчасну та адекватну терапію для профілактики тяжких ускладнень . Відомий спосіб прогнозування перебігу місцевих променевих уш коджень шляхом дослідження метаболітів сполучної тканини Сгексу ронових та сіалових кислин) та їх кількісна оцінка С а, с N1400278 СССР МПК G 01 N 33/48. Способ прогнозирования течения лучевых повреждений. Френкель Л.А . и соавт. заявлено 30.01.86., опублико вано 12.06.88). Спосіб дозволяє прогнозувати перебіг репаративних процесів в зоні радіаційного ушкодження шкіри до появлення кліничних симптомів загоєння променевих виразок та розсмоктування Фіброзів . До недоліків цьог о способу треба від нести скла дність біохімічних методів дослідження , а також неможливість погнозува ти перебіг пострадіаційного ушкодження до кліничних проявів про цесу. Цей недолік не дозволяє планувати профілактичні лікувальні засоби для запобігання розвитку тяжких ускладнень . Найбільш близьким до способу, що заявляється, по технічній суті й ефекту, що досягається, є спосіб прогнозування пос традіаційних ушкоджень шкіри в експерименті шляхом моніторінга кількісного вмісту мастоц итів в біоптаті ураженої ШКІРИ (ЛИН днер и соавт . Морфометрический анализ популяции тучных клеток . Архив патологии, том XLII,- N6,- 1980, с. 60). Ланий спосіб базується на вивченні функционально ! активності м а ст о ц и т і в, п р и їх д е г р ан у л я ц Н , к о л и в м і ж к л іт и н н у с е р е д у 2. виділяється дві групи біологічно активних речовин рецепторного типу: гепарин та інші глюкозоаміноглікани а також гістамін та , деякі інші біогенні аміни. Біогені аміни базують дію на клітинно му, тканинному рівнях, знижуючи клітинний метаболізм що призво, дить до блокади мітозу й Фагоцитозу Клітинні та тканинні ефекти . біогенних амінів обумовлюють протизапальну дію Згідно з даним . способом проводять комплексний морфометричний аналіз який вклю, чає складання цитограм , визначення індекса насичення гепарином, відносної часткості слабкої, помірної та сильної дегрануляції . До недоліків цього способу треба віднести трудомі осість , складність й тривалість виконання досліджень, що не дає можливість використовувати його в умовах кліники як експрес-аналіз . Крім того, відсутність кількісних критеріїв також ускладнює прог нозування перебігу пострадіаційних ускладнень на доклінічних стадіях. В засаду винаходу поставлене завдання створення способа прог но з у ва н н я п е ре б і гу по с т ра д і ац і й ни х уш к о дж е нь ш кі р и в ек с п ер и м ен т і , в я ко м у к іл ь к іс н е з і ст а вл е н ня ма с т оц и ті в в суб*епідермальному та глибокому шарах дозволить виявити прогноз ний показник на базі якого можливе здійснення експрес-аналізу в умовах кліники для прогнозування перебігу пострадіаційних ушкод жень на докліничній стадії їх розвитку, що дозволить планувати профілактичні та терапевтичні засоби з урахуванням прогнозу . Поставлене завдання вирішується таким чином у відомому спо собі прогнозування перебігу пострадиаційних ушкоджень шкіри в ек сперименті шляхом моніторінга вмісту мастоцитів Лосліження вико. нують в суб*епідермальному та глибокому шарах шкіри, розраховують процентний вміст в них мастоцитів визначають їх співвідно, шення І при його значенні яке дорівнює 3,4 ±0,05 й більше прог, нозують розвиток тяжкого пострадіаційного ушкодження . Вибір вмісту мастоцитів в суб*епідермальному та глибокому ша рах шкіри, як нового прогнозного фактора, обумовлений великим прогностичним потенціалом диференційного дослідження даних субпо пуляцій, пов'язаного з кількісною та якісною різнорідністю масто в цитів в субепідермальному та глибокому шарах Кількісне . співвідношення процентних вмістів мастоцитів в цих шарах 3,4 + 0,05, яке одержане емпірічне, дозволяє дати об'єктивну оцінку взаємозв'язку процесів, які відбуваються в ураженій шкірі і приз водить до тяжких ускладнень. Вся сукупність СУТТЄВИХ ознак, які заявляються, забеспечує можливість реалізації способу прогнозування перебігу пос тра діа ці йни х ушк од же нь шк іри в ек сп ери ме нті н а до клі ні чни х з, стадіях розвитку ушкодження. Спосіб, який заявляється, здійснюють таким чином: морських свинок, середньої ваги 320 г опромінюють на рентгенівській уста новці при заздалегідь відомих умовах . Біоптати з ураженої шкіри беруть на 19 - 23 добу. На парафінових зрізах гістологічно вияв ляють мастоїдити основним коричневим відомим способом. Гістологічні зрізи депарафінують у ксилолі й доводять крізь батарею спиртів до води, забарвлюють основним коричневим рВ -1,0 на протязі 5-Ю хвилин з наступним замиканням зрізів у бальзам. Одержані препарати здатні до дослідження Підраховують кількість мас. тоїдитів у суб*епідермальних та глибоких шарах шкіри , в 60 полях зору й виражають їх у процентах Розвиток тяжкого пострадіаційно . го ушкодження прогнозують коли співвідношення процентних значень кількості мастоцитів в суб'епідермальному та глибокому шарах, дорівнює 3,4 ± 0,05. Приклад. Морська свинка вагою 320 г. була опромінена рентгенівською установкою АРТ-02 при умовах: 50 kV, 10 mA, фільтр 0,7 А1, поле опромінення 20-23 mm, тубус 1-2, h = 100 mm, Р-750, поглинута доза 100 Гр. Зона опромінення - праве стегно . На 20 добу після опромінення взяли біоптат шкіри розміром 0,5 см X 0,5 см. Мастоцити виявляли на парафінових зрізах звичайним способом Гісто. логічні зрізи депарафінували у ксилолі й доводили крізь батарею спиртів до води, забарвлювали коричневим рН-1,0 на протязі 5-Ю хвилин з наступним замиканням зрізів у бальзам . При дослідженні от ри м ан их пр еп а ра ті в п ід р ах ов у ва ли кі ль к іс ть ма ст о ци ті в у субе епідермальному та глибокому шарах ШКІРИ В 60 полях зору й ви ражали її у процентах. Розраховували процентне співвідношення кількості мастоцитів в субв епідермальному та глибокому шарах шкіри, одержане співвідношення дорівнювало 3,4 + 0,05. ПРИ цьому клінично на 35-37 добу спостерігався розвиток тяжкої глибокої ви в разки м яких тканин в опроміненій зоні аж до кістки. Аналогічним способом було виконано 10 досліджень . Результати дослідження наведені в таблиці 1. В прикладах N1 - N6, де співвідношення процентного вмісту мастоцитів в суб*епідермальному та глибокому шарах дорівнює 3,4 та вище, прогнозували тяжке пострадіаційне ушкодження : тяжка, глибока виразка м'яких тканин , яка росповсюджувалася до кістки . У всіх випадках прогноз підтвер дився. В прикладах N7 - N9 співвідношення, яке аналізується меньш ніж 3,4? в цих випадках спостерігалися ускладнення середньої тя жини С поверхнева виразка м'яких тканин і легкі ускладнення С по) верхневий дерматит , гіперемія , лущення, невеличка ерозія}. Прик 4. лад N10 С контроль) наведене значення співвідношення мастоїдитів в неопроміненій шкірі. Таблиця 1. 1 N Вміст мастоцитів в кількісному Іп\п та процентному с співвідношенні і і і в суб*епідермального і царі 1 кількість і її. 47 % 298,4 шення в глибокому шарі кількість 31 Процентне 1 Прогноз 1 Під- 1 співвідно перебігу твержен 1 процесу 1 1 1 % 86 3,4 ±0,06 тяжка, глибока виразка ме яких тканин, яка розповсюджується до кіст і і і і і і 12. ЗО 190 20 ІЗ. 35 222 24 ня про-1 гнозу 1 1 1 + 1J 3,4 ±0,05 - п 1 1 1 ки 55 1 1 + 1 1 65,3 3,4 ±0,07 + 1 .......... 1 50 317,5 33 92,6 3,4 ±0,03 43 279,4 29 90 3,4 +0,05 - 1. 6 41 260,3 27 75,5 3,4 ±0,05 _ _ 1. 7 20 121 25 70,5 1. 4 1. 5 1 | 1 і [ 1 . 1 і і + ........... j 2,8 ±0,01 поверхнева виразка м* яких тканин середньої тяжини + + : 5. Продовження таблиці 1. N Вміст мастоцитів в кількісному І Процентне І Прогноз І Під— та п\п процентному співвідношенні ІспіввідноІ перебігу!твержен 1 шення процесу ня пров суб*епідерв глибокому 1 гнозу мального шарі шарі кількість 1. 8 20 9 . 1 : 25 10. 16 1 1 г |1 1 % 127 кількість 80 % 222 0,5 ±0,07 поверхне вий дерматит, гіперемія, лущення, невелика ерозія 163,7 60 166 (1,9 +О,08 поверхне + вий дерматит, гіперемія, лущення 1 К.ОНТ + 100 36 100 1+0,0 шкіра без змін роль Таким чином, реалізація способа, що заявляється, прогнозування перебігу пострадиаційних ушкоджень шкіри дозволить: - здійснювати експрес-діагностику в умовах кліники; - прогнозувати перебіг пострадіаційних ушкоджень на доклінічник стадіях їх розвитку; - підвищити ефективність терапевтичних засобів за рахунок їх планування в узгодженні з точним прогнозом розвитку пос традіаційних ушкоджень.