Спосіб гормональної цитодіагностики

Спосіб гормональної цитодіагностики шляхом взяття проби клггин букального епггелію, обліку клггин в препараті в першій, другій фазах та в овуляторний пік менструального циклу, оцінки естро генної насиченості організму, який відрізняється тим, що в пробі клггин букального епггелію визна Винахід належить до області медицини, а саме до гінекологи і може бути використаний для діагностики насиченості організму жінки статевими гормонами по букальному епітелію Відомий спосіб гормональної цитодіагностики шляхом взяття проби епггелію зі слизової оболонки піхви (кольпоцитодіагностика), нанесення проби на предметне скло, просушування, фарбування барвником, дослідження під мікроскопом проби типу (велика КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів та кокової флори не дають можливості точно визначити види клггин епггелію та ступінь їхнього дозрівання) За цих же причин не підлягають трактуванню проби епггелію слизової оболонки піхви, взяті в період менструації, кровотечі, невдовзі після статевого акту Кольпоцитолопчні дослідження не проводять також у випадках, коли не можна взяти пробу епітелію слизової оболонки піхви у дітей або незайманих дівчат, при травмах та за інших причин, що не дозволяють оглянути пацієнтку на гінекологічному кріслі Усіх перелічених недоліків не має гормональна цитодіагностика проб букального епггелію (слизової оболонки ротової порожнини) Відомий вибраний за прототип спосіб гормональної цитодіагностики шляхом взяття проби клітин букального епггелію, нанесення проби на покривне скло, нанесення на неї однієї краплі води, закриття проби іншим покривним склом зверху Підготовлену таким чином пробу клітин букального епггелію поміщають в електрофоретичну камеру, змонтовану на предметному склі з платиновими електродами На електроди подають напругу ЗО - 40 В з силою струму 0,1 мА В першу фазу менструального циклу у здорової жінки (норма) визначають за відо для визначення виду клггин, КІЛЬКОСТІ КЛГГИН КОЖНО ГО виду, розрахунку їх співвідношення та оцінки за величиною цих співвідношень насиченості організму жінки статевими гормонами (Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике / под ред проф М А Базарновой, проф В Т Морозовой— К Вища школа Головное изд -во, 1988 — С 204 - 216) Недоліками відомого способу гормональної цитодіагностики є обмеженість його застосування при запальних захворюваннях статевих органів жінки не підлягають гормональному трактуванню проби епітелію слизової оболонки піхви цитолггичного типу (велика КІЛЬКІСТЬ присутніх в слизовій оболонці паличок Додерлейна призводять до розплавлення проміжних клггин епггелію), запального чають види клггин та КІЛЬКІСТЬ КЛГГИН КОЖНОГО виду, ОЦІНЮЮТЬ наявність складчастості в клітинах, та їхнє розміщення в препараті, за процентним вмістом поверхневих, проміжних та парабазальних клітин епггелію визначають індекс дозрівання, за процентним вмістом поверхневих клітин з пікнотичними ядрами - карюпікнотичний індекс, за процентним вмістом складчастих клітин - індекс складчастості, за процентним співвідношенням скупчених та роздільно розташованих клітин - індекс скупченості, потім за величиною індексів дозрівання та карюпікнотичного оцінюють естрогенну насиченість організму, а за величиною індексів складчастості та скупченості - прогестеронову стимуляцію букального епггелію ю ю 44551 мим способом-прототипом 56,5% електрофоретидомому способі гормональної цитодіагностики, чне рухливих ядер клггин букального епггелію, в який включає взяття проби клітин букального епісередині циклу (овуляторний пік) - 60,2%, в другій телію, обліку клітин в препараті в першій, другій фазі - 52,1% (р 0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 Як видно з наведеної таблиці, показники клітинного складу вагінального та букального епгге лію, що мають діагностичне значення, достовірно не відрізняються Тобто, цілком правомірно вико 44551 ристовувати букальний епггелій для гормональної визначають за співвідношенням скупчених та окрецитодіагностики Точність цитодіагностики за заявмо розташованих клггин, характеризує прогестероленим способом зростає порівняно зі способомнову стимуляцію букального епгтелію прототипом, тому що чутливість клггин букального Спосіб гормональної цитодіагностики, що заепгтелію до змін гормонального статусу організму являється, виконують наступним чином жінки значно перевищує чутливість електрофореПробу букального епгтелію зішкрібають швидтичної рухливості ядер клггин букального епгтелію кими рухами шпателя із слизової поверхні щоки, до аналогічних гормональних змін, оскільки ця рухзлегка надавлюючи на неї Одержаний зскрібок ливість майже не реагує на зміни фаз менструальпрепаровочною голкою переносять на покривне ного циклу 56,5%, 60,2% та 52,1% ВІДПОВІДНО (Юрскло та розміщують тонким рівним шаром Пробу кова О В Изменение электрофоретической подвианалізують під мікроскопом з фазовоконтрастною жности клеточных ядер буккального эпителия у приставкою для дослідження нативних (нефарбоженщин с неосложненным течением беременносваних) препаратів Використовують мікроскоп та ти / Физиология и патология репродуктивной функприставку, наприклад, марки КФ-4 виробництва ции женщины Сб науч тр — Харьков Харьк ЛОМО (Ленінград) мед ин-т, 1984 - С 32) В цей же період гормони Естрогенну насиченість клггин букального епікрові змінюються в значно ширшому діапазоні, нателію діагностують через кількісну оцінку цитологіприклад, 59 100 62 (середній рівень естрадюлу) чних даних на 7-й, 14-й та 21-й день менструальчи 16 36,5 360 (середній рівень прогестерону) ного циклу (три фази), використовуючи ІД та КІ (Долгов В и др Клинико-диагностическое значеІД складається з трьох чисел, що відокремлені ние лабораторных показателей - М Центр, 1995 одне від іншого косою ЛІНІЄЮ, та відповідають про- С 192, 171) В способі, що заявляється, в якості центному вмісту парабазальних, проміжних та подіагностичного показника вибрано ступінь дозріверхневих клітин букального епгтелію (наприклад, вання клггин букального епгтелію, бо цей процес 10/70/20) Для цього в декількох полях зору підразначно чутливіше реагує на гормональну насичеховують по 100 епггеліальних клітин, та визначаність організму впродовж менструального циклу, ють серед них КІЛЬКІСТЬ парабазальних, проміжних ніж електрофоретична рухливість клггинних ядер та поверхневих Число одного виду клггин серед Так, наприклад, КІЛЬКІСТЬ поверхневих (більш до100 всіх підрахованих відповідає процентному вмізрілих) букальних клітин впродовж менструальносту цього виду Одержані числові дані ІД порівнюго циклу змінюється як 18,7% 79,3% 49,8% (див ють з приведеними вище в таблиці показниками, табл), а електрофоретична рухливість - 56,5% вибраними за норму В залежності від числового 60,2% 52,1% значення ІД оцінюють дію есторогену на епггелій як помірну чи виразну атрофію (наприклад, 80/20/0 Оскільки діагностичні дослідження букального чи 100/0/0 ВІДПОВІДНО) або помірну чи виразну проепгтелію включають мікроскопічний аналіз клггин, ліферацію (0/80/20 чи 0/0/100) клггин то на точність цього процесу не впливають ні втомлюваність, ні вік пацієнтки, ні функціональні зміни КІ визначають як процент всіх поверхневих клів и організмі На дозрівання клггин, їхню складчастин з пікнотичними ядрами серед загальної КІЛЬКОтість чи скупченість (діагностичні показники) вплиСТІ підрахованих клітин в пробі (серед 100) Числоває лише насиченість епгтелію статевими гормонава величина КІ прямо пропорційна естрогенній нами Спосіб, що заявляється, дозволяє визначати сиченості організму Наприклад, коли ІД дорівнює як естрогенну насиченість організму (за ступенем 0/15/85, то парабазальні клггини в пробі епгтелію дозрівання клггин епітелію), так і прогестеронову відсутні, проміжних клітин 15, а поверхневих - 85 стимуляцію епгтелію (за КІЛЬКІСТЮ складчастих та Аналіз 85 поверхневих клітин під мікроскопом поскупчених клітин), ТОДІ, ЯК прототип -лише естроказав, що ПІКНОТИЧНІ (менші 6 мкм) ядра мають генну насиченість тільки 70 з них Значить, КІ дорівнює 70 Суттєвими ознаками винаходу є визначення Прогестеронову стимуляцію букального епгтепоказників (виду клггин, їхньої КІЛЬКОСТІ, розташулію оцінюють за Іскл та ІСКу Іскл визначають як відновання в пробі) та розрахунок числових діагностичшення всіх складчастих дозрілих клітин до загальних індексів за процентним вмістом поверхневих, ної КІЛЬКОСТІ всіх клітин в пробі букального епітепроміжних та парабазальних клітин епгтелію, які лію, виявлених при мікроскопічному дослідженні відповідають першому, другому та третьому етаЦей індекс оцінюють за трибальною системою ІСКу пам дозрівання, визначають ІД За процентним визначають за відношенням числа скупчених (від 4 вмістом поверхневих клітин (максимальне дозріі більше) клггин до клггин, що розміщуються окревання клггин, яке настає лише під впливом естромо Цей індекс оцінюють також за трибальною сисгенної стимуляції) з пікнотичними (розміром менше темою В залежності від значення ІСклТа ІСКу прогесбмкм) ядрами розраховують КІ За величиною цих теронову стимуляцію букального епгтелію визначадвох індексів оцінюють естрогенну насиченість орють як стимуляцію першого, другого або третього ганізму, оскільки саме цей гормон викликає пролістепеня (Руководство к практическим занятиям по феративні зміни в слозовій оболонці рота, що приклинической лабораторной диагностике / под ред зводять до конденсації хроматинової структури проф М А Базарновой, проф В Т Морозовой - К ядер (пікнотичних) клітин букального епітелію Під Вища школа Головное изд -во, 1988- С 207 впливом прогестеронової стимуляції краї цитопла210) зми дозрілих поверхневих клггин починають скруНаводимо конкретні приклади реалізації спочуватись За процентним вмістом складчастих клісобу гормональної цитодіагностики, що заявляєтьтин визначають \скл Надалі вплив прогестерону ся призводить до скупчення дозрілих клітин ІСКу, який Приклад № 1 Хвору К, 36 років, направив до 44551 8 гінекологічної КЛІНІКИ дерматолог, який протягом 6 та ІСКу Іскл визначали як відношення всіх складчасМІСЯЦІВ лікував и з приводу розацеа, на додаткове тих дозрілих клітин до загальної КІЛЬКОСТІ ВСІХ КЛІдослідження рівня статевих гормонів, порушення ТИН в пробі букального епггелію, виявлених при містатусу яких розглядається ним як можлива причикроскопічному дослідженні За трьох-бальною сисна дерматологічного захворювання Гінеколог-ентемою Іскл оцінили в 1 бал ІСКу оцінили в 1 - 2 бали докринолог при опитуванні хворої К встановив, що Такі значення \скл та ІСКу характерні для ановулятов останні 8 МІСЯЦІВ менструації в неї тривають доврного (монофазного) менструального циклу За реше, ніж звичайно 3 анамнезу хворої К менархе з зультатами вимірювання ректальної температури 14 років, звичайно менструації тривають 5-6 днів, а встановлено монофазний менструальний цикл цикл складає 28 днів Пологи мала одні, абортів Діагноз синдром персистенцм фолікулів Абсотри, без ускладнень При гінекологічному огляді лютна пперестрогенія встановлено шийка матки чиста, ПІХВОВІ виділення Приклад № 2 Хвора Н , 16 років, звернулася - сильні білі Матка не збільшена, придатки не видо гінекологічної КЛІНІКИ з приводу відсутності мензначаються струацій протягом 3 МІСЯЦІВ 3 анамнезу хворої Н в дитинстві розвивалась без особливостей, менарРекомендовано дослідження гормональної хе з 13 років, звичайно менструації помірні, безбофункції яєчників вимірювання ректальної темпелісні і тривають 4 - 5 днів, а цикл складає 28 - 31 ратури протягом трьох МІСЯЦІВ, кольпоцитолопчні день Статевих стосунків не мала, virgo mtacta (не дослідження (мікроскопічний аналіз клггин піхвовозаймана) При огляді встановлено генггальний стаго епггелію за відомим способом-аналогом) на 7-й, тус ЗОВНІШНІ статеві органи розвинуті нормально, 14-й, 21-й день менструального циклу Оцінка репмен цілий Пальпаторне ректальне дослідження зультатів мікроскопічного аналізу піхвового епггепоказало матка не збільшена, рухлива, безболіслію показала наявність лейкоцитозу до 0,5 поля на, придатки не визначаються, зона їхньої пальпазору, виявлено нитки міцелію гриба роду Candida, ції безболісна Для встановлення причини затримрясно Гормональна інтерпретація такої проби кліки менструації протягом 3-х МІСЯЦІВ необхідні дотин піхвового епггелію не можлива, бо, як відомо, слідження гормональної функції яєчників 3 етичпроби вапнального епггелію у випадку грибкових них міркувань рутинну гормональну кольпоцитодіта запальних захворювань не підлягають трактуагностику не проводили Хворій Н рекомендовано ванню (Руководство к практическим занятиям по гормональну цитодіагностику по букальному епітеклинической лабораторной диагностике / под ред лію Спроба визначення електрофоретичної рухпроф М А Базарновой, проф В Т Морозовой - К ливості клггинних ядер букального епггелію на 7-й, Вища школа Головное изд -во, 1988 - С 210) Бу14-й та 21-й день очікуваного менструального цикло вирішено аналізувати з метою гормональної цилу за способом-прототипом не дозволила встанотодіагностики пробу букального епггелію Застосовити діагноз, бо показала абсолютну норму ВІДПОвувати для діагностики спосіб-прототип виявилось ВІДНО 56,3%, 60,5%, 52,0% (Юркова О В Измененедоцільним, оскільки виміряні показники електроние электрофоретической подвижности клеточных форетичної рухливості мало розрізнялись за велиядер буккального эпителия у женщин с неосложчиною 55,1% 58,3% 53,9% Єдиною можливістю ненным течением беременности / Физиология и провести гормональну цитодіагностику букального патология репродуктивной функции женщины Сб епггелію для хворої К було застосування способу, науч тр — Харьков Харьк мед ин-т, 1984 - С який заявляється 32) Але ж результат діагностики за способом-проДослідження проводили на 7-й, 14-й та 21-й тотипом дуже сумнівний, оскільки у неваптної день менструального циклу Пробу букального епішістнадцятилггньої пацієнтки протягом 3-х МІСЯЦІВ телію зішкрібали швидкими рухами шпателя із відсутня менструація Хворій Н призначено виміслизової поверхні щоки хворої К, злегка надавлюрювання ректальної температури протягом 3-х МІючи на щоку Одержаний зскрібок препаровочною СЯЦІВ та гормональну цитодіагностику по букальноголкою перенесли на покривне скло та розмістили му епггелію на 7-й, 14-й та 21-й день очікуваного тонким рівним шаром Пробу аналізували під мікменструального циклу за способом, що заявляєтьроскопом марки КФ-4 з фазовоконтрастною прися Дослідження проводились аналогічно прикладу ставкою для дослідження нативних препаратів В № 1 При дослідженнях на 7-й день очікуваного декількох полях зору підраховували по 100 епггеліменструального циклу парабазальні клггини в усіх альних клітин, та визначали серед них КІЛЬКІСТЬ паполях зору були відсутні Середня КІЛЬКІСТЬ промірабазальних, проміжних та поверхневих При дожних клітин дорівнювала 88, поверхневих - 12 Отслідженнях на 7-й день менструального циклу паже ІД визначено як 0/88/12 При мікроскопічному рабазальні клггини в усіх полях зору були відсутні дослідженні 12 поверхневих клітин виявлено, що Середня КІЛЬКІСТЬ проміжних клітин дорівнювала вони не мають пікнотичних ядер Тобто, КІ дорів25, поверхневих - 75 Отже ІД визначено як нює 0 Результати досліджень на 14-й день ІД = 0/25/75 При мікроскопічному дослідженні 75 пове0/90/10, КІ = 0, на 21-й день ІД = 0/87/13, КІ = 0 рхневих клітин виявлено, що 54 з них мають пікноЗначення трьох ІД показують помірну проліфератичні ядра Тобто, КІ дорівнює 54 Результати доцію клггин букального епітелію, яка відбувається сліджень на 14-й день ІД = 0/15/85, КІ = 61, на 21 під впливом ппоестрогенм Значення трьох КІ хай день ІД = 0/12/88, КІ = 76 Значення трьох ІД порактерні для низької естрогенної насиченості оргаказують виразну проліферацію клггин букального нізму Прогестеронову стимуляцію букального епіепггелію, яка відбувається під впливом пперестротелію не оцінювали, оскільки дозрілі (поверхневі генм Значення трьох КІ характерні для значної есклггини з пікнотичними ядрами відсутні в пробах трогенної насиченості організму Прогестеронову епггелію) Прояви прогестеронової стимуляції в стимуляцію букального епггелію оцінювали за \скл 44551 10 пробах відсутні ІД визначено як 25/75/0 Оскільки поверхневих клітин не виявлено, КІ дорівнює 0 Результати другоЗа результатами вимірювання ректальної темго дослідження (через 7 днів) ІД = 31/69/0, КІ = 0 ператури встановлено монофазний менструальРезультати третього дослідження (через 14 днів) ний цикл ІД = 28/72/0, КІ = 0 Значення трьох ІД показують Діагноз порушення менструального циклу по помірну атрофію клггин букального епггелію, яка типу опсоменореї Гіпоестрогенія Рекомендовано відбувається під впливом ппоестрогенм Значення додаткове обстеження для визначення рівня фолітрьох КІ характерні для низької естрогенної насикулостимулюючого, лютеїнізуючого гормонів та ченості організму Прогестеронову стимуляцію бупролактину з метою встановлення причин ппоесткального епггелію не оцінювали, оскільки дозрілі рогенм (поверхневі клггини з пікнотичними ядрами відсутні Приклад № 3 Хвору А , 57 років, направив до в пробах епітелію) Прояви прогестеронової стимугінекологічної КЛІНІКИ травматолог, який її лікував з ляції в пробах відсутні приводу перелому стегна, на додаткове дослідження рівня статевих гормонів для уточнення Діагноз Хірургічна менопауза Остеопороз Гіпричин можливого захворювання остеопорозом, поестрогенія Рекомендовано замісну гормональну що дозволило б підвищити ефективність лікування терапію перелому та запобігти переломам у майбутньому Приклад № 4 Пацієнтка Л , 25 років, соматичГінеколог-ендокринолог при опитуванні хворої А не та гінекологічно здорова До пнеколога-ендоквстановив 7 років тому проведено двосторонню ринолога звернулась для планування вагітності оваріектомію з приводу кіст яєчників Пологів та Пацієнтці Л призначено гормональну цитодіагносабортів мала по два Будова тіла правильна, маса тику за способом, що заявляється Дослідження тіла занижена Через травму гінекологічний огляд проведено так, як це описано в прикладі № 1 Напроводити не можна водимо результати аналізів Хворій А призначено гормональну цитодіагноНа 7-й день менструального циклу ІД 2/23/75, стику по букальному епггелію Проби букального Іскл ~ 1 , Іску ~ 1 , ~ ~ епггелію досліджували тричі на місяць через кожні на 14-й день ІД 0/4/96, ІСкп = 2, Іску= 2, 7 днів за способом, що заявляється Дослідження на 21-й день ІД 0/33/67, ІСкп = 3, Іску = З проводились аналогічно прикладу № 1 При перРекомендовано найсприятливіший для зачатшому дослідженні поверхневі клггини в усіх полях тя період - 14-й ± 2 день від початку менструальзору були відсутні Середня КІЛЬКІСТЬ проміжних ного циклу, бо за гормональною насиченістю відклггин дорівнювала 75, парабазальних - 25 Отже повідає овуляторному піку ДП "Український інститут промислової власності "(Укрпатент) Україна, 04119, Киів-119, вул сім'ї Хохлових, 15 (044) 456-20-90