Наномодифіковане живильне середовище борисевича-каплуненка-косінова

1. Наномодифіковане живильне середовище, що містить як основу живильне середовище Сотона або живильне середовище Мордовського, або живильне середовище Школьникової, або інше живильне середовище, а як мікроелементну добавку - водний колоїдний розчин біогенних металів, яке відрізняється тим, що містить водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів, стабілізований харчовою кислотою. 2. Наномодифіковане живильне середовище за п. 1, яке відрізняється тим, що містить наступні компоненти, г: 2 (19) 1 3 44662 Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., "Медицина", 1973. стр.80; Авт. свид. СССР №1110173. МПК C12Q1/04. Опубл.: 23.04.84.). Недоліком цих середовищ є низька чутливість і використання дефіцитних інгредієнтів. Відоме живильне середовище Гельберга для вирощування мікобактерій туберкульозу при дослідженні біологічного матеріалу від тварин і посівах культур мікобактерій туберкульозу, що містить, г/л: яєчну масу - 400-500 (6 цілісних курячих яєць), жовтки яєць - 90-100 (4 жовтки), молоко - 140-160, картопляний відвар - 140-160. малахітовий зелений - 0,2-0,25 і сольовий розчин - 140-160, що складається з калія фосфорнокислого двозаміщеного - 0,14-0,16, натрію лимоннокислого - 0,140,16, магнію сірчанокислого - 0,14-0,16, пептону 0,8-1,0, гліцерину - 3,2-4,0 і дистильованої води до 140-160 мл (Патент России №2059728. ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ БИОМАТЕРИАЛА ЖИВОТНЫХ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА. МПК C12Q1/04. Опубл.: 10.05.1996). Проте, при використанні цього і інших живильних середовищ, що використовуються в бактеріологічній діагностиці туберкульозу тварин, ріст первинних культур мікобактерій туберкульозу дуже мізерний і повільний, і тому до появи їх колоній потрібні тривалі терміни інкубації: з посівів біоматеріалу - 30-70 днів, при пересіваннях свіжовиділених культур - 30-65 днів. Тому спостереження за посівами біомагеріалу проводять протягом 90 днів. Відоме живильне середовище Фінн (авт. св. 325879, кл. З12N1/20 від 1970р.) для вирощування мікобактерій туберкульозу, що прискорює ріст і підвищує висіюваність мікобактерій, яке містить дієтичні яйця - 4-5 штук, магнезію сірчанокислу 0,04-0,05г, натрій лимоннокислий - 0,10-0,12г, залізоаміачний галун - 0,004-0,005г: калій фосфорнокислий однозаміщений - 1,6-2,5 г; амоній лимоннокислий однозаміщений - 0,45-0,55г; натрій глутаміновокислий однозаміщений - 0,9-1,1г; гліцерин - 1,6-2,5мл; дистильовану воду - 100мл; 2%ний водний розчин малахітової зелені - 3,33-4мл. Проте, при використанні цього живильного середовища ріст первинних культур мікобактерій дуже повільний і з'являється при посіві біоматеріалу через 30-70 днів, а при посіві чистих культур через 21-50 днів. Відоме живильне середовище Фаст-3Л (патент РФ 2059728, кл. З12Q1/04 від 1993 р.) для виділення з біоматеріалу тварин і культивування мікобактерій туберкульозу. Склад середовища, г/л: яйця курячі - 400,0-500,0; жовтки курячих яєць 90,0-100,0; молоко - 140-160,0; картопляний відвар - 140,0-160,0; малахітовий зелений - 0,2-0,25; сольовий розчин: калій фосфорнокислий двозаміщений натрій лимоннокислий магній сірчанокислий пептон гліцерин дистильована вода алкан 0,14-0,16 0,14-0,16 0,14-0,16 0,8-1,0 3,2-4,0 до 140-160 15,3-30,6. При посіві біоматеріалу від лабораторних тварин і великої рогатої худоби на це середовище 4 первинний ріст з'являється на 17-19 діб, проте, це середовище вимагає великої кількості компонентів і швидко підсихає, в термостаті. Відоме живильне середовище Школьникової Р.А., що містить в якості джерела азотистого живлення рідкий гідролізат казеїну або аспарагін, калій фосфорнокислий однозаміщений, натрій фосфорнокислий двозаміщений, магній сірчанокислий, натрій лимонно-кислий, лимонно-аміачне залізо (зелене), гліцерин. (Див. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, М., "Медицина", 1973. стр.80.). Недоліком цього середовища є низька чутливість. Найбільш близьким до того, що заявляється, є наномодифіковане живильне середовище для культивування мікобактерій, що містить в якості основи живильне середовище Сотона або живильне середовище Мордовського, або живильне середовище Школьникової, або інше живильне середовище, яке додатково містить водний колоїдний розчин наночастинок металів або наночастинок оксидів металів, або наночастинок гідроксидів металів або їх суміш, при цьому метали вибрані з групи, що складається з магнію, міді, цинку, заліза (див. патент України на корисну модель №39824. НАНОМОДИФІКОВАНЕ ЖИВИЛЬНЕ СЕРЕДОВИЩЕ ДЛЯ КУЛЬТИВУВАННЯ МІКОБАКТЕРІЙ. / БОРИСЕВИЧ В.Б., БОРИСЕВИЧ Б.В., КАПЛУНЕНКО В.Г., КОСІНОВ М.В., БОРИСЕВИЧ В.Б., МПК C12N1/20. Опубл. 10.03.2009, бюл. №5). Це живильне середовище має недостатню чутливість і низьке прискорення росту мікобактерій. У основу корисної моделі поставлена задача підвищення чутливості середовища, виходу життєздатних мікобактерій, прискорення їх росту і підвищення інтенсивності накопичення бактерійної маси. Запропоноване, як і відоме живильне середовище для культивування мікобактерій містить в якості основи живильне середовище Сотона, або живильне середовище Мордовського, або живильне середовище Школьникової або інше живильне середовище, а в якості мікроелементної добавки водний колоїдний розчин біогенних металів і, відповідно до цієї пропозиції, містить водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів. стабілізований харчовою кислотою. При цьому містить наступні компоненти, г: живильне середовище Мордовського, або живильне середовище Сотона, або живильне середовище Школьникової або інше живильне середовище - 1000; водний колоїдний розчин наноаквахелатов біогенних металів, стабілізований харчовою кислотою, - 50-150. Біогенні метали вибрані з групи, що складається з магнію, міді, заліза, цинку, кобальту, марганцю. молібдену, селену, хрому, кремнію, вісмуту, а водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів містить, мг/л: наноаквахелат гідроксиду наноаквахелат ксиду наноаквахелат дроксиду наноаквахелат магнію, його оксиду, 0,5-20 міді, її оксиду, гідро0,03-3 заліза, його оксиду, гіцинку, його оксиду, гі 0,1-15 0,005-0,5 5 дроксиду наноаквахелат собальта, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат марганцю, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат молібдену, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат селену, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат хрому, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат кремнію, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат вісмуту, його оксиду, гідроксиду харчова кислота вода 44662 0,001-0,2 0,002-5 0,001-0,3 0,0005-0,1 0,00005-0,05 0,002-0,2 0,003-0,3 10-1000 до 1000мл. Запропоноване живильне середовище містить водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів, стабілізований харчовою кислотою Це збільшує чутливість середовища, вихід життєздатних мікобактерій, прискорює їх ріст і підвищує інтенсивність накопичення бактерійної маси. Встановлено, що наноаквахелати біогенних металів сприяють регенерації тканин, стимулюючи метаболічні процеси в біологічних об'єктах. Виявлена інтенсифікація регенераційної активності при загоєнні ран у тварин при застосуванні наноаквахелатів металів (див. Нанотехнологія у ветеринарній медицині / В.Б.Борисевич, Б.В.Борисович. В.Г.Каплуненко, М.В.Косінов та ін. (ред. проф. В.Б.Борисевич, проф. В.Г.Каплуненко). - К.: Ліра, 2009. - 232с.), тобто посилення здатності до розмноження клітин. Цитостімулювальна властивість є характерною особливістю певних металевих наночастинок, яка може бути використана і у бактеріології, зокрема у складі живильних середовищ, особливо у таких випадках, коли мікроорганізми ростуть або погано, або повільно. Компоненти узяті в наступному співвідношенні, г: базове живильне середовище 1000; водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів, стабілізований харчовою кислотою, - 50-150. При вмісті водного колоїдного розчину наноаквахелатів менше 50 г знижується біологічна активність живильного середовища і зменшується швидкість росту мікобактерій. Вміст водного колоїдного розчину наноаквахелатів більше 150 г призводить до перевищення кількості мікроелементів, що також зменшує швидкість росту мікобактерій. Водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів містить, мг/л: наноаквахелат гідроксиду наноаквахелат ксиду наноаквахелат дроксиду наноаквахелат дроксиду наноаквахелат гідроксиду наноаквахелат ду, гідроксиду наноаквахелат ду, гідроксиду наноаквахелат гідроксиду наноаквахелат магнію, його оксиду, 0,5-20 міді, її оксиду, гідро0,03-3 заліза, його оксиду, гі0,1-15 цинку, його оксиду, гі0,005-0,5 собальта, його оксиду, 0,001-0,2 марганцю, його окси0,002-5 молібдену, його окси0,001-0,3 селену, його оксиду, хрому, його оксиду, гі 0,0005-0,1 0,00005-0,05 6 наноаквахелат кремнію, його оксиду, гідроксиду наноаквахелат вісмуту, його оксиду, гідроксиду харчова кислота вода 0,002-0,2 0,003-0,3 10-1000 до 1000мл. Компоненти колоїдного розчину узяті в оптимальних співвідношеннях. При вмісті компонентів менше нижніх меж знижується біологічна активність живильного середовища і зменшується швидкість росту мікобактерій. Вміст компонентів вище за верхні межі призводить до перевищення кількості мікроелементів, що також зменшує швидкість росту мікобактерій. Водний колоїдний розчин наноаквахелатів біогенних металів отримують шляхом електроімпульсного диспергування гранул біогенних металів у воді (див. патент України на корисну модель №38391. СПОСІБ ОТРИМАННЯ КАРБОКСИЛАТІВ МЕТАЛІВ "НАНОТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ КАРБОКСИЛАТІВ МЕТАЛІВ". МПК С07С51/41, C07F5/00, C07F15/00. Опубл. 12.01.2009, бюл. №1). Біогенні метали вибрані з групи, що складається з магнію, міді, заліза, цинку, кобальту, марганцю, молібдену, селену, хрому, кремнію, вісмуту. Приклад. Висіви мікобактерій були проведені з використанням музейного штаму М. bovis, а також збудників туберкульозу, виділених з патологічного матеріалу хворих на туберкульоз корів (польові ізоляти). Готували завісь М. bovis штаму «Шахтар» 1мг культури на 1мл ізотонічного розчину натрію хлориду з проведенням мікроскопії. Посіви проводили у контролі на живильне середовище Мордовського з рН 6.5 та середовище для культивування мікобактерій ДП «Ветеринарна медицина» м. Харків з рН 7,1, у досліді - на ті ж самі середовища з уведенням до їх складу 1,0% колоїду наноаквахелатів Cu, Zn, Mg, Co. Облік росту колоній проводили через 2-3 дні протягом перших 10 днів та кожні 5 днів протягом наступних 80, з описом їх кількості та вивчення морфологічних та тинкторіальних властивостей мікобактерій. Розмір колоній визначали за наступними критеріями: а) дрібні колонії (розмір 1-2мм), б) середні колонії (розмір 2-4мм), в) великі колонії (розмір більше 4мм). Проведене дослідження ефективності середовища для виділення збудника із проб патологічного матеріалу з метою виявлення та опису змін, характерних для туберкульозу. Препарували лімфатичні вузли, спостерігаючі зміни характерні для туберкульозу, а саме казіозні та запнені некротичні вогнища. Суспензію патологічного матеріалу висівали на згадані середовища, визначаючі культуральні та морфологічні властивості мікобактерій. Статистичну обробку отриманих даних виконували на персональному комп'ютері із застосуванням програми «Статистика», використовуючі t-критерій Стьюдента. Результати вивчення ростових властивостей мікобактерій на живильних середовищах представлено в таблиці 1. 7 44662 8 Таблиця 1 Дні появи перших колоній Середовище Музейний штам М.bovis: а) середовище Мордовського б) середовище Мордовського з наноаквахелатами Cu, Zn, Mg, Co в) середовище «Ветеринарна медицина» (Харків) г) середовще «Ветеринарна медицина» (Харків) з наноаквахелатами Cu, Zn, Mg, Co Польовий ізолят М. bo vis: а) середовище Мордовського б) середовище Мордовського з наноаквахелатами Cu, Zn, Mg, Co в) середовище «Ветеринарна медицина» (Харків) Середня кількість колоній в 4-х пробір- Морфологічні характеристики колоній ках на 10-й день від початку росту 22 3,0±0,28 R,S-форма, опуклі, матові, вологі 10 7,25±0,42*** 24 4,0±0,29· 11 7,75±0,21*** 27 2,25±0,49 11 6,5±0,28*** 32 2,0±0,27 12 S-форма, опуклі, матові, вологі 6,75±0,42 R,S-форма, опуклі, матові, вологі S-форма, опуклі, матові, вологі R,S-форма, опуклі, матові, вологі S-форма, опуклі, матові, вологі R,S-форма, опуклі, матові, вологі г) середовще «Ветеринарна медицина» (Харків) з наноаквахелатами Cu, Zn, Mg, Co S-форма, опуклі, матові, вологі Примітка: *** Р