Живильне середовище для культивування мікобактерій

Живильне середовище для культивування мікобактерій, яке складається з живильного середовища Мордовського, яке містить калій фосфорнокислий однозаміщений, натрій лимоннокислий, магній сірчанокислий, глікокол, гліцерин, воду дистильовану, жовткову масу та розчин малахітового зеленого 2 %, яке 3 Гідрогумат (ТУ 205 УССР-614-88) - це розчин натрієвих солей гумусових кислот, які отримують шляхом кислотно-лужної екстракції низинного осокового, дерев'янистого та тростинового торфу із ступенем розкладення не менше 20%, зольністю не більше 20%. Препарат не леткий, стійкий, містить не менше 10% сухих речовин. Найбільш близьким за біологічним рішенням до передбачуваної корисної моделі є середовище Мордовського яке при застосуванні його у діагностиці туберкульозу, не завжди дає очікуваний результат, а встановлення кінцевого діагнозу на туберкульоз утруднюється через повільний ріст мікобактерій на ньому. Задачею корисної моделі є удосконалення живильного для культивування мікобактерій шляхом додавання в живильне середовище Мордовського 0,125% розчину гідрогумату для стимуляції росту мікобактерій. Поставлена задача досягається тим, що в середовище Мордовського, яке містить в своєму складі калій фосфорнокислий одно заміщений, натрій лимоннокислий, магній сірчанокислий, глікокол, гліцерин, воду дистильовану, жовткову масу та водний розчин малахітового зеленого 2%, додають 0,125% розчин гідрогумату, для стимуляції росту мікобактерій, при такому співвідношенні компонентів: калій фосфорнокислий однозаміщений 1000мг натрій лимоннокислий 1000мг магній сірчанокислий 1000мг Глікокол 4000мг Гліцерин 70мл вода дистильована до 1000мл жовточна маса 1000мл водний розчин малахітового зеленого 2% 30-50мл розчин гідрогумату 0,125% 100мл Приклад 1 Готують стандартне середовище Мордовського в об'ємі 200мл та послідовні розведення гідрогумату по 2мл в концентрації 0,25%; 0,125%; 0,06%; 0,03%; 0,015%; 0,008%; 0,004%; 0,002%; 0,001%. Додають в кожні чотири пробірки по 0,5мл кожного розведення гідрогумату та розливають в пробірки середовище Мордовського по 5мл. Отримують 36 пробірок з розведеннями гідрогумату та 4 пробірки з стандартним середовищем Мордовського в якості контролю. Далі пробірки з розведеннями помішують в сушильну шафу та коагулюють за температури +90°С. Потім готують завись М. bovis штаму «Шахтар», 1мг культури на 1см3 фізіологічного розчину і засівають отримане середовище. Далі посіви поміщують в термостат для культивування за температури +37°С з наступним обліком початку росту протягом 90 днів. Кожного дня перші 10 днів і через 5 днів наступні 80 днів згідно настанови по діагностиці туберкульозу тварин. (Настанова по діагностиці туберкульозу / В.М. Манченко, З.Р. Троценко, М.С. Павленко та ін. Київ, 1994. –39с). 28293 4 Показники інтенсивності росту М. bovis на передбачуваному винаході наведено в таблиці 1. Інтенсивності росту М. bovis на середовищі Мордовського з дод концентрації Концентрація гідрогумату в середовищі Мордовського 0,25% 0,125% 0,06% 0,03% 0,015% 0,008% 0,004% 0,002% 0,001% * Термін появи перших колоній (Дні) Середня кількість колоній у 4-х пробірках на 10-й день після початку росту 13 13 16 17 21 24 23 22 27 32 7,0±2,27 8,5±2,10 6,5±2,02 3,75±0,85 3,75±1,03 2,07±0,40 2,25±0,25 2,25±0,52 1,75±0,47 3,0±0,40 * Контроль стандартне середовище Мордовського Приклад 2. Готують стандартне середовище Мордовського в об'ємі 200мл та послідовні розведення гідрогумату по 2мл в концентрації 0,25%; 0,125%; ,06%; 0,03%; 0,015%; 0,008%; 0,004%; 0,002%; 0,001%. Додають в кожні чотири пробірки по 0,5мл кожного розведення гідрогумату та розливають в пробірки середовище Мордовського по 5мл. Отримують 36 пробірок з розведеннями гідрогумату та 4 пробірки з стандартним середовищем Мордовського в якості контролю. Далі пробірки з розведеннями поміщують в сушильну шафу та коагулюють за температури +90°С. Потім готують завись штаму швидкорослих атипових мікобактерій №1, 1мг культури на 10см3 фізіологічного розчину і засівають отримане середовище. Далі посіви поміщують в термостат для культивування за температури +37°С з наступним обліком початку росту протягом 90 днів. Кожного дня перші 10 днів і через 5 днів наступні 80 днів згідно настанови по діагностиці туберкульозу тварин. (Настанова по діагностиці туберкульозу / В.М. Манченко, З.Р. Троценко, М.С. Павленко та ін. - Київ, 1994.-39с). Показники інтенсивності росту швидкорослих атипових мікобактерій №1 на передбачуваному винаході наведено в таблиці 2. Показники інтенсивності росту швидкорослих атипо Концентрація гідрогумату в середовищі Мордовського Термін появи перших колоній (дні) 0,25% 5 Середня Середня кількість колоній кількість колоній у 4-х пробірках у 4-х пробірках на 1-й день на 5-й день після початку після початку росту росту 2±0,70 17,25±2,65 М R 5 0,125% 0,06% 0,03% 0,015% 0,008% 0,004% 0,002% 0,001% * 28293 5 5 5 5 5 6 6 6 7 7±1,08 3±0,90 4,25±1,37 2,75±0,85 1,5±0,28 1,75±0,75 1,25±0,25 1,25±0,25 2±0,7 6 38,25±5,25 *Контроль стандартне середовище Мордовського R-форма, дрібні, жовтуватого кольору 33,5±6,23 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору 21,5±4,09Аналіз результатів дослідження інтенсивності R-форма, дрібні, жовтуватого кольору росту мікобактерій штамів 14,0±5,14 R-форма, дрібні, різних жовтуватого кольору на удосконаленому середовищі Мордовського 21,5±8,85 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору залежно від концентрації гідрогумату показав, що 18,75±10,57 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору найбільша інтенсивність росту спостерігається на 19,5±6,93 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору середовищі з концентрацією 0,125%, воно 18,75±8,1 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору ефективніше в 1,5-2,8 рази у порівнянні зі 24,5±1,55 R-форма, дрібні, жовтуватого кольору стандартними середовищами. Приклад 4 Готують удосконалене живильне середовище Мордовського з додаванням 0,125% гідрогумату та Приклад 3 два стандартні живильні середовища, що Готують стандартне середовище використовують в умовах бактеріологічних відділів Мордовського в об'ємі 200мл тапослідовні ветеринарних лабораторій: Мордовського та сухе розведення гідрогумату по 2мл в концентрації живильне середовище для культивування 0,25%; 0,125%; 0,06%; 0,03%; 0,015%; 0,008%; мікобактерій «ДП Ветеринарна медицина рН 7,1 м. 0,004%; 0,002%; 0,001%. Додають в кожні чотири Харків» (ТУ У 24.6-00497087-006-2004). пробірки по 0,5мл кожного розведення гідрогумату Далі проводять обробку проб патологічного та розливають в пробірки середовище матеріалу доставленого з господарств Мордовського по 5мл. Отримують 36 пробірок з неблагополучних по туберкульозу за методом розведеннями гідрогумату та 4 пробірки з Алікаєвої згідно настанови по діагностиці стандартним середовищем Мордовського в якості туберкульозу (Настанова по діагностиці контролю. Далі пробірки з розведеннями туберкульозу / В.М. Манченко, З.Р. Троценко, М.С. поміщують в сушильну шафу та коагулюють за Павленко та ін. - Київ, 1994.-39с.). температури +90°С. Потім готують завись штаму Потім проводять паралельний висів суспензії швидкорослих атипових мікобактерій №2, 1мг патологічного матеріалу одночасно на три 3 культури на 10см фізіологічного розчину і вищезгадані середовища по сім пробірок кожного засівають отримане середовище. Далі посіви для кожної проби. Посіви поміщують в термостат і поміщують в термостат для культивування за культивують за температури +37°С з наступним температури +37°С з наступним обліком початку обліком початку росту протягом 90 днів, згідно росту протягом 90 днів. Кожного дня перші 10 днів настанови по діагностиці туберкульозу, кожний і через 5 днів наступні 80 днів згідно настанови по день перші 10 днів і через 5 днів протягом діагностицітуберкульозу тварин. (Настанова по наступних 80 днів. Таким чином оброблюють 8 діагностиці туберкульозу / В.М.Манченко, З.Р. проб патологічного матеріалу. Троценко, М.С. Павленко та ін. -Київ, 1994.-39с.). Показники інтенсивності росту мікобактерій, з Показники інтенсивності росту швидкорослих проб патологічного матеріалу, на середовищі атипових мікобактерій №2 на передбачуваному Мордовського, сухому живильному середовищі винаході наведено в таблиці 3. для культивування мікобактерій «ДП Ветеринарна медицина7,1 м. Харків» (ТУ У 24.6-00497087-006Таблиця 3 2004) та удосконаленому середовищі Мордовського з додаванням 0,125% розчину Показники інтенсивності росту швидкорослих атипових мікобактерій №24. гідрогумату наведено в таблиці * Контроль стандартне середовище Мордовського Концентрація гідрогумату в середовищі Мордовського Термін появи перших колоній (дні) 0,25% 0,125% 0,06% 0,03% 0,015% 0,008% 0,004% 0,002% 0,001% * 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 Середня Середня кількість кількість колоній Показники росту культури мікобактерій на різни колоній у 4-х у 4-х пробірках Морфологічні характеристики колоній пробірках на на 5-й день Поява перших колоні Кількість проб Живильне середовище 1-й день після після початку змінами (дні) початку росту росту Мордовського 15,75±2,09 5 (з ДП«Ветеринарна патологічними 18,0±2,44 23±6,28 36,75±9,68 S-форма, дрібні, матового кольору медицина» змінами) S-форма, дрібні, матового кольору 25±0,27 39,25±5,4 Мордовського (удоск.) 12,5±0,64 15,25±1,93 34,75±6,0 S-форма, дрібні, матового кольору Мордовського 6±0 3 (без 9,5±1,32 28±3,39 S-форма, дрібні, матового кольору ДП«Ветеринарна патологічних 6,5±0,5 22,25±4,19 28,75±5,7 S-форма, дрібні, матового кольору медицина» змін) 15±1,22 25,75±4,75 S-форма, дрібні, матового кольору Мордовського(удоск.) 5±0 11±1,47 23±2,34 S-форма, дрібні, матового кольору 12,25±8,35 17,73±5,7АналізS-форма, дрібні, матового кольору результатів дослідження інтенсивності 15,25±6,15 26±12,6 мікобактерій на удосконаленому середовищі S-форма, дрібні, матового кольору росту Мордовського у дрібні, матового кольору 3,25±1,31 16,5±6,33 S-форма, порівнянні з середовищем Мордовського та сухим живильним середовищем 7 для культивування мікобактерій «ДП Ветеринарна медицина 7,1 м. Харків» (ТУ У 24.6-00497087-0062004 показав, що найбільша інтенсивність росту спостерігається на удосконаленому середовищі Мордовського з додаванням 0,125% розчину гідрогумату. Показник появи перших колоній склав відповідно 12,5±0,64 та 6,0±0 в пробах зі змінами та без змін, а середній показник кількості колоній на 10 день після початку росту склав відповідно 24,5±9,4 та 27,5±17,25, що в 1,3-2 рази перевищує показники інтенсивності росту на середовищі Мордовського та сухого живильного середовища для культивування мікобактерій «ДП Ветеринарна медицина 7,1 м. Харків» (ТУ У 24.6-00497087- 0062004). Ефект пришвидшення інтенсивності росту колоній мікобактерій на удосконаленому середовищі може бути використаний окрім лабораторій ветеринарної медицини і в біологічній промисловості, зокрема при виготовлені ППДтуберкуліну. 28293 8