Спосіб виявлення алергену

Спосіб виявлення алергену, що включає фотоелектричне вимірювання оптичної ЩІЛЬНОСТІ цитратної крові в контрольному та дослідних зразках з попередньою інкубацією цих зразків ВІДПОВІДНО з фізіологічним розчином і алергенами, які можуть викликати розвиток алергічного стану, центрифугування досліджуваної цитратної крові з одночасним вимірюванням координати кожного із осаджених еритроцитів, визначення загальногрупової координати усіх осаджених еритроцитів у динаміці для кожного моменту вимірювання як Винахід належить до галузі медицини, зокрема, до клінічної імунологи та алергології В останні роки найбільш актуальною проблемою у сучасній медицині стали алергічні захворювання, патогенетичне лікування яких обов'язково проводять з урахуванням етіологічних факторів, що могли сприяти розвитку алергічного стану [Новиков Д К Клиническая аллергология Справочное пособие - Минск "Высшая школа", 1991 - 511 с ] Тому надзвичайно важливим у цій проблемі є питання про виявлення у кожного хворого на алергію конкретного етіологічного чинника, тобто специфічного алергену Із багатьох алергічних захворювань особливі складності існують у своєчасній діагностиці перш за все лікарської хвороби у галузі дерматології при її розвитку на фоні перебігу шкірного захворювання, оскільки найбільш часто лікарська хвороба проявляється на шкірі і не відрізняється від проявів будь-якого істинного дерматозу [Солошенко Э Н Лекарственная болезнь патогенез, клиника, диагностика, лечение, профилактика//Харьковский мед журнал -1996 № 1 - 2 - С 42 - 46] середнє значення їх координат, оцінку величини седиментації еритроцитів і їх середньої швидкості за зміненням положення загальногрупової координати, визначення показника відношення цих величин у контрольному і дослідних зразках та визначення алергену як специфічного при ВІДМІННОСТІ цього показника від одиниці, який відрізняється тим, що додатково приймачем випромінювання здійснюють формування й одночасну реєстрацію розміщених на задану відстань парних зображень, ВІДПОВІДНИХ кожному з еритроцитів, які спостерігають, причому усі парні зображення орієнтують так, що умовні лінії, які поєднують центри зображень, у парах паралельні, а самі зображення у парах роблять детерміновано зв'язаними по інтенсивності і розмірах, при цьому відфільтровують шумові ВІДМІТКИ, які є одиночними і не мають на заданій відстані відповідної їм другої ВІДМІТКИ або не співпадають у парах за орієнтацією у просторі, розмірами і інтенсивністю Для етіологічної діагностики лікарської хвороби застосовують імунологічні та біофізичні способи виявлення специфічного алергену Відомий спосіб виявлення специфічного алергену за допомогою тесту лімфобластичної трансформації, який полягає в культивації контрольних та дослідних зразків гепаринізованої периферичної крові на середовищах 199 або Хенкса в присутності стимулятора бластогенеза фітогемаглютиніну (ФГА) протягом 3 днів ВІДПОВІДНО З фізіологічним розчином та з алергеном, який підозрюється як специфічний Потім З контрольного та дослідних зразків крові готують морфологічні препарати, або добавляють в зразки крові Н-тимідин Результати оцінюють з використовуванням морфологічного або радюімунного методу, при цьому в контрольному і дослідних зразках підраховують КІЛЬКІСТЬ трансформованих лімфоцитів у лімфобласті [Солошенко Э Н , Брайловский А Я , Базарнова М А Тест лимфобластической трансформации при лекарственной аллергии // Клин, медицина -1971 - № 6 -С 131 -136] Недоліком цього способу є довготривалість О ю ю 51540 менш трудомістких, більш доступних і швидких за його виконання, велика імовірність помилкового строками виконання та видачі результатів, є вельвиявлення специфічного алергену та його невиявми актуальним і перспективним лення, обумовлені суб'єктивністю у разі морфолоВиявлена в останні роки відповідальність еригічного підрахунку результатів У разі підрахунку троцитів в механізмах розвитку алергічних реакцій, результатів зі включенням мітки з Н-тимідином поруч із клітинними елементами білої крові [Стонедолік способу полягає в необхідність мати стеляр Г М , Никифиров В И Об участии эритроцитов рильні бокси і радюімунолопчну лабораторію з в реакции аллергизации //Труды Горьковского мегамалічильником дицинского института - 1975 - Вып 65 - С 235 Відомий також спосіб виявлення специфічного 240, Эритроциты при некоторых аллергических алергену з використанням методу альтерації лейзаболеваниях / Одинокова В А , Каликштейн Д Б , коцитів, який полягає в попередній інкубації контМороз Л А и др // Лаб дело - 1985 - № 6 - С рольних і дослідних зразків гепаринизованої крові 344 - 347, О механизме деструкции эритроцитов (ВІДПОВІДНО З фізіологічним розчином або з алерпри иммунизации / Кирдей Е Г, Нечаев В И , Фегеном, який підозрюється як специфічний) на продосеев А П и др // Гематология и трансфузиолотязі години при кімнатній температурі Потім в зрагия - 1984 - № 12 - С 21 - 24], дозволила викоризки крові додають розчин акридинового стати цю залежність при розробці способів оранжевого і через 3-5 хвилин готують препарати експрес-діагностики алергії різної етіології [Кагана предметних склах у формі "живої краплі", при нович Д И , Анисичкина З Ф Эритрограммы как цьому кров прикривають покроєним склом Підраметод выявления малых концентраций химичехунок реакції ведуть в темній кімнаті за допомогою ских веществ на организм подростков // Гигиена и люмінесцентного мікроскопу з використанням імепрофзаболевания -М, 1972 -С 131 -1 34] рсійного об'єктиву Підраховують КІЛЬКІСТЬ альтерірованих лейкоцитів в контрольному і дослідних Найбільш близьким до пропонуємого, обраним зразках і при різниці більшій ніж 30% реєструють як прототип, є спосіб виявлення специфічного існування сенсибілізації до алергену, який досліалергену, що полягає у фотоелектричному виміджується [Солошенко Э Н Реакция аллергической рюванні оптичної ЩІЛЬНОСТІ цитратної крові в контальтерации лейкоцитов в диагностике лекарстрольному та дослідних зразках з попередньою венных дерматозов // Дерматология и венеролоінкубацією цих зразків ВІДПОВІДНО З фізіологічним гия - К Здоров'я, 1980 - Вып 15 - С 13 - 16, розчином і алергенами, котрі підозрюються винПольнер А А, Серова Т И Применение базоними у розвитку алергічного стану, після чого дофильного теста и реакции торможения миграции сліджувану цитратну кров центрифугують і при лейкоцитов для диагностики лекарственной алцьому одночасно вимірюють координати кожного лергии // Научные труды Центрального института із осаджених еритроцитів, далі у динаміці для кожусовершенствования врачей -1977-Т 217 -С 17 ного моменту вимірювання визначають загально-20] групову координату усіх осаджених еритроцитів, як Недоліком цього способу при його виконанні є велика імовірність помилкового виявлення специфічного алергену та його невиявлення, велика тривалість і складність виконання, обумовлені необхідністю мати в лабораторії спеціальну кімнату, яку потрібно затемнювати, люмінесцентний мікроскоп, а головне - спеціально підготовлених кваліфікованих фахівців у зв'язку з тим, що спосіб не автоматизований і тому не виключена суб'єктивність при підрахунку результатів ВІДОМІ Й ІНШІ способи виявлення специфічного алергену, наприклад, за допомогою методу інгибіцм міграції лейкоцитів, прямого та непрямого тесту Шеллі, тромбоцитопенічного тесту, реакції мікропреципітацм Уаньє, радюалергосорбентного тесту визначення специфічного імуноглобуліну Е, тесту специфічного розеткоутворення, надслабкої хемілюмінесценції сироватки крові [Чернушенко Е Ф , Когосова Л С Иммунологические исследования в клинике -К Здоров'я, 1978 - 1 6 0 с ] Однак майже всі ці імунологічні та біофізичні способи виявлення алергену дуже трудомісткі, тривалі за часом постановки, вимагають дефіцитних реактивів, дорогого обладнання, віварію (наприклад, непрямий тест Шеллі), відрізняються суб'єктивністю оцінок, низкою точністю результатів діагностики, або забезпечення умов роботи в радюімунолопчних лабораторіях Все це обмежує широке їх використання у КЛІНІЦІ, тим більше при масових обстеженнях Саме тому пошук експрес-методів виявлення сенсибілізації організму до алергенів, середнє значення їх координат, причому величину седиментації еритроцитів і їх середню швидкість оцінюють за зміненням положення загальногруповоі координати, після чого визначають показник відношення величини седиментації еритроцитів і їх середніх швидкостей у контрольному та дослідних зразках, і при ВІДМІНІ ЦЬОГО показника від одиниці й алерген розцінюють як специфічний [Пат України № 34280 А, кл G 01N 33/68, А61В 10/00, 2000 Спосіб виявлення специфічного алергену / Солошенко Е М , Мавров 1 1 , Даник Ю Г , Дунаева А В , Ярмак Т П , Шевченко З М - Бюл №2 - 2000, №1 -2001] Недоліком цього способу є велика імовірність помилкового виявлення специфічного алергену та його невиявлення, що обумовлено внутрішніми шумами приймача випромінювання, які приводять до формування хибних ВІДМІТОК, І ЯК наслідок цього - до зміщення координати загальногрупової координати В основу винаходу покладено задачу підвищення точності виявлення специфічного алергену шляхом дій, які забезпечують зменшення впливу внутрішніх шмів приймача випромінювання Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі виявлення алергену, що включає фотоелектричне вимірювання оптичної ЩІЛЬНОСТІ цитратної крові в контрольному та дослідних зразках з попередньою інкубацією цих зразків ВІДПОВІДНО з фізіологічним розчином і алергенами, які підозрюються винними у розвитку алергічного ста 51540 тури) ПЕОМ При обертанні ротору в прозорих вимірювальних комірках відбувається центробіжна седиментація еритроцитів, швидкість якої залежить від частоти обертання ротору Світловий потік від джерела світла через ділянки проб крові (плазму) в прозорих вимірювальних комірках потрапляє на вхід оптичного блоку (наприклад, біпризму Фрінеля), який введено до приладу додатково й за допомогою якого цей світловий потік розділяють просторово на дві частини При цьому на реєструючому елементі приймача випромінювання СА-41р формують два телевізійних зображення, розміщені на деяку кутову відстань, які задають згідно з умовами спостереження з урахуванням характеристик приймача і особливостей зображень, які формуються Зображення можуть спостерігатися візуально за допомогою відСпосіб, що пропонується для виявлення спеео контролюючого пристрою (наприклад, цифічного алергену може бути реалізований за звичайного телевізора або монітора ПЕОМ) Таким допомогою відомих приладів [Солошенко Э Н , чином, кожному еритроциту відповідають два зоТарасов И А , Гончаров Н А , Мацкивский В И браження, що розсуміщенні на задану відстань, а Устройство для оценки сенсебилизации организма також ВІДПОВІДНИМ чином зорієнтовані у просторі і к лекарственным и химическим аллергенам // АС співпадають за розмірами та інтенсивністю На СССР № 1656457 от 04 01 88 -БИ -№ 22 -1991 ] відміну від цих зображень, ті зображення, які сфоПрилад автоматизованого комплексу, який рермувалися під впливом внутрішніх шумів приймача алізує запропонований спосіб, складається з апаі не мають на заданій відстані співпадаючого ВІДратного блоку та ПЕОМ В апаратному блоці знаПОВІДНОГО другого зображення - відфільтровуються ходиться центрифуга (ротор та електропривод), в ПЕОМ за цією ознакою Для здійснення вищерегулятор швидкості электродвигуна Зняття інфоописаної фільтрації, як було вже вказано вище, до рмації здійснюється оптоелектронним способом за приладу вводять спеціальний оптичний блок (надопомогою джерела світла і телевізійних приймаприклад, біпризму Фрінеля), а суміш зображень, чів, які з'єднані з ПЕОМ через стандартний інтерщо утворюється у результаті реєстрації промодуфейс Як телевізійні приймачі можуть бути викорильованими еритроцитами, а також від спеціальностані твердотільні приймачі на базі приладів із го оптичного блоку в якості потоків світла і ВІДМІзарядовим зв'язком, так звані ПЗЗ-матриці (наприТОК, утворених власно шумами приймача клад, СА-41р, або СТС-230р, та такі ІНШІ) Ротор випромінювання, перетворюють у електричний являє собою плоский диск, що розташовується сигнал Потім цей електричний сигнал через відвертикально В свою чергу на диску розташовуеокарту, наприклад, типу SCSI AHA-8945 або ATI ється 15 капілярів Світло ВІД джерела світла про3D Xpression, вводять до ПЕОМ, де параметри ходить скрізь щілини в кришці та диску через освісигналів, що відповідають кожному із зображень, тлену частину крові (плазму) і через оптичний перевіряють на ВІДПОВІДНІСТЬ вищевказаним умоблок, який виконує фазове розділення світлових вам потоків, потрапляє на реєструючий елемент телевізійного приймача Обертання ротору здійснюєтьЯк двигун та електронний блок керування двися за допомогою електроприводу від центрифуги гуном можуть бути використані ВІДПОВІДНІ вузли ОПН-8 стандартної медичної центрифуги типу ОПН-8 ПЕОМ, що використовується в автоматизоваІнформацію про глибину осадження в кожній ному комплексі, здійснює функції керування, знятвимірювальній комірці вводять у ПЕОМ у формі тя, обробки та архівування інформації Вимірювамасиву одиниць і нулів льна інформація, що надходить від телевізійного Далі знаходять значення загальногрупової коприймача, записується в буферний регістр і зберіординати (згк), яке визначають в ряд послідовних гається в ньому "від капіляру до капіляру" Зв'язок моментів часу tj X згк Швидкість осадження ериз ПЕОМ здійснюється через стандартний інтертроцитів (ШОЕ) в цьому випадку визначають, як фейс Через нього в апаратний блок надходять відношення різниці значень загальногрупових косигнали керування приводом, освітлювачем та ординат, отриманих у різні моменти часу до інтервводом-виводом інформації валу часу між їх вимірами, а середню ШОЕ, як середнє арифметичне від отриманих значень Спосіб реалізують таким чином Взяту у хворошвидкостей за час проведення дослідження Для го цитратну кров, що обробляють шляхом додання цього вимірюють значення координати кожного із до контрольного зразка фізіологічного розчину, а осаджених еритроцитів Визначають у динаміці до дослідних зразків - алергенів, які підозрюються для кожного моменту дослідження загальногруповинними у розвитку алергічного стану, вводять у ву координату усіх осаджених еритроцитів, як сепрозорі вимірювальні комірки, якими є звичайні реднє значення їх координат, причому величину капіляри Панче-нкова для аналізу ШОЕ, шкубують седиментації еритроцитів і їх середню швидкість їх протягом 15 хвилин при кімнантній температурі оцінюють за зміненням положення загальногрупоПісля ПІДГОТОВКИ ВИХІДНИХ даних (дата, прізвище вої координати, після чого визначають показник пацієнта, час і вид дослідження та ш) капілярів відношення величини седиментації еритроцитів і їх роблять пуск двигуна з пульту керування (клавіану, з наступним центрифугуванням і одночасним вимірюванням координати кожного із осаджених еритроцитів, згідно з винаходом, додатково здійснюють формування і одночасову реєстрацію приймачем випромінювання розсуміщених на задану відстань парних зображень, ВІДПОВІДНИХ кожному з еритроцитів, які спостерігають, причому усі парні зображення орієнтують так, щоб умовні лінії, які поєднують центри зображень у парах, були паралельними, а самі зображення у парах роблять детерміновано зв'язаними по інтенсивності і розмірам, при цьому відфільтровують шумові зображення, які є одиночними і не мають на заданій відстані ВІДПОВІДНОГО їм другого зображення, або не співпадають у парах за орієнтацією у просторі, розмірами та інтенсивністю 51540 8 одиниці алерген розцінювали, як специфічний середніх швидкостей у контрольному та дослідних Результати досліджень свідчили, що при викозразках і при ВІДМІНІ ЦЬОГО показника від одиниці ристанні способу, який не дозволяв відфільтровуалерген розцінюють, як специфічний вати шумові ВІДМІТКИ, що формуються під впливом Приклади конкретного виконання способу внутрішніх шумів приймача випромінювання, цей Приклад 1 Хворий П К І , 34 років, знаходивпоказник для пеніциліну рівнявся - 0 7у о , а для ся під наглядом Інституту дерматології та венероалое - 0 9у о Ці результати не давали підгрунття, логи АМНУ у зв'язку з алопецією Під час провещо у хворого існує сенсибілізація до лікарських дення лікування у хворого з'явились зуд та засобів, у той час як клінічна картина, навпаки, кореподібна висипка 3 метою виявлення чинника вказувала про и існування алергічного процесу у хворого натще брали кров для дослідження, в яку добавляли 3 8% розчина При використанні пропонуємого способу, який цитрату натрію За допомогою автоматизованого дозволяв відфільтровувати шумові ВІДМІТКИ, ЯКІ комплексу проводили дослідження, при цьому гоформуються під впливом внутрішніх шумів притували контрольний та ДОСЛІДНІ зразки, в які до ймача випромінювання, показник відношення сецитратної крові хворого додавали ВІДПОВІДНО ІЗОдиментації та середніх швидкостей осадження ТОНІЧНИЙ розчин, а також пеніцилін та алое, які еритроцитів у контрольному та дослідному зразках підозрювались винними у розвитку його алергічнодля пеніциліну рівнявся - 0 8у є , а для алое го стану Ікубацію контрольного та дослідних зраз1 9у є Висновок алергеном для хворого є алое ків проводили при кімнатній температурі 15 хвиЦей лікарський засіб було відмінено і продовжена лин Потім капіляри Панченкова з контрольним і терапія, яку хворий одержував без ускладнень дослідними зразками цитратної крові вставляли в Приклад 2 Хвора В М І , 45 років, знаходирадіальні камери для вимірювальних комірок авлась на лікуванні у дерматологічному відділенню томатизованого комплексу При цьому як контроІнституту дерматології та венерології АМНУ у зв'яльні, так і ДОСЛІДНІ проби одного і того ж хворого зку з псоріазом 3 2000 року стала помічати ппердосліджували на приладах, на одному з яких не чутливість до деяких медикаментів В анамнезі проводилася фільтрація шумових зображень, які патологія шлунково-кишкового тракту На фоні формуються під впливом внутрішніх шумів прилікування псоріазу у хворої спостерігали розвиток ймача випромінювання, ана другому - проводилаалергічної реакції за екземоподібним типом 3 меся, згідно з пропонуємим способом До того притою встановлення етіологічного діагнозу лікарської ладу, на якому проводилася фільтрація шумових хвороби у хворої забрали кров натще і з нею прозображень, додатково вводили спеціальний оптивели дослідження за допомогою автоматизованого чний блок (наприклад, біпризму Фрінеля), за докомплексу, до якого з метою відфільтровування помогою якого світловий потік просторово ділили шумових ВІДМІТОК додатково був введений спеціана дві частини При цьому на реєструючому елельний оптичний блок типа біпризми Фрінеля Доменті приймача випромінювання СА-41 р формуслідження проводилися почергово на приладі без ються два телевізійних зображення, розсуміщені додатково введенного спеціального оптичного на деяку кутову відстань, які спостерігаються за блоку та з ним Як показали проведені досліджендопомогою відеоконтрольного пристрою (наприня, завдяки використанню способу з приладом, на клад, монітора ПЕОМ) При цьому кожному еритякий було встановлено додатково спеціальний роциту відповідають два зображення, що розсуміоптичний блок і проводилася фільтрація шумових щені на задану відстань, а також ВІДПОВІДНИМ ВІДМІТОК, що сформувалися під впливом внутрішніх чином зорієнтовані у просторі і співпадають за шумів приймача випромінювання, у хворої вияврозмірами та інтенсивністю На відміну від цих лена сенсибілізація до тіосульфату натрію (ШОЕ зображень, ті зображення, які сформувалися під 1 8у о) Була призначена відповідна терапія та впливом внутрішніх шумів приймача і не мають на рекомендовані засоби по профілактиці рецидивів заданій відстані співпадаючого ВІДПОВІДНОГО другоалергічних реакцій на медикаментозні препарати го зображення - відфільтровуються в ПЕОМ за цією ознакою Для здійснення вищевказаної фільДля перевірки ефективності способу, що протрації, суміш зображень, що утворюється у репонується, проби одних і тих самих 52 хворих на зультаті реєстрації промодульованими еритроцилікарську хворобу досліджувалися на приладах, в тами, а також від спеціального оптичного блоку в одному з яких проводилася фільтрація шумових якості потоків світла і ВІДМІТОК, утворених власно зображень, згідно з пропонованим способом, а в шумами приймача випромінювання, перетворюдругому — не проводилася Паралельно проби ється у електричний сигнал Потім цей електричцих же хворих досліджувалися за допомогою траний сигнал через відеокарту, наприклад, типу ATI диційних і розроблених специфічних імунологічних 3D Xpression, вводять до ПЕОМ, де параметри та біофізичних тестів, помилки при прийнятті рісигналів, що відповідають кожному із зображень, шення у яких не перевищували 5% Як свідчить перевіряють на ВІДПОВІДНІСТЬ вищевказаним умоаналіз результатів проведених досліджень, спевам цифічний алерген, який може бути відповідальним за розвиток алергічного стану, за постановкою вищевказаних методів — реакції агломерації лейВизначали величину седиментації та середню коцитів (РАЛ) — реєструється у 80% хворих на швидкість осадження еритроцитів за зміненням лікарську хворобу, за методом Панченкова в його положення загальногрупової координати в контрокласичній постановці - у 75% хворих, за методом льному та дослідних зразках, потім - показник відкислотних еритрограм — у 61 5% хворих, в той час ношення величини седіментацм та середніх швидяк при використанні пропонуємого способу - у костей осадження еритроцитів у контрольному та 90 3% хворих Щодо терміну виявлення специфічдослідних зразках і при ВІДМІНІ ЦЬОГО показника від 51540 ного алергену, то при використанні реакції агломерації лейкоцитів він складає 5 - 6 годин, методу Панченкова в його класичній постановці 3 0 - 3 5 години, методу кислотних еритрограм - близько 2х годин, в той час, як при використанні пропонуємого способу — всього - 20 - ЗО хвилин При цьому встановлено, що реалізація способу, який пропонується, дозволяє знизити помилку при прийнятті рішення по відношенню до способу прототипу у середньому не менш ніж на 23% 10 Таким чином, за допомогою пропонуємого способу, у порівнянні з прототипом, за рахунок надання зображенням еритроцитів, котрі спостерігаються, таких ознак, які дозволяють однозначно відрізнити їх серед зображень, що сформувалися під впливом внутрішніх шумів приймача випромінювання, можно вирішити задачу зниження імовірності помилкового виявлення специфічних алергенів та їх невиявлення ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71