Спосіб одержання засобу з протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю

1. Спосіб одержання засобу з протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю, 3 56038 способу одержання засобу рослинного походження з комплексною протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю шляхом водноспиртової екстракції листя тополі китайської при заданих параметрах способу, що дозволяє скоротити час проведення процесу, підвищити вихід і розширити спектр специфічної активності продукту. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання засобу з протизапальною, анальгетичною, діуретичною активністю, що включає неодноразову екстракцію рослинної сировини спиртом етиловим при загальному співвідношенні сировини до екстрагенту 1:9-1:11, об'єднання одержаних екстрактів та їх упарювання, у відповідності з корисною моделлю екстракції піддають листя тополі китайської 49-51% спиртом етиловим при температурі 60-80°С послідовно тричі по 2 години новими порціями екстрагента, об'єднаний екстракт додатково відстоюють, фільтрують і концентрують до одержання сухого залишку. Корисною моделлю передбачено, що об'єднаний екстракт відстоюють при температурі від +5°С до +10°С протягом 24-48 годин. 4 Всі параметри заявленого способу визначені експериментальним шляхом. Сукупність ознак способу є новою, не відомою з джерел інформації. Тополя китайська (Populus Simonii Carr.) поширена на території України, як декоративна рослина [4]. З літературних джерел не відомо використання тополі китайської з лікувальною метою, хоча листя та бруньки інших видів тополь (тополі чорної, тополі тремтячої) використовують як у народній так і у офіційній медицині. Авторами вперше було досліджено фармакологічну активність листя тополі китайської, що дає можливість розширити перелік засобів рослинного походження з протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю. Вибір 49-51% спирту етилового в якості екстрагента обумовлений його здатністю найбільш повно вилучити з листя тополі китайської комплексу біологічно активних речовин (БАР) з заданим спектром фармакологічної активності. При здійсненні серії експериментів з визначення концентрації екстрагента було встановлено, що вичерпна екстракція комплексу БАР забезпечується 49-51% етанолом. Дані експерименту наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Кількісний вихід екстрактивних речовин з листя тополі китайської при використанні різних екстрагентів Екстрагент Кількісний вихід екстрактивних речовин,% вода 20% етанол 50% етанол 70% етанол 96% етанол 34,49 35,82 36,98 36,80 30,06 Визначені експериментальним шляхом такі ознаки, як співвідношення сировина : екстрагент 1:9-1:11, тривалість екстракції протягом 2 годин при нагріванні до 60-80°С з двократною заміною екстрагенту дозволяє максимально вилучити БАР з комплексною протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю з сировини при найменшій Концентрування одержаного екстракту доцільно здійснювати шляхом упарювання під вакуумом. Для упарювання екстракту оптимальним є інтервал температур 60-70°С, який обумовлений концентрацією етанолу в екстрагенті. При зменшенні температури збільшується час упарювання, при витраті часу і забезпечити високий вихід сухого екстракту на рівні 32%. Очищення об'єднаного екстракту здійснюється його відстоюванням при температурі від +5°С до +10°С протягом 24-48 годин., що призводить до осадження частинок сировини та відокремленням осаду шляхом фільтрування. збільшенні можливе руйнування термолабільних речовин. Експериментально був здійснений вибір сировини в залежності від фази вегетації тополі китайської. Результати дослідження динаміки накопичення фенольних сполук у листі тополі китайської у різні терміни заготівлі наведені у табл. 2. Таблиця 2 Кількісний вміст фенольних сполук у листі тополі китайської в залежності від фази вегетації Група БАР Гідроксикоричні кислоти,% Флавоноїди,% Дубильні речовини,% Травень 3,97 2,07 4,99 Червень 3,62 1,84 4,63 Дані табл. 2 свідчать, що найбільша кількість фенольних сполук у листі тополі китайської накопичуються у травні, тому для одержання з листя тополі китайської комплексу БАР з протизапальною, анальгетичною та діуретичною активністю Липень 3,23 1,46 4,15 Серпень 2,93 0,94 3,32 Вересень 2,88 2,05 4,92 Жовтень 2,73 1,6 4,56 раціонально використовувати сировину, заготовлену саме у травні. Заявлений спосіб здійснюють таким чином. Повітряно - сухе листя тополі китайської екстрагують 49-51% етанолом, при співвідношенні сирови 5 56038 на : екстрагент 1:9 - 1:11, тричі протягом 2 годин, при нагріванні до 60-80°С. Об'єднаний екстракт відстоюють при температурі (+5°С) - (+10°С) протягом 24 - 48 годин, фільтрують та концентрують переважно шляхом упарювання під вакуумом при температурі 60-70°С до одержання сухого залишку. Одержаний сухий екстракт листя тополі китайської гігроскопічний порошок гірчичнозеленуватого кольору, зі специфічним запахом, гіркий на смак, добре розчинний у 40-80% спирті та киплячій воді, практично нерозчинний в ефірі, хлороформі. Вихід продукту 32%. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 1,5 кг подрібненого повітряносухого листя тополі китайської поміщають у реактор з підігрівом, заливають 50% етанолом та екстрагують при температурі 70°С протягом 2 годин при періодичному перемішуванні. Другу екстракцію проводять за попередніх умов. Загальне співвідношення сировина : екстрагент складає 1:10. Одержані екстракти об'єднують відстоюють при температурі +5°С протягом 24 годин, фільтрують і випарюють у вакуумі при температурі 65°С до отримання сухого продукту. Одержують 480 г сухого продукту. Вихід - 32%. Приклад 2. Протизапальну активність одержаного за заявленим способом екстракту, вивчали на моделі карагенінового набряку стопи у щурів, за антиексудативними властивостями екстракту, який 6 досліджували у дозах 1 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг та 10 мг/кг. Препаратами порівняння слугували альтан та вольтарен в ефективних дозах - 1 мг/кг та 8 мг/кг відповідно. Дослідження проводили на 6 групах стандартизованих білих щурів обох статей масою від 180 до 200 г по 6 тварин у групі. Набряк стопи у щурів викликали субплантарним введенням 0,05 мл 1% розчину карагеніну в одну із задніх кінцівок тварин дослідних та контрольних груп через 1 годину після інтрагастрального введення досліджуваного екстракту у різних дозах та препаратів порівняння. Контрольна група щурів одержувала еквівалентну кількість води. Про розвиток набряку судили за збільшенням об'єму стопи, який вимірювали через 1 годину (при максимальному розвитку запального процесу) за допомогою механічного онкометра за А.С. Захаревським. Протизапальну активність досліджуваних засобів визначали за здатністю зменшувати набряк стопи у дослідних тварин у порівнянні з контрольними. Розрахунок проводили за формулою: VK VA 100%  ; A VK де: A - протизапальна активність,% VK і VÄ - різниця об'ємів стопи до та після введення карагеніну у контрольній і дослідних групах. Результати дослідження наведено у таблиці 3. Таблиця 3 Протизапальна активність сухого екстракту з листя тополі китайської, одержаного за заявленим способом Варіанти досліду Контроль Альтан, 1 мг/кг Вольтарен, 8 мг/кг 1 мг/кг Сухий екстракт з листя 2 мг/кг тополі китай- 5 мг/кг ської 10 мг/кг Величина набряку, умовні одиниці 24,0±4,10 6,5±0,62 8,0±2,05 5,3±1,53 11,0±3,76 6,0±2,39 11,0±3,76 Активність,% 72,9 66,7* 75,8* 54,2 74,9* 54,2 Примітка: * - різниця достовірна у порівнянні з контрольною групою тварин (Р