Спосіб кількісного визначення цефалоспоринів

Спосіб кількісного визначення цефалоспоринів, що включає підготовку проби шляхом послідо 3 Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі кількісного визначення цефалоспоринів, який включає підготовку проби шляхом послідовного додавання до випробуваного зразку розчину окисника та розчину лугу, зокрема натрій гідроксиду, з подальшим фотометруванням одержаного розчину, на відміну від найближчого аналога передбачено, що як окисник використовують 4-4 10 моль/л розчин калій гідрогенкароату, розчин -2 лугу додають у концентрації 2,4-10 моль/л, а вимірювання оптичної густини здійснюють у часі. Нижня межа визначуваних концентрацій цефалоспоринів становить 1 мкг/мл. Всі параметри заявленого способу визначені дослідним шляхом. Експериментальним шляхом встановлено, що порядок змішування розчинів суттєво чинить вплив на кінетику та вихід продукту реакції. Найвища швидкість накопичення продукту реакції спостерігається лише після попереднього змішування розчину зразка досліджуваного цефалоспорину з розчином калій гідрогенкароату, а відтак - розчином лугу. Максимальна активність калій гідрогенкароату у реакції спостерігалася при її концентра-4 ції 4-10 моль/л. Встановлено, що оптимальна концентрація лугу, при якій спостерігалась найбільша швидкість утворення продукту реакції, -2 2,4-10 моль/л. У відсутності калій гідрогенкароату у зазначених вище умовах впродовж 30 хв. (час спостереження) утворення продукту реакції не відбувалось. Такий необхідний надлишок калій гідрогенкароату може бути пояснений його участю у процесі подальшого гідролітичного розщеплення утвореного на першій стадії реакції відповідного Sоксиду цефалоспорину в лужному середовищі. Заявлений спосіб дозволяє спростити процедуру виконання аналізу уникаючи нагрівання реакційної суміші, а також підвищити чутливість та точність визначення. Корисну модель здійснюють наступним чином. У мірні колби на 50 мл за допомогою мікробюретки послідовно відміряють 0,5; 1,00; 2,00; 4,00; 6,00; 7,00; 8,00 мл стандартного розчину досліджуваного цефалоспорину, при постійному перемішуванні додають по 2,00 мл 0,02 моль/л розчину калій гідрогенкароату та по 2,00 мл 0,61 моль/л розчину натрій гідроксиду з наступним доведенням об'єму дистильованою водою до позначки. Після додавання розчину лугу починають відлік часу. Одержані розчини фотометрують у кварцовій кюветі з товщиною 1 см при відповідний довжині хвилі для досліджуваного цефалоспорину проти дистильованої води (компенсаційний розчин) впродовж 10 63351 4 хв. через кожну хвилину або одноразово через 20хв. За даними досліду будують градуювальну залежність тангенсу кута нахилу лінійної ділянки кінетичної кривої tg від концентрації досліджуваного цефалоспорину або залежність оптичної густини за 20 хв, А20 від концентрації досліджуваного цефалоспорину. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Кількісне визначення цефалексину у гранулах для приготування пероральних суспензій кінетичним методом здійснювали наступним чином. Близько 0,5 г (точна наважка) препарату розчиняли в 50 мл дистильованої води, фільтрували у мірну колбу місткістю 100 мл, доводили об'єм розчину до позначки і ретельно перемішували. 2,00 мл отриманого розчину переносили у мірну колбу на 100 мл, при постійному перемішуванні послідовно додавали 4,00 мл 0,02 моль/л розчину калій гідрогенкароату, 3,4 мл 0,61 моль/л розчину натрій гідроксиду та доводили об'єм до позначки дистильованою водою. Після додавання розчину лугу починали відлік часу. Отриманий розчин фотометрували у кварцовій кюветі з товщиною 1 см при 305 нм, використовуючи дистильовану воду як компенсаційний розчин, щохвилини протягом 10хв. та будували кінетичну криву залежності оптичної густини розчину від часу, знаходили тангенс кута нахилу ділянки кінетичної кривої. Кількісне визначення цефалексину здійснювали у відповідності з градуювальним графіком (мал. 1) залежності концентрації цефалексину (С, мкг/мл) від тангенса кута нахилу лінійної ділянки кінетичної кривої. Аналіз даних (мал. 1) свідчить, що в межах від 1 до 14 мкг/мл, умовна швидкість реакції зберігає лінійний характер залежно від концентрації цефалексину. Це дозволяє здійснювати визначення цефалексину в зазначеному інтервалі концентрацій стандартним кінетичним методом тангенсів (початкових швидкостей). Вміст цефалексину у перерахунку на цефалексину моногідрат (C16H19N3O5S) в гранулах (X, мг) розраховували за формулою: X  C  20 , де, C - вміст цефалексину, розрахований за методом стандарту, мкг/мл, Ccm C  tg лф ; 20 - коефіцієнт перерахунtg cm ку у мг на 5 мл розчину готової до вживання лікарської форми. 5 63351 6 Таблиця 1 Кількісне визначення цефалексину за заявленим способом Узято гранул цефалексину, мг/5 мл Знайдено Метрологічні характеристики 235,4 98,49 X  2412 | (100,92 %) , 103,77 S  5,2 238,4 99,75 S x  2,3 239,0 100,00 X  6,5 245,3 (239мг / 5 мл) * % 248,0 250 50 мг / 5 мл 25 мг/5 мл 102,64 RSD  2,17%   2,69%   0,92% Примітка: *Вміст цефалексину в гранулах у перерахунку на цефалексину моногідрат зазначений у сертифікаті якості. Результати кількісного визначення цефалексину у готовій лікарській формі наведені у таблиці 1, із яких видно, що визначення цефалексину у гранулах для приготування суспензії за заявленим способом можливе із задовільною точністю (RSD=2,17 %). Аналіз даних таблиці 1 свідчить про те, що заявлений спосіб за метрологічними характеристиками відповідає вимогам Державної фармакопеї України щодо валідаційних показників. Приклад 2. Кількісне визначення цефазоліну у порошку для приготування розчину для ін'єкцій здійснювали наступним чином. Близько 0,6 г препарату (точна наважка) розчиняли в 50 мл дистильованої води, фільтрували у мірну колбу місткістю 100 мл, доводили об'єм розчину до позначки і ретельно перемішували. 4,00 мл отриманого розчину переносили у мірну колбу на 100 мл, при постійному перемішуванні послідовно додавали 2,00мл 0,02 моль/л розчину калій гідрогенкароату, 2,00 мл 0,61 моль/л розчину натрій гідроксиду та доводили об'єм до позначки доводили дистильованою водою. Після розчину лугу починали відлік часу. Отриманий розчин фотометрували у кварцовій кюветі з товщиною 1 см при 305 нм, використовуючи дистильовану воду як компенсаційний розчин, через 20 хвилин після початку вимірювання та будували кінетичну криву залежності оптичної густини розчину від концентрації досліджуваного розчину. Кількісне визначення цефазоліну здійснювали у відповідності з градуювальним графіком (мал. 2) залежності оптичної густини (А20) від концентрації цефазоліну (С, мкг/мл). Аналіз даних (мал.2) свідчить, що в межах від 1,6 до 26,0 мкг/мл, оптична густина А20 зберігає лінійний характер залежно від концентрації цефазоліну. Цей дозволяє здійснювати кількісне визначення цефазоліну в порошку для приготування розчину для ін'єкцій стандартним кінетичним методом фіксованого часу. Вміст цефазоліну у порошку для приготування ін'єкцій розраховували за формулою: m  0,897  A n  m , де Xмг / фл cm mн  A cm m cm - маса наважки стандарту, г; A n - оптична густина визначуваного розчину препарату; m - маса середня флакону, г; m н - маса наважки визначуваного розчину препарату, г; A cm - оптична густина стандартного розчину; 0,897 = 0,99-0,95-0,954; 0,99 - кількісний вміст цефазоліну натрію у субстанції, мас. частки; 0,95 - коефіцієнт перерахунку на безводну речовину; 0,954 - коефіцієнт перерахунку на цефазолін кислоту (M(ЦФк та) / М(ЦФNa) ) . 7 63351 8 Таблиця 2 Кількісне визначення цефазоліну за заявленим способом Узято цефазоліну, г Знайдено Метрологічні характеристики г % Цефазолін препарат 0,50035 989,4 98,94 (99,0 %*) 989,4 98,94 X  2412 | (100,92 %) , S  5,2 944,4 94,44 S x  2,3 966,9 96,69 989,4 98,94 X  6,5 RSD  2,17%   2,69%   0,92% Примітка: * Вміст цефазоліну у порошку для приготування ін'єкцій вказаний у сертифікаті якості. Аналіз даних таблиці 2 свідчить про те, що заявлений спосіб за метрологічними характеристиками відповідає вимогам Державної фармакопеї України щодо валідаційних показників. Таким чином, заявлено новий спосіб кількісного визначення цефалоспоринів характеризу ється високою чутливістю, відтворюваністю, а також суттєво скорочує час аналізу. Спосіб може бути застосований у роботі контрольноаналітичних та хіміко-токсикологічних лабораторій. 9 Комп’ютерна верстка Мацело В. 63351 Підписне 10 Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601