Спосіб діагностики вагінального дисбіозу у дівчаток

Спосіб діагностики вагінального дисбіозу у дівчаток шляхом зскрібання епітеліальних клітин зі слизової оболонки піхви дівчинки, визначення мікробіоценозу методом полімеразно-ланцюгової реакції за зразком зішкребу, аналізування одержаних результатів, 3 них результатів визначення мікробіоценозу (Майоров М.В. Бактериальный вагиноз: "что в имени тебе моем?…» // Провизор, 2002.- № 18. - С. 3637). Недоліком відомого способу-прототипу є недостатня точність діагностики. Причиною недоліку відомого способупрототипу є його обмеженість лише якісною оцінкою мікробного середовища піхви у дівчаток. В основу корисної моделі поставлено задачу в способі діагностики ВД у дівчаток шляхом застосування методу кількісної ПЛР в режимі реального часу забезпечити кількісну оцінку мікробіоценозу піхви дівчинки із диференційованим визначенням ВД: вагінального нормоценозу, помірного ВД, виразного ВД. Кількісна оцінка мікробіоценозу значно скорочує термін діагностики, дозволяє підібрати точну, ощадливу та безпечну для організму дитини антимікробну терапію. Поставлена задача вирішується тим, що створено спосіб діагностики ВД у дівчаток шляхом зскрібання епітеліальних клітин зі слизової оболонки піхви дівчинки, визначення мікробіоценозу методом полімеразно-ланцюгової реакції за зразком зішкребу, аналізування одержаних результатів. Новим у заявленому способі є те, що ПЛР виконують із тестовим набором реагентів "Фемофлор" в режимі реального часу, за допомогою яких вимірюють абсолютний показник (АП) рівня умовно патогенного мікроорганізму (УПМ) та АП рівня загальної бактеріальної маси (ЗБМ) зішкребу, підраховують відносний показник (ВП) рівня УПМ відніманням десяткових логарифмів числових значень одержаних АП, в разі одержання величини ВП більше 0,5 у дівчинки діагностують вагінальний нормоценоз, при його значенні від 0,5 до-1 - помірний ВД, менше -1 - виразний ВД. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Діагностика й адекватне лікування захворювань, викликаних порушеннями мікробного середовища піхви у дівчаток препубертатного віку можливі за наявності чітких уявлень про склад нормальної мікрофлори піхви в цьому віці. Існують суперечливі відомості про критерії норми щодо складу мікрофлори піхви у дівчаток в різні вікові періоди. Загальноприйнятим у вітчизняній практиці дитячого гінеколога вважається етапний підхід до оцінки мікробіоценозу, при якому певний піхвовий біотоп відповідає певному періоду розвитку дівчинки. Вважають, що у новонародженої дівчинки піхву заповнено густим стерильним слизом. Протягом 1-4 днів після народження внаслідок процесів розпаду поверхневого епітеліального шару піхви під впливом статевих гормонів матері піхву новонародженої дівчинки заселяють ЛБ (85-90 %), біфідобактерії (до 10 %) і пептострептококи (до 5 %). Молочна кислота, яка продукується ЛБ, створює кисле середовище в піхві (рН 4,0-4,5). Таким чином, у цей період вагінальний мікробіоценоз дівчинки багато в чому схожий з таким у здорової дорослої жінки. Однак через 10 днів рівень естрогенів знижується, в результаті чого епітелій піхви стоншується до 2-4 шарів, знижується вміст 66669 4 глікогену в ньому, що, в свою чергу, призводить до зниження вмісту ЛБ і нейтралізації вагінального середовища до 7,0. Протягом перших двох місяців життя мікрофлора заміщується на кокову та факультативноанаеробну, рН піхви підвищується до 7,0-8,0, ЗБМ становить від 102 КУО/мл до 105 КУО/мл, і цей стан розглядається багатьма авторами як нейтральний період, або період гормонального спокою. Вхід в піхву зіяє за рахунок тонкої дівочої пліви, але його глибоке розташування та відмежування від анального отвору високою задньою спайкою в нормі перешкоджає заселенню піхви екзогенною мікрофлорою. Даний період триває до 8-9 років (початку розвитку вторинних статевих ознак). Потім відбувається поступова заміна кокової флори на коково-бацилярну. У віці 10-10,5 років, коли концентрація естрадіолу в крові досягає 100 нмоль/л, піхва заселяється переважно ЛБ. ЗБМ збільшується до 105-106 КУО/мл. Порушення мікробіоценозу піхви є сприятливим фоном для розвитку патогенних бактерій. З нормалізації мікробіоценозу починають лікування наслідків ВД у дівчаток. Проте ефективність нормалізації мікробіоценозу, її підтримка впродовж усього курсу терапії залежить від точної кількісної діагностики. За відомим способом-прототипом визначають стан мікробіоценозу піхви за методом ПЛР. Проте в даний час метод ПЛР використовують для дослідження УПМ виключно з метою якісної оцінки, тобто для відповіді "є чи ні" в досліджуваному матеріалі шукана ДНК. Такий підхід малоінформативний у зв'язку з тим, що УПМ можуть бути присутніми як при патологічних станах (у значних кількостях), так і в нормі (в обмеженій кількості). Таким чином, визначення УПМ за методом якісної ПЛР може призводити до призначення невиправданого та надлишкового лікування. Спосіб, що заявляється, використовує принципово новий підхід до дослідження мікрофлори піхви дівчинки, заснований на комплексній оцінці груп мікроорганізмів, які формують генітальний біоценоз, методом кількісної ПЛР в режимі реального часу. Дисбіотичні процеси характеризуються порушенням кількісних співвідношень нормо- та УПМ за умови великого видового розмаїття останньої. Успіх лікування порушення мікробіоценозу залежить від правильності вибраної терапії для кожної конкретної пацієнтки, що неможливо без кількісної оцінки УПМ та її співвідношення з кількістю нормальної флори. Не менш важлива точна кількісна корекція мікробіоценозу в разі його порушення в процесі лікування ВД. Для цього необхідний точний своєчасний контроль в режимі реального часу. На даний момент це може забезпечити лише діагностична система ПЛР із тестовим набором реагентів "Фемофлор" (виробник НПО ДНК-Технология). Застосовувана за способом, що заявляється, система ПЛР із "Фемофлор" дозволяє проводити етіологічно спрямовану терапію, мінімізувати лікарський вплив, уникати поліпрагмазії, проводити динамічні спостереження, моніторинг ефективності лікування, скоротити термін санації. 5 66669 Суттєвою ознакою заявленого діагностичного способу є вибір критерію визначення порушення мікробіоценозу у дівчинки. ЛБ домінують в піхві здорової дорослої жінки. їх кількість є основним критерієм при діагностиці ВД у дорослої жінки (А.А. Евсеев. Вагинальный дисбиоз и методы его коррекции / Росс, вестник акуш.-гинеколога.-2007.№4. - С. 65-69). У дівчинки препубертатного віку ЛБ відсутні. Тому критерієм визначення порушення мікробіоценозу у дівчинки є порівняння АП рівня ЗБМ та УПМ. Ефективність діагностики ВД у дівчаток за заявленим способом доведена шляхом клінічних досліджень. В дитячій гінекологічній клініці були проведені дослідження мікробіоценозу піхви у 174 дівчаток у препубертатному віці. Дівчатка були розподілені на дві групи: основну, представлену 134 пацієнтками з наявністю мікробного дисбалансу піхви різного ступеня, і групу контролю, представлену 40 дівчатками з нормальним вагінальним мікробіоценозом і відсутністю будь-яких клінічних проявів вагініту. Критеріями відбору були: вік від 5 до 10 років; відсутність менструацій; відсутність хламідіозу, трихомоніазу, гонореї, сифілісу, ВІЛ, гепатиту В, ендокринних захворювань. Вивчали клінічні й ана 6 мнестичні дані. Дослідження спектра вагінальної мікробіоти проводили за допомогою комплексної кількісної ПЛР з використанням тест-систем "Фемофлор-16" (виробник НПО ДНК-Технология, РФ). Матеріалом для дослідження був зішкріб епітеліальних клітин, який забирали одноразовими стерильними інструментами типу "Cytobrush" із заднього склепіння піхви через гіменальні кільця. Середній вік дівчаток в основній групі склав 8,93±0,24 року, у контрольній - 8,75±0,34 року, р>0,05. В основній групі патологічні виділення зі статевих шляхів (білі, сироподібні, жовтуваті, пінисті тощо) мали 76 (56,72±0,65 %) пацієнток, а в контрольній групі тільки 4 (6,15±0,31 %) дівчинки мали виділення зі статевих шляхів у вигляді білів, р