Кріопротектор “trialactis” для довготривалого зберігання мікроорганізмів

Реферат: Кріопротектор для довготривалого зберігання мікроорганізмів містить лактозу, додатково містить безсольову 1 % пептонну воду та обезжирене коров'яче молоко. UA 71536 U (12) UA 71536 U UA 71536 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до біотехнології, медицини, а саме до бактеріології, і може використовуватися в практичних та наукових лабораторіях з метою довготривалого зберігання культур мікроорганізмів методом кріоконсервації. До цього часу, як кріопротектори використовувались понад 100 сполук (спирти, аміни, амінокислоти та їх аміди, оксиди, вуглеводи, білки, природні та штучні полімери, неорганічні солі та ін.). Однак всі відомі кріопротектори можуть діяти на клітини токсично, величина дії залежить від температури та експозиції клітин з кріопротектором. Тому, як правило, відразу після розморожування видаляють кріопротектор з клітин та середовища шляхом послідовних відмивань та центрифугування. В практичній роботі використовували кріопротектор Фрея, до складу якого входить кінська сироватка, яка при системному використанні кріопротектора Фрея призводить до значного подорожчання технологічного процесу. Також, за результатами експериментальних даних встановлено, що кріопротектор Фрея не забезпечує протективні властивості для зберігання деяких мікроорганізмів (галофільних вібріонів). Відомий є кріопротектор (UA 62695, МПК: А23В 4/06, дата публікації 12.09.2011, бюл. № 17/2011), що містить сіль поварену харчову, лактозу та лактулозу, який також не забезпечує протективні властивості для зберігання деяких мікроорганізмів. В основу корисної моделі поставлена задача створення кріопротектора для довготривалого зберігання мікроорганізмів, який внаслідок застосування у ньому нових інгредієнтів та нового їх співвідношення зменшує негативний вплив на оброблювані ним мікроорганізми, та, який не потребує ускладнення технологічного процесу, зокрема центрифугування та послідовного відмивання від нього мікроорганізмів. Поставлена задача вирішується тим, що кріопротектор для довготривалого зберігання мікроорганізмів що включає лактозу, додатково містить безсольову 1 % пептонну воду та обезжирене коров'яче молоко, у наступному співвідношенні компонентів, %: лактоза 10 обезжирене коров'яче молоко 10 безсольова 1 % пептонна вода 80. Застосування такого кріопротектора для довготривалого зберігання мікроорганізмів, внаслідок застосування у ньому нових інгредієнтів та нового їх співвідношення, зменшує негативний вплив на оброблювані ним мікроорганізми, що дозволяє використовувати його для збереження в колекціях життєздатних культур зі стабільними фенотиповими ознаками. Застосування такого кріопротектора не потребує ускладнення технологічного процесу, зокрема центрифугування та послідовного відмивання. Кріопротектор має нижчу вартість, ніж придбаний за кордоном. Приклад Кріопротектор "Trialactis" використовується для приготування суспензії бактерій на початкових етапах ліофільного висушування. Основа кріопротектора "Trialactis" є безсольова 1 % пептонна вода, яка містить 10 % обезжиреного коров'ячого молока, збагаченого 10 % лактози. Для приготування безсольової 1 % пептонної води до 1 л дистильованої води додають 10 грамів сухого ферментативного пептону, суміш доводять до кипіння, охолоджують до 40 °C та фільтрують. Незбиране коров'яче молоко доводять до кипіння, охолоджують до кімнатної температури та ставлять в холодильник. Наступного дня збирають жир, повторно кип'ятять, охолоджують та ставлять в холодильник. На третій день збирають жир, третій раз кип'ятять охолоджують та збирають решту жиру. До знежиреного молока додають 10 грам сухої лактози. Таким чином збагачене лактозою обезжирене молоко додається із розрахунку 10 % до безсольової 1 % пептонної води. Середовище стерилізують при 0.5 атм. (110 °C) протягом 20 хвилин. Готове середовище має бути білого кольору без плям жиру та осаду. Кріопротектор "Trialactis" після приготування ставлять до термостату при 37 °C на 48 годин. Через 48 годин роблять висів на неелективне середовище, для перевірки на стерильність. При задовільному контролі на стерильність, середовище є готовим для використання. Кріопротектор "Trialactis" має зберігатись в захищеному від світла місці при температурі (+5-10 °C) протягом 14 діб. Визначення ефективності використання середовища проводилося за допомогою депонованих референтних культур. Отримані результати представлені в Таблиці. 55 1 UA 71536 U Таблиця Визначення ефективності корисної моделі за допомогою депонованих референтних культур Назва використаного середовища Середовище Trialactis Середовище Фрея Контроль на фізіологічному розчині V. V. V. V. Назва та V. V. V. V. V. V. V. V. V. V. V. V. V. para- paraV. para- para№№ cholе- cholе- chole- algi- para- para- chole- cholе- chole- algicholе- cholealgihae- haecholеhae hae рефеrае rае rае noly- haemo- haemo- rае rае rае nolyrае rае nolymoly- molyrае moly- molyрентних О1 non О139 ticus lyticus lyticus Ο1 non О139 ticus О1 non ticus ticus ticus О139 ticus ticus мікроор- № O1 № № № № № О1 № № № O1 № № № № 112 № № ганізмів 225 № 67 112 603 2448 2451 225 №67 112 603 225 № 67 603 2448 2451 2448 2451 Наявність росту мікроорріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ганізму в вихідній суспензії Наявність росту мікроорганізму в немає немає немає немає немає немає ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст суспензії росту росту росту росту росту росту після заморожування Наявність росту мікроорганізму в суспензії немає немає немає немає немає немає ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст після росту росту росту росту росту росту ліофільного висушування 1 місяць зберігання після немає немає немає немає немає немає ліофіль- ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст росту росту росту росту росту росту ного висушування 2 місяці зберігання і після немає немає немає немає немає немає ліофіль- ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст росту росту росту росту росту росту ного висушування 3 місяці зберігання і після немає немає немає немає немає немає ліофіль- ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст росту росту росту росту росту росту ного висушування 4 місяці зберігання і після немає немає немає немає немає немає ліофіль- ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст росту росту росту росту росту росту ного висушування 5 місяців немає немає Немає немає немає немає ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст зберігання росту росту росту росту росту росту 2 UA 71536 U Продовження таблиці Визначення ефективності корисної моделі за допомогою депонованих референтних культур Назва використаного середовища Середовище Trialactis Середовище Фрея Назва та V. V. V. V. V. V. V. V. V. V. №№ cholе- cholе- chole- algi- para- para- chole- cholе- chole- algiрефеrае rае rае noly- haemo- haemo- rае rае rае nolyрентних О1 non О139 ticus lyticus lyticus Ο1 non О139 ticus мікроор- № O1 № № № № № О1 № № ганізмів 225 № 67 112 603 2448 2451 225 №67 112 603 6 місяців зберігання 7 місяців зберігання 8 місяців зберігання 9 місяців зберігання 10 місяців зберігання 11 місяців зберігання 12 місяців зберігання 18 місяців зберігання 24 місяці зберігання ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст Контроль на фізіологічному розчині V. parahaemolyticus № 2448 V. V. V. V. V. V. V. parapara- paracholе- chole- cholе- algihaehae hae rае rае rае nolymolymoly- molyО1 non О139 ticus ticus ticus ticus № O1 № № № № № 225 № 67 112 603 2451 2448 2451 немає немає немає немає немає немає ріст ріст росту росту росту росту росту росту дисонемає немає немає немає немає немає ріст ціація росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту немає немає немає немає немає немає немає ріст росту росту росту росту росту росту росту ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Кріопротектор для довготривалого зберігання мікроорганізмів, що містить лактозу, який відрізняється тим, що додатково містить безсольову 1 % пептонну воду та обезжирене коров'яче молоко, у наступному співвідношенні компонентів, %: лактоза 10 обезжирене коров'яче молоко 10 безсольова 1 % пептонна вода 80. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3