Препарат, який має противопухлинну, антитоксичну і радіопротекторну дію

1. Препарат, який має протипухлинну, антитоксичну і радіопротекторну дію, що включає видоспецифічну двоспіральну ДНК, який відрізняється тим, що як ДНК використовують ДНК у складі фрагментованого до 200-2000 пар нуклеотидів нуклеопротеїдного комплексу, що містить, % мас.: ДНК 40-80 зв'язані з ДНК білки ядерного матриксу 20-60. 2. Препарат за п. 1, який відрізняється тим, що для одержання препарату використовують видоспецифічну біологічну сировину. 3. Препарат за п. 2, який відрізняється тим, що як видоспецифічну сировину використовують плаценту людини. Винахід відноситься до медицини, зокрема, фармакології, і може бути використаний в клінічній практиці для лікування злоякісних новоутворень. Сучасна медицина має у своєму розпорядженні досить великий арсенал лікарських препаратів для хіміотерапії пухлин. В основному хіміотерапевтичні засоби представлені групою цитостатичних препаратів, серед яких найбільш поширеними й ефективними є алкілувальні цитостатики типу циклофосфану, хлорбутину і сарколізину. Через більш низьку цитостатичну, антипроліферативну активності в меншому ступені застосовуються препарати з групи антиметаболітів (азатіоприн, фторурацил та ін.). Природні протипухлинні препарати рослинного (колхіцин та ін.) і бактеріального (руброміцин та ін.) походження мають також обмежене застосування через високу токсичність і вузький терапевтичний спектр дії (лікування деяких різновидів пухлин, переважно з екзофітним ростом). В даний час на фармацевтичному ринку протипухлинних препаратів відсутні лікарські засоби, що мають комплексну фармакологічну дію, а саме, мають власну протипухлинну активність у поєднанні з радіопротекторною і анти токсичною дією при проведенні комплексної хіміотерапії, переважно, з використанням алкілувальних цитостатиків і рентгенотерапії пухлин. Відоме використання алкілувальних цитостатиків типу циклофосфану, що мають широкий терапевтичний спектр, для терапії найбільш поширених злоякісних новоутворень: раку легень, раку молочної залози, сарком, раку яєчників та ін. [М.Д. Машковский, Лекарственные средства, ч.ІІ, Μ., Медицина, 1993, с.498-499; с.501-502]. Недоліком даних препаратів є їхня висока токсичність і пригнічувальний вплив на лейкопоез. Розвиток лейкопенії є небезпечним ускладненням в терапії злоякісних новоутворень цитостатиками, тому що створює загрозу розвитку кровотеч, зниження імунологічної резистентності і поширення суперінфекції. Практично будь-яка інфекція на тлі проведення цитостатичної терапії, наприклад, циклофосфаном чи сарколізином, може викликати септичні ускладнення, що практично не піддаються лікуванню сучасними антибактеріальними препаратами, тому що відсутні клітинні і гуморальні механізми природної резистентності через пригнічення цитостатиками. (19) UA (11) 78215 (13) C2 (21) 2004010639 (22) 28.01.2004 (24) 15.03.2007 (31) 2003115627 (32) 27.05.2003 (33) RU (46) 15.03.2007, Бюл. № 3, 2007 р. (72) Шурдов Мі хаіл Аркадьєвіч, RU, Якубов Лєонід Анатольєвіч, RU, Богачєв Сєргєй Станіславовіч, RU, Троіцкій Алєксандр Васільєвіч, RU, Вєрєщагін Євгєній Івановіч, RU (73) Шурдов Міхаіл Аркадьєвіч, RU (56) RU C1 2078581 10.05.1997 RU C1 2194502 20.12.2002 3 78215 4 Зараз найбільш ефективним способом при ліценту розморожують протягом 5-6 годин, промикуванні солідних пухлин є у рентгенотерапія [Е. вають, гомогенизують у 10мМ трис-НСІ буфері (рН Браунвальд, Внутренние болезни, 2т., М., Меди7,5), що містить 1мМ ЕДТА. В одержаний гомогецина, 1993, с.501-505], однак вона має також значнат додають додецилсульфат натрію до кінцевої ний процент ускладнень, насамперед зв'язаних з концентрації 2% та інкубують при 65°С протягом 6імуносупресією, пригніченням білого паростка кро24 годин. До одержаного лізату додають хлорид ві і розвитком суперінфекції. натрію до кінцевої концентрації 2М та інкубують Найбільш близьким до препарату, що заявляпротягом 3-12 годин при 65°С. Після інкубації лізат ється, прототипом, є препарат «Дезоксинат», що центрифугують при 9000´g протягом 10 хвилин. представляє собою натрієву сіль двоспиральної До одержаного супернатанту додають рівний об'єм дезоксирибонуклеїнової кислоти, одержувану з ацетону, охолодженого до +10°С, для осадження молочка осетрових риб, частково деполімеризовануклеопротеїдного комплексу (НПК). Одержаний ну за допомогою ультразвуку до молекулярної НПК тричі промивають охолодженим ацетоном і маси 2,7-4,0´105дальтон. Вміст ДНК у препараті 96° етиловим спиртом для видалення незв'язаних більше 90%, як домішки в препараті присутні РНК з ДНК низькомолекулярних білків і пептидів. Очи(від 3 до 5%) і білки негістонового типу, зв'язаніз щений НПК розчиняють при 65°С в 10мМ трис-НСІ ДНК (ФС 42-3924-00). Препарат має антитоксичну і буфері (рН 7,5), що містить 1мМ ЕДТА, потім розрадіопротекторну дію і використовується як стимучин центрифугують при 9000´g протягом 10 хвилятор лейкопоезу при хіміопроменевій терапії, що лин, супернатант фільтрують крізь скляний фільтр проводиться онкологічним хворим. Препарат виіз діаметром пір 120мкм і піддають його дії ультрапускається у виді 0,5% розчину і призначений для звуку з частотою 11-44кГц для фрагментації НПК. підшкірного і внутрішньом'язового введення з розГлибину фрагментації контролюють за допомогою рахунку 75мг активної речовини незалежно від віку електрофореза і по досягненні необхідного діапахворого. зону в. межах 200-2000 пар нуклеотидів процес Недоліками «Дезоксинату» є: впливу ультразвуком зупиняють. Розчин фрагмен- ДНК, що міститься в «Дезоксинаті», не має тованого НПК центрифугують при. 9000´g протявидової специфічності, гетерологічна і тому може гом 10 хвилин, потім додають двократний об'єм викликати алергійні і пірогенні реакції, що виявляохолодженого 96° етилового спирту. Осаджений ються у виді підвищення температури. З цієї приНПК промивають 70° етиловим спиртом і після чини препарат не може бути введений внутрішйого висушування одержують препарат, що заявньовенно через можливий розвиток ляється. анафілактичного шоку, що часто спостерігається Вихід цільового продукту складає 0,3-0,5% від при внутрішньовенних інфузіях видонеспецифічвихідної сировини, вміст основної речовини (нукних біологічних субстанцій. леопротеїдного комплексу) складає 95,0-99,5%. - «Дезоксинат» не має власної протипухлинної Молекулярна маса нуклеопротеїдного комплексу активності і тому застосовується лише як допоміж1,5´106дальтон. Перед використанням, препарат ний лейкостимулюючий препарат для профілактирозчиняють у фармацевтично прийнятному розки мієлодепресій при хіміопроменевій терапії ончиннику до вмісту основної речовини 0,5-4,0%. Як кологічних хворих. При цьому, лейкостимулюючий фармацевтично прийнятний розчинник використоефект розвивається повільно і стійкі зміни спостевують переважно фосфатну чи трис-НСІ буферну рігаються через 4-10 днів. Радіопротекторний суміш, фізіологічний розчин. ефект «Дезоксинату» носить непрямий характер і Визначальними суттєвими відмінностями преспрямований на корекцію лейкопенії і стимуляцію парату, що заявляється, від препарату-прототипу імунітету, що розвиваються при гострій променевій є таке: хворобі ll-Іll ступеня тяжкості. - препарат, що заявляється, містить нативний, Технічною задачею даного винаходу є ствовидоспецифічний фрагментований нуклеопротеїдрення препарату з видоспецифічної сировини, що ний комплекс, що складається з д.с.ДНК і зв'язамає протипухлинну, антитоксичну і радіопротектоних з нею білків ядерного матриксу, при співвідрну дію. ношенні: д.с.ДНК - 40-80%, білки 20-60%, що Поставлена технічна задача досягається продозволяє розширити спектр терапевтичної активпонованим препаратом на основі фрагментованності препарату: останній має власну протипухного до 200-2000 пар нуклеотидів нуклеопротеїдлинну активність у поєднанні з прямою радіопроного комплексу, виділеного з плаценти людини, текторною і антитоксичною дією який містить, у %мас.: (лейкостимулюючою); двоспіральну ДНК 40-80, - за рахунок визначеної глибини фрагментації білки ядерного матриксу 20-60. нуклеопротеїдного комплексу (200-2000 пар нукПрепарат, що заявляється, одержують у такий леотидів) препарат, що заявляється, можна віднеспосіб. сти до нативних препаратів, що містять повний Плаценту від здорових породілей, перевірену набір фрагментів геному людини і, відповідно, при на гепатит, ВІЛ-інфекцію і сифіліс, заморожують і терапії онкологічних захворювань у людини презберігають при -20°С в окремому стерильному парат має замісну, рецепторно-опосередковану, поліетиленовому пакеті, супроводжуваному санігенно-репаративу функцію, а також анаболічну і тарно-гігієнічним паспортом, до моменту одержантрофічну. У прототипі ступінь фрагментації вище ня препарату (умовна назва «Панаген»), але не (молекулярно-масовий розподіл знаходиться в більше 1 року з моменту заготівлі. інтервалі 2,7-4,0´105дальтон), що робить препарат Після накопичення необхідної кількості, плабільш віддаленим від нативних препаратів, що 5 78215 6 містять фрагменти геному, до того ж біологічна комплексну фармакологічну активність. сировина не видоспецифічна, гетерологічна і, відПротипухлинна активність препарату, що заповідно, при терапії онкологічних захворювань у являється, досліджена на моделі in vivo. Лінійнослюдини функція препарату буде лише анаболічпецифичну пухлин у ГА-1, підтримувану в асцитній ною чи трофічною; формі на мишах лінії A/Sn, трансплантували вн ут- препарат, що заявляється, через видосперішньом'язово (106 пухлинних клітин) сингенним цифічність і гомологічність біологічного матеріалу мишам A/Sn. Через 6 днів цим самим мишам про(плацента людини) може вводитися внутрішньотягом 11 днів вводили внутрішньочеревинно превенно, завдяки чому лейкостимулюючий ефект парат, що заявляється, одержаний із плаценти при сполученні з хіміотерапією цитостатиками людини, і НПК, одержаний з печінки мишей лінії розвивається швидше і більш виражений. СВА; як контроль використовували фізіологічний Відомі препарати з плаценти людини, застосорозчин. Експериментальні тварини були розділені вувані для стимуляції процесів регенерації ранена групи: вих поверхонь різної етіології, а також використо1-а група. Контрольні миші, введення фізіоловувані для лікування виразкової хвороби шлунка, гічного розчину. переважно, у виді екстрактів для внутрішньом'язо2-а група. Експериментальні миші, введення вих і підшкірних ін'єкцій [Машковский Μ Д. ЛекарсНПК із плаценти людини (доза 0,5мг на мишу щотвенные средства. Ч.І, Ч.ІІ. - 12-е изд., перераб., дня). испр. и доп. - М., 1996]. Однак, з доступних джерел 3-я група. Експериментальні миші, введення не виявлено відомостей про препарат, аналогічНПК із печінки мишей лінії СВА (доза 0,5мг на миний тому, що заявляється, який має вищезгадану шу щодня). Таблиця 1 V11 0,43±0,1 0,23±0,04 0,14±0,03 Р1-2