Засіб для лікування і профілактики інфекційних захворювань людини, що передаються статевим шляхом, і спосіб його одержання

1. Засіб для лікування і профілактики захворювань людини, що передаються статевим шляхом, який містить як активне начало мікробну масу, сорбент і біологічно активну добавку, який відрізняє ться тим, що містить композицію у вигляді водної суспензії, що складається з кремнієорганічного сорбенту поліметилсилоксану у вигляді гідрогелю метилкремнієвої кислоти в кількості від 10 до 99,5 мас. % і неорганічних сорбентів: аеросилу та/або глинястих мінералів у кількості від 90 до 0,5 мас. %, як мікробну масу містить один чи кілька видів живих чи убитих еубіотичних бактерій, вибраних з групи: біфідобактерії, лактобацили, лактококи і стрептококи, у кількості від 0,01 до 50 мас. % від маси водної суспензії сорбентів, як біологічну активну добавку містить олії та/або екстракти рослин, та/або інші речовини, що мають фунгіцидну та/або бактерицидну, та/або регенеруючу тканини активність в кількості від 0,01 до 10 мас. % від отриманої водної суспензії. 2. Засіб за п. 1, який відрізняється тим, що має форму супозиторія. 3. Засіб за п. 1, який відрізняється тим, що містить прийнятну мазеву основу. C2 2 (19) 1 3 82282 бактерій, вірусів і грибів. Мікози і дисбактеріози піхви одержали широке поширення. Особливе значення набули бактеріальні і вірусні захворювання людини, що передаються статевим шляхом. Крім відомих, до них, насамперед, відносяться сироватковий гепатит і СНІД. Пошук профілактичних засобів, спрямованих проти цих патологічних станів, надбав високої актуальності. Профілактика виникнення захворювань при статевому акті є важливим моментом у вирішенні цього питання. Це досягається застосуванням різних механічних, хімічних і біологічних засобів. Пошук композицій., що складаються з сорбціонних матеріалів, нормальної мікрофлори статевих біотопів та речовин природного походження, що не допускають проникнення і колонізацію сторонньою мікрофлорою і вірусами цих біотопів, є одним з напрямків профілактики цих станів. Для лікування вагінітів та вагінозів у жінок у даний час застосовують препарати місцевого призначення у вигляді супозиторій для піхви, що містять еубіотичну мікрофлору або антибіотики, а також мазі, до складу яких входять бактерицидні, фунгіцидні і регенеруючі речовини. Препаратів, спрямованих на профілактику інфекційних захворювань статевого біотопу чоловіків, не існує. Також не існує спеціальних композицій сорбентів для інтимного застосування для чоловіків і жінок, які містять еубіотичну мікрофлору. З косметичних засобів для застосування у піхву відомі інтимні гелі лубріканти, наприклад, фірми "Faberlic" і "Masculan", що містять протизапальні і ранозагоювальні речовини, але не мають у своєму складі нормальної мікрофлори статевих біотопів і сорбентів спеціального призначення. Найбільш близьким до рішення, що заявляється, є препарат для лікування бактеріального вагінозу, спосіб його одержання і спосіб лікування бактеріального вагінозу [Патент РФ №2248212, А61К35/74, 20.03.2005 і патент України №65702А, А61К35/66, А61К35/74, F61K9/02, А61К9/06, 15.04.2004], що містить у своєму складі мікробну масу живих еубіотичних бактерій у кількості 105-109 на одну дозу, прийнятний сорбент при його масовому співвідношенні до мікробної маси (9-1):(1-9), біологічно активну антимікробну та/або фунгіцидну добавку в кількості 0,05-3мас.% щодо маси одержуваного препарату у виді рослинних олій і екстрактів і як основу прийнятну жирову основу, що містить не більш 5мас.% води. Препарат являє собою суппозиторії або мазь. Спосіб одержання препарату включає попередню іммобілізацію еубіотичної мікрофлори на частках сорбціонного матеріалу розміром не більш 100мкм, що мають активну іммобілізуючу поверхню від 10 до 100%, з наступним ліофільним висушуванням. Ліофілізовану біомасу живих мікроорганізмів змішують з іншими компонентами препарату, у тому числі жировою основою, зберігаючи зміст вологи не більш 5мас.%. Хоча антиінфекційна активність і приживлення еубіотичних мікроорганізмів у піхві характеризується досить високими показниками, відомий засіб має ряд недоліків. Зокрема, 4 сорбенти, що використовуються, мають низьку сорбційно-деструктивну, противірусн у та антибактеріальну дію, що обмежує їх застосування. Крім того, протиінфекційна дія знижується за рахунок високого змісту емульгованих жирів у гідрофобній основі засобу і невеликої кількості води (не більш 5мас.%). І, нарешті, до складу засобу включена тільки жива біомаса еубіотичних мікроорганізмів і в недостатньої концентрації (105-9 мікробних клітин на дозу), що виправдано при виготовленні гідрофобних мазей і супозиторій,але не виправдано при виготовленні гідрофільних мазей у вигляді паст, гелів, кремів і суспензій. Крім того додаткові введені у кількості 0,05-3мас.% обмежують можливості конструювання засобу. Метою дійсного винаходу є створення інтимного засобу у формі мазі у вигляді мазі емульсіонного типу (крему), пасти, суспензії або супозиторій для чоловіків і жінок, що володіє підвищеною сорбційно-деструктивною лікувальнопрофілактичною дією проти агресивної мікрофлори, що проникнула у статеві біотопи людини, і додатково має профілактичну дію щодо захворювань вірусної етіології, що передаються статевим шляхом, а також деяких захворювань, що передаються при нетрадиційному статевому акті. Технічним результатом винаходу є створення засобу для лікування і профілактики захворювань статевої системи людини, що передаються статевим шляхом, а також деяких інших захворювань людини, які виникають при нетрадиційному статевому акті; засобу, що володіє вираженим противірусним, протимікробним ефектом. Технічний результат досягається за рахунок того, що засіб, який заявляється, утримує як активний початок мікробну масу, сорбент і біологічно активну добавку; у якості сорбенту містить композицію, що складається з кремнійорганічного сорбенту поліметилсилоксану у вигляді гідрогелю метилкремнієвої кислоти в кількості від 10 до 99,5мас.% і неорганічних сорбентів: кремній діоксида (аеросила) та/або глинястих мінералів у кількості від 90 до 0,5мас.%, виготовлену у вигляді 5-95% водної суспензії; у якості мікробної маси засіб містить один чи кілька видів живих чи убити х е убіотичних бактерій, обраних з групи; біфідобактерії. лактобацили. лактококи і стрептококи; у кількості від 0.01 до 50мас.% від маси водної суспензії сорбентів; засіб також містить у якості біологічно активних добавок олії та/або екстракти рослин та/або інших речовин, що володіють фунгіцидною та/або бактеріцидною та/або регенеруючою тканини активністю в кількості від 0,01 до 10мас.% від маси водної суспензії сорбентів. У частині способу одержання засобу, що заявляється, технічний результат досягається тим, що готують 5-95% водну суспензію композиції сорбентів, що складається з гідрогелю метилкремнієвої кислоти в кількості від 10 до 99,5мас.% і аеросила та/або глинястих мінералів у кількості від 90 до 0,5мас.%; у неї вносять живу чи 5 82282 вбиту мікробну масу, що містить від 108 до 1012 клітин у 1см 3 одного чи декількох видів живих чи убити х еубіотичних бактерій, обраних з груп: біфідобактерії, лактобацили, лактококи і стрептококи, у кількості 0,01-50мас.% від водної сорбціонної композиції, і біологічно активні добавки у вигляді олій та/або екстрактів рослин та/або інших речовин, що володіють фунгіцидною та/або бактеріцидною та/або регенеруючою тканини активністю, у кількості 0,01 до 10мас.% від отриманої масі речовини, і перемішують до повної гомогенізації. У засіб може бути додана прийнятна мазева основа. Засіб може бути отриманий у вигляді мазі емульсіонного типу, пасти, суппозиторії чи суспензіонної мазі. Введення в сорбціонний комплекс гідрогелю метилкремнієвої кислоти, непридатної для конструювання іммобілізованих бактеріальних засобів, обгрунтовано її властивістю деструктувати клітинні стінки бактерій і сорбувати на собі вірусні частки. Введення в сорбціонний комплекс інших сорбентів доповнює ций ефект та додає додаткові мазеві властивості. Композиція, яка містить від 10 до 99,5мас.% поліметилсилоксану у вигляді гідрогелю метилкремнієвої кислоти і від 90 до 0,5мас.% аеросила та/або глинястих мінералів у вигляді 595% водної суспензії сорбентів є оптимальною. Включення біомаси живих чи убитих еубіотичних бактерій, характерних для статевих біотопів людини, зокрема лактобацил, обгрунтовано тим, що у присутності сорбентів вони в значній мірі активізують протиінфекційний ефект, підсилюючи колонізаційну резистентність біотопу піхви і біотопу крайньої плоті у чоловіків. Регенеруючий, пом'якшуючий і додатковий бактерицидний і фунгіцидний ефект досягається введенням до складу засобу, що заявляється, добавок рослинного походження, зокрема, олій і екстрактів рослин у кількості від 0,01 до 10мас.% щодо водної суспензії сорбентів. Ці речовини при різних варіаціях у межах, що заявляються, забезпечують необхідний рН, консистенцію засобу, що заявляється у вигляді мазі емульсіонного типу, пасти або суспензії. Консистенцію засобу також визначає прийнятна мазева основа. Приклад 1 Визначення противірусної активності засобу, що заявляється, виготовленого в вигляді пасти. У дослідженні була використана композиція, що складається з сорбціонного комплексу, що включає 62,2мас.% гідрогелю метилкремнієвої кислоти і 3,3мас.% аеросила та 34,5мас.% води. В отриману пасту було введено 1мас.% ліофілізованої біомаси убитих лактобацил і від отриманої маси речовини 0,05мас.% рослинних екстрактів. Отриману пасту гомогенізували. Противірусну активність засобу вивчали по його здатності сорбувати HBsAg (основний маркер вірусного гепатиту В) із сироватки крові, отриманої від донорів-носіїв. Методом імуноферментного аналізу (ІФА) в антигенвміщуючій сироватці, обробленої засобом, 6 що заявляється, у порівнянні з вихідної антигенвміщуючою сироваткою, визначали титр HBsAg. Для проведення ІФА використовували імуноферментну тест-систему для виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту В, модифіковану "ІФА-HBsAg/M", виробництва НПО "Діагностичні системи" (Росія, Нижній Новгород). У досліді була використана сироватка донора-носія, що містить HBsAg, консервована мертиолятом натрію 1:10000, з оптичною щільністю (Ощ) у ІФА 1,237. Засіб, що заявляється, вносили в сироватку в співвідношенні 1:0,5 (одна частина сироватки, 0,5 частини засобу). Тривалість інкубації складала 30хв при температурі 37°С и перемішуванні через кожні 10 хвилин. Осадження засобу в антигенвміщуючій сироватці здійснювали центрифугуванням при 1500об/хв протягом 5хв. У досліді постановку ІФА проводили з дворазовими розведеннями надосаду, обробленого засобом у триразовому дублікаті рядів. Контролем була постановка ІФА з дворазовими розведеннями антигенвміщуючій сироватки, не обробленої засобом у триразовому дублікаті рядів. ІФА проводили в повній відповідності з інструкцією з застосування тест-системи. Вимір Ощ проведений при довжині хвилі 450нм щодо референс-фільтра 620нм. К-ср=0,010. Cut off=K-cp+коефіцієнт 0,06=0,010+0,06=0,070 (перевищення значення Cut off позначає присутність антигену в пробі). Результати досліджень приведені в таблиці 1. Таблиця Дослід 1. Схема дослідження й облік реакції. Конт. Розведення Т/С сироватки 1 А 4 5 6 7 Кратніс зниженн HBsAg 8 Вих. Вих. Вих. Вих. 2,82 Дослід 2 3 Вих. Blank Вих. + + 0,016 1,123 1,108 Контроль + 1,237 1,223 1,190 1,065 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1,106 2,967 0,706 0,720 0,698 0,749 0,798 0,804 K+1 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1,126 2,899 0,415 0,430 0,392 0,478 0,435 0,480 К1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1,33 0,008 0,243 0,251 0,217 0,289 0,315 0,342 1:16 1:16 1:16 1:16 1:16 К1:16+ + + + + + 1,546 K+1 1:2 + В С D Е F G 0,013 0,140 0,135 0,104 0,181 0,206 0,199 1:32 1:32 К- 1:32 + 1:32+ 1:32+ 1:32+ + + 1,61 0,009 0,082 0,078 0,071 0,111 0,132 0,129 1:64 1:64 1:64 К1:64 - 1:64 1:64 Елімінац + + + 0,011 0,051 0,097 0,094 0,103 7 82282 0,045 0,034 8 2,869 0,340 0,323 0,328 0,294 0,243 0,251 1:128 1:128 1:128 К+2 1:128- 1:128 1:128 Елімінація + 1:16 + 1:16 1:16+ 1:16 1:16 К1:16 + + + D + + + 0,0010 0,211 0,226 0,117 Н 0,985 0,023 0,076 0,078 0,081 0,128 0,140 0,135 0,017 0,037 К1:32 + 1:32 + 1:32 1:32 1:32 1:32 Е + + + + 0,008 0,128 0,143 У таблиці 1 рядки (А-Н) позначають 0,078 0,081 0,082 0,092 розведення сироватки від вихідної концентрації К1:64 + 1:64 + 1:64 1:64 1:64 1:64 (вих.) до розведення 1:128. Стовпчики позначають: F 0,016 0,086 0,099 1 - контрольні тест-системи; 2-4 - повторність 0,051 0,045 0,062 0,070 досліду; 5-7 - повторність контролю; 8 - кратність К1:128+ 1:128+ 1:128 1:128 1:128 1:128 зниження концентрації вірусів у досліді в G 0,012 0,075 0,085 порівнянні з контролем; (+ і -) позначають 0,023 0,017 0,023 0,017 наявність чи відсутність антигену. К + 2 1:25 - 1:256 1:256 1:256 1:256 1:256 Дані таблиці 1 свідчать, що засіб, що Н 1,002 0,034 заявляється, при використаному сполученні 0,028 0,023 0,027 0,018 0,021 компонентів у розведенні вірусвміщуючій сироватки 1:64 цілком і незворотньо елімінує У таблиці рядки (А-Н) позначають розведення віруси гепатиту В із середовища (у таблиці сироватки від вихідної концентрації (вих.) до виділено жирним шрифтом). До розведення 1:32 розведення 1:256. Стовпчики позначають: 1 спостерігається часткова елімінація вірусів. У контроль тест-системи; 2-3 - контроль сироватки цьому випадку титр HbsAg у досліді знижується в без сорбенту (дві повторності); 4-11 - по дві 1,59 рази, у порівнянні з контролем. Титр повторності різних сполучень сорбціонного антигенвміщуючої сироватки в контрольному комплексу; (+ і -) - позначають наявність чи дослідженні склав 1:128 у всіх трьох повторностях. відсутність антигену. З огляду на те, що в секретах статевих біотопів Результати дослідів, представлені в таблиці 2, людини HBsAg у со тні разів менше, ніж у сироватці свідчать, що зменшення концентрації крові, можна говорите про істотню профілактичну поліметилсилоксана, представленого гідрогелем противірусну ефективність засобу, що метилкремнієвої кислоти, приводить до зниження заявляється, у тому числі і проти Віл-інфекції. кількості сорбованого HвsAg, що видно по Приклад 2 наростанню титру антигену при збільшенні змісту Визначення границь противірусної дії цього сорбенту в засобі, що заявляється. сорбціонної композиції в засобі, що заявляється. Противірусна активність сорбціонної композиції Границі противірусної дії сорбціонної зберігається в межах змісту поліметилсилоксана композиції в засобі, що заявляється, вивчали на від 99,5 до 10мас.% від маси композиції (у таблиці прикладі сорбції HbsAg. Для цього 2 виділено жирним шрифтом). Вирішального використовували різні співвідношення сорбентів у противірусного ефекту аеросилу в засобі, що двох крайніх сполученнях: гідрогелю заявляється, не виявлено. поліметилсилоксана (ПМС) - 10 і аеросила (А) Таким чином, введення в статеві біотопи 90мас.% і гідрогелю поліметилсилоксана - 99,5 і засобу, що заявляється, перед статевим актом аеросила - 0,5мас.%. і проміжних сполученнях має попереджуючий профілактичний і 96,7:3,3 і 10:90мас.%. В кожний з варіантів противірусний ефект за рахунок незворотньої сорбціонного комплексу вводили 34,5мас.% води. сорбції вірусних часток і виведенням їх разом із Дослідження проводили методом, описаним у секретом з порожнин статевих біотопів. прикладі 1, але в двукратних повторностях. Схема Приклад 3 дослідження і облік реакції аналогічний. Вимір Ощ Визначення зон протимікробної дії засобу. проведений при довжині хвилі 450нм щодо Визначення зон протимікробної дії засобу референс-фільтра 620нм. К-ср=0,012. Cut off=Кпроводили методом мікробіологічних досліджень. cр+коефіцієнт 0,06=0,012+0,06=0,072. Для цього готували композицію сорбентів у співвідношенні, що показало високий результат Таблиця 2 противірусної дії (62,2мас.% поліметилсилоксана у виді гідро гелю кремнієвої кислоти і 3,3мас.% Схема дослідження та обліку границь противірусної активності засобу. аеросила і 34,5мас.% води). В отриману сорбціонну композицію вводили різну кількість Співвідношення поліметилсілоксанаубитих лактобацил від 0,01 до 50мас.%. біомаси і аэросила в Конт. Сироватка без сорбціонному комплексі засобумасу вносили в суспензію золотистих Виготовлену т/с сорбенту. ПМС-99,5 ПМС-96,7 ПМС-10,0 ПМС-0,5 Астафілококів і в суспензію клебсіел при вихідному А-0,5 А-3,3 А-90,0 бактерій 99,5 бактеріальних клітин у 1мл у вмісті 106 1 2 3 4 5 6 7 8співвідношенні: 3мл 11 9 10 бактеріальної суспензії і 1см 3 Blank 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2 + 1:2засобу, + що заявляється. Після 24 годинної + 1:2 1:2 + 1:2 + А 0,012 0,765 0,790 0,734 0,742 0,716 0,720 0,736 0,729 0,812 0,785 експозиції при кімнатній температурі засіб К+1 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4 + 1:4осаджували1:4центрифугуванням при 1500об/хв + 1:4 + + 1:4 + В 2,896 0,457 0,432 0,437 0,403 0,415 0,430 0,385 0,416 0,425хвилин. Надосад висівали на протягом 15 0,427 С К+1 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8 + 1:8відповідні для +умовнопатогенних мікроорганізмів + 1:8 + 1:8 1:8 + елективні середовища по 0,01мл. Контролем 0,303 1:16 + 0,164 1:32 + 0,082 1:64 + 0,073 1:128 0,023 1:256 0,015 0,269 1:16 + 0,170 1:32 + 0,078 0 1 0 1 0 1:64 - 1 0,045 0 1:128 0,017 1:256 0,019 1: 0 1 0 9 82282 служив надосад бактеріальної суспензії без обробки засобом. Постановка мала 10 повторностей. Результати дослідів представлені в таблиці 3. 10 просліджується як у модельних експериментах, так і в клінічних спостереженнях. Таблиця 3 Вплив засобу, що заявляється, на умовнопатогену мікрофлору в експериментах in vitro (ін вітро) Умовно патогенні бактерії. S.aureus K.pneumoniae Дослідні зразки (КОЕ) Кількість біомаси лактобацил в мас. % від маси сорбціонної композиції, що введена в засіб 0,01 1 50 60 20±12 16±8 0 0 58±18 37±12 0 0 Контрольні зразки (КОЕ) >600 >600 З поставлених дослідів випливає, що лактобацили в складі засобу сприяють очищенню бактеріальної суспензії. Ефект від введення біомаси лактобацил спостерігається при 0,01мас.% , а при досягненні високих рівнів: 50мас.% і більш - умовнопатогенна мікрофлора припиняє висіватися. Приклад 4. Клінічне спостереження за чоловіками. Вивчали вплив засобу в короткому клінічному спостереженні на 10 чоловіках добровольцях. Ціль дослідження складалася у визначенні можливості звільнення біотопу під крайньою плоттю penis засобом при його дворазовому нанесенні в біотоп протягом доби. Для цього після сну ранком проводили посів вмісту біотопу penis на середовище Эндо, кров'яний агар, середовище Сабуро, і на молочно-жовтково-сольовий агар. Після дворазового нанесення засобу протягом дня, увечері виконували аналогічні посіви з біотопу. Результати клінічного спостереження представлені в таблиці 4. Таблиця 4 Вплив засобу, що заявляється, на мікрофлору біотопу крайньої плоті в чоловіків Мікроорганізми, поживні середовища Кров'яний агар Мікробне число МЖС А. С тафілококи ЭНДО Эндобактерії САБУРО. Гриби рода Кандида Контрольні посіви (КОЕ) Дослідні посіви (КОЕ) Бактерицидний ефект. 2386±78 840±61 314±102 953±38 Дані, приведені в таблиці 4, показують, що засіб, що заявляється, при нанесенні його в біотоп статевого органу чоловіків сприяє елімінації мікрофлори і очищенню біотопу. Як свідчать результати короткого клінічного спостереження, одноденне застосування засобу знижує рівень обсімененості голівки статевого органу чоловіків по загальному мікробному числу в 10,5 разів, при цьому спостерігається зниження росту стафілококів, грибів і мікроорганізмів, здатних рости на агарі ЭНДО. Таким чином, засіб у складі, що заявляється, і способі виготовлення має виражений противірусний, протимікробний ефект, що 226±16 32±4 95±67 14±3 10,5 26,3 3,3 68,1