Спосіб виготовлення бактеріального родентицидного препарату

Реферат: Спосіб виготовлення бактеріального родентицидного препарату, що включає: приготування зернової основи з додаванням до його складу ароматично-смакової принади, одержання посівної культури бактерій на ферментері, інокуляцію зернової основи посівною культурою Salmonella enteritidis var. Issatschenko та її дорощування. Зернову основу замочують у гарячому слабко лужному розчині. Як ароматично-смакову принаду використовують олію соняшникову нерафіновану. Інокуляцію зернової основи проводять штамом бактерій S. enteritidis var. Issatschenko Ч-1, депонованим у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за реєстраційним номером 434. UA 91682 U (12) UA 91682 U UA 91682 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі біотехнології, а саме стосується одержання бактеріального родентицидного препарату, який застосовують для боротьби зі шкодочинними мишоподібними гризунами в сільському господарстві. Відомий спосіб виготовлення бактеріального родентицидного препарату Бактеродента, який передбачає використання двох компонентів: культури бактерій Salmonella typhimurium № 371 і бродіфакуму. Недоліком цього способу є його багатокомпонентність та низька вибірковість дії через вміст у препараті хімічного антикоагулянту, хоч і у значно менших кількостях порівняно зі звичайною хімічною принадою. Тому він є токсичним для всіх видів теплокровних тварин, у тому числі і для людини [1,2]. Найближчим відомим аналогом заявленої корисної моделі є спосіб виготовлення препарату для знищення гризунів Бактороденцид шляхом вирощування бактерій Salmonella enteritidis var. Issatschenko на розпареному зерні злаків. Даний спосіб включає виготовлення маточної культури, замочування і стерилізацію зерна злаків з подальшим його зараженням бактеріями та дорощування клітин Salmonella enteritidis var. Issatschenko на зерновому середовищі. Недоліками відомого способу виготовлення препарату є його складність та трудомісткість, що зумовлює одержання не достатньо якісного родентицидного препарату [3]. В основу корисної моделі поставлено задачу створити спосіб виготовлення бактеріального родентицидного препарату, який забезпечить підвищення його якості. Поставлена задача вирішується завдяки створенню нового способу виготовлення бактеріального родентицидного препарату, що включає виконання наступних етапів: 1. Приготування зернової основи з додаванням до його складу ароматично-смакової принади. 2. Одержання посівної культури бактерій на ферментері БІОР 250, інокуляцію зернової основи посівною культурою S. enteritidis var. lssatschenko та її дорощування, згідно з корисною моделлю, зернову основу замочують у гарячому слабко лужному розчині упродовж 1-2 години, як ароматично-смакову принаду використовують олію соняшникову нерафіновану, а інокуляцію зернової основи проводять штамом бактерій S. enteritidis var. lssatschenko Ч-1. Спосіб одержання бактеріального родентицидного препарату, що заявляється, здійснюється наступним чином. Для приготування зернової основи препарату використовують чисте доброякісне зерно пшениці, жита, ячменю, вівса тощо. Спочатку зерно замочують у гарячому слабко лужному розчині упродовж 1-2 годин, після чого промивають і до нього додають нерафіновану соняшникову олію у кількості 1-4 % до маси зерна. Стерилізацію зернової основи здійснюють в автоклаві за 1,5 атм. упродовж 1,5 години. Додавання соняшникової олії слугує атрактантом для гризунів і, завдяки обволікаючим властивостям, впливає на розсипчастість зернової основи, що дозволяє покращити якість препарату. Замочування зерна у гарячому слабо лужному розчині упродовж 1-2 годин обумовлює його краще очищення від забруднення, сприяє швидкому проникненню бактерій у товщу зерна, зменшує затрати ручної праці та скорочує строк приготування зернової основи. Для виготовлення препарату використовують штам Ч-1 бактерій S. enteritidis var. lssatschenko. Штам мікроорганізму є природним родентопатогеном та є безпечним для людини, свійських і корисних диких тварин. Контрольно-виробничий штам S. enteritidis var. lssatschenko Ч-1 депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (м. Київ, вул. Донецька, 30) 26 вересня 2007 року за реєстраційним номером 434. [4] Використання зазначеного штаму зі стабільними культурально-морфологічними та патогенними властивостями забезпечує одержання ефективного родентицидного препарату. Культура бактерій S. enteritidis var.Issatchenko штам Ч-1, яка зберігається у ліофілізованому стані в ампулах, оживлюється шляхом висіву на ΜΠΑ. Посівну культуру готують у посудинах з рідким дріжджовим середовищем, засіваючи їх суспензією бактерій тифу гризунів на фізіологічному розчині з агарових косяків ΜΠΑ з розрахунку 5 % на посудину. Робоча ферментацію проводять у ферментері БІОР -250 ємністю 150 літрів на середовищі, що містить, %: екстракт кормових дріжджів 0,5±0,02 сухий кухонна сіль 0,5±0,02 питна вода решта. рН 7,2-7,4 доводиться 1 UA 91682 U 5 10 15 розчином питної соди Середовище вищезазначеного складу стерилізується впродовж 1,5 години за надання гострої пари Ρ = 3 атм. за 130-135 С. Коефіцієнт заповнення ферментера 0,5. Після стерилізації та охолодження поживного середовища до ферментера вносять до 10 % посівного матеріалу. Ферментацію проводять за температурою 37 °C з постійною аерацією 100 літрів повітря на середовище за хвилину. Мішалка працює у постійному режимі - 10-13 обертів за хвилину. Через 12 години ферментація зупиняється та перевіряється титр бактеріальних клітин. Інокуляцію бактерій на зернову основу здійснюють шляхом змішування культуральної рідини з зерновою основою. Дорощування інокульованого бактеріями зерна здійснюють протягом доби за температури 37 °C. Реалізація відмінних ознак корисної моделі забезпечує виготовлення бактеріального родентицидного препарату, який має більшу віруленність, набуває додаткової принадності для гризунів при зменшенні тривалості виготовлення препарату й затрат ручної праці. Ефективність від застосування на відкритих площах бактеріального родентицидного препарату, виготовленого таким способом, складає 94 %. Можливість здійснення корисної моделі підтверджується наступними прикладами. Приклад 1. Дослідження якості посівного матеріалу здійснюють шляхом визначення титру життєздатних клітин, характерних для виробничого штаму бактерій. Таблиця 1 Порівняльна характеристика якості одержання посівного матеріалу Одержаний посівний матеріал Час культивування культури, год. За відомим способом За запропонованим способом 24 12 Титр бактеріальних клітин, 3 КУО/см 9 910 10 4010 20 25 30 35 З наведеної таблиці видно, що при одержанні посівного матеріалу бактерій запропонованим способом досягається високий титр життєздатних клітин за суттєвого зменшення тривалості їх культивування. Приклад 2. Випробування ефективності бактеріального препарату у виробничих умовах проводили на базі Чернігівського інституту агропромислового виробництва НААН (с. Прогрес, Козелецького рну, Чернігівської обл.) на засіяному житом озимим полі площею 45 га методом прикопки шпар. Приблизно посередині поля намічали облікову ділянку площею 0,5 га, на якій за добу до розкладання препарату підраховували та прикопували усі шпари. На наступний день підраховували відкриті (жилі) шпари гризунів, у які закладали бактеріальний препарат із розрахунку 3-5 г на шпарку. Термін спостереження 15 діб, по закінченню якого вдруге проводили облік жилих шпар мишоподібних гризунів. Оцінку ефективності застосування бактеріального препарату проводили за показниками кількості жилих шпар до і після обробки за формулою: кількість жилих шпар після обробки 100 x  100  ,в % кількість жилих шпар до обробки . За результатами випробувань встановлено, що застосування бактеріального препарату для знищення мишоподібних гризунів на відкритих площах з нормою внесення 3-5 г на шпарку, сприяє ефективному зменшенню гризунів. 2 UA 91682 U Таблиця 2 Облік ефективності бактеріального препарату при знищенні мишоподібних гризунів на відкритих площах методом прикопки шпар Кількість шпар, колоній мишоподібних гризунів після обробки до обробки % ефективності (через 15 діб) обробки (за всього в т.ч. жилих жилих жилими шпарами) колоній шпар колоній шпар колоній шпар Назва культури, площа поля Жито 0,5 га 5 10 15 озиме, 6 50 4 35 2 94,29 Таким чином, використання запропонованого способу виготовлення бактеріального родентицидного препарату дозволяє одержати більш принадну приманку для мишоподібних гризунів з високим титром життєздатних клітин бактерій виробничого штаму, покращити його товарний вигляд за рахунок поліпшення сипучості, знизити затрати ручної праці. Перелік посилань 1. Патент України № 11593, МПК А01P 1/00. Препарат для знищення гризунів "Бактеродента" / А.Д. Болдирєв, М.І. Коляда. - заявл. 05.11.2004; опубл. 16.01.2006, Бюл.№1. 2. Шкодочинні гризуни та боротьба з ними / Кравченко Н.О., Божок Л.В. // Чернігівщина аграрна. - 2013. - № 21. - С. 29-30. 3. Кандыбин Η. В. Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными насекомыми/ Н.В.Кандыбин. - М.: Агропромиздат, 1989. - 175 с. 4. Патент України № 95325, МПК C12N 1/20. Родентицидний штам Salmonella enteritidis /В.В. Волкогон, Г.М. Дяченко, Н.А. Кравченко, О.М. Дмитрук, О.В.Головач. - заявл. 25.06.2009; опубл. 25.07.2011, Бюл. № 14. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 Спосіб виготовлення бактеріального родентицидного препарату, що включає: приготування зернової основи з додаванням до його складу ароматично-смакової принади, одержання посівної культури бактерій на ферментері, інокуляцію зернової основи посівною культурою Salmonella enteritidis var. Issatschenko та її дорощування, який відрізняється тим, що зернова основу замочують у гарячому слабко лужному розчині упродовж 1-2 годин, як ароматичносмакову принаду використовують олію соняшникову нерафіновану, а інокуляцію зернової основи проводять штамом бактерій S. enteritidis var. Issatschenko Ч-1, депонованим у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за реєстраційним номером 434. Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3