Спосіб одержання безалкалоїдного екстракту з козлятника лікарського з антидіабетичною дією

Реферат: Спосіб одержання безалкалоїдного екстракту з козлятника лікарського з антидіабетичною дією включає подрібнену надземну частину рослини, яку настоюють з підкисленим етиловим спиртом, упарюють. Після чого витяжку розводять водою і хлороформом, одержують водну алкалоїдвмісну та хлороформну безалкалоїдну фракції. Етиловий спирт підкислюють хлоридною кислотою до рН 2 і використовують хлороформну безалкалоїдну фракцію. UA 96839 U (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ БЕЗАЛКАЛОЇДНОГО ЕКСТРАКТУ З КОЗЛЯТНИКА ЛІКАРСЬКОГО З АНТИДІАБЕТИЧНОЮ ДІЄЮ UA 96839 U UA 96839 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі біохімії, а саме технології екстракції біологічно активних речовин з рослинної сировини з одночасним позбавленням від токсичних сполук - алкалоїдів, і може бути використана у харчовій, фармацевтичній промисловостях і фітотерапії для виробництва препаратів на основі рослинної сировини, біологічно активних добавок до їжі і лікарських композицій антидіабетичної дії. Відомий спосіб одержання засобу для профілактики і лікування інсулін-незалежного цукрового діабету [патент РФ N 2458701, кл. А61К36/899, А61К36/48, А61К36/55, А61К36/45, А61К36/185, А61КЗЗ/08, А61РЗ/10, 2012], на основі сухих екстрактів пагонів чорниці, козлятника лікарського, гарцинії камбоджійської, насіння льону звичайного, шкірки квасолі, гімнеми лісової, кураю пагорбкового, кореневища пирію за такого вмісту компонентів (у вагових частинах): козлятник лікарський 2,94-10,78, гарцинія камбоджійська 3,9-11,76, насіння льону звичайного 1,0-4,9, молоді пагони чорниці 9,8-49,0, шкірки квасолі 19,0-30,0, гімнема лісова 4,12-15,5, курай пагорбковий 4,12-15,5, кореневища пирію 2,94-10,8, хрому піколінат 0,005-0,008, магнію оксид 1,685-2,78, ванадію сульфат 0,006-0,009, за яким екстракти одержують водною екстракцією рослинної сировини, з наступним видаленням розчинника та висушуванням концентратів до сухих екстрактів, після чого компоненти змішують згідно з пропорціями. Недоліком є те, що збір містить імпортну сировину, а саме гарцинію камбоджійську. Велика трудоємність одержання фітозбору, що обумовлена значною кількістю рослин у його складі може призводити до розвитку побічних і негативних реакцій організму, таких як алергічні реакції, індивідуальна непереносимість. Відомий спосіб одержання протидіабетичного збору [патент України №28381, А61К35/78, 2000], що містить листя чорниці, стручки квасолі, корені цикорію звичайного, корені кульбаби лікарської, траву полину звичайного і траву козлятника лікарського за такого співвідношення компонентів (у вагових частинах): стручки квасолі 8-12, корені цикорію 8-12, корені кульбаби 812, листя чорниці 13-17, трава козлятника 13-17, трава полину 18-22, за яким готують настій 1 ст. ложки суміші на 250 мл окропу в термосі протягом ночі. Недоліком є те, що ефективність використання композицій зі зборів сухих трав не завжди максимальна, зважаючи на неповне вилучення екстрактивних речовин або втрати активності цих речовин при приготуванні чаїв у домашніх умовах. Найближчим за технічною суттю - прототипом є спосіб одержання екстракту козлятника лікарського (Galega officinalis L.) позбавленого алкалоїдів [Лапынина Л.А. Выделение и изучение физиологически активных соединений галеги лекарственной как сырья для получения сахароснижающего препарата: автореф. дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук. / Л.А. Лапынина. - Харьков, 1972.-15с], за яким подрібнену надземну частину козлятника лікарського тричі настоюють з етиловим спиртом, підкисленим оксалатною кислотою до рН 2,03,0. З одержаних кислих спиртових витяжок осаджують білки та інші речовини 96 % етиловим спиртом, повторюють процедуру поки не припиниться утворення осаду, який відфільтровують. Витяжки упарюють при температурі 50-65 °C. Кислі спиртові витяжки, з яких осаджені білки та інші речовини, розводять водою і збовтують з хлороформом. Окремо відбирають хлороформну та водну фракції. Підлужнюють водний розчин до рН 9,0-10,0 і три рази екстрагують алкалоїди хлороформом із лужного середовища. Спосіб має наступні недоліки: значна тривалість настоювання сировини зі спиртом, а також упарювання спиртових витяжок і видалення осаджених білків, в цілому обробка займає 8-10 робочих днів і більше у разі упарювання спиртових витяжок на теплій водяній бані у відкритих порцелянових чашках; велика кількість операцій, пов'язаних з очищенням спиртової витяжки від білків і продуктів білкового розпаду; обробка сировини токсичним реагентом - аміаком; можлива втрата малих кількостей біологічно активних речовин основного характеру внаслідок сорбції їх білками і фільтрувальним папером особливо при багаторазовому фільтруванні; низький кінцевий вихід біологічно активних речовин; В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб одержання безалкалоїдного екстракту козлятника лікарського з антидіабетичною дією за рахунок уникнення процедури осадження білків, завершення процедури екстракції на етапі розділення кислої спиртової витяжки на водну та хлороформну фракції, упарювання хлороформної витяжки, що дасть змогу одержати концентрований препарат з високою цукрознижувальною активністю і скоротити процедуру екстракції біологічно активних речовин. Поставлена задача вирішується тим, що у способі одержання безалкалоїдного екстракту з козлятника лікарського з антидіабетичною дією, за яким подрібнену надземну частину рослини 1 UA 96839 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 настоюють з підкисленим етиловим спиртом, упарюють, після чого витяжку розводять водою і хлороформом, одержують водну алкалоїдвмісну та хлороформну безалкалоїдну фракції, при цьому етиловий спирт підкислюють хлоридною кислотою до рН 2 і використовують хлороформну безалкалоїдну фракцію. Хромато-мас-спектрометрією визначають компонентний склад сполук хлороформної фракції та виявляють 31 сполуку. Серед них вищі жирні кислоти та їх ефіри (39,10 % від суми усіх сполук), дитерпени (6,16 %), тритерпени (7,41 %), фітостероли (19,59 %) та флаваноїди (2,89 %). Домінуючими компонентами є жирні кислоти, основну частину з яких складають етиловий естер пальмітинової кислоти і метиловий ефір ліноленової кислоти. Переваги способу: 1) простий і нетривалий процес виготовлення, який складається з двох етапів екстрагування етиловим спиртом і екстрагування хлороформом; 2) широка доступна національна сировинна база; 3) одержання препарату багатого на біологічно активні речовини та водночас позбавленого алкалоїдів, які є токсичними. Літературні дані про цукрознижувальну дію трави і насіння козлятника лікарського суперечливі. Рядом авторів показано, що цукрознижуюча дія цієї рослини обумовлена наявністю у її складі алкалоїдів. Основний алкалоїд галегін за своєю хімічною будовою і фармакологічною активністю є аналогом протидіабетичних препаратів ряду бігуаніду: глібутид, метформін та ін. Було встановлено, що алкалоїдвмісний екстракт є високотоксичним. Тому авторами було запропоновано одержати препарат, позбавлений алкалоїдів, який би мав виражену цукрознижувальну дію. Екстракт, отриманий згідно зі способом, є в'язкою мазеподібною масою темно-зеленого кольору з приємним запахом, гіркуватим на присмак, добре розчинним у метиловому або етиловому спирті, нерозчинним в олії, у воді утворює темно-зелену суспензію, яка після струшування зберігає однорідність не менше 60 хв. Екстракт у дозі 0,6 г на 1 кг маси тіла тварини, що вводять per os, виявляє виражену гіпоглікемічну дію за умов експериментального цукрового діабету, забезпечує коригуючий вплив на функціональний стан клітин крові, сприяє мобілізації антиоксидантних та антирадикальних механізмів захисту організму. Екстракт виявляє коригуючий вплив на обмін вуглеводів та морфо-функціональний стан клітин крові за умов експериментального цукрового діабету, що обґрунтовує доцільність його застосування у профілактиці, комплексній терапії та корекції ускладнень, що виникають при цукровому діабеті. Спосіб одержання екстракту з козлятника лікарського досить простий і ефективний, дає змогу одержати пероральний протидіабетичний препарат з вираженим гіпоглікемічним ефектом, антиоксидантними властивостями та протекторною дією на морфо-функціональний стан клітин периферичної крові за умов цукрового діабету 1 типу, дає змогу розширити асортимент фармакологічних препаратів та біологічно активних добавок, що використовуються для корекції метаболічних порушень при даній патології. Спосіб ілюструється прикладом: Надземну частину козлятника лікарського, інтродукованого в Ботанічному саду Львівського національного університету імені Івана Франка, збирають у період цвітіння, висушують у темряві при кімнатній температурі протягом 14-21 доби. З 4 кг сирої трави вихід повітряно-сухої становить 1 кг. Етанольний екстракт виготовляють настоюванням 30 г подрібненої до розміру частин 1,5-3 мм сухої надземної частини козлятника лікарського у 96 % етиловому спирті, підкисленому 0,1 н хлоридною кислотою до рН 2 упродовж 12 годин у співвідношенні 1:5 при кімнатній температурі. Одержану спиртову витяжку зливають, а рослинний матеріал промивають трьома об'ємами 96 % етилового спирту. Одержані спиртові витяжки об'єднують та упарюють у вакуумі за допомогою роторного випарювача LABOROTA 4001-efficient (Heidolph, Німеччина) з 2 параметрами: t=+50…+55 °C, тиск 0,8-0,9 кг/см , 80 об./хв до повного видалення спирту та одержання густого залишку екстракту масою 4-6 г. До максимально упареного етанольного екстракту додають 9 мл Н2О до отримання однорідної маси та 9 мл хлороформу. Після перемішування 10 хв витяжку центрифугують упродовж 10 хв при 1500 об/хв. Одержують дві фракції: 1 - водну темно-коричневого забарвлення, яку упарюють у вакуумі за допомогою роторного випарювача LABOROTA 4001-efficient (Heidolph, Німеччина) з параметрами: 2 t=+55…+65 °C, тиск 0,8-0,9 кг/см , 100 об/хв до одержання сухого залишку масою 3-3,5 г; 2 хлороформну темно-зеленого забарвлення, яку упарюють у вакуумі за допомогою роторного 2 UA 96839 U 5 10 випарювача LABOROTA 4001-efficient (Heidolph, Німеччина) з параметрами: t=+40…+45 °C, тиск 2 0,8-0,9 кг/см , 100 об/хв до одержання сухого залишку масою 1-1,5г. Як протидіабетичний препарат використовують водну суспензію упареної хлороформної безалкалоїдної фракції у дозі 0,6 г на 1 кг маси тіла тварини. Вихід препарату становить 3,3-5,0 %. Порівняно з прототипом спосіб одержання препарату не потребує використання багатоступінчатого способу екстракції, суттєво скорочує тривалість процесу екстракції біологічно активних речовин, зменшує втрату біологічно активних речовин основного характеру завдяки уникненню процедури осадження білків і їх фільтрування, дозволяє зменшити дозу застосування екстракту до 0,6 г на 1 кг маси тіла тварини, порівняно з прототипом, в якому екстракт застосовували у дозі 3,5 г на 1 кг маси тіла тварини. Запропонований спосіб достатньо простий, ефективний і дає змогу отримати препарат з вищою біологічною активністю, що підтверджує одержання передбачуваного результату. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб одержання безалкалоїдного екстракту з козлятника лікарського з антидіабетичною дією, що включає подрібнену надземну частину рослини, яку настоюють з підкисленим етиловим спиртом, упарюють, після чого витяжку розводять водою і хлороформом, одержують водну алкалоїдвмісну та хлороформну безалкалоїдну фракції, при цьому етиловий спирт підкислюють хлоридною кислотою до рН 2 і використовують хлороформну безалкалоїдну фракцію. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3