Спосіб індукування загибелі клітин

Реферат: Винахід належить до медицини і стосується способу індукування загибелі клітин, який передбачає інгібування адаптивної реакції теплового шоку в клітині та наступне індукування в ній реакції теплового шоку, де інгібітором реакції теплового шоку є аміноакридин або карбазол. UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Перехресні посилання на попередні заявки [0001] Ця заявка ґрунтується на попередніх патентних заявках США №61/054,785, що була подана 20 травня 2008 р., №61/102,913, що була подана 6 жовтня 2008 р., та №61/179,674, що була подана 19 травня 2009 р., зміст яких повністю включений сюди шляхом посилань. Галузь техніки [0002] Винахід стосується способу індукування загибелі клітин індукуванням реакції теплового шоку в клітині в комбінації з інгібуванням адаптивної реакції теплового шоку. Попередній рівень техніки [0003] Рак є гострою проблемою охорони здоров'я людей. Він спричиняє приблизно чверть всіх смертей в США і є головною причиною загибелі чоловіків і жінок старше за 85 років. Імовірність виникнення раку протягом життя дорівнює 46 % у чоловіків і 38 % у жінок. Більшість засобів антибластомної терапії має побічні ефекти, включаючи нудоту, блювання, втрату волосся, лихоманку і риск інфікування. Хіміотерапія і радіаційна терапія швидко призводять до запалення слизових оболонок порожнини рота і шлунково-кишкового тракту у пацієнтів, й ці ефекти можуть бути критеріями обмеження доз токсичних препаратів в деяких процесах лікування. [0004] Ракові клітини виявляють високий рівень адаптивної реакції теплового шоку. Ця реакція є адаптивним механізмом, який застосовують всі живі організми, які мають клітинну структуру, для виживання в умовах так званого протеотоксичного стресу, тобто фактору, що призводить до накопичення погано структурованих протеїнів, котрі схильні до агрегатування, і наступної загибелі клітин внаслідок повної денатурації протеїнів, що викликана таким агрегатуванням. Клітини можуть активізувати зазначений захисний механізм, індукуючи синтез комплементарних протеїнів (шаперонів), які відомі як протеїни теплового шоку (далі в абревіатурі HSP від англійських слів "heat shock proteins"). [0005] Життєздатність ракових клітин може бути залежною від реакції теплового шоку, оскільки вони мають більш високий рівень порушень структури протеїнів. Проте ефективність способів термічної терапії раку обмежена індукуванням адаптивної реакції теплового шоку, яка суттєво зменшує чутливість ракових клітин до терапевтичного втручання і можливість застосування термічної терапії й інших способів модулювання теплового шоку. Відповідно, потрібне удосконалення методів індукування загибелі клітин. Короткий виклад суті винаходу [0006] Тут запропонований спосіб індукування загибелі клітин, що складається з інгібування адаптивної реакції теплового шоку в клітині та наступного індукування в ній реакції теплового шоку (далі в абревіатурі HSR від англійських слів "heat shock response"). Така реакція може бути індукована уведенням індуктора теплового шоку в клітину. Цим індуктором може бути гелданаміцин (далі DMAG17 або 17-DMAG або GM), інгібітор протеасом, арсеніт або етанол. Реакція теплового шоку може бути також індукована шляхом підвищення внутрішньої температури клітини за допомогою нагрівального засобу. Температура може бути підвищена до щонайменше 39-60 °C, зокрема застосуванням інфрачервоного випромінювання. Це випромінювання може мати довжину хвиль в інтервалі 5-15 мкМ. Температура може бути також підвищена джерелом тепла, яке вибране з групи, яка складається з електролюмінесцентного пристрою, лазерного діоду, емісійного лазеру з вертикальною резонаторною поверхнею, світлодіоду та резистивної лампи накалювання. Інгібітором реакції теплового шоку може бути 9аміноакридин (далі 9АА) або карбазол (далі CZ або CRBZ або CBL з номером). [0007] Клітиною може бути ракова клітина, причому рак може бути вибраний з групи, яка складається з метастатичного раку грудей, раку сечового міхура, карциноми легень, раку стравоходу, базаліоми, злоякісної меланоми, пухлини ока і раку голови та шиї. Другій спосіб може включати індукування реакції теплового шоку в клітині. Для цього застосовують антибластомний агент. Короткий опис креслень [0008] Фіг. 1 показує, що акрихін (QC) та 9-аміноакридин (9АА) перешкоджають синтезу протеїнів теплового шоку HSP70 в клітині, що оброблена інгібіторами протеасом. [0009] Фіг. 2 показує, що QC та 9АА інгібують транскрипцію гена HSP70 у відповідь на інгібітори протеасом. [0010] Фіг. 3 показує, що синтез HSP70, індукований DMAG17, є чутливим до дії QC та 9АА. [0011] Фіг. 4 показує, що QC та 9АА пригнічують транскрипцію гена HSP70А1/В', індуковану DMAG17 та інгібітором протеасом MG132. [0012] Фіг. 5 показує токсичну дію DMAG17 в комбінації із QC на клітини HeLa. [0013] Фіг. 6 показує токсичну дію теплового шоку (43 °C, 30 хвилин) в комбінації із QC. 1 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0014] Фіг. 7 показує, що чутливість ракових (тобто не нормальних) клітин до нагрівання зростає під дією QC та CZ (сполука CBL0137). [0015] Фіг. 8 показує, що опосередковане si-РНК зменшення FACT-нуклеарного комплексу, SSPT1 та FACT-кінази CKII підвищує чутливість клітин до нагрівання. [0016] Фіг. 9 показує, що акрихін та 9АА перешкоджають синтезу HSP70 в клітинах, оброблених інгібіторами протеасом. Фіг. 9А показує результати імуноблоттінгу протеїнового екстракту із клітин HeLa, що були оброблені протягом 5 годин інгібітором протеасом MG132 (MG, 5 мкМ) в комбінації із протималярійними препаратами "еметин" (далі ЕМ, 1 мкМ), "хлорохін" (далі CQ, 20 мкМ), "хінін" (далі Q, 20 мкМ) або "акрихін" (QC, 20 мкМ), з застосуванням антитіла анти-HSP70. Смужка 1 містить екстракт з необроблених клітин HeLa. Експресія пірину була досліджена як перевірка навантаження (L.c.). Фіг. 9В показує протеїнові екстракти з клітин HeLa, оброблені протягом 5 годин інгібітором протеасом MG132 (5 мкМ) як таким або в комбінації із 20 мкМ QC або 9АА, після імуноблоттінгу з застосуванням антитіла анти-HSP70. Негативні контролі включають необроблені клітини HeLa (смужка 1) і клітини, оброблені QC або 9АА за відсутності MG132 (смужки 6 та 7). Пірин був досліджений як перевірка навантаження (L.c.). Фіг. 9С показує, що еметин (але не QC або 9АА) інгібує в цілому 35 синтез протеїнів. S-мічені протеїни з необроблених клітин HeLa (смужка 1 зліва) і клітин, оброблених QC (20 мкМ), 9АА (20 мкМ), або ЕМ (1 мкМ), були досліджені методами електрофорезу та ауторадіографії. Фіг. 9D показує, що аміноакридини не погіршують інгібування протеасом агентом MG132, як це показують результати тестування активності протеасом in vitro з використанням екстрактів з клітин HeLa, оброблених протягом 4 годин зазначеною комбінацією інгібітору протеасом MG132 (5 мкМ), QC (20 мкМ) і 9АА (20 мкМ). Активність протеасом показана відносно до її прийнятого за 100 % значення в необроблених клітинах. Фіг. 9E показує, що QC інгібує в клітинах HeLa активацію транскрипції HSP70А1 інгібіторами протеасом. 10 мкг від сумарної РНК, виділеної з необроблених клітин HeLa (смужка 1), та клітин, оброблених протягом 5 годин 0,1 мкМ бортезомібу (далі BZ) або 5 мкМ MG132 (MG), узятого окремо чи в комбінації із 20 мкМ QC були досліджені шляхом Нозерн-блоттінгу зі зразками HSP70А1 (верхня панель) та GAPDH (нижня панель). GAPDH був використаний для перевірки специфічної активності QC як інгібітору та навантаження РНК. Фіг. 9F показує, що аміноакридини не перешкоджають експресії гена металотіонеїну під дією ZnCl2. Клітин HeLa були необроблені (смужка 1 зліва) або оброблені протягом 5 годин 200 мкМ ZnCl2 (Zn) як таким або в комбінації із 20 мкМ QC або 9АА. 10 мкг від загальної маси РНК були досліджені шляхом Нозерн-блоттінгу зі зразками металотіонеїну (далі МТ), HSP70А1 та GAPDH. [0017] Фіг. 10 показує, що індукування реакції теплового шоку HSR із застосуванням MG132, DMAG17 або теплового шоку як такого є чутливим до аміноакридинів. Фіг. 10А показує результати імуноблоттінгу протеїнового екстракту (10 мкг) клітин HeLa, оброблених протягом 5 годин 5 мкМ MG132 (MG) або 1 мкМ 17-DMAG (GM) як таким або в комбінації із 20 мкМ QC або 9АА, із застосуванням антитіла анти-HSP70. Смужка 1 містить екстракт з необроблених клітин HeLa. Для перевірки навантаження протеїнів (L.c.) була досліджена експресія К18. Фіг. 10В показує, що QC або 9АА пригнічують транскрипцію гена HSP70А1, індуковану 17-DMAG або MG132. Нозерн-гібридизація РНК з необроблених клітин HeLa (смужка 1) й таких же клітин, оброблених протягом 5 годин 1 мкМ 17-DMAG (GM) або 5 мкМ MG132 (MG) окремо або в комбінації із 20 мкМ QC або 9АА. GAPDH мРНК був використаний для перевірки специфічності інгібітору та навантаження РНК. Фіг. 10С показує, що QC та 9АА не змінюють акумулювання генів мРНК, які не були індуковані під дією 17-DMAG, як це показала Нозерн-гібридизація РНК з клітин HeLa, оброблених протягом 5 годин 1 мкМ 17-DMAG (GM) окремо або в комбінації із 20 мкМ QC або 9АА. GAPDH, p65RelA і GRP94 є генами, експресія яких не була придушена дією 17-DMAG. HSP70А1 був включений як позитивний контроль для генів, що індукує 17-DMAG. Фіг. 10D показує, що QC пригнічує HSF1-специфічну експресію генератора EGFP, що індукована протеотоксичним стресом (тут і далі абревіатура HSF1 від англійського терміну "heat shock factor" позначає "фактор теплового шоку"). Клітини HeLa, які є носіями комплексу генераторів HSF1-EGFP, були необроблені (смужка зліва), або оброблені 0,1 мкМ бортезомібу (BZ), 1 мкМ 17-DMAG (GM), або протягом 1 години тепловим шоком (HS) при 43 °C як таким чи в комбінації із 20 мкМ QC. Експресію EGFP після 8 годин витримки досліджували флуоресцентним мікроскопом. [0018] Фіг. 11 показує, що аміноакридини пригнічують активацію HSF1 і його транслокацію в ядра. Фіг. 11А показує, що дія на клітини HeLa MG132, 17-DMAG або теплового шоку індукує активність зв'язування HSF1 ДНК. Цитоплазматичні екстракти із клітин HeLa були досліджені тестом електрофоретичної рухливості на зсув (англійська абревіатура "EMSA"), причому ці клітини були або необроблені (смужка зліва), або оброблені 5 мкМ MG132 (MG) чи 1 мкМ 17 2 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 DMAG (GM) протягом 4 годин, або піддані тепловому шоку (43 °C) протягом 1 години. Утворення комплексу між HSF1 та 32Р-міченим зразком олігонуклеотиду, що має сайт для зв'язування HSF1, пригнічували 50х надлишком того ж самого, але не поміченого олігонуклеотиду, що має сайт для зв'язування NFkB (смужка 4). Специфічність винайденого комплексу була надалі підтверджена його супер-зсувом в присутності антитіла анти-HSF1 (смужка 7). Фіг. 11В показує, що QC не знижує активність зв'язування HSF1 ДНК в ядрі, індуковану протеотоксичним стресом. EMSA був проведений, як описано в поясненнях до Фіг. 11А, з міченим зразком олігонуклеотиду та екстрактами з ядер необроблених клітин HeLa (смужка 1 зліва), або оброблених протягом 4 годин 5 мкМ MG132 (MG), або 1 мкМ 17-DMAG (GM) як таким чи в комбінації із 20 мкМ QC. Фіг. 11С показує, що бафіломіцин підвищує концентрацію QC в ядрах. Клітини HeLa були оброблені 5 мкМ QC як таким або в комбінації із 0,5 мкМ бафіломіцину протягом 1 години. Внутрішньоклітинна локалізація QC була досліджена з використанням ультрафіолетового мікроскопу та блакитного фільтру. Фіг. 11D показує, що бафіломіцин (далі Baf) підвищує активність QC як інгібітору дії теплового шоку. Клітини HeLa були необроблені (смужка 1 зліва), або оброблені протягом 5 годин зазначеними комбінаціями 5 мкМ MG132 (MG), 0,5 мкМ бафіломіцину (Baf) та QC в різних концентраціях. Збірні екстракти клітинного протеїну були досліджені Вестерн-блоттінгом з застосуванням антитіла анти-HSF1. Експресія пірину була досліджена як перевірка навантаження (L.c.). [0019] Фіг. 12 показує, що QC підсилює цитотоксичність індукторів протеотоксичного стресу. Фіг. 12А показує токсичність комбінацій ліків, виміряну тестуванням життєздатності клітин. Клітини HeLa були оброблені протягом 4 годин зазначеними комбінаціями 17-DMAG (1 мкМ) та QC (10 або 20 мкМ). Життєздатність клітин визначали після їх 72-годинної витримки фарбуванням метиленовим синім. Наведені дані є середніми для трьох експериментів. Фіг. 12В показує токсичність комбінації бортезоміб/QC, визначену по життєздатності клітин, як зазначено для Фіг. 12А. Клітини HeLa були оброблені протягом 4 годин 0,1 мкМ бортезомібу як такого або в комбінації із 10 мкМ QC. Наведені дані є середніми для двох експериментів. Фіг. 12С показує визначені імуноблоттінгом дані про апоптоз клітин HeLa, оброблених комбінацією бортезомібу (BZ) (0,1 мкМ), 17-DMAG (GM) (1 мкМ) та QC (10 мкМ). Ознаками були такі апоптозо-специфічні протеолітичні фрагменти, як повний протеїн PARP та протеїн К-18 (PARP/apopt та K18/apopt). Фіг. 12D показує, що опосередковане si-РНК падіння HSP70 сенсибілізує клітини до бортезомібу та 17-DMAG, як встановлено імуноблоттінгом протеїнів з HSP70 si-РНК клітин HeLa, які оброблені зазначеними концентраціями 0,1 мкМ бортезомібу (BZ), 20 мкМ QC та 1 мкМ 17DMAG (GM) і експресують si-РНК. Протеїнові екстракти були видобуті з клітин через 24 години після їх трансфекції HSP70 і оброблені на ніч бортезомібом та 17-DMAG. Експресію HSP70 і апоптозо-специфічне розщеплення K18 ідентифікували відповідними антитілами. Контрольні клітини HeLa були необроблені ліками (смужка 1) або оброблені на ніч ліками в зазначених вище кількостях (смужки 5-9). Фіг. 12Е показує, що каспас-інгібітор ZVAD-FMK захищає клітини від апоптозу, індукованого комбінацією протеотоксичного стресу і аміноакридинів, як це було виявлено імуноблоттінгом рівнів протеїну HSP70 і апоптозо-специфічного розщеплення K18 в клітинах HeLa, які були оброблені на ніч зазначеними комбінаціями 1 мкМ 17-DMAG (GM), 0,1 мкМ бортезомібу (BZ), 20 мкМ QC та 20 мкМ ZVAD-FMK (ZVAD). Обробка клітин анти-Fas антитілом (Fas, смужка 9) та комбінацією анти-Fas антитіла й ZVAD-FMK (смужка 10) забезпечує відповідно позитивні контролі апоптозу і захисний ефект ZVAD-FMK. [0020] Фіг. 13 показує вплив 17-DMAG і акрихіну на зростання ракових клітин in vitro та in vivo. Фіг. 13А показує, що QC пригнічує синтез HSP70 у відповідь на протеотоксичний стрес клітин МСА205 та В-16. РНК із контрольних клітин і клітин, оброблених протягом п'яти годин розчином 1 мкМ 17-DMAG (GM) в присутності або без 20 мкМ QC, були проаналізовані Нозернгібридизацією в пробах з HSP70А1 та GAPDH. Фіг. 13В показує результати тестів на виживання клітин МСА205 та В-16, оброблених протягом чотирьох годин розчином 1 мкМ 17-DMAG (GM) в комбінації із 20 мкМ QC. Клітини були зібрані, розбавлені 1:50 і досліджені на виживання з метиленовим синім після 72 годин витримування. Числові показники є середніми величинами для двох експериментів. Фіг. 13С показує, що внутрішньо-пухлинна ін'єкція QC блокує синтез HSP70, індукований 17-DMAG. Миші лінії C57BL/6 як носії пухлин МСА205 були піддані одноразовій внутрішньо-пухлинній ін'єкції фосфатно-сольового буферного розчину (контроль), 25 мкг 17-DMAG (GM) або 1,25 мкг QC+25 мкг 17-DMAG. П'ятьма годинами пізніше миші були забиті. Видобуту із пухлин РНК проаналізували Нозерн-гібридизацією в пробах з HSP70А1. Гібридизацію в пробах з GAPDH використали як перевірку навантаження (L.c.). Результати, отримані в двох експериментах, показані окремо для кожної пухлини при кожній обробці. Фігури 13D та 13E показують результати ін'єкцій мишам лінії C57BL/6 з пухлинами МСА205 (13D) та В16 (13E). Також показані середні об'єми пухлин для кожної з груп мишей. 3 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0021] Фіг. 14 показує на мишах як моделях антибластомні ефекти комбінування неефективних доз акрихіну і локальної гіпертермії. [0022] Фіг. 15 показує вплив карбазолу на експресію гена HSP70 у відповідь на протеотоксичний стрес, як це встановлено шляхом Нозерн-гібридизації РНК, виділеної із контрольних клітин HeLa, клітин, оброблених протягом п'яти годин окремо MG132, комбінацією MG132 із 10 мкМ 9АА, або 1 мкМ карбазолів (CRBZ) 159, 188 і 198 зі зразком гена HSP70. Для перевірки навантаження застосували GAPDH. [0023] Фіг. 16 показує, що CRBZ198 пригнічує HSF1-специфічну експресію генератора GFP. Клітини HeLa, інфіковані лентивірусом, що експресує генераторний ген, були оброблені 0,1 мкМ бортезомібу (Brtz) окремо або у комбінації із 1 мкМ CRBZ188 (неактивного) та CRBZ198 (активного). Експресію GFP визначали через 10 годин після експерименту, застосовуючи мікроскоп. [0024] Фіг. 17 показує вплив теплового шоку (HS) та комбінації АА/CRBZ на HSF1специфічну експресію GFP. Клітини HeLa, інфіковані лентивірусом, що експресує HSF1специфічний GFP, були піддані HS при 43 °C протягом 30 хвилин, або HS в комбінації із 20 мкМ 9АА, або 1 мкМ CRBZ198 чи CRBZ159 (позначка u/t, тобто "untreated", вказує на необроблені клітини HeLa). GFP був виявлений через 12 годин при 37 °C. Детальний опис винаходу [0025] Винахідники зробили неочікуване відкриття того, що індукування реакції теплового шоку в комбінації із інгібуванням адаптивної реакції теплового шоку може викликати загибель клітин. Хоча це й не пов'язано з теорією, інгібітори адаптивної реакції теплового шоку можуть перешкоджати клітині виявити здатність переносити індукування реакції теплового шоку внаслідок пригнічення фактору теплового шоку HSF1, який є головним посередником в транскрипції, що індукована тепловим шоком. Протеїни теплового шоку є шаперон-протеїнами, які різним чином попереджають фатальні наслідки дії шкідливих стимулів шляхом дезагрегатування, реструктуризації та ренатурації пошкоджених протеїнів. Захисна дія протеїнів теплового шоку полягає також в їх здатності пригнічувати деякі форми загибелі клітин, включаючи апоптоз. За умови відсутності протеїнів теплового шоку клітини менш здатні до відповіді на хімічні, екологічні та фізіологічні стреси. Зокрема, ракові клітини можуть бути більш чутливими до інгібування адаптивної реакції теплового шоку, бо вони зазвичай виявляють вищі рівні протеїнів теплового шоку і можуть залежати від тих підвищених рівнів як механізму придушення впливу кумулятивних мутацій, що відбуватимуться внаслідок експресії шкідливих протеїнів. Відповідно, комбінація інгібування адаптивної реакції теплового шоку й індукування реакції теплового шоку створюють простий і гнучкий спосіб індукувати загибель клітин. 1. Визначення термінів [0026] Використана тут термінологія призначена лише для описування окремих втілень винаходу і не пов'язана з намірами щось обмежувати. Зокрема, терміни, вживані в описі і пунктах формули винаходу в однині, позначають також і множину, якщо з контексту не випливає явно протилежне. [0027] Для зазначення тут числових інтервалів кожний числовий параметр проміж іншими, що мають одну і ту ж точність вимірювання, представлений явно. Наприклад, в інтервалі 6-9 числа 7 і 8 слід розглядати поряд з числами 6 і 9, а в інтервалі 6,0-7,0 такими числами є 6,0; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9 та 7,0. а. акрил [0028] Використаний тут окремо або в комбінаціях термін "акрил" може стосуватися радикалу CH2=C(Q)C(O)O-, де Q є аліфатичною або ароматичною групою. b. ацил [0029] Термін "ациламіно" може означати R(=O)N-, де R є алкілом або арилом. c. уведення [0030] Використаний тут термін "уведення" стосовно дозування препаратів може означати як окрему дозу, так і певну кількість доз визначеного препарату. d. аліфатичний [0031] Використаний тут термін "аліфатичний" може означати нерозгалужені, розгалужені або циклічні вуглеводневі радикали, які можуть бути заміщеними або не заміщеними, насиченими або ненасиченими, але не можуть бути ароматичними. Далі термін "аліфатичний" може включати аліфатичні групи, що містять атоми оксигену, нітрогену, сірки або фосфору замість одного або більше атомів карбону в вуглеводневому ланцюгу. e. алкоксил [0032] Використаний тут окремо або в комбінації термін "алкоксил" може стосуватися алкілу, алкенілу або алкінілу, що приєднаний простим кінцевим етерним зв'язком. Прикладами 4 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 алкоксильних груп можуть бути метоксил, етоксил, н-пропоксил, ізопропоксил, н-бутоксил, 2бутоксил, трет-бутоксил, н-пентоксил, 2-пентоксил, 3-пентоксил, ізопентоксил, неопентоксил, нгексоксил, 2-гексоксил, 3-гексоксил, 3-метилпентоксил, флуорометоксил, дифлуорометоксил, трифлуорометоксил, хлорометоксил, дихлорометоксил та трихлорометоксил. Термін "алкоксил" означає також –OR, де R є алкіл. f. алкоксіалкіл [0033] Термін "алкоксіалкіл" означає алкільну групу, в якій атом гідрогену заміщений алкоксильною групою. g. алкеніл [0034] Використаний тут окремо або в комбінації термін "алкеніл" може стосуватися розгалуженої або нерозгалуженої ненасиченої аліфатичної групи, що містить щонайменше один подвійний карбон-карбон зв'язок на визначеному місці вздовж ланцюгу. Типовими прикладами алкенільної групи можуть бути етеніл, E та Z пентеніли, деценіл тощо. h. алкіл [0035] Використаний тут окремо або в комбінації термін "алкіл" може стосуватися прямоланцюгової або розгалуженої вуглеводневої групи, що містить певну кількість атомів карбону, наприклад: метил, етил, нормальний або розгалужений пропіл чи бутил. i. алкілтіо [0036] Термін "алкілтіо" може означати –SR, де R є алкіл. j. алкініл [0037] Використаний тут окремо або в комбінації термін "алкініл" може стосуватися розгалуженої або нерозгалуженої ненасиченої аліфатичної групи, що містить щонайменше один потрійний карбон-карбон зв'язок на визначеному місці вздовж ланцюгу. Типовими прикладами алкенільної групи можуть бути етиніл, пентиніл, пропаргил тощо. k. аміно [0038] Використаний тут окремо або в комбінації термін "аміно" може стосуватися групи, що містить в ланцюгу атом нітрогену. Типовими (але не обмежуючими) зразками аміногруп слугують алкіламіно-, диалкіламіно-, ариламіно-, диариламіно-, алкілариламіно-, алкілкарбоніламіно-, карбамоїл, уреїдо- тощо. Термін "аміно" як такий означає –NH2, а термін "алкіламіно-" означає -NR2, де один R алкіл, а другий R є алкіл або атом гідрогену. l. ароматичний [0039] Використаний тут окремо або в комбінації термін "ароматичний" може стосуватися ненасиченої вуглеводневої групи, що має 4n+2 не локалізованих p(pi) електронів і може бути заміщеною або незаміщеною. Далі, термін "ароматичний" може стосуватися ароматичних груп, що містять щонайменше один атом нітрогену замість одного або більше атомів карбону в структурі вуглеводню. Типовими прикладами ароматичної групи можуть бути феніл, нафтил, тієніл, фураніл, піридиніл, (із)оксазоїл тощо. m. алкілсульфініл [0040] Термін "алкілсульфініл" означає R–SO2–, де R є алкіл. n. алкілсульфоніл [0041] Термін "алкілсульфоніл" означає R–SO3–, де R є алкіл. o. морфолінова група [0042] Термін "морфолінова група" означає p. тетрагідрофурилова група 45 50 . [0043] Термін "тетрагідрофурилова група" означає q. піперидинілова група [0044] Термін "піперидинілова група" означає r. арил [0045] Використаний тут окремо або в комбінації термін "арил" може стосуватися заміщеної або не заміщеної ароматичної групи, що за бажанням з'єднана із іншою ароматичною або 5 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 неароматичною циклічною групою. Типовими прикладами арильної групи можуть бути феніл, метилфеніл, нафтил, фенілен, феніліден, ксиліл, стиріл, фенетил, бензтриїл і тому подібні. s. арилоксил [0046] Використаний тут окремо або в комбінації термін "арилоксил" може стосуватися арильної групи, що приєднана простим кінцевим етерним зв'язком. t. розгалужений [0047] Використаний тут окремо або в комбінації термін "розгалужений" може стосуватися групи, що містить від одного до 24 зв'язаних атомів і має в головному ланцюгу щонайменше один або більше підпорядкованих ланцюгів. Відгалужена група може містити від одного до 12 основних атомів. Приклади розгалужених груп: ізобутил, трет-бутил, ізопропіл, СН2СН2СН(СН3)СН2СН2-, -СН2 СН(СН2СН3)СН2СН2-, -СН2СН2С(СН3)3. u. рак [0048] Використаний тут термін "рак" може означати будь-який стан стійкості до апоптичних стимулів. v. терапія раку [0049] Використаний тут термін "терапія раку" може означати будь-який спосіб лікування раку, відомий із рівня техніки, включаючи хіміотерапію і радіаційну терапію. w. карбоніл [0050] Використаний тут термін "карбоніл" або "карбоксил" може означати будь-яку групу, що містить подвійний зв'язок карбон-оксиген. Типовими (але не обмежуючими) зразками карбоніловмісних груп слугують альдегіди (тобто формалі), кетони (тобто ацили), карбонові кислоти (тобто карбоксили), аміди (тобто сполуки з амідогрупами), іміди (тобто сполуки з імідогрупами), естери, ангідриди і тому подібні сполуки. x. комбінування [0051] Використаний тут термін "комбінування із" або "сумісне застосування" для описування застосування аміноакридину і додаткової терапії може означати, що аміноакридин уводять до, під час, або після додаткової терапії, або їх комбінацію. y. ціан Використаний тут окремо або в комбінаціях термін "ціан", "ціанат" або "ціанід" може стосуватися подвійного зв'язку карбон-нітроген. Типовими (але не обмежуючими) зразками ціаногруп є ізоціанати, ізотіоціанати і тому подібні. Термін "ціан" означає -CN. z. циклічний [0052] Використаний тут окремо або в комбінаціях термін "циклічний" або "цикло" може стосуватися радикала, що має одне або декілька замкнених насичених або ненасичених кілець, які сформовані із 3-12 (або із 3-7) основних атомів. аа. ефективна кількість [0053] Термін "ефективна кількість", застосований, як тут передбачено, відносно сполуки, продукту або композиції, може означати таку ефективну кількість сполуки, продукту або композиції, яка забезпечує досягнення бажаного результату. Точна потрібна кількість буде варіюватися залежно від конкретно використаних сполуки, продукту або композиції, способу їх уведення тощо. Таким чином, завжди неможливо точно визначити "ефективну кількість" заздалегідь. Однак прийнятна ефективна кількість може бути визначена одним з відомих фахівцям методів шляхом лише рутинних експериментів. bb. галогеноалкіл [0054] Термін "галогеноалкіл" означає алкіл, заміщений одним або більше, наприклад від 1 до 3, атомом галогену, зокрема флуором, хлором, бромом, йодом або їх комбінаціями. Аналогічно, "галогеноциклоалкіл" є циклоалкільною групою, що містить один або більше галогенів-замісників. [0055] Термін "арил" окремо або в комбінації означає моноциклічну або поліциклічну (переважно моноциклічну або біциклічну) ароматичну групу, наприклад, феніл або нафтил. Якщо це не зазначено інакше, "арил" може бути незаміщений або заміщений, наприклад, одним або більше, зокрема від одного до трьох атомів галогену, алкілами, гідроксиалкілами, алкоксилами, алкоксилалкілами, галогеноалкілами, нітро-, аміно-, алкіламіно-, ациламіно-, алкілтіо-, алкілсульфініл- і алкілсульфоніл- групами. Прикладами арильних груп є феніл, нафтил, тетрагідронафтил, 2-хлорфеніл, 3-хлорфеніл, 4-хлорфеніл, 2-метилфеніл, 4метоксилфеніл, 3-трифлуорметилфеніл, 4-нітрофеніл і тому подібні. cc. галоген [0056] Використаний тут окремо або в комбінації термін "галоген", "галід" або "гало" означає флуор "F", хлор "CI", бром "Br", йод "I", і астат "At". Типовими прикладами галогеновмісних груп є хлорацетамід, бромацетамід, йодацетамід і тому подібні. 6 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 dd. гетеро [0057] Використаний тут в комбінаціях термін "гетеро" означає один або декілька атомів будь-якого елементу, відмінного від карбону або гідрогену. Типовими прикладами є гетерогрупи, що містять як гетероатоми нітроген, оксиген, сірку і фосфор. ee. гетероарил [0058] Термін "гетероарил" означає моноциклічну або біциклічну кільцеву систему, яка має одне або два ароматичних кільця і містить щонайменше один атом нітрогену, оксигену або сірки в ароматичному кільці і яка може бути незаміщеною або заміщеною, наприклад, з одним або більше, зокрема, одним або трьома замісниками типу галогену, алкілу, гідроксилу, гідроксиалкілу, алкоксилу, алкоксилалкілу, галогеноалкілу, нітро-, аміно-, алкіламіно-, ациламіно-, алкілтіо-, алкілсульфініл-, і алкілсульфоніл- груп. Типовими (але не обмежуючими) зразками гетероарильних груп є тієніл, фурил, піридил, оксазоліл, хіноліл, ізохіноліл, індоліл, триазоліл, ізотіазоліл, ізоксазоліл, імідізоліл, бензотіазоліл, піразиніл, пірімідиніл, тіазоніл і тіадіазоліл. [0059] Термін "алкілен" означає алкільну групу, що має замісник. Наприклад, термін "Cl3алкілeнарил" стосується алкільної групи, що містить від одного до трьох атомів карбону і заміщена арильною групою. ff. гетероцикл [0060] Використаний тут термін "гетероцикл" може означати циклічну групу, що містить гетероатом. Типовими (але не обмежуючими) зразками гетероциклів можуть бути піридин, піперидин, піримідин, піридазин, піперазин, пірол, піролідин, піролідинон, морфолін, тіоморфолін, індол, ізоіндол, імідазол, триазол, тетразол, фуран, бензофуран, дібензофуран, тіофен, бензотриазол, бензоксазол, бензтіофен, хінолін, ізохінолін, азапін, нафтопіран, фуранобензопіранон і тому подібне. gg. гетероциклоалкіл [0061] Термін "гетероциклоалкіл" означає моноциклічну, біциклічну та трициклічну циклоалкільну групу, що містить в кільці один або більше гетероатомів, вибраних з групи, що складається з оксигену, нітрогену і сірки. Гетероциклоалкільна група може також мати оксогрупу (=0), що приєднана до кільця. Типовими (але не обмежуючими) зразками гетероциклоалкілів є 1,3-диоксолан, 2-піразолін, піразолідин, піролідин, піперазин, піролін, 2H-піран, 4H-піран, морфолін, тіофолін, піперидин, 1,4-дитіан і 1,4-диоксан. hh. гідроксил [0062] Термін "гідроксил" означає -OH. ii. гідроксиалкіл [0063] Термін "гідроксиалкіл" означає алкільну групу, в якій гідроген заміщений гідроксилом. jj. нижчий [0064] Використаний тут термін "нижчий" може означати групу, що має від 1 до 6 основних атомів. kk. нітро [0065] Термін "нітро" означає -NO2. ll. за бажанням [0066] Використаний тут термін "за бажанням" або "бажано" може означати, що наступний за нею опис випадків включає різні можливі варіанти, які розрізняються наявністю або відсутністю деякої ознаки. Наприклад, фраза "за бажанням заміщений алкіл" може означати, що алкільна група може бути як заміщеною, так і незаміщеною, і що таке визначення включає обидва варіанти. mm. пептид [0067] "Пептид" або "поліпептид" є ланцюговою послідовністю амінокислот і може бути натуральним чи синтетичним або комбінацією натурального із синтетичним. nn. фосфатовмісна група [0068] Використаний тут термін "фосфатовмісна група" може означати групу, що містить щонайменше один атом фосфору в окисленому стані. Типовими (але не обмежуючими) зразками сполук з такими групами є фосфонова кислота, фосфінова кислота, фосфатні естери, фосфініден, фосфін, фосфініл, фосфініліден, фосфораніл, фосфораніліден, і тому подібне. oo. насичений [0069] Використаний тут термін "насичений" може означати групу, в якій всі доступні валентності основних атомів замкнені на інші атоми. Типовими прикладами насичених груп є бутил, циклогексил, піперидин і тому подібне. pp. заміщений 7 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 [0070] Використаний тут термін "заміщений" може означати групу, що має один або більше атомів гідрогену, видалених від атома карбону або гетероатома і заміщених іншими групами. Заміщені групи можуть мати від одного до п'яти або від одного до трьох замісників. Атом із двома замісниками позначають "ді" або "ди", тоді як атом з більшою кількістю замісників позначають "полі." Типовими прикладами таких замісників є аліфатичні групи, ароматичні групи, алкіл, алкеніл, алкініл, арил, алкоксил, галоген, арилоксил, карбоніл, акрил, ціан, аміно-, нітро-, фосфатовмісні групи, сірковмісні групи, гідроксил, алкілкарбонілоксил, арилкарбонілоксил, алкоксилкарбонілоксил, арилоксикарбонілоксил, алкілкарбоніл, арилкарбоніл, алкоксилкарбоніл, амінокарбоніл, алкіламінокарбоніл, диалкіламінокарбоніл, алкілтіокарбоніл, ациламіно, амідино, іміно, алкілтіо, арилтіо, тіокарбоксилат, алкілсульфініл, трифлуорметил, азидо, гетероцикліл, алкіларил, гетероарил, семикарбазид, тіосемикарбазид, малеімід, оксіміно, імідат, циклоалкіл, циклоалкілкарбоніл, діалкіламіно, арилциклоалкіл, арилкарбоніл, арилалкілкарбоніл, арилциклоалкілкарбоніл, арилфосфініл, арилалкілфосфініл, арилциклоалкілфосфініл, арилфосфоніл, арилалкілфосфоніл, арилциклоалкілфосфоніл, арилсульфоніл, арилалкілсульфоніл, арилциклоалкілсульфоніл або їх комбінації і замісники для них. qq. сірковмісна група [0071] Використаний тут термін "сірковмісна група" може означати групу, що містить атом сірки. Типовими (але не обмежуючими) зразками є сульфгідрил, сульфен, сульфін, сульфініл, sulfo-, сульфоніл, тіо-, тіоксо- і тому подібні групи. rr. обробка і лікування [0072] Використані тут терміни "обробка" і "лікування", коли вони стосуються захисту ссавців від ушкоджень, можуть означати запобігання, придушення, репресію або виключення шкідливих чинників. Запобігання означає профілактичну обробку ссавців до початку дії шкідливих чинників. Придушення означає лікування ссавців після початку дії шкідливих чинників, але до виникнення клінічних прояв захворювання. Репресія означає лікування ссавців після виникнення клінічних прояв захворювання з метою послаблення або стабілізації дії шкідливих чинників. Виключення дії шкідливих чинників означає лікування ссавців після виникнення клінічних прояв захворювання для позбавлення їх від страждань. ss. трифлуорметоксил [0073] Термін "трифлуорметоксил" означає -OCF3. tt. трифлуорметил [0074] Термін "трифлуорметил" означає -CF3. uu. ракова клітина [0075] Використаний тут термін "ракова клітина" може означати будь-яку клітину, що стійка до апоптичних стимулів. vv. нерозгалужений [0076] Використаний тут термін "нерозгалужений" може означати групу, що має від 1 до 24 основних атомів, де основний ланцюг або основа поширюється по прямій. Нерозгалужена група може містити від 1 до 12 основних атомів. ww. ненасичений [0077] Використаний тут термін "ненасичений" може означати групу, де щонайменше одна доступна валентність, що зв'язує два суміжних головних атоми, не замкнена на інший атом. Типовими прикладами ненасичених груп є -CH2CH2CH=CH2, феніл, пірол і тому подібні. xx. незаміщений [0078] Використаний тут термін "незаміщений" може означати групу, що не має будь-якої приєднаної до неї або замісної групи. 2. Спосіб індукування загибелі клітини [0079] Тут запропонований спосіб індукування загибелі клітини. Така загибель може бути індукована інгібуванням адаптивної реакції теплового шоку в комбінації із індукуванням цієї реакції в клітині. Реакція теплового шоку може бути індукована уведенням в клітину придатного агента-індуктора або підвищенням внутрішньої температури клітини нагрівальним засобом. a. Інгібування адаптивної реакції теплового шоку [0080] Інгібітором адаптивної реакції теплового шоку може бути здатний до включення в ДНК негенотоксичний агент, який придушує опосередковану HSF-1 транскрипцію. Цим інгібітором адаптивної реакції теплового шоку може бути аміноакридин, карбазол, або його похідні. (1) Аміноакридин [0081] Аміноакридин може мати таку формулу: 8 UA 103483 C2 (Сполука 1) 5 10 де R1 є H або галоген; R2 є H або, за бажанням, алкоксил; R3 є H або, за бажанням, бажанням алкоксил; і R4 є H або, за бажанням, аліфатична група, арил, або гетероцикл. [0082] Аміноакридином може бути 9-аміноaкридин або Mepacrine, який також відомий як акрихін. Аміноакридин може бути таким, як описано в WO/06/12419, зміст якої включений тут шляхом посилання. (2) Похідні карбазолу [0083] Інгібітором реакції адаптивного теплового шоку можуть бути карбазол або його похідні. Карбазол або його похідні можуть бути такими, як це описано в U.S. Provisional Application 61/102,913 від 6 жовтня 2008,зміст якої включений тут шляхом посилання. [0084] Карбазол або його похідні можуть мати формулу (І): 15 20 25 30 35 40 де a R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, C1-6галогеноалкіл, циклоалкіл, 6 e e a 1 e 1 гетероциклоалкіл, арил, гетероарил, OR , N(R )2 та SR , або R та R чи NR та R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне карбоциклічне чи гетероциклічне кільце; b R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, C1-6галогеноалкіл, циклоалкіл, e e e b 6 e 6 гетероциклоалкіл, арил, гетероарил, OR , N(R )2, та SR , або R та R чи NR та R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне карбоциклічне або гетероциклічне кільце; c R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6 алкіл, C1-6 гідроксиалкіл, циклоалкіл, e c d гетероциклоалкіл, арил, гетероарил, і C(=O)R , або R та R , які разом створюють п'яти-, шести-, або семиланкове аліфатичне кільце, що містить, за бажанням, атом оксигену; d R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил, e d 7 гетероарил, і C(=O)R , або R та R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне кільце; e R незалежно обраний з групи, що містить гідроген, C 1-6алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, e арил, і гетероарил, або дві R групи, які разом з атомом нітрогену, до якого вони приєднані, створюють п'яти-, або шестиланкове аліфатичне кільце; 1 2 3 4 5 6 R , R , R , R , R ,та R вибрані незалежно з групи, що містить гідроген, C 1-6алкіл, циклоалкіл, 6 e e e e гетероциклоалкіл, арил, гетероарил, галоген, OR , C(=O)R , C(=O)OR , °C(=O)R , C(=O)N(R )2, e e e e e e e e e e C(=O)NR SO2R , N(R )2, NR C(=O)R , NR C(=O)N(R )2, CN, NO2, CF3, OCF3, SR , SOR , SO2R , e SO2N(R )2, і OSO2CF3; 7 R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил і гетероарил; 9 UA 103483 C2 n є 0, 1, 2, 3, 4, або 5, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0085] Карбазол або його похідні можуть мати загальну структурну формулу (Іа): 5 10 15 20 25 де a e 6 a 1 R є C1-3алкіл, C1-4галогеноалкіл, C3-5циклоалкіл, N(R )2, або OR , або R і R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце; b e e b 6 R є C1-4алкіл, C1-4галогеноалкіл, C3-5циклоалкіл, N(R )2, або OR , або R і R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце чи п'яти- або шестиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце, що містить атом нітрогену; c R є C1-6алкіл, C3-5циклоалкіл, або C1-3гідроксиалкіл; d d 7 R є гідроген, C1-4алкіл, або C3-5циклоалкіл, або R і R разом із атомами, до яких вони приєднані і створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне кільце, що містить атом нітрогену, c d або R і R , які разом створюють шести- або семиланкове аліфатичне кільце, що містить, за бажанням, атом оксигену; e R є незалежно гідроген або C1-3алкіл; 1 R є гідроген або C1-3алкіл; R є гідроген, гідроксил, або C1-3алкоксил; 3 4 R і R є незалежно гідроген або C1-3алкіл; 5 R є гідроген, гідроксил, C1-3алкоксил, або галоген; 6 R є гідроген, C1-3алкіл, C1-3алкоксил, або галоген; 7 R є гідроген або C1-3алкіл; n є 0, 1, 2, 3, 4, або 5, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0086] Карбазол або його похідні можуть мати загальну структурну формулу (Іb): 30 35 де a a 1 R є метил, етил, н-пропіл, циклопропіл, NH(CH3), або OCH3, або R і R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'ятиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце; b b 6 R є метил, етил, н-пропіл, циклопропіл, NH(CH3), або OCH3, або R і R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'ятиланкове аліфатичне суто карбоциклічне кільце або п'ятиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце, що містить атом нітрогену; c R є метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, циклобутил, або 2-гідроксилетил; 10 UA 103483 C2 d d 7 R є гідроген, метил, етил, або циклобутил, або R і R разом із атомами карбону, до яких вони приєднані і створюють п'ятиланкове аліфатичне карбоциклічне кільце, що містить атом c d нітрогену, або R і R , які разом створюють морфолінову групу, тетрагідрофурилову групу, або 5 10 піперидинілову групу або групу ; 1 R є гідроген; 2 R є гідроген, гідроксил, або метоксил; 3 4 R і R є гідроген; 5 R є гідроген, гідроксил, метоксил, або флуор; 6 R є гідроген, метил, метоксил, або флуор; 7 R є гідроген; n є 1 або 2, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0087] Карбазол або його похідні можуть мати структурну формулу (ІІ): 15 20 25 30 35 де f R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил, h f g гетероарил і C(=O)R , або R і R , які разом створюють п'яти-, шести- чи семиланкове аліфатичне кільце, що містить, за бажанням, атом оксигену; g R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6 алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил, h g h гетероарил і C(=O)R , або R і R , які разом із атомами, до яких вони приєднані, створюють п'яти-, шести- чи семиланкове аліфатичне кільце; h R незалежно обраний з групи, що містить гідроген, C 1-6 алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, h арил і гетероарил, або два R , які разом з атомом нітрогену, до якого вони приєднані, створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне кільце; 9 10 11 12 13 14 R , R , R , R , R , і R незалежно обрані з групи, що містить гідроген, C 1-6алкіл, h h h h циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил, гетероарил, галоген, OR , C(=O)R , C(=O)OR , °C(=O)R , h h h h h h h h h C(=O)N(R )2, C(=O)NR SO2R , N(R )2, NR C(=O)R , NR C(=O)N(R )2, CN, NO2, CF3, OCF3, SR , h h h SOR , SO2R , SO2N(R )2 і OSO2CF3; 8 R обраний з групи, що містить гідроген, C1-6алкіл, циклоалкіл, гетероциклоалкіл, арил і гетероарил; р є 0, 1, 2, 3, 4, або 5 f g за умови, що коли p є 2, один з R і R є відмінним від етилу, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0088] Карбазол або його похідні можуть мати загальну структурну формулу (ІІа): 11 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 де f R є C1-6алкіл; g g 8 R є гідроген або C1-4алкіл, або R і R які разом з атомами, до яких вони приєднані, створюють п'яти- або шестиланкове аліфатичне кільце, що містить один атом нітрогену; 9 R є гідроген або C1-3алкіл; 10 R є гідроген, гідроксил, або C1-3алкоксил; 11 12 R і R незалежно є гідроген або C1-3алкіл; 13 R є гідроген, гідроксил, C1-3алкоксил, або галоген; 14 R є гідроген, C1-3алкіл, або C1-3алкоксил; 8 R є гідроген або C1-3алкіл; р є 0, 1, 2, 3, 4, або 5, f g за умови, що коли p є 2, один з R і R є відмінним від етилу, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0089] Карбазол або його похідні можуть мати структурну формулу (ІІb): де f R є метил або етил; g g 8 R є гідроген або метил, або R і R , які разом з атомом, до якого вони приєднані, створюють п'ятиланкове аліфатичне кільце, що містить один атом нітрогену; 8 R є гідроген; p є 1 або 2, або його фармацевтично прийнятні сіль чи гідрат. [0090] Карбазол або його похідні можуть мати структурну формулу, яка вибрана із групи, що складається з: 12 UA 103483 C2 5 13 UA 103483 C2 14 UA 103483 C2 15 UA 103483 C2 16 UA 103483 C2 17 UA 103483C2 18 UA 103483 C2 19 UA 103483 C2 20 UA 103483 C2 21 UA 103483 C2 [0091] Похідні карбазолу можуть мати таку структурну формулу: 22 UA 103483 C2 [0092] Карбазол може бути також вибраний із групи, що складається з: CBL0137 5 CBL0197 CBL0198 23 UA 103483 C2 CBL0100 CBL0159 5 CBL0212 24 UA 103483 C2 CBL0174 та CBL0175 5 10 (3) Інгібітор транскрипції або трансляції [0093] Інгібітор адаптивної реакції теплового шоку може бути також інгібітором транскрипції або трансляції. Наприклад, це може бути актиноміцин D або циклогексімід. b. Агент або фактор, що індукує тепловий шок (1) Агент, що індукує тепловий шок [0094] Реакція теплового шоку в клітині може бути індукована агентом-індуктором теплового шоку. Цей агент може бути таким інгібітором синтезу протеїнів, як пуроміцин або азетидин. Цей агент може бути також таким інгібітором HSP90, як гелданаміцин (DMAG17), радицікол, або 17AAG. Цей агент може бути також таким інгібітором протеасом, як MG132, бортезоміб або 25 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 лактацистин. Цей агент може бути також таким інгібітором серинпротеази, як DCIC, TPCK, або TLCK. Цей агент може бути таким посередником запалення, як циклопентенон, простагландин, арахідонат або фосфоліпаза A2. Цей агент може бути також таким тритерпеноїдом як целастрол. Цей агент може бути таким со-індуктором, як не-стероїдний протизапальний засіб типу саліцилату натрію чи індометацину, або похідне гідроксиламіну типу бімокломол або аримокломол. Цей агент може бути також таким флавоноїдом, як кверцетин або сполука метилфенілiденлактаму типу KNK437. Цей агент може бути також арсенітом або етанолом. (2) Нагрівальні засоби [0095] Реакція теплового шоку в клітині може бути також індукована нагрівальним засобом. Нагрівальні засоби можуть бути фотоелектричні, механічні або хімічні. Нагрівальні засоби можуть бути здатними до неінвазивного нагрівання клітини, зокрема крізь шкіру. Нагрівальні засоби можуть також містити провід, просвіт, ресивер, зонд або катетер, як описано в U.S. Pat. Pub. №20070288075. Нагрівальні засоби можуть містити оптичні волокна, нити, або імплантований прилад. Нагрівальні засоби можуть бути такими, як описано в патенті США №5,814,008, зміст якого включений сюди шляхом посилання. [0096] Нагрівальні засоби можуть також містити датчик для вимірювання температури клітини або тканини в зоні лікування і, відповідно, генерувати сигнал, що вказує температуру. Температура може бути виміряна термопарою, резистивним термометром або термістором. Датчик може мати форму голки або зонду. Температуру нагрівального засобу можна регулювати згідно з зазначеним сигналом. Температуру можна регулювати для утримування її на заздалегідь визначеному рівні або для попередження перегрівання оброблюваної клітини або тканини внаслідок перевищення заздалегідь визначеного рівня, змінюючи кількість енергії, що витрачається на живлення нагрівального засобу. (a) Фотоелектричні нагрівачі [0097] Нагрівач може бути таким джерелом світла як множина твердих світловипромінювальних пристроїв. Наприклад, джерелом світла може бути світлодіод, електролюмінесцентний прилад, лазер, лазерний діод, лазер з вертикальним резонатором, або лампа накалювання. Світло може бути видимим, ближньо-інфрачервоним, або інфрачервоним. Наприклад, довжина хвиль може бути від 750 нм до 1 мм. Довжина хвиль може також бути 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, або 1000 нм. Довжина хвиль може також бути 1; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9; 3; 3,1; 3,2; 3,3; 3,4; 3,5; 3,6; 3,7; 3,8; 3,9; 4; 4,1; 4,2; 4,3; 4,4; 4,5; 4,6; 4,7; 4,8; 4,9; 5; 5,1; 5,2; 5,3; 5,4; 5,5; 5,6; 5,7; 5,8; 5,9; 6; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9; 7; 7,1; 7,2; 7,3; 7,4; 7,5; 7,6; 7,7; 7,8; 7,9; 8; 8,1; 8,2; 8,3; 8,4; 8,5; 8,6; 8,7; 8,8; 8,9; 9; 9,1; 9,2; 9,3; 9,4; 9,5; 9,6; 9,7; 9,8; 9,9; 10; 10,1; 10,2; 10,3; 10,4; 10,5; 10,6; 10,7; 10,8; 10,9; 11; 11,1; 11,2; 11,3; 11,4; 11,5; 11,6; 11,7; 11,8; 11,9; 12; 12,1; 12,2; 12,3; 12,4; 12,5; 12,6; 12,7; 12,8; 12,9; 13; 13,1; 13,2; 13,3; 13,4; 13,5; 13,6; 13,7; 13,8; 13,9; 14; 14,1; 14,2; 14,3; 14,4; 14,5; 14,6; 14,7; 14,8; 14,9; або 15 мкМ. Довжина хвиль може також бути 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, або 100 мкМ. Довжина хвиль може також бути 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, або 1000 pin. [0098] Джерелом світла може бути інтенсивний лазер, зокрема із застосуванням двофотонного методу. Лазер може випускати добре колімований промінь. Джерело світла може бути також малопотужним і некогерентним. Світло може випромінюватися, починаючи від декількох фотонів на квадратний метр (тобто мати низьку густину потужності у порівнянні з високо інтенсивним лазером). Наприклад, енергія може бути 30-25000 Дж, а густина потужності 2 може бути менша за 500 мВт/cм . [0099] Нагрівальні засоби можуть випромінювати мікрохвильову або радіочастотну енергію, як це описано в патентах США №6,904,323 та №5,549,638, зміст яких включений тут шляхом посилань. Нагрівальні засоби можуть мати антену, зокрема у вигляді решітки. Нагрівальні засоби можуть також мати ультразвуковий передатчик. (b) Механічні нагрівачі [0100] Нагрівальні засоби можуть мати елемент опору. Цей елемент опору може бути лампою накалювання. Нагрівальні засоби можуть також мати нагрівальну рідину або газ, 26 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 розміщений в балоні, як це описано в U.S. Pat. Pub. № 2007/0288075, зміст якої включений тут шляхом посилання. (c) Хімічні нагрівачі [0101] Нагрівальний засіб може містити хімреагент, здатний підвищувати внутрішню температуру клітини. Наприклад, хімреагент може містити частинки оксигідроксиду заліза з декстраном або комплекс заліза. Хімреагентом може також бути галій, індій, технецій, стронцій, йод або інший матеріал, сумісний з живою клітиною. Хімреагент може підвищувати внутрішню температуру клітини прискоренням метаболізму або власним окисленням в клітині з підвищенням рівнів оксигенaції крові, як це описано в патенті США №4,569,836, зміст якого включений тут шляхом посилання. (d) Температура [0102] Внутрішня температура клітини може бути підвищена щонайменше до 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, або 100 °C. Внутрішня температура клітини може бути також підвищена в інтервалі 138 °C, 39-45 °C, 45-60 °C, 60-85 °C, або 85-100 °C. Температура повинна бути достатньою, щоб пошкодити або вбити оброблену аміноакридином клітину, але нижче рівня, за яким починається пошкодження або загибель здорової клітини, що не була оброблена. Температура також повинна бути достатньою, щоб індукувати тепловий шок. Внутрішня температура клітини може бути підвищена щонайменше на час 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19,20,21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 чи 60 хвилин, або на час 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 чи 72 години. c. Уведення [0103] Описані тут сполуки, хімреагенти і агенти можуть бути уведені в клітину шляхом абсорбції і дифузії усередину серцево-судинної системи пацієнта. Уведення може бути оральним, парентеральним, трансдермальним або з використанням супозиторіїв. Уведення в клітину може бути зроблено голкою, що приєднана до шприца, або катетером, приєднаним до системи внутрішньовенного вливання, або локально. 3. Лікування пацієнта [0104] Передбачений тут спосіб може бути застосований для лікування захворювання або усунення дії шкідливого чинника у пацієнта, який цього потребує. Інгібітор реакції адаптивного теплового шоку може бути уведений пацієнту і реакція теплового шоку може бути індукована у пацієнта локально або в цілому. Наприклад, агент, здатний індукувати реакцію теплового шоку, може бути уведений в таку клітину, як ракова або інфікована клітина. Агент-індуктор реакції теплового шоку може бути уведений пацієнту в цілому. Внутрішня температура клітини може бути підвищена локальною дією нагрівального засобу на клітину. Також може бути підвищена температура тіла пацієнта в цілому, але лише до фізіологічно припустимої гіпертермії. a. Рак [0105] Рак або передраковий стан можна лікувати розкритим тут способом. Рак може бути пухлиною, що розташована підшкірно або на шкірі. Пухлина може мати малі або великі розміри. Можливий рак мозку, зокрема гліома, гліобластома, астроцитома, анапластична астроцитома, астроцитома-олігодендрогліома, аденома гіпофізу. Можливий також такий пульмональний або плевральний мезотеліальний рак, як рак легень, карцинома легень, немілкоклітинна карцинома легень, трахеобронхіальний рак, початкова стадія раку легень, ендобронхіальний метастатичний рак, периферичний рак легень або злоякісна плевральна мезотеліома. [0106] Можливий також такий гастроентерологічний рак, як пре-злоякісне або злоякісне утворення, що розташоване всередині стравоходу, жовчного протоку або колоректуму. Можливий також рак голови і шиї, рак стравоходу, початкова стадія раку стравоходу, виразка стравоходу Баррета, прикоренева холангіокарцинома, отвердіння печінки або підшлункової залози, печінкові метастази колоректального раку або панкреатичний рак. [0107] Рак може також бути таким урологічним захворюванням, як рецидивна папілома, рак сечового міхуру, поверхневий рак сечового міхуру, рак простати або доброякісна гіперплазія простати. Можливий також такий гінекологічний рак, як карцинома або дисплазія шийки матки, цервікальний рак, або цервікальна внутрішньоепітеліальна неоплазія. [0108] Можливий також такий рак шкіри, як плоскоклітинна карцинома (SCC), епідермоцитальна карцинома (BCC), злоякісна меланома, ВІЛ-індукована саркома Капоші, Mediterranean-related саркома Капоші, базалоїдна фолікулярна гамартома, хвороба Боуена, 27 UA 103483 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 шкірна T-клітинна лімфома або гіперплазія сальної залози. Рак може також бути пре-злоякісним або злоякісним шкірним утворенням. Можливий також такий рак молочної залози, як метастатичний рак молочної залози, рак товстої кишки, ендометриальний рак, пухлина ока або такий рак голови і шиї, як рак ротової порожнини, рак глотки, карцинома губ, рак носової порожнини або гортані. (1) Комбіноване лікування [0109] Спосіб лікування раку або передракового стану, сполука або розкрита тут композиція можуть бути комбіновані або сумісно застосовані в антибластомній терапії. Ця антибластомна терапія може бути застосуванням антибластомного препарату, радіаційною терапією, хірургією або фотодинамічною терапією (далі ФДТ). (a) Протиракове лікування [0110] Протиракове лікування може бути такою радіаційною терапією, як рентгенівське опромінювання, використання радіочастот або мікрохвильової енергії, ультразвук, радіоізотопна терапія, іонізуюча радіація, зовнішня або променева дистанційна терапія, брахитерапія або радіотерапія від герметизованого чи негерметизованого джерела. Протиракове лікування може також бути такою хірургією, як зменшення маси, кріотерапія або хірургічне видалення пухлин. (2) Фотодинамічна терапія [0111] ФДТ може включати опромінення видимим світлом обробленої аміноакридином клітини, яка може також бути оброблена фотосенсибілізуючим агентом. Світло може мати специфічну довжину хвилі і може активувати фотосенсибілізуючий агент. Активований фотосенсибілізуючий агент може генерувати синглетний оксиген або радикал, який здатний пошкодити або вбити клітину. ФДТ може бути такою, як це описано в патентах США №6,899,723 та №6,693,093, зміст яких включений тут шляхом посилання. b. Лікування не-злоякісних проявів [0112] Не-злоякісні прояви у пацієнта, що страждає ними, можуть бути вилікувані із застосуванням способу. Лікування показане у випадках таких шкірних розладів, як псоріаз, звичайна бородавка або випадіння волос. Можливі й такі офтальмологічні розлади, як стареча макулодегенерація, субфовеальна хороїдальна васкуляризація, патологічна міопія, ретикулоендотеліальний цитомікоз або хороїдальна неоваскуляризація. Показаннями можуть бути також такі серцево-судинні розлади, як атеросклеротична бляшка, інтимальна гіперплазія, атеросклероз, або гемолітичні ушкодження, або рестеноз. c. Лікування інфекції [0113] Інфекція у пацієнта, що страждає нею, може бути вилікувана із застосуванням способу. Це може бути така вірусна інфекція, як герпес, грип, вірус імунодефіциту людини, або гепатити A, B та C. Це також може бути така бактеріальна інфекція, як хламідіоз, туберкульоз або мікоплазмоз. [0114] Інфекція може бути також спричинена такими еукаріотичними паразитами, як цвіль, лямблії, токсоплазми або трипаносоми. Цвіль може бути дріжджами. Трипаносоми можуть спричиняти малярію і можуть бути плазмодіями чи лейшманіями. d. Лікування хвороб, пов'язаних з запаленням [0115] Пов'язані з запаленням хвороби або обставини також можуть бути вилікувані із застосуванням способу. Запалення може бути хронічним, обумовленим аутоімунною хворобою, алергією, астмою, септичним шоком, реакцією "трансплантат проти господаря", хірургічною раною, опіком, або ішемічним порушенням. 4. Спосіб скринінгу [0116] Тут також передбачений спосіб скринінгу сполук, що здатні модулювати реакцію адаптивного теплового шоку в клітині, коли така сполука застосована в комбінації із індукуванням реакції теплового шоку. Цей спосіб може включати індукування реакції теплового шоку в популяції клітин і уведення цієї популяції в контакт із тест-сполукою. Кількість загиблих клітин з популяції у порівнянні з контролем може бути індикатором здатності сполуки модулювати реакцію адаптивного теплового шоку. [0117] Клітини в популяції можуть також містити генератор індукованого теплового шоку. Крім того, зазначений спосіб може включати вимірювання концентрації генератора. Ця концентрації генератора у порівнянні з контролем може бути індикатором здатності сполуки модулювати реакцію адаптивного теплового шоку. Зазначений генератор може містити таку копію гена HSP70, як HSP70A1 або HSP70'B. Зазначений генератор може містити також протеїн HSP70. Зазначений генератор може також включати вектор, що містить промотор реакції теплового шоку, оперативно пов'язаний з геном генератора. Цей ген генератора може кодувати розпізнаваний маркер, яким може бути люцифераза, протеїн зелений флуоресцентний, протеїн 28