Живильне середовище для культивування базідіальних грибів-продуцентів комплексу ферментів

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательным средам для культивирования базидиальных грибов - продуцентов комплекса ферментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повышение активности монофенол-монооксигеназы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности. Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиофилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.%. Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенолмонооксигеназы и пероксидазы. 4 табл. 1 132507 Г 2 Изобретение относится к биотехно(КМД-активность) в культуральных логик, конкретно к способам получефильтратах, полученных после отделения ферментов, осуществляющих деструкния мицелия и остатков твердого субцию лигноцеллюлозного сырья, и может страта. быть использовано в производстве фер- 5 П р и м е р 2 . Готовят питательные ментов, применяемых в целлкщозно-бусреды следующего состава, г: NH 4 H 2 PO, мажной, деревообрабатывающей, пищевой 1,8; КН а РО 4 0,5; К,НРО4 0,3; MgSO4 промышленности, а также в сельском 0,4; лиофилизированный зеленый сок хозяйстве. люцерны 5-40; пода водопроводная Цель изобретения - повышение акtO до 1 л. тивности монофенол-монооксигеназы и В качестве продуцента внеклеточных пероксидазы при сохранении целлюлозферментов используют высший базидиальной активности. ный гриб Funalia trogii (Berk.) Bond. Питательная среда для культивироet Sing. 0146. вания базидиальных грибов - продуцен- '5 Результаты, полученные для 7-суточтов комплекса ферментов, обладающего ной культуры, приведены в табл. 3. монофенол-монооксигеназной, пероксиП р и м е р 3. Состав питательных дазной и целлюлозной активностью, сосред и условия культивирования аналодержит в качестве источника углерода гичны примеру 1. лиофилиэированный сок зеленой массы 20 Активности внеклеточных ферментов люцерны. Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069, Состав лиофилизированного сока люStereum purpureum (Pers.) Fr. 030, церны приведен в табл. 1. Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087,ї При этом состав питательной среды Fomes. fomentarius (Fr.) Kickx. 0117 следующий, г/л: однозамещенный фосфат при культивировании и на среде с зеаммония 1,8-2,0; однозамещенный фосленым соком люцерны приведены в фат калия 0,5-0,6; двузамещенный фостабл. 4. фат калия 0,3-0,4; сульфат магния Изобретение позволяет более чем 0,4-0,5; лиофилизированный зеленый в 2 раза повысить активность моносок люцерны 10-20. ™ фенол-монооксигеназы и пероксидазы. П р и м е р 1, Готовят питательные Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я среды следующего состава, г: Ш 4 Н , Р 0 . Питательная среда для культивиро2,0; КН Р0 4 0,6; КгНРО^ 0,4; MgSO4 вания базидиальных грибов - проду0,5; лиофилизированный зеленый сок центов комплекса ферментов( осуществлюцерны 5,0-40,0; вода водопроводная - 35 ляющих деструкцию лнгноцеллкшозного до 1,0 л. сырья, содержащая источник углерода, Указанные питательные среды готооднозамещенный фосфат аммонияv одновят путем последовательной загрузки замещенный фосфат калия, двузамещенвсех компонентов при постоянном переный фосфат калия, сульфат магния и мешивании, помещают в колбу Эрлен^0 воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, мейера емкостью 0,5 л (по 0,1 л среды что, с целью повышения активности на колбу) и стерилизуют острым паром монофенол-монооксигеназы и пероксида30 мин при 0,1 МПа, Затем колбы охлажзы при сохранении целлюлозной активдагот до комнатной температуры и заности, в качестве источника углерода севают чистой культурой высшего бази- 45 и стимулятора биосинтеза среда содердиального гриба Pleurotus ostreatus жит лиофилизированный сок зеленой (Jacp,.:Fr) К ш т ИМВ,-1300» Культивимассы люцерны при следующем соотнорование проводят в стационарных уелотении компонентов, г/л воды: виях методом поверхностной пленки при Одноэамещенный 28+1 °С в течение 7 сут. 50 фосфат аммония 1,8-2,0 В табл. 2 приведены результаты изОднозамещенный мерений активностей монофенол-монофосфат калия 0,5-0,6 оксигеназы (КФ 1,14.18,1)» пероксидаДвузамещенный зы (КФ 1.11.1,7), эндо-1,4-р-глюканафосфат калия 0,3-0,4 зы (КФ 3.2,1.4), способности комплек- - 5 5 Сульфат магния 0,4-0,5 са ферментов к осахариванию фильтроЛиофилизированвальной бумаги (ФБ-активность) и ный зеленый сок * растворимой карбоксиметилцеллюлозы люцерны 10-20 325071 Т а б л и ц а 1 Компоненты Содержание, % на сухую массу Сухое вещество 93,8-95,7 Сырой протеин 2А,3-25,1 Белок 15,3-15,5 Сырой жир 1,91-1,94 Сырая клетчатка ' 2,76-2,77 Сырая зола 18,40-19,0 БЭВ 50,80-51,90 , Сахара 5,90-5,99 Кальций 4,64-4s66 Фосфор 0,26-0,27 Натрий 0,30-0,32 Калий - 4,50-4,52 Каротин 90,18-91,34 мг/кг Сапонины 164,0-168.0 ед/г Хлорофилл (суммарный) 14,2-14,3 мг/кг Т а б л и и а Фермент Субстрат Единицы иэмерения 2 Показатели при концентрации зеленого сока, % [ 2,0 4,0 _ 0,5 1,0 70 s 0 140,0 140,0 122,2 70 B 0 112 s 0 140,0 128,8 % деполимеризации 20» 0 22,5 22 S 5 20,8 мг % глюкозы 13 S 9 16,6 28 S 3 25 f 9 119,1 117S5 80,4 80,0 МонофенолМОНООКСИ' геназа Бензидин ед/л Пероксидаза Эндо-1,4~£глюканаза КМЦ ЇФіЦ-активность -" ФБ-активность Фильтровальная бумага 325071 Т а б л и ц а Фермент Субстрат Единицы измерения Показатели при концентрации зеленого сока, 1 1,0 0,5 Монофенолмонооксигенаэа 1 4,0 43,1 50,0 і 08,0 50,9 112,0 110,6 % деполимеризации 15,6 56,3 40 е 6 40,0 мг % глюкозы 27,8 36,8 35,5 35,0 6,2 8,1 ед/л К Ц М КМЦ-активность ФБ-актив-1ность Г 2,0 43,7 Бензидин Пероксидаза Эндо-1,4-£глюканаза 3 Фильтровальная бумага 106,6 Т а б л и ц а Фермент Субстрат Единицы измерения 4 Показатели при концентрации зеленого сока, X 0,5 ^ 1,0 1 2,0 | 4,0 Coriolus hirsutus (Fr.) Quel n 069 Монофенол монооксигеназа Пероксидаза Эндо-1,4-£ Іглюканаза 14,7 15,1 Н,4 13,3 18,5 .18,0 17,6 Z деполимеризации 25,0 21,2 21,0 20,2 16,1 12,3 ї 2,2 10,6 6,0 22,7 ед/л -" КМЦ ЮЩ-активность ФБ-а'ктив" ность 12,7 мг % глюкозы Бензидин ' Фильтровальная бумага Stereum purpuretim Монофенол-монооксигеназа Пероксидаза Бензидин ед/л 0 (Pers) Fr, 030 14,0 14,7 14,5 10,0 18,6 17,5 18,0 12,2 132507 • Фермент Субстрат Единицы измерения • • продолжение табл.4 • Показатели при концентрации зеленого сока, * 0,5 Эндо-1,4глюкана^а КМЦ і | 1,0 2,0 J^ 4,0 ФБ-активность 17,3 21,2 22,0 23,0 мг % глюкозы КМЦ-активность X деполимеризации 14,І 9,1 9,5 9,0 -" 2,4 0 0 Фильтроваль ная б бумага Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087 Монофенол-монооксигеназа Бензидин • 6,7 13,3 18,9 8,5 17,4 18,9 17,5 9,6 9,6 12,5 10,9 мг % глюкозы 10,6 16,7 22,0 20,0 -" 2,4 26,2 14,4 3,9 ед/л їїероксидаза Эндо-1,4-^глюканаза KM! КМЦ-активность КШ ФБ-активность % деполимеризации Фильтровальная бумага Pomes fomentarius Монофенол-монооксигеназа Бензидин КМЦ-актив ность ФБ-активность 0117 КЩ КМЦ ед/л 23,3 27,3 . 13,7 11,1 _ н_ Пероксидаза Эндо-),4-£глюкаиаза ( F r . ) Kickx. 25,5 39,0 24,4 18,0 % деполимеризации 18,0 0 0 0 мг % глюкозы 14,1 7,9 7,3 0. 2,2 2,6 Фильтровальная бумага ВНИИПИ Заказ 3021/24 Произв.-полигр, пр-тие, Тираж 499 г . Ужгород, ул. Подписное Проектная, 4 ' '0 11,0 0