Спосіб одержання препарату жовчогінної дії

Способ получения препарата желчегонного действия, включающий экстракцию травы ландыша 80%-ным эталоном, упаривание экстракта, обработку его смесью галогенпроизводного углеводорода с эталоном, упаривание водной фазы, выделение целевого продукта и высушивание, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что водное извлечение после обработки его смесью галогенпроизводного углеводорода с этанолом разбавляют водой до соотношения 1:2-2,4, а выделение целевого продукта проводят экстракцией бутанолом при соотношении фаз 1.0.6-0,8 с последующей промывкой бутанольного извлечения водой. С > ел (Л 00 Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способа получения из травы ландыша лекарственного средства желчегонного действия, содержащего очищенную сумму флавоноидов. Известны способы получения препаратов желчегонного действия из ландыша дальневосточного. Наиболее близким является способ получения лекарственного средства желчегонного действия "Конвафлавин", внедренный на опытном заводе ВНИИХТЛС (опытнопромышленный регламент производства препарата "Конвафлавин". Утвержден 3.10.80). Согласно этому способу сухое измельченное растительное сырье экстрагируют 80% этанолом, экстракт упаривают до ЙОДНОГО остатка и обрабатывают хлороформен но-спиртовой смесью 8:2. Водную фазу отделяют, упаривают, смешивают с полиамидным сорбентом и наносят на хроматогрэфическую колонку, заполненную полиамидным сорбентом и дистиллированной водой. После нанесения на колонку сопутствующие вещества элюируют дистиллированной водой, а при появлении положительной пробы на флавоноиды действующие вещества десорбируют этанольно-водной смесью, элюаты упаривают, высушивают и измельчают Выход сухого продукта согласно регламенту - 0,4 % от массы сухого растительного сырья, содержание суммы флавоноидов - 17-29%. Недостатками известного способа являются низкий выход готового продукта из-за больших потерь на стадиях очистки и выделения на полиамидном сорбенте и сложно о о 15580 сть технологии, требующей больших затрат продукта 2,3 кг, т.е. 2,3% от массы сухого времени, энергоресурсов, сырья, растительного сырья. Целью предполагаемого изобретения П р и м е р 3. 100 кг сухой измельченной является увеличение выхода готового протравы ландыша экстрагируют 80%-ным этадукта и упрощение технологии. 5 нолом, экстракт упаривают до водного осПоставленная цель достигается тем, что татка 50 л и обрабатывают 3 раза равным водное извлечение после обработки смесью объемом смеси хлористый метилен - этанол гэлогенпроизводного углеводорода с этано3:1. Водную фазу отделяют, упаривают до лом упаривают до удаления примеси экстраудаления экстрагента, разбавляют водой до тентов, разбавляют водой до объема 10 240 л и обрабатывают бутанолом при общем соотношением 1:(2-2,4) к массе растительсоотношении фаз 1:0,8. Бутанольные извленого сырья и экстрагируют сумму действуючения отделяют, объединяют и промывают щих веществ бутанолом при соотношении 150 л воды. Водный слой отделяют, а промыфаз 1:{0,6-0.8), а бутанольное извлечение тое бутанольное извлечение упаривают, выпромывают водой, 15 сушивают и измельчают. Выход сухого продукта 2,3 кг, т.е. 2,4% от массы сухого Предлагаемый способ заключается в растительного сырья. следующем. Соотношение водной и спиртовой фаз Сухую измельченную траву ландыша при жидкостной экстракции действующих экстрагируют 80% этанолом, экстракт упаривают до водного остатка и обрабатывают 20 веществ определено исходя из данных таСл.1. смесью галогенпроизводного углеводорода Из данных табл.1 следует, что оптимальс этанолом. Водную фазу отделяют, упариным соотношением водной и спиртовой фаз вают до удаления экстра ген то в, разбавляют при жидкостной экстракции действующих водой до обьема соотношением 1:(2-2,4) к массе проэкстрагированного растительного 25 веществ препарата является 1:(0,6-0.8), так как эти соотношения дают наиболее высосырья и обрабатывают бутанолом при обкие выходы сухого продукта. Соотношение щем соотношении фаз 1;(0,6-0,8). Бутанольвыше 1:0,8 практически не увеличивает выное соотношение отделяют, промывают ход продукта, а при соотношении ниже 1:0,6 водой, упаривают, высушивают и измельчают. Выход сухого продукта 2,2-2,4% от мае- 30 выход резко снижается. сы сухого растительного сырья, содержание Согласно требованиям нормативнотехфлавоиоидов в препарате 22-27%. ~ нической документации препарат не долП р и м е р 1.100 кг сухой измельченной жен содержать сердечных гликоэидов. С травы ландыша экстрагируют 80%-ным этаэтой целью перед жидкостной экстракцией нолом, экстракт упаривают до водного ос- 35 проводится разбавление исходного водного татка 50 л и обрабатывают 3 раза равным раствора, а полученное бутанольное извлеобъемом смеси хлористый метилен - этанол чение промывается водой. Данные по опре3:1, Водную фазу отделяют, упаривают до делению соотношения для разбавления удаления экстрагента, разбавляют водой до водного раствора приведены в табл.2, из 200 л и обрабатывают бутанолом при общем 40 которой следует, что оптимальным разбавсоотношении фаз 1:0,6. Бутанольные извлелением водного раствора по отношению к чения отделяют, объединяют и промывают массе проэкстрагированного растительного 120 л воды. Водный слой отделяют, а промы- сырья является 1:(2-2.4). тое бутанольное извлечение упаривают, выБолее низкое соотношение приводит к сушивают и измельчают. Выход сухого 45 ухудшению качественных показателей пропродукта 2,2 кг, т.е. 2,2% от массы сухого дукта, а более высокое значительно уменьрастительного сырья. шает выход продукта. П р и м е р 2.100 кг сухой измельченной Желчегонное действие, травы ландыша экстрагируют 80%-ным этаЖелчегонное действие препарата, полнолом, экстракт упаривают до водного ос- 50 ученного по известной и предлагаемой техтатка 50 л и обрабатывают 3 раза равным нологии, изучали на крысах обоего пола объемом смеси хлористый метилен - этанол массой 280-320 г. Животным под нембутало3 1 . Водную фазу отделяют, упаривают до вым наркозом вскрывали брюшную поудаления экстрагента, разбавляют водой до лость, отсепаровывали желчный проток, 220 л и обрабатывают бутанолом при общем 55 вводили в него полиэтиленовый катетер, чесоотношении фаз 1:0,7. Бутанольные извлерез который желчь оттекала наружу в стачения отделяют, объединяют и промывают канчик. Регистрацию оттекающей желчи 140 п воды. Водный слой отделяют, а промы- производили каждый час, принимали за истое бутанольное извлечение упаривают, выходную величину, а время обозначали "консушивают и измельчают. Выход сухоготрольным часом". Для выяснения влияния 15580 препаратов на желчеотделительную функцию печени крысам в двенадцатиперстную кишку после "контрольного часа" вводили конеафлавин в дозе 80 мг/кг (доза конвафлавина. по предварительным нашим дан- 5 ным вызывающая максимальный желчегонный эффект у крыс). О желчегонном действии препарата судили по разнице в объеме желчи, выделенной в каждый последующий час после введения препаратов, 10 по сравнению с "контрольным часом", а также по общему количеству желчи, выделенному животными за 4 ч. Кроме того, была поставлена контрольная группа опытов. Животным после "контрольного часа" в 12- 15 перстную кишку вводили 1 % раствор бикарбоната нэтрия в том же объеме, в котором растворяли препарат. На каждую серию поставлено по 8-11 опытов. Результаты обрабатывали статистическим методом 20 вариационной статистики. Полученные результаты приведены в табл.3. После введения препаратов желчеотделение у крыс, по сравнению с интактной группой, увеличивается. Максимальное уве- 25 личение желчеотделения отмечается, в основном, в первые два часа после введения препаратов и составляет для конвафлавина, полученного по известной технологии 30,6±2,86%. Предлагаемая технология кон- 30 вафлавина, улучшая его очистку, существенно не изменяет желчегонной активности препарата. После введения всех серий препарата, по сравнению с интактной группой в одинаковой степени увеличивается и об- 35 щее количество желчи. Токсичность препарата. Определение токсичности конвафлавина, полученного по известной и предлагаемой технологии, проводилось в острых 40 опытах на мышах и крысах при однократном введении внутрь в дозе, максимально допустимой по объему (10 г/кг). Полученные данные представлены в табл.4. Проведенные исследования показали, 45 что по токсичности препараты, полученные по разным технологиям, не отличаются друг от друга и относятся к нетоксичным веществам. Сравнительная характеристика техни- 50 ко-экономических показателей известного и предлагаемого способа представлена в табл 5, из которой следует, что предлагаемый способ уменьшает общее количество технологических операций за счет исключения хроматографического разделения, что а Свою очередь, исключает параллельное целевое производство и стандартизацию полиамидного сорбента (в табл.3 не отражено), так как в СССР он централизованно не производится. Замена хроматографирования жидкостной экстракцией бутанолом позволяет значительно увеличить выход препарата, упростить технологический процесс за счет сокращения числа стадий и времени его осуществления, а также уменьшитьтрудозатраты на единицу продукта. Повышение выхода достигается за счет более полного выделения его жидкостной экстракцией из водного раствора и уменьшения потерь в процессе очистки и выделения в сравнении с хроматографированием. По предлагаемому способу процесс очистки и выделения действующих веществ сводится к легковоспроизводимой технологической операции жидкостной экстракции вместо хроматографирования. предусматривающего: - использование полиамидного сорбента, полученного из различного исходного сырья и разными методами и из-за этого имеющего колебания в показателях качества, влияющих на содержание суммы флавоноидов s препарате и его выход: - подготовку хроматографических колонн; - отделения водорастворимой фракции; - десорбцию действующих веществ этанолом. При отсутствии дополнительных капитальных вложений экономический эффект на 1 кг порошка конвафлавина, получаемого по заявленной технологии, составляет 2588.7 руб. Экономический эффект на 100 тыс. упаковок конвафлавина составляет 132023,7 руб. Предлагаемый способ апробирован в промышленныхусловиях и внедрен в производство на опытном заводе ВНИИХТЛС в 1991 г. T5580 Таблица 1 №fsb п/п 2 3 4 5 Соотношение водной и бутанольной фаз 1:0.5 1:0.6 1:0,7 1:0,8 1:0.9 • Примечание Выход продукта в % от массы растительного сырья Получение продукта 1,87 во всех примерах 2.23 проведено из одного 2,36 2.44 и того же исходного раствора по единой 2.46 методике Таблица 2 Зааисимость выхода готового продукта и его качества от разбавления водного растаора п/п 1 2 3 4 5 Соотношение: масса Выход сухого продук- Соответствие ФС42растительного та, в % отмассы рас- 2720-90 и по содерсырья:объем разбавтительного сырья жанию сердечных ленного водного расгликозидов твора Не соответствует 2,48 V.1.8 1:2 Соответствует 2,43 1:2,2 2,34 Тоже -"2,21 1:2,4 -"1:2,6 1,85 ТаблицаЗ Серия препарата Интактная группа 10286 (Известный способ) 40589 (Предлагаемый способ) 71189 (Предлагаемый способ) . 81189 (Предлагаемый способ) Количество оттекающей желчи, мл после введения препарата через Зч 4 ч контроль 1ч 2 ч 0,61+0,02 0,59 ±0,02 0.59±0,02 0,61 ±0.1 0,55±0.02 0,65 ±0,059 0,82 ±0,068 0.71+0,043 0.71 ±0.037 0,67 ±0,043 0,62 ±0.04 0,72 ±0.059 0,71 ±0,087 0,78±0,052* 0,66±0,075 0,63 ±0,05 0.77 ±0,042* 0.77 ±0,055 0.71 ±0,038 0,67±0,045 0.84 ±0,044* 0,84 ±0.052* 0.78 ±0.052 0,71 ±0,037 0,67 ±0,056 Продолжение табл, 3 Серия препарата Общее количество желчи Интактная группа 10286 (Известный способ) 40589 (Предлагаемый способ). 71189 (Предлагаемый способ) 2,95±0,79 Максимальное увеличение, мл % 3,70±0,24** 0,19±0.011** 30.6±2,86** 3,49±0,30 0.18±0,024** 29,6±3,44** 3.35 ±0,02** 0,20 ±0.03** 35.3±7,43** 10 15580 Продолжение табл. 3 Серия препарата Общее количество желчи Максимальное увеличение, мл 81189 (Предлагаемый способ) 0,21±0,029** 3,83±0,21** % 35,2 ±6,34** * - различия, статистически достоверные по сравнению с "контрольным часом™. ** -различия, статистически достоверные по сравнению с интактной группой. Таблица 4 Серия препаратов Вид животных 10286 (Известный способ) 40589 (Предлагаемый способ) 71189 (Предлагаемый способ) 81189 (Предлагаемый способ) Мыши пе 12 10 Крысы Мыши 12 12 Крысы Мыши Крысы Мыши Крысы п/п 8 9 10 11 12 Число животных в груп Доза, г/кг Число вы- Число погибживших жи- ших живовотных тных 10 2 10 10 12 12 0 12 12 10 10 12 12 0 0 12 12 10 10 12 12 0 0 12 10 12 0 0 ТаблицаБ По прототипу (согласно регламенту проПо предлагаемому способу изводства конвафлавина, без учета целевого получения полиамидного сорбента) . I. Технологические операции Измельчение растительного сврья Измельчение растительного сырья Экстракция 80% этанолом Экстракция 80% этанолом Упаривание экстракта Упаривание экстракта Обработка хлороформенно-спиртовой Обработка хлористометиленово-спиртовой смесью смесью Упаривание водного раствора Упаривание водного раствора Приготовление смеси водного концентЖидкостная экстракция бутанопом рата с сорбентом Приготовление хроматографический коПромывка бутанольного извлечения лонки Ианесеніле на колонку и эпюирование Упаривание бутанольного извлечения водорастворимой фракции Приготовление элюента Высушивание, измельчение Элюирование действующих веществ Упаривание элюатом Высушивание, измельчение II. Трудозатраты, в н/ч на 1 кг продукта 149 45,3 III. Выход продукта, в % от массы растительного сырья в среднем 0,4 2,2-2,4 IV. Содержание суммы флавоноидовв % 22-27 17-28 f 15580 Упорядник Замовлення 4190 Техред М.Моргентал Коректор М.Керецман Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101