Засіб стимуляції імунологічного статусу тварин та імунної відповіді на антигени

ДЛЯ СЛУЖЕБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКЗ союз соеєтсних 1552421 СОЦИАЛИСТЖЕСНИХ РЕСПУБЛИН А1 Д 61 К 39/39, 39/125 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЄТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) М56171/30-13 ї (22-) 13.07.88 (71) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (72) А.И. Собко, В.Н. Тацкая и В.Г. Квачев (53) 5 7 6 . 8 . 0 9 7 . 3 ( 0 8 8 . 8 ) 15&) Авторское свидетельство СССР № 13690ЙЗ, к л . А 61 К 3 9 / 3 9 , 1983. Авторское свидетельство СССР № 1378578, к л . G 01 N З З Л 8 , 1986. Изобретение относится к ветеринарной иммунологии и может быть использовано для стимуляции иммунологического статуса животных и иммуного о т вета на антигены. Целью изобретения является повышение стимулирующего эффекта. Для э т о г о животным вводят двукратно штамм E n t e r o v i r u s s u i s - 3 УНИВИ 5 (ВГНКИ М 359/5) с интервалом 12-21 день в дозе Ю 4 ТЦД Й О -10 6 ТЦД 5 о на 1 к г массы тела. Повышение иммунологического с т а т у са регистрируют, начиная с пятых с у ток после второго введения вируса. Для стимуляции иммунного ответа на антигены штамма E n t e r o v i r u s s u i s - 3 УНИВИ вводят также двукратно одновременно с этими антигенами в приведен 11-90 (5 і *) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ИММУНОЛОГИЧЕСіКОГО СТАТУСА ЖИВОТНЫХ И ИМУННОГО ОТВЕТА НА АНТИГЕНЫ (57) Изобретение относится к ветеринарной иммунологии и может быть и с пользовано при проведении профилактики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных. Целью изобретения является повышение стимуляции иммунологического статуса животных и имунного ответа на антигены. Для с т и муляции иммунологического статуса животных и иммунного ответа на а н т и г е ны животным вводят двукратно E n t e r o v i r u s s u i s - 3 штамм УНИВИ с интервалом 12-21 день в дозе 10* ТЦД 5 о -10 б ТЦД 5 О на 1 к г массы тела. 6 т а б л . ной выше дозировке и с указанным интервалом введения. Иммунный ответ на вводимые антигены оценивают одним из общепринятых способов (в реакции нейтрализации , связывания компонента, гемагглютинации и д р . ) . П р и м е р 1 . Определение о п т и мальной кратности введения вируса для стимуляции иммунологического статуса животных. Для этого используют к р о ликов, вводят им суммарную дозу в и руса 10* ТЦЛ во/кг массы тела, а введение вируса осуществляют одно, двухили трехкратно с интервалом 15 дней. Оценку проводят по показателям макрофагальной трансформации мононуклеаров (ПМТМ) , фагоцитарн'-му числу. (Л СП 1552*121 Для этого отбирают 3 группы животных по 7 голов в каждой, всего 21 кролик, массой по 2,0 кг. Первой группе животных вируссодержащую культуральную жидкость энтеровируса свиней штамма УНИВИ вводят однократно в дозе 2,0'10? ТЦД 50 . Второй группе вирус вводят двукратно в дозе 1,0'10s ТЦД 5о на одно введение, третьей - трехкратно по 0,66х * 10 ТЦД F o на одно введение. Проведенные исследования показывают, что выраженную стимуляцию иммунологического статуса животных по- 15 лучают прИ двукратном и трехкратном введении вируса ( с м . т а б л . 1 ) . Однако трехкратное введение вируса нецелесообразно, так как не вызывает с у щественного увеличения контролируемых 20 показателей иммунологического статуса животных, удлиняет продолжительность осуществления способа, увеличивает расходы на содержание животных. Од25 нократное введение не обеспечивает выполнение способа. Таким образом, наиболее целесообразно двукратное введение вируса. П р и м е р 2„ Определение о п т и 30 мального интервала между введениями вируса для повышения иммунологического статуса животных. Для э т о г о используют кроликов (32 г о л о в ы ) , вводят им суммарную дозу в и руса 1 0 г ТЦД 5 О / К Г массы тела, а вве- 35 дение вируса осуществляют двукратно. Оптимальные интервалы между введениями энтеровируса свиней штамма УНИВИ определяют в опыте на кроликах и оценивают по показателям иммуноло- 40 гического статуса животных-(см. табл. 2 ) , Для э т о г о отбирают 6 групп животных по 5 голов в каждой (в 3~группе 7 животных), всего 32 кролика массой 45 по 2,0 к г . Вирус вводят внутримышечн о , двукратно с интервалами 8 , 12, 15, 18, 21 и 2п д н я . Кровь отбирают через 5 лней после второго введения вируса и определяют показатель макро- 50 фатальной трансформации мононуклеаров, фагоцинарный показатель и фагоцитарное число. Из приведенных в табл. 2 данных следует, что наиболее выраженную с т и муляцию иммунологического статуса животных обеспечивает введение вируса с интервалом 12-21 день. Уменьшение 4 интервала до 8 />ней не обеспечивает требуемой стимуляции иммунологического с т а т у с а , а уьеличение до 2k дней сопровождается явным снижением е г о показателей. Таким образом, допустимые интервалы между введениями вируса составляют 12-21 день, оптимальный интервал составляет 15 ДНвй, П ,р и м е р 3- Определение о п тимальной дозы введения вируса для повышения иммунологического статуса животных. Для э т о г о используют кролик о в , вводят им вирусы двукратно с интервалом 15 дней. Отбирают 5 групп животных по 6 голов в каждой (в 3~й группе 7 к р о л и к о в ) , всего 31 кролик массой по 2,0 к г . Вирус вводят внутримышечно с интервалом 15 дней в дозе 10 3 Т Ц Д 5 0 1 х г - 10 7 ТЦД 5 0 /кг массы тела (см. табл. 3 ) • Анализ представленных в табл. 3 данных показывает, что высокие показатели стимуляции иммунологического статуса животных получают при введении вируса в дозе 10* Т Ц Д ? 0 - 10 6 на 1 к г массы тела. Введение вируса в меньшей дозе не обеспечивает достаточной стимуляции иммунологического с т а т у с а , а в больших дозах (10 7 ТЦДso/кг) не приводит к существенному повышению стимулирующего эффекта и нецелесообразно по экономическим со'ображениям. Оптимальной дозой вируса является 10 ТЦД 5 о на 1 к г массы тела. П р и м е р Цг Стимуляция иммунолог и ч е с к о г о статуса поросят в хозяйствах с традиционной технологией веде-. ния свиноводства. В хозяйстве с традиционной техно-^ логией выращивания свиней отбирают две группы поросят-огъемышей в возрасте 30 дней (всего 2k головы). Поросятам 1-й группы вводят п а рентерально энтеровирус свиней УНИВИ в виде культуральной вируссодержащей жидкости двукратно с интервалом 12 дней в суммарной дозе 10* ТЦД6О на 1 к г массы тела. Поросятам 2-й группы вводят плацебо ( к о н т р о л ь ) . Через 5 суток после повторного введения энтеровируса свиней штамма УНИВИ у поросят отбирают кровь и. определяют иммунологический с т а т у с . Результаты определения представлены в табл. h. 1552^21 Числовые результаты исследований повышает также иммунологический стаобработаны статически. Различия потус животных, о чем свидетельствует ':казателей опытной и контрольной групп повышение П Т с 26,5+2,82 до $ЬfU ММ статистически достоверны. +3,5%. Из представленных в табл. h данных П р и м е р 6. Стимуляция иммунного следует, что введение энтеровируса ответа на эритроциты барабана энтесвиней штамма УНИВИ в дозе ю * ТЦД/ь ровирусом свиней штаммов УНИВИ. на 1 кг массы тела двукратно с интерВ опыте используют две группы кровалом 12 дней обеспечивает стимуля10 ликов (Ik голов) массой 2,5 кг кажцию иммунологического статуса животдый. Кроликов 1-й группы иммунизируют ных, что, в свою очередь, является парентерально эритроцитами барана важным аспектом повышения их неспев 0,1%-ной концентрации. Эритроциты цифической резистентности, устойчибарана вводят в объеме 2,0 мл двукратвости к инфекционным заболеваниям, J5 но с интервалом 15 днеЧ. j сохранности и продуктивности. 2-й группе одновременно с эритроцитами барана парентерально вводят П р и м е р 5. Стимуляция иммунноэнтеровирус свиней штамм УНИВИ в дого ответа к вирусу трансмассивного 6 зе 10 ТЦД 5 о на 1 кг массы тела. гастроэнтерита свиней (ТГС) энтеровиЧерез 14 дней после второго вверусом свиней штаммом УНИВИа 20 дения антигена (1-я группа) и антигеДля проведения испытания отбирают на с энтеровирусом свиней штамма УНИВИ две группы кроликов массой 2,0 кг (2-я группа) у кроликов отбирают каждый, в количестве 12 голов. Кроликровь и определяют уровень спецификов 1-й группы иммунизируют парантерально культуральным вирусом ТГС штам-25 ческого иммунного ответа на эритроциты ма Пурдью 115 в дозе 10 г Т Ц Д Б 0 на барана по титрам гемагглютинирующих 1 кг массы тела двукратно с интерваантител. лом 21 день. Кроликам 2-й группы одРезультаты опыта приведены в новременно с вирусом ТГС парентеральтабл. 6. но вводят энтеровирус свиней штамм 30 При изучении стимуляции иммунного УНИВИ в дозе 10* Т Ц Д 5 0 на 1 кг массы ответа на антигены эритроцитов баратела. Через ТА дней после второго на (табл. 6) устанавливают, что соввведения вирусов у животных обеих местное введение энтеровируса свиней групп отбирают кровь и определяют штамма УНИВИ с эритроцитами барана уровень вируснейтрализующих антител 35 значительно повышает иммунный ответ в вирусу ТГС в реакции нейтрализации к эритроцитам. В опытной группе жии оценивают иммунологический статус вотных средний титр геммагглютинирупо макрофагальной трансформации моноющих антител был.в 2,2 раза выше по нуклеаров клеток крови. сравнению с контрольной группой. Результаты опытов представлены а •табл. 5. Формула и з о б р е т е н и я I Статистический анализ показывает Способ стимуляции иммунологическодостоверность различий средних ( р < го статуса животных и иммунного отве^ 0 , 0 0 1 ) . Таким образом, полученные 45 та на антигены, включающий введение результаты (см. табл. 5) свидетельживотному иммуностимулирующего прествуют о существенности достоверной парата, о т л и ч а ю щ и й с я стимуляции специфического иммунного тем, что, с целью повышения стимулиответа на антиген (вирус ТГС) при одрующего эффекта, в качестве препарата новременном его введении с энтерови50 используют штамм Enterovirus suis русом свиней штаммом УНИВИ. Титры ВГНКИ № 359/5. а введение осуществлявируснейтрализующих антител к вирусу 5. ТГС в этой группе животных в 1,9 рают в дозе 10ч-10 ТЦД5О на 1 кг массы за выше. Совместное введение вирусов тела с интервалом 12-21 день. 8 1552*421 Т а б л и ц а Определение кратности введения вируса Количество введений 1 2 3 пмтк, % 28,6+3,7 38,8+5,1 39,1+5,6 Фагоцитарный показатель, % 26,1+3,4 34,1+4,0 35,8+4,9 Фагоцитарное число 5,7+0,9 9,9+1,6 9,3+1,2 Т а б л и ц а Определение интервала введения вируса Интервал, Дни 8 12 15 18 21 24 ПМТМ, % 29,4+2,7 33,2+4,3 38,8+5.1 36,0+4,9 36,2+5.0 31,5+4,0 Фагоцитарный показатель, % 27,^+3,5 31,8+4,2 34.1+4,0 32.7+4,4 33,4+4,5 29.1+3,8 1 2 Фагоцитарное число 6,1+1.1 7.4+1,2 9.9+1 ,6 9,0+1,5 8,1+1,4 7,6+1,3 Т а б л и ц а Определение оптимальной дозы вируса Доза 10* ю 56 to7 to ПМТМ, % 26,0+2,9 31,5+3,7 38,8+5,1 39,8+4,2 39,5-е,9 фагоцитарный Фагоцитарное показатель, ' число 22,4+3 29,6+3 ,8 34,1+4 ,0 34,0+3 ,8 35,4+4 ,6 5,8+0,6 7,4+0,9 9,9+1,6 9,0+1,4 9,8+0,9 Т а б л и ц а 4 Стимуляция иммунного статуса Группы живот- (ПМТМ, % ных Фагоцитарный [Фагоцитарное показатель, %\ число 42,0+4,6 31,9+3,8 66,2_+7,4 40,1+4,9 р с 0,001 12,2+1,4 7,0+0,9 р < 0,005 9 1552421 Т а б л и ц а Стимуляция иммунного ответа вирусу ТГС Группа Введение вирусов 1 2 ТГС, шт. Пурдью-115 ТГС, шт. Пурдью-115 Средний титр вируснейтрализующих антител (в показателях обратных разведений) 161,0+15,6 316,6+52,9 + Показатель макрофдгальной трансформации мононуклеаров, 2б,5+_2,8 34,1+3,5 — шт. УНИВИ р < 0,001 " р ^ 0,001 I Т а б л и ц а 6 Определение уровня специфического иммунного ответа на эритроциты барана Группы Средний титр геммагглютини животных рующих антител (в показателях, обратных разведению) 1 (контроль) 2 (опыт) 1325+1^6,2 р < 0,001 Редактор Л. Лашкова Составитель VI. Га'реева Техред М.Ходанич " Корректор М. Пожо Заказ 606/ДСП Тираж 40б Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113^35, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул.Гагарина, 101