4-аміно-5-хлоро-2,3-дигідро-n-[1-(3-метоксипропіл)-4-піперидиніл]-7-бензофуранкарбоксамід, спосіб його одержання (варіанти), фармацевтична композиція і спосіб її одержання

1 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-ІЧ-[1 -(3метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамид формулы СН3-О-(СН2)з или его фармацевтически приемлемая кислотноаддитивная соль 2 Соединение по п 1, отличающееся тем, что оно представляет собой монохлоргидрат 4-амино5-хлоро-2,3-дигидро-1Ч-[1-(3-метоксипропил)-4пиперидинил]-7-бензофуранкарбоксамида 3 Соединение по п 1, отличающееся тем, что оно представляет собой соль 4-амино-5-хлоро-2,3дигидро-1Ч-[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамид бутандикислоты (1 1) 4 Соединение по любому из пп 1-3 для использования в качестве лекарства 5 Соединение по любому из пп 1-3 для производства лекарства для лечения нарушений подвижности желудочно-кишечного тракта 6 Соединение по любому из пп 1-3 для производства лекарства для лечения запора 7 Соединение по любому из пп 1-3 для производства лекарства для лечения синдрома раздраженной кишки 8 Соединение по любому из пп 1-3 для производства лекарства для лечения атонии кишечника 9 Соединение по любому из пп 1-3 для производства лекарства для улучшения проходимости (большого) кишечника 10 Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения, заявленного в любом из пунктов 1-3 11 Способ приготовления фармацевтической композиции по п 10, в котором терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп 1-3 тщательно перемешивают с фармацевтически приемлемым носителем 12 Способ получения соединения по пп 1 или 2, в котором промежуточное соединение с формулой (II) N-алкилируют алкилирующим агентом с формулой (III), где W является соответствующей уходящей группой, такой как галоген, например хлор, или уходящей сульфонилокси-группой в реактивно инертном растворителе в присутствии соответствующего основания о' 13 Способ по п 12, отличающийся тем, что дополнительно превращают соединение с формулой (І) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль или, наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в форму свободного основания посредством щелочи 14 Способ получения соединения по пп 1 или 2, в котором амин с формулой (V) N-ацилируют карбоновой кислотой с формулой (IV) о' СН3-О-(СНг)э-М V~ 00 15 Способ по п 14, отличающийся тем, что дополнительно превращают соединение с формулой (І) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль или, наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в форму свободного основания посредством щелочи О го го о> ю 59334 Настоящее изобретение относится к новому производному бензамида и его фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям, фармацевтическим композициям, которые включают указанное новое соединение, способы для получения указанных соединений, композиций и их использованию в качестве лекарств, в частности для лечения включающих ослабленную подвижность кишечника, особенно толстой кишки В нашей заявке ЕР-0,389,037-А, опубликованной 26 сентября 1990г раскрываются производные І\І-(3-гидрокси-4-пиперидинил) (дигидробензофуран или дигидро-2Нбензопиран)карбоксамида, как имеющего свойства, стимулирующие подвижность желудочнокишечного тракта , В нашей заявке ЕР-0,445,862А, опубликованной 11 сентября 1991 г, раскрываются производные І\І-(4-пиперидинил) (дигидробензофуран или дигидро-2Н-бензопиран)карбоксамида, также имеющие свойства стимулировать подвижность желудочно-кишечного тракта Соединение по данному изобретению отличается от вышеупомянутого проявлением высоких энтерокинетических характеристик Настоящее изобретение относится к соединению с формулой /—\ О СН3-О-{СНг)э—N \_HN о' \ ( (I) и его фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям Химическое название соединения с формулой (I) есть 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[1-(3метоксипропил)-4-пиперидинил]-7-бензофуранкарбоксамид Фармацевтически приемлемые кислотноаддитивные соли, как указывалось выше, понимают как терапевтически активные формы нетоксичных кислотно-аддитивных солей, которые соединения с формулой (І) в состоянии образовать Последние можно удобно получить, обрабатывая форму основания соответствующей кислотой Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты типа галоидоводородных кислот, например, соляной кислоты или бромистоводородной кислоты, серной, азотной, фосфорной и т п кислот или органические кислоты типа, например, уксусной, пропановой, молочной, пировиноградной, щавелевой, малоновой, сукциновой, (т е бутандикислоты), малеиновой, фумаровой, яблочной, винной, лимонной, метансульфокислоты, этансульфокислоты, бензолсульфокислоты, р-толуолсульфокислоты, циклогексансульфоновой, салициловой, раминосалициловой, памовой, и т п кислот Термин "кислотно-аддитивные соли", как он приведен выше, также включает сольваты, которые соединения с формулой (I), равно как и их соли, могут образовать Такими сольватами являются, напри мер, гидраты, алкоголяты, и т п Обратно, форму соли можно преобразовать обработкой щелочью в форму свободного основания Далее термин "соединения с формулой (I)" означает как само соединение с формулой (I), так и его фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, если не указывается иначе Группу интересных соединений с формулой (I) представляют кислотно-аддитивные соли, которые образованы обработкой формы основания соединения с формулой (I) галоидоводородными кислотами или бутанди-кислотой Предпочтительными соединениями с формулой (I) являются монохлоргидрат 4-амино-5-хлоро2,3-дигидро-1\1-[1-(3-метоксипропил)-4пиперидинил]-7-бензофуран-карбоксамида и этандикарбонат 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[1(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7-бензофуранкарбоксамида (1 1) Соединения с формулой (I) можно приготовить в соответствии с процедурами, которые раскрыты в ЕР-0,369,037-А и ЕР-0,445,862-А Ряд альтернативных способов дан ниже В последующих процедурах приготовления продукты реакции можно выделить из реактивной смеси и, если необходимо, далее очистить в соответствии с методиками, общеизвестными в данной области, типа экстрагирования, дистилляции, кристаллизации, растирания и хроматографии Соединения с Формулой (I) можно приготовить N-алкилированием промежуточного соединения с формулой (II), с алкилирующим агентом с формулой (III), где W есть соответствующая уходящая группа, типа галогена, например, хлор, уходящая сульфонилокси-группа, например, метансульфонилокси (мезилат) или р-толуолсульфонилокси (тозилат), в реактивно инертном растворителе, например, диметилформамиде в присутствии соответствующего основания, например, триэтиламина Соответствующий катализатор, типа йодистого калия, может быть добавлен для увеличения скорости реакции о' (О т 00 Соединения с формулой (I) можно также приготовить реакцией N-ацилирования карбоновой кислоты с формулой (IV), или ее реактивного промежуточного соединения и амина с формулой (V) Указанную реакцию N-ацилирования можно выполнить, перемешивая два реагента в реактивно инертном растворителе типа хлорированного углеводорода, например, хлороформа, или ароматического углеводорода, например, толуола 59334 CH3-O-(CH2h-N У™NH2 (V) gv> Вышеуказанные промежуточные соединения известны специалистам или их приготовление приведено в ЕР-0,389,037-А и ЕР-0,445,862-А Соединения с формулой (I) обладают прекрасными характеристиками стимулирования кишечной подвижности В частности, настоящие соединения с формулой (I) показывают существенные эффекты стимулирования подвижности большого и малого кишечника Иными словами настоящие соединения с формулой (I) имеют энтерокинетические характеристики Эти характеристики поддержаны фармакологическими примерами, описанными ниже Настоящие соединения с формулой (I) стимулируют неадренергическое нехолинергическое (NANC) возбуждение и продвижение фекальных гранул через большой кишечник Кроме того, они ускоряют эвакуацию желудка и сокращение малого кишечника, а также имеют облегчающее воздействие на холинергические нервы Указанные соединения также лишены характеристик антагониста рецептора 5-НЇ2 или 5НТз Кроме того, настоящие соединения также показывают активность m-vivo как засвидетельствовано в тесте "Телеметрической записи активности толстого кишечника бодрствующей собаки" С учетом их полезных характеристик стимулирования энтерокинетической активности соединения можно предписывать в различных формах для введения Для приготовления фармацевтических композиций в соответствии с данным изобретением эффективное количество определенного соединения в форме основания или кислотноаддитивной соли, в качестве активного ингредиента тщательно перемешивают с фармацевтически приемлемым носителем Указанный носитель может иметь широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата и предпочтительного способа введения Эти фармацевтические композиции желательно приготовить в форме единичных доз, приемлемых для введения орально, ректально или в виде парентеральной инъекции Например, приготовляя композиции, в форме оральной дозы, можно использовать любой из обычных фармацевтических носителей, такие например, как вода, гликоли, масла, спирты, и т п , в случае оральных жидких препаратов типа суспензии, сиропа, эликсира и раствора, или твердые носители типа крахмалов, Сахаров, каолина, смазочных веществ, связывающих веществ, разъединяющих веществ, и т п в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток, ввиду легкости введения, таблетки и капсулы представляют наиболее преимущественную форму единичного дозирования, в которой обычно применяют твердые фармацевтические носители Для парентеральных композиций, носитель будет включать стерильную воду, по меньшей мере, в большей части, хотя и можно использовать другие ингредиенты, например, чтобы способствовать растворимости Например, можно приготовить растворы для инъекций, в ко торых носитель содержит соленый раствор, раствор глюкозы или смесь соленого раствора и раствора глюкозы Можно также приготовить суспензии для инъекций, в которых могут использоваться соответствующие жидкие носители, суспензионные агенты, и т п В композициях, предназначенных для подкожного введения, носитель может содержать агент, способствующий проникновению, и/или соответствующий смачивающий агент, возможно, соединенный с другими добавками любого характера в меньшей пропорции, причем указанные добавки не травмируют кожу Такие добавки могут облегчить подкожное введение и/или быть полезными для приготовления желаемых композиций Эти композиции можно вводить разными путями, например, накожная припарка, пластырь, мазь Особенно удобно дозировать вышеуказанную фармацевтическую композицию в форме единичных доз для удобства введения и единообразия дозирования Форма единичной дозы, используемая в описании и формуле, относится к физически дискретным единицам, пригодным для единичного дозирования, каждая единица содержит предварительно установленное количество активного ингредиента, вычисленного так чтобы производить желаемый терапевтический эффект в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем Примерами форм единичной дозы являются таблетки (включая таблетки с насечкой или оболочкой), капсулы, пилюли, упаковки с порошком, брикеты, растворы для инъекций или суспензии, объем столовой ложки, объем чайной ложки и т д и их кратные порции С учетом их способности стимулирования подвижности кишечной системы и в частности, способности повышать подвижность толстого кишечника, соединения данного изобретения полезны для нормализации или улучшения кишечного транзита в субъектах, страдающих от симптомов, связанных с нарушением подвижности, например, пониженной перистальтики только малого или большого кишечника в сочетании с задержкой опорожнения кишечника С учетом использования соединений дан способ лечения теплокровных животных, включая людей, страдающих от расстройств подвижности кишечной системы, типа например, запора, псевдозакупорки, атонии кишечника, после оперативной атонии кишечника, синдрома раздраженного кишечника (СРК) и задержки транзита, вызванного лекарством В частности предложен способ лечения расстройств подвижности большого кишечника Предложенные соединения также можно использовать для облегчения очистки большого кишечника или облегчения интубации и/или эндоскопии Указанный способ предусматривает систематическое введение эффективного (малого и большого)стимулирующего количества соединения с формулой (I) теплокровным животным, включая человека Следовательно, обеспечивается использование соединения с формулой (I) в качестве лекарства и, в частности, использование соединения с формулой (I) для производства лекарства для лечения симптомов, связанных с нарушениями подвижности или транзита малого или 59334 большого кишечника В общем можно утверждать, что терапевтически эффективное количество составляет приблизительно от 0,001 мг/кг до 10мг/кг веса тела, преимущественно, от 0,02мг/кг до 5мг/кг веса тела Метод лечения может также включать введение активного ингредиента по режиму от двух до четырех приемов в день Экспериментальная часть Пример 1 В трихлорометане (135мл) 4-амино-5-хлоро2,3-дигидро-7-бензо-фуранкарбоновую кислоту (0,05 мол) (приготовление которой было описано в ЕР-0,389,037-А) суспензировали в охлаждали до ±5°С N.N-диэтилэтанамин (0,05 мол) добавляли по каплям при температуре ниже 10°С Этиловый хлороформат (0,05 мол) добавляли по каплям и реактивную смесь перемешивали в течение 40 минут, поддерживая температуру ниже 10°С Полученную в результате смесь добавляли по каплям в течение 20 минут к раствору 1 -(3метоксипропил)-4-пиперидинамина (0,05 мол) в трихлорометане Охлаждающую ванну удаляли и реактивную смесь перемешивали в течение 150 минут Указанную смесь вымывали водой (50мл) Осадок отфильтровали через стеклянный фильтр и вымывали водой и СНСІз Фильтрат вымывали послойно Выделенный органический слой вымывали водой (50мл)+50%-ный раствор НаОН (1мл), осушали и растворитель выпаривали Остаток перемешивали в 2-пропаноле (100мл) Смесь подкисляли НСІ/2-пропанолом (7,2мл, 5,29 N) Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и полученный осадок отфильтровали, вымывали 2-пропанолом (15мл) и осушали (вакуум, 50°С), получая 12,6г (62%) монохлоргидрата 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[(1-(3метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамида (соединение 1) Пример 2 Смесь 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-І\І-(4пиперидинил)-7-бензо-фуранкарбоксамида (0,01 моль), 1-хлоро-З-метоксипропана (0,012 моль) N.N-диэтилэтанамина (2,1мл) и КІ (каталитическое количество) в N.N-диметилформамиде (75мл) перемешивали в течение ночи при 50°С Реактивную смесь охлаждали Растворитель выпаривали, остаток очищали колонной хроматографией над силикагелем (элюэнт СН2СІ2/(СНз0Н/МНз) 97/3) Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали Остаток растворяли в 2-пропаноле и превращали в соль соляной кислоты (1 1) НСІ/2пропанолом Осадок отфильтровали и осушали (вакуум, 80°С), получая 1,40г (35%) монохлоргидрата 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[1-(3метоксипропил)-4-пиперидинил]-7-бензофуранкарбоксамида (соединение 1) Пример 3 Реакция под потоком N2 4-амино-5-хлоро-2,3дигидро-7-бензо-фуранкарбоновую кислоту (0,18 моль) растворяли в тетрагидрофуране (360мл) и этот раствор перемешивали и охлаждали до ±3°С 1,1'-карбонилбис-1Н-имидазол (0,18 моль) добавляли в одной порции и охлаждение прекращали Смесь перемешивали в течение 75 минут (становилось однородной после 30 минут) Раствор 1-(3 8 метоксипропил)-4-пиперидинамина (0,18 моль) в тетрагидрофуране (90мл) добавляли по каплям (экзотермическая температура поднималась от 23°С до 27°С) Реактивную смесь перемешивали в течение 24 часов Дополнительно добавляли 1,1'карбонилбис-имидазол (0,0125 моль) и реактивную смесь перемешивали в течение 75 минут Дополнительно добавляли 1-(3-метокси-пропил)4-пиперидинамин (0,0125 моль) (в 10мл THF) Полученную в результате реактивную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре, затем в течение 2,5 часов при температуре дефлегмации Затем смесь перемешивали в течение 13 часов, доводя до комнатной температуры Растворитель выпаривали Остаток перемешивали в течение 8 часов в воде (360мл) и осадок отфильтровали, вымывали водой, а затем осушали (вакуум, 30°С), получая 62,9г (95%) моногидрата 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[1-(3метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамида, т плавл 90,7°С (соединение 2) Пример 4 Соединение (2) (5г, 0,00129 моль) растворяли в теплом этаноле (25мл) Добавляли раствор (+)(З)-молочной кислоты (1,45г, 0,0135 моль) в этаноле (10мл) При непрерывном перемешивании кристаллизацию начинали при 23°С Смесь перемешивали в течение 24 часов Осадок отфильтровали, вымывали этанолом (2мл), затем осушали (вакуум, 55°С, 72 часа), получая 3,7г (62 %) (1 1) 4амино-5-хлоро-2,3-дигидро-1\1-[(1-(3метоксипропил)-4-пиперидинил1-7бензофуранкарбоксамида соли (+)-(S)гидроксипропановой кислоты, т плавл 170,4°С (соединение 3) Соединение (2) (5г, 0,00129 моль) растворяли в теплом этаноле (35мл)/воде (3,5мл) Добавляли фосфорную кислоту (0,929мл) и почти мгновенно происходила кристаллизация Смесь перемешивали в течение 24 часов при 23°С Осадок отфильтровали, вымывали этанолом (2мл), а затем осушали (вакуум, 55°С, 72 часа), получая 5,87г (97,7%) (1 1) 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидро-І\І[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамида соли фосфорной кислоты (0,929мл), т плавл 259,6°С (соединение 4) Соединение (2) (5г 0,00129 моль) растворяли в теплом этаноле (35мл)/воде(3,5мл) Добавляли 48 %-ный раствор бромистоводородной кислоты (1,52мл) и почти мгновенно происходила кристаллизация Смесь перемешивали в течение 24 часов при 13°С Осадок отфильтровали, вымывали этанолом (2мл), а затем осушали (вакуум, 55°С, 72 часа), получая 5,4г (93,2%) 4-амино-5-хлоро-2,3дигидро-1\1-[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7бензофуранкарбоксамида, соли бромистоводородной кислоты (1 1), т плавл 280,1 °С (соединение 5) Соединение (2) (5г, 0,00129 моль) растворяли в теплом этаноле (25мл) Добавляли раствор янтарной кислоты (1,6г) в этаноле (10мл)/вода (3,5мл) и почти мгновенно происходила кристаллизация Смесь перемешивали в течение 24 часов при 23°С Осадок отфильтровали, вымывали этанолом (2мл), а затем осушали (вакуум, 55°С, 72 часа), получая 5,7г (91%) 4-амино-5-хлоро-2,3дигидро-1\1-[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7 59334 10 бензофуранкарбоксамида, соли бутандикислоты сквозь полость толстой кишки, катод находился в (1 1), т плавл 197,2°С (соединение 6) растворе ванны Препарат возбуждали квадратноПример 5 прямоугольными импульсами (9V, 1мсек/импульс) Соединение (2) (5г, 0,00129 моль) растворяли в течение Юсек каждые 5 минут при различных в этаноле (35мл) Добавляли воду (3,5мл) По капчастотах, электростимуляция приводила к раслям добавляли серную кислоту(0,75мл) Смесь слаблению (= реакция при включении) с немедперемешивали в течение 24 часов при ±22°С ленно следующим сокращением (= реакция при Осадок отфильтровали, вымывали этанолом выключении) Первоначально препараты стиму(2мл), затем осушали (вакуум, 55-60°С, 72 часа), лировали три раза при 0,4Гц для того, чтобы пополучая 6,1 г (101%) 4-амино-5-хлоро-2,3-дигидролучить субмаксимальную релаксацию, с после1Ч-[1-(3-метокси-пропил)-4-пиперидинил]-7дующими тремя стимулирующими бензофуранкарбоксамида, сульфата (11), т раздражителями при 1,5Гц, чтобы получить субплавл 267,5°С (соединение 7) Соединение (2) (5г, максимальное сокращение Затем тестовое со0,00129 моль) растворяли в этаноле (35мл) Доединение добавляли к жидкости ванны и снова бавляли воду (3,5мл) По каплям добавляли меоба стимулирующих раздражителя (0,4Гц и 1,5Гц) 7 тансульфоновую кислоту (0,88мл) Смесь переповторяли три раза При концентрации (3 10 М) мешивали, а затем осушали (вакуум, 55-60°С, 72 тестовое соединение вызывало увеличение реакчаса), получая 6г (100%) 4-амино-5-хлоро-2,3ции при выключении на 100 % относительно пердигидро-1Ч-[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7воначального значения бензофуранкарбоксамида, соли м етан сул ьфо ноПример 7 вой кислоты (1 1), т, плавл 286°С (соединение 8) Морских свинок Данкин-Хартли любого пола Соединение (2) (5г, 0,00129 моль) растворяли в (350г или больше, не подвергавшиеся голоданию), метилизобутилкетоне (35мл) при 60-65°С По капубивали посредством вывиха шеи с последующей лям добавляли уксусную кислоту (8мл) (темперадекапитацией Нисходящую часть толстой кишки тура поднимается до 75°С) Почти мгновенно выотрезали на расстоянии ±5см от прямой кишки, падал осадок Смесь охлаждали до комнатной отрезали и накладывали лигатуру на расстоянии температуры Смесь перемешивали в течение 20 ±40см и освобождали от приросшей ткани Когда в часов Осадок отфильтровывали, вымывали этатолстой кишке было по крайней мере 10 гранул, нолом, а затем осушали (вакуум, 55-60°С, 72 чаткань переносили в стеклянный лабораторный са), получая 5,5г (99%) 4-амино-5-хлоро-2,3стакан, содержащий 200мл раствора Krebsдигидро-1\1-[1-(3-метоксипропил)-4-пиперидинил]-7Henseleit, насыщали смесью 95% кислорода и 5% бензофуранкарбоксамида, соль уксусной кислоты двуокиси углерода и поддерживали при 37°С Рас(1 1),т плавл 156,1°С (соединение 9) твор содержал либо чистый растворитель, либо тестовое соединение Эвакуированные гранулы Фармакологические примеры подсчитывали и удаляли из раствора каждые 5 Пример 6 минут в течение максимального периода 60 минут Стимулирование выявленной релаксации неСовокупное число гранул, эвакуированных из толадренергических нехолинергических нервов, за стой кишки в каждой точке, выражали как процент которой следовало сокращение Релаксация опоот общего числа гранул, находившихся во всей средствовалась через передающий датчик, отличтолстой кишке в начале эксперимента Кривые ный от норадреналина, азотной кислоты или АТР зависимости реакции от времени строили нанесеСокращение опосредствовалось через перением на график точек "совокупный процент градатчик, отличный от ацетилхолина нул, вытесненных из толстой кишки - время" При Морских свинок Данкин-Хартли любого пола концентрации настоящего соединения (3 10 9М) (350-бООг, не подвергавшиеся голоданию) убивали 80% начального количества гранул вытеснялось в посредством вывиха шеи с последующей декапитечение 10 минут тапией Удаляли восходящую часть толстой кишки, а полость очищали многократной промывкой Пример 8 раствором De Jalon После осторожного иссекания Коаксиальная стимуляция подвздошной кишки брыжейки, восходящую часть толстой кишки разморской свинки деляли на 4 сегмента длиной Зсм Каждый сегМорских свинок Данкин-Хартли обоих полов мент располагали вертикально в ванне для орга(вес тела ±500г) убивали посредством вывиха шеи нов, содержащей 100мл раствора De Jalon Ванну с последующей декапитацией Подвздошную кишдля органов поддерживали при 37°С и насыщали ку удаляли и очищали нагретым и окисленным смесью 95% кислорода и 5% двуокиси углерода раствором Krebs-Henseleit Средние, неповрежденные сегменты подвздошной кишки морской Для того, чтобы блокировать а, р, и мускаринсвинки длиной 4,5см подвешивали в вертикальрецепторы, к раствору добавляли фентоламин ном положении с предварительной нагрузкой 1 гр в (10 6М), пропанолол (3 10 М) и атропин (3 10 7 М) 100мл раствора Krebs-Henseleit (37,5°C ), насыСокращения измеряли изометрически Препарат щенном смесью 95% кислорода и 5% двуокиси многократно растягивали до получения основного углерода Трансмуральное возбуждение прилаганапряжения 40мН и позволяли стабилизироваться ли по всей длине сегмента подвздошной кишки в течение 45-бОмин К раствору ванны добавляли посредством двух платиновых электродов, при гистамин (3-10 5М) для того, чтобы получить макэтом анод продевали сквозь полость подвздошной симальное сокращение Трансмуральное возбужкишки, катод помешали в раствор ванны Препадение прилагали по всей длине полоски толстой рат возбуждали единичным прямоугольным стикишки посредством использования двух платиномулирующим раздражителем [1мсек, 0,1 Гц, субвых электродов, при этом анод протягивали 12 11 59334 максимальная реакция (ток приводящий к 80% стабильными, давали субмаксимальную стимулямаксимальной реакции)] от программируемого цию для получения 80% максимальных реакций стимулятора Сокращения измерялись изометридо тех пор, пока судорожные реакции не становически В течение периода стабилизации 30 минут лись стабильными, по крайней мере, в течение полоски многократно растягивали до напряжения 15мин, после чего к жидкости ванны добавляли 2г, чтобы получить установившееся напряжение единичную дозу тестового соединения Амплитуду 1г Перед началом электрической стимуляции засудорожных реакций через пять минут после введавали кривые зависимости реакции от совокупдения тестового соединения сравнивали с амплиные дозы для ацетилхолина Электрическую ститудой до введения тестового соединения Намуляцию начинали при сверхмаксимальном токе, стоящее соединение показало увеличение чтобы определить максимальную амплитуду суамплитуды судорожных реакций более чем на 5% 9 дорожной реакции Когда эти реакции становились при концентрации 3 10 М Комп'ютерна верстка О Воробей Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна