Застосування галоїдного похідного гідроксамової кислоти в лікуванні нейродегенеративних захворювань центральної нервової системи

1. Застосування хімічної речовини, вибраної з групи, яка складається з N-[2-гідрокси-3-(1піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлориду, його оптично активного енантіомеру або суміші його енантіомерів і фармацевтично прийнятної солі оптично активного енантіомеру або суміші її енантіомерів для одержання фармацевтичної композиції для лікування або профілактики нейродегенеративних захворювань центральної нервової системи. 2. Застосування за п. 1, де хімічна речовина являє собою (+)-R-N-[2-гідрокси-3-(1піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлорид. 3. Застосування за п. 2, де хімічна речовина є сіллю (+)-R-N-[2-гідрокси-3-(1піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлориду. 4. Застосування за п. 3, де хімічна речовина являє собою (+)-R-N-[2-гідрокси-3-(1піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлориду цитрат. C2 2 (19) 1 3 86782 4 буде різко збільшуватись протягом наступних дешення симптомів на протязі обмеженого періоду сятиріч. На сьогоднішній день лікування цих хвочасу, і можуть допомогти підтримувати незалежроб є тільки симптоматичним; каузальної терапії ність протягом довшого періоду часу. З розвитком не існує, великою мірою внаслідок невідомої(их) захворювання мозок продукує все менше і менше причин(и) цих поліетіологічних захворювань. Але ацетилхоліну, і медикаменти можуть практично незважаючи на те, що етіологія та фактична локавтрачати свою ефективність. Екселон (Exelon) і лізація пошкодження і втрати клітин в центральній Ремініл (Reminyle) є найбільш успішними лікарсьнервовій системі (ЦНС) при розладах, подібних до кими засобами цього класу, відомими на ринку хвороби Альцгеймера (ХА), хвороби Паркінсона (див. Neurodegenerative Disorders: The world market (ХП), множинного склерозу (MC), нейропатій, хво2002-207; a Visiongain Report; VISIONGAIN™, роби Хантінгтона (XX), аміотрофного латерально2003; див. також: Terry AV and Buccafusco JJ: The го склерозу (АЛС), можуть відрізнятися, існує багаcholinergic hypothesis of age and Alzheimer's то спільних моментів в розвитку захворювання та disease related cognitive deficits: recent challenges внутрішньоклітинних змінах. and their implications for novel drug development; Хоча досягнуто величезний прогрес в симптоThe Journal of pharmacology and experimental матичному лікуванні численних нейродегенератиtherapeutics, 306: 821-27, 2003; та Cummings JL: вних захворювань, все ще існує величезна незаUse of cholinesterase inhibitors in clinical practice: доволена потреба у фармакологічному та evidence based recommendations; Am J Geriatr біофармакологічному лікуванні, яке буде сповільPsychiatry 11: 131- 45, 2003). нювати і, можливо, зупиняти розвиток цих захвоВ інших клінічних випробуваннях засобів для рювань. лікування ХА досліджували екстракт гінкго білоба ХА являє собою найбільш розповсюджене як антиоксидант, але подальші дослідження не нейродегенеративне захворювання і найбільш продемонстрували чіткої ефективності у пацієнтів розповсюджену форму деменції (відповідає приз ХА. близно за 80% всіх випадків). ХА характеризується Ефективність нестероїдних протизапальних зниженням пам'яті, погіршенням мови, порушенагентів, випробуваних до сьогоднішнього дня, не ням візуально-просторових навичок, недалекоглябуло доведено. дністю, байдужістю до навколишнього світу, при Нещодавно зареєстрований в Європі препарат збереженні моторної функції. Симптоми хвороби Ебікса (Еbіха, мемантин), неспецифічний антагоАльцгеймера перш за все виявляються погіршенніст рецепторів N-метил-D-аспартату (NMDA), який ням пам'яті і, протягом кількох років, руйнуванням просувають на ринку компанії Merz і Lundbeck, свідомості, особистості та здатності до функціонупризначений конкурувати з визнаним золотим ставання. Можуть також виникати сплутаність свідондартом лікування, препаратом Арісепт (Aricept). мості і непосидючість. Відрізняльними характерисДо цього часу клінічні дослідження демонстрували тиками захворювання є амілоїдні бляшки та позитивні результати (Mintzer JE: The search for нейрофібрилярні клубки в мозку, а також виявляbetter noncholinergic treatment options for Alzється втрата нервових клітин в областях мозку, які heimer's disease, J Clin Psychiatry 64, suppl 9:18-22, є життєво важливими для пам'яті та інших розумо2003; та Reisberg В et al.: Memantine in moderate to вих здібностей. Захворювання зазвичай розпочиsevere Alzheimer's disease, N Engl J Med 348:1333нається після 60 років, і ризик захворіти збільшу41, 2003). Інший підхід, який до цього часу є супеється з віком. Хоча люди молодшого віку також речливим, полягає в імунізації, тобто розробці ліможуть захворіти на хворобу Альцгеймера, це карських засобів, які були б здатні зменшувати явище є набагато менш розповсюдженим. Привиробництво бета-амілоїду та очищувати відклаблизно 3 % чоловіків і жінок у віці від 65 до 74 родення амілоїду шляхом імунізації. ків мають ХА, і приблизно половина людей у віці ХП являє собою другий за розповсюдженістю 85 років і старше можуть захворіти. та важливістю нейродегенеративний розлад. ХвоНа сьогоднішній день не існує засобів, для ліроба Паркінсона виникає, коли певні клітини мозку кування хвороби Альцгеймера, і тривалість життя в області мозку, відомій як чорна субстанція (subпацієнтів звичайно становить близько 8-10 років stantia nigra) гинуть або стають пошкодженими. після встановлення діагнозу. На ринку присутня Точна причина загибелі нейронів невідома, але численна кількість медикаментів, які можуть сприокиснювальний стресс та дисфункція мітохондріаяти запобіганню погіршення деяких симптомів на льного ланцюга транспорту електронів - особливо обмежений період часу. Крім того, деякі лікарські зменшена активність комплексу І - є широко визасоби можуть допомогти контролювати поведінзнаними причинами. Зазначені нейрони продукукові симптоми ХА. ють важливу хімічну речовину, відому як допамін, На сьогоднішній день існує чотири лікарських хімічний месенджер, відповідальний за передачу засоби, зареєстровані Управлінням лікарських сигналів між substantia nigra і corpus striatum. засобів і харчових продуктів (FDA) для лікування Симптоми хвороби Паркінсона включають насимптомів помірної та вираженої ХА. Ці медикаступне: основною рисою є mремор, або мимовільні менти відомі як інгібітори холінестерази, та їхня ритмічні рухи кінцівок, рук, ніг та щелепи. Класично дія, за даними досліджень, полягає у запобіганні тремор виникає, коли персона перебуває в стані руйнуванню ацетилхоліну - хімічної речовини мозспокою, і покращується при довільних рухах; поку, яка вважається важливою для пам'яті та мисступова втрата спонтанних рухів, яка часто прилення. Хоча ні один з цих медикаментів сам по зводить до численних проблем, таких як "заморособі не зупиняє розвитку захворювання, вони моженість"; зниження ментальних навичок та жуть допомогти попередити або віддалити погіршвидкості мислення, зміна голосу, та знижена ви 5 86782 6 разність обличчя; ригідність м'язів або негнучкість недостатності, звичайно протягом 3-5 років з мокінцівок, виникає у всіх групах м'язів, але найбільш менту появи симптомів. розповсюджена в руках, плечах та шиї; постуральПричина АЛС невідома. Однак, важливий крок на нестабільність, або сутула, зігнута постава із у напрямку відповіді на це питання було зроблено зігнутими ліктями, колінами і стегнами; поступова в 1993 р., коли вчені відкрили, що мутації гену, втрата автоматичних рухів, в тому числі мигання який продукує фермент супероксиддисмутазу повік, і зменшена частота ковтання; нестійка хода; (SOD1), асоціюються з деякими випадками родиндепресія і деменція. ного АЛС (Rosen D R et al.: Mutations in Cu/Zn Хворі на це захворювання сьогодні мають веSuperoxide dismutase gene are associated with лику кількість можливостей лікування і ця кількість familial amyotrophic lateral sclerosis. Nature, 362: 59буде постійно зростати протягом наступних 10-15 62, 1993). Цей фермент являє собою потужний років. Перший ефективний засіб для лікування антиоксидант, який захищає організм від пошкохвороби Паркінсона - карбідопа/леводопа (Сінедження, спричиненого вільними радикалами. Вільмет, Sinemet, Bristol-Myers Squibb) було виведено ні радикали являють собою дуже нестабільні мона ринок в 1970 г. що стало революцією в лікуванлекули, які виробляються клітинами в ході ні захворювання. Цей засіб довів свою високу нормального метаболізму (основним джерелом є ефективність з точки зору контролю симптомів, мітохондрії). Якщо вільні радикали не нейтралізотаких як тремор, брадикінезія, рівновага і ригідвані, вони можуть накопичуватися і спричиняти ність. Однак, дискінетичні побічні ефекти і зниженвипадкові пошкодження ДНК, ліпідів мембран та ня ефективності при тривалому лікуванні зумовбілків всередині клітин. Хоча до цього часу чітко не люють потребу в альтернативних лікарських з'ясовано, яким чином мутація гену супероксиддизасобах та/або допоміжних лікарських засобах для смутази (SOD1) призводить до дегенерації моторкомпенсації побічних ефектів. Агоністи допаміну, них нейронів, дослідники теоретично припускають, виведені на ринок в 1980-х роках, задовольнили що накопичення вільних радикалів може бути насцю потребу. Ці лікарські засоби є доведено ефеклідком неправильного функціонування цього гену. тивними як регулятори типу допаміну, і як монотеХоча нейродегенеративні захворювання марапія для віддалення потреби в лікуванні карбідоють багато різних характеристик, розповсюдженою пою/леводопою у пацієнтів з вперше рисою є втрата клітин, поступова та прогресуюча встановленим діагнозом хвороби Паркінсона. Інші деградація певних областей центральної нервової нещодавно розроблені засоби лікування, такі як системи. Дисбаланс продукування і нейтралізації інгібітори катехол-О-метілтрансферази (СОМТ), реакційноздатних форм кисню (ROS) збільшується антихолінергічні засоби, а також селегілін/депреніл із старінням, і нейродегенеративні захворювання також здійснюють вплив, хоча менш помітний, на погіршують ці явища. Роль супероксиддисмутази ринок засобів лікування ХП (див. (SOD) при АЛС, як потужного антиоксиданту, який Neurodegenerative Disorders: The world market захищає мозок від пошкодження, спричиненого 2002-207; a Visiongain Report; VISIONGAIN™, вільними радикалами, було описано вище. При 2003). хворобі Паркінсона реакційно здатні форми кисню Аміотрофний латеральний склероз (АЛС), (ROS) генеруються аутоокисненням під час норякий іноді називають хворобою Лу Геріга, являє мального метаболізму допаміну, або під дією мособою швидко прогресуюче, неврологічне захвоноамінооксидази (Lev N et al.: Apoptosis and Parkрювання з обов'язковим летальним кінцем, яке inson's disease; Progress in Neuroатакує нервові клітини (нейрони), відповідальні за Psychopharmacology and Biological psychiatry 27: контроль довільних м'язів. Захворювання являє 245-50, 2003). При ΧΑ ініціюючі події, які призвособою найбільш розповсюджене захворювання дять до розвитку захворювання, є комплексними, моторних нейронів, що характеризується поступоале широко визнаним є те, що загибель нейронів вою дегенерацією та загибеллю моторних нейрочастково опосередковується вільно-радикальним нів (Rowland LP, Schneider NA: Amyotrophic lateral пошкодженням (Pratico D and Delanty N: Oxidative sclerosis. N Engl J Med 344:1688-1700, 2001). Моinjury in diseases of the central nervous system: Foторні нейрони - це нервові клітини, розташовані в cus on Alzheimer's disease, Am J Med 109: 577-85, мозку, стовбурі мозку і спинному мозку, які вико2000). нують функції контролюючих одиниць і життєво На цей час єдиний засіб з доведеною ефективажливих комунікаційних зв'язків між нервовою вністю для пацієнтів, що страждають на АЛС - Рісистемою і довільними м'язами тіла. Повідомленлузол (Riluzole) подовжує тривалість життя приня від моторних нейронів мозку (які називають близно на 3 місяці (Miller, R.G., Mitchell, J.D., Lyon, вищими моторними нейронами) передаються моΜ. & Moore, D.H. Riluzole for amyotrophic lateral торним нейронам спинного мозку (які називають sclerosis (ALS)/motor neuron disease (MND). Cochнижчими моторними нейронами), а від них - до rane. Database. Syst. Rev. CD001447 (2002)). Таким конкретних м'язів. При АЛС як вищі моторні нейрочином, ідентифікація нових терапевтичних стратени, так і нижчі моторні нейрони дегенерують або гій для використання при лікуванні АЛС залишагинуть, з припиненням надсилання повідомлень до ється пріоритетним напрямком. м'язів. Нездатні функціонувати, м'язи поступово З матеріалів WO 97/16439 відомо, що деякі слабшають, виснажуються (атрофія) та тремтять види похідних гідроксиламіну підсилюють експре(фасцикуляції). Практично втрачається здатність сію шаперону в клітинах, які піддаються фізіологімозку розпочинати та контролювати довільні рухи. чному стресу, і є корисними в лікуванні захворюБільшість хворих на АЛС вмирають від дихальної вань, пов'язаних з функцією системи шаперону. В опублікованій патентній заявці розкриті різномані 7 86782 8 тні нові категорії похідних гідроксиламіну. Визнафного латерального склерозу, за яким пацієнту чений також певний клас галоїдних похідних гідровводять терапевтично ефективну кількість N-[2ксамової кислоти, до якого належить N-[2-гідроксигідрокси-3-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-13-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3оксид-3-карбоксімідоїлхлориду. карбоксімідоїлхлорид, але N-[2-гідрокси-3-(1В даному винаході термін N-[2-гідрокси-3-(1піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлорид не згадувався прямо. карбоксімідоїлхлорид стосується N-[2-гідрокси-3N-[2-Гідрокси-3-(1(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлориду як вільної основи, її фаркарбоксімідоілхлорид вперше розкрито і заявлено мацевтично прийнятної солі, одержаної при додау WO 00/50403 як чудовий засіб, що здатний змеванні мінеральної або органічної кислоти, а також ншувати інсулінорезистентність. Як було заявлено рацемічної сполуки і кожного з оптично активних він є корисним в лікуванні серій хронічних діабетиенантіомерів і сумішей енантіомерів та фармацевчних ускладнень, особливо ретинопатії, нейропатії тично прийнятних солей оптично активних енантіта нефропатії, і патологічного зменшення нейроомерів або сумішей енантіомерів. дегенерації, спричиненої діабетом, поряд із зменСлід відзначити, що N-[2-гідрокси-3-(1шенням інсулінорезистентності у пацієнта. Хімічні піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3властивості цієї сполуки і її детальний синтез такарбоксімідоїлхлорид переважно застосовується у кож описані в названому документі. формі солі, утвореної при додаванні кислоти. Крім Інше застосування N-[2-гідрокси-3-(1того, слід відзначити, що оптично активні форми піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3цієї сполуки є переважними, особливо (+)-R-N-[2карбоксімідоїлхлориду в лікуванні діабету, особгідрокси-3-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1ливо в лікуванні діабету II типу (інсуліноксид-3-карбоксімідоїлхлорид. Більш переважними незалежного, ІНЗЦД) описане у WO 03/026653. є солі останнього оптично активного енантіомеру, Розкритий винахід стосується антигіперглікемічної утворені при додаванні кислоти, і найбільш перекомпозиції, яка може застосовуватися перорально важним є (+)-R-N-[2-гідрокси-3-(1і містить комбінацію метформіну та N-[2-гідроксипіперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-33-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3карбоксімідоїлхлориду цитрат. карбоксімідоїлхлорид як активний компонент. ПоТермін «нейродегенеративне захворювання» мітний антигіперглікемічний ефект базується на стосується відомих типів нейродегенеративних синергізмі, що виникає при комбінації двох активзахворювань, включаючи аміотрофний латеральних агентів. Жодна з патентних заявок, що стосуний склероз (АЛС), хворобу Альцгеймера (ХА), ється N-[2-гідрокси-3-(1хворобу Паркінсона (ХП), хворобу Хантінгтона піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3(XX), множинний склероз (MC), та різні типи нейкарбоксімідоїлхлорид, не вказує на застосування ропатій. цієї сполуки для лікування захворювань, відмінних Наступні біологічні тести проводили для (+)-Rвід діабету. N-[2-гідрокси-3-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1Нами було знайдено, що N-[2-гідрокси-3-(1оксид-3-карбоксімідоїлхлориду цитрату, як тестопіперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3вої сполуки. Ця хімічна сполука далі в цьому тексті карбоксімідоїлхлорид має біологічні властивості, буде називатися сполукою А. які роблять його корисним в лікуванні нейродегеВ цьому дослідженні використовували транснеративних захворювань. У дослідженні, проведегенних мишей лінії mSOD1(G93A) обох статей. Всім ному на трансгенних мишах лінії mSOD1(G93A), Nекспериментальним тваринам щоденно вводили [2-гідрокси-3-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1сполуку А (10мг/кг, внутрішньочеревинно), почиоксид-3-карбоксімідоїлхлорид запобігав прогресунаючи з віку 35 днів, за розкладом, подібним до ючій втраті моторних нейронів та функції м'язів, попередньо описаного Zhu et al 2002 (Zhu, S. et al. яка звичайно виникає у мишачій моделі АЛС. Minocycline inhibits cytochrome c release and delays На базі описаного вище відкриття винахід заprogression of amyotrophic lateral sclerosis in mice. безпечує нове застосування N-[2-гідрокси-3-(1Nature 417, 74-78 (2002)). піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3Оцінка функції м'язів і кількості моторних одикарбоксімідоїлхлориду у виготовленні фармацевниць тичних композицій для лікування або профілактики Електрофізіологічну оцінку функції м'язів пронейродегенеративних захворювань. водили in vivo на живих тваринах на м'язахПереважно винахід забезпечує нове застосурозгиначах extensor digitorum longus (EDL) обох вання N-[2-гідрокси-3-(1задніх кінцівок для визначення ступеня розвитку піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3захворювання. Реєстрували ізометричне напрукарбоксімідоїлхлорид у виготовленні фармацевтиження та оцінювали кількість моторних одиниць. чних композицій для лікування або профілактики Трансгенних тварин та диких тварин одного аміотрофного латерального склерозу. виводку анестезували хлоральгідратом (4 % хлоКрім того, винахід забезпечує спосіб лікування ральгідрат; 1 мл/100 г маси тіла, внутрішньочереабо профілактики нейродегенеративних захворювинно), і м'язи EDL готували для оцінки in vivo сковань, за яким пацієнту вводять терапевтично еферочувальної здатності та кількості моторних ктивну кількість N-[2-гідрокси-3-(1одиниць. Дистальні сухожилля м'язів EDL були піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3розітнуті та приєднані до передавачів ізометричної карбоксімідоїлхлоридy. Переважно винахід забезсили (пристрої Dynamometer UFI) за допомогою печує спосіб лікування або профілактики аміотрошовкових ниток. Обидві лапи були нерухомо закрі 9 86782 10 плені на столі голками. Сідничний нерв було відсіхунку однієї і тієї ж клітини в послідовних секціях, чено окремо і всі його відгалуження були відрізані виживання моторних нейронів оцінювали в сідничвід нерва, що йде до м'яза EDL. Дистальний кінець ному моторному пулі в кожній 3-й секції попереконерва далі стимулювали з використанням біполявого відділу спинного мозку поміж рівнями L2-L5. рних срібних електродів. Довжину м'яза коригуваДо підрахунку включали тільки ті нейрони, в яких ли до максимального напруження, одержаного за при сильному збільшенні було чітко видиме ядро. умов стимуляції нерва. Ізометричні скорочення Для всіх оцінених параметрів результати анавикликали стимуляцією відрізаного кінця моторнолізували з використанням U-тесту Манна-Уітні для го нерва з використанням імпульсів шириною 0,02 порівняння незалежних вибірок. У всіх випадках мсек. Тетанічні скорочення викликали стимуляцією використовували двобічні тести, і рівень значущом'яза EDL при 40, 80 та 100 Гц на протязі 500 сті було встановлено як р < 0,05. мсек. У трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A) віком Для оцінки кількості моторних одиниць в кож35 днів вже виявлялися мікроскопічні ознаки дегеному м'язі моторні нерви м'язів EDL стимулювали нерації поперекових моторних нейронів, а у віці кожні 4 сек. Силу стимулу поступово збільшували 110 днів параліч задньої кінцівки був очевидним. до одержання покрокового збільшення напруженВплив лікування сполукою А на функцію м'язів ня скорочення, по мірі залучення індивідуальних задньої кінцівки, а також на кількість моторних моторних аксонів. Кількість покрокових збільшень одиниць і виживання моторних нейронів оцінюварахували з одержанням приблизної кількості моли у віці 120 днів, коли трансгенні миші лінії торних одиниць, присутніх в кожному м'язі (Dick, J., mSOD1(G93A) знаходилися на пізній стадії захворюGreensmith, L. & Vrbova, G. Blocking of NMDA вання. receptors during a critical stage of development У диких мишей в нормі присутні 28 ± 0,6 (сеreduces the effects of nerve injury at birth on muscles реднє значення ± S.E.M., n = 11) моторних одиand motoneurones. Neuromuscul. Disord. 5, 371-382 ниць в м'язах EDL. У трансгенних мишей лінії (1995)). mSOD1(G93A) у віці 120 днів були наявні тільки За даними реєстрації напруження скорочення 8,3±0,7 (середнє значення ± S.E.M., n = 10) моторми оцінювали деякі скорочувальні характеристики них одиниць. Однак, у трансгенних мишей лінії м'язів EDL у лікованих і нелікованих трансгенних mSOD1(G93A), лікованих сполукою А, спостерігало(G93A) мишей лінії mSOD1 , в тому числі час напівреся значне покращення виживання моторних одилаксації EDL, як міру часу, необхідного для релакниць, і у віці 120 днів були наявні 14,3±0,6 (середсації м'яза після скорочення. нє значення ± S.E.M., n = 10) моторних одиниць (р Оскільки в нормі EDL є швидким м'язом, він = 0,003). швидко втомлюється при безперервній стимуляції, Скорочувальні характеристики м'язів EDL демонструючи характерну модель втоми. Для доі) Із занотованих значень напруження скорослідження моделі втоми EDL в цих експериментах чення ми також досліджували деякі скорочувальні м'язи обох задніх кінцівок щосекунди стимулювали характеристики м'язів EDL у лікованих і неліковапри 40 Гц імпульсами довжиною 250 мсек на проних трансгенних машей лінії mSOD1(G93A). В нормі тязі 3 хвилин, і реєстрували скорочення м'язів. EDL являють собою швидкі м'язи, що легко втомВ кінці експерименту м'язи EDL з обох лап вилюються, і у диких мишей час напіврелаксації EDL, тягали та зважували і заморожували до хрусткого як міра часу, необхідного для релаксації м'яза пісстану в розплавленому ізо-пентані. М'язи зберігаля скорочення, становить 25,8 ± 2,4 мсек (середнє ли при -80°С до проведення гістологічного аналізу. значення ±S.E.M., n = 10). На протилежність цьоПісля завершення фізіологічних експериментів му, у нелікованих мишей час напіврелаксації упооцінювали виживання моторних нейронів шляхом вільнюється внаслідок денервації та атрофії м'яза підрахунку кількості моторних нейронів в сідничі становить 43,3 ±6,93 мсек (середнє значення ному моторному пулі в рогах черевини з попере±S.E.M., n = 10). Однак, у мишей, лікованих сполучних розтинів поперекового відділу спинного мозку кою А, час напіврелаксації істотно покращувався і (White,С.М., Greensmith,L & Vrbova.G. Repeated становив 32,3 ± 1,80 мсек (середнє значення ± stimuli for axonal growth causes motoneuron death in S.E.M., n = 10), (р = 0,030). adult rats: the effect of botulinum toxin followed by іі) Модель втоми та індекс втоми м'язів EDL partial denervation. Neuroscience 95, 1101-1109 Оскільки в нормі EDL являють собою швидкі (2000)). Мишам робили глибоку анестезію (4% м'язи, при безперервній стимуляції вони швидко хлоральгідрат; 1 мл/100 г маси тіла, внутрішньостомлюються, демонструючи характерну модель черевинно) та здійснювали транскардіальну первтоми. Модель втоми м'язів EDL досліджували у фузію фіксуючим розчином з вмістом 4 % парафомишей дикого типу, трансгенних мишей лінії рмальдегіду. Спинний мозок витягали та mSOD1(G93A) і лікованих трансгенних мишей лінії здійснювали постфіксацію поперекової області mSOD1(G93A). Вимірювали зменшення напруження протягом 2 год в тому ж фіксуючому розчині, з після 3 хвилин стимуляції і обчислювали індекс кріопротекцією в сахарозі (30 % в МРВ) та замо(FI). У трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A) у віці рожені поперечні секції розрізали в кріостаті на 120 днів м'язи EDL ставали резистентними до секції по 30 мкм і збирали на пластинки з основою. втоми внаслідок дегенерації моторних нейронів, Далі секції злегка контрастно забарвлювали за денервації та подальших змін фенотипу м'язових Нісслом (Nissl, галоціанін). Кількість забарвлених волокон. Таким чином, у трансгенних мишей лінії за Нісслом моторних нейронів в обох рогах череmSOD1(G93A) у віці 120 днів індекс втоми EDL ставини підраховували з використанням світлового новив 0,255 + 0,04 (середнє значення ± S.E.M., n = мікроскопу. З метою уникнення подвійного підра10) в порівнянні з 0,848 ± 0,028 (середнє значення 11 86782 12 ± S.E.M., n = 10) у мишей дикого типу. Однак, у групі лікованих сполукою А тварин зменшення мамишей, лікованих сполукою А, індекс втоми EDL си тіла віддалялося і тривалість життя значно постановив 0,416±0,07 (середнє значення ± S.E.Μ., кращувалася, тобто миші лінії mSOD1(G93A) жили в n= 10). Таким чином, індекс втоми EDL значно посередньому 153 ±2,6 днів (середнє значення ± кращувався у лікованих трансгенних мишей лінії S.E.M., n = 7). Це представляє значне збільшення mSOD1(G93A) в порівнянні з нелікованими однопотривалості життя - більше, ніж на 22 % (р £ 0,001). метними тваринами лінії mSOD1(G93A) (p £ 0,05). Наведені вище біологічні властивості роблять Після завершення фізіологічних експериментів N-[2-гідрокси-3-(1-піперидиніл)пропокси]піридин-1оцінювали виживання моторних нейронів шляхом оксид-3-карбоксімідоїлхлорид корисним в лікуванні підрахунку кількості моторних нейронів в сідничнейродегенеративних захворювань. Хоча всі види ному моторному пулі в рогах черевини з поперенейродегенеративних захворювань можуть бути чних розтинів поперекового відділу спинного мозприйняті до уваги, сполука за винаходом є особку. Відповідно до збільшення виживання моторних ливо корисною в лікуванні АЛС. Доза сполуки заодиниць, яке спостерігалося, кількість моторних лежить від стану і захворювання пацієнта, і добова нейронів, що вижили в сідничному моторному пулі доза становить 0,1-400 мг/кг, переважно 0,1-100 лікованих трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A) мг/кг маси тіла. В лікуванні людей пероральна дотакож була значно підвищеною в порівнянні з нелібова доза переважно становить 10-300 мг. Ці дози кованими однопометними тваринами лінії вводять у вигляді дозованих форм, які в певних mSOD1(G93A). У мишей дикого типу виявлено випадках можуть бути розділені на 2-3 менші дози 593±15,8 (середнє значення ±S.E.M., n = 13) модля кожного дня, особливо при пероральному літорних нейронів у досліджуваному сегменті сідникуванні. чного моторного пулу. У нелікованих трансгенних Переважно застосовується стереоізомер рамишей лінії mSOD1(G93A) у віці 120 днів значна кіцемічної сполуки, більш переважно застосовуєтьлькість моторних нейронів загинула і вижили тілься (+)-енантіомер. В цьому випадку для лікування ки 237±14 (середнє значення ±S.E.M., n = 7). Одбуде достатньо меншої кількості активного інгредінак, у трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A), єнта в наведених вище межах. лікованих сполукою А, спостерігалося різке підвиАктивна субстанція може бути введена у звищення виживання моторних нейронів з кількістю чайні фармацевтичні композиції за способами, 412±28 (середнє значення ± S.E.M., n = 4) моторвідомими з рівня техніки. Ці фармацевтичні компоних нейронів, що вижили, навіть у віці 120 днів (р = зиції містять, на додаток до звичайних допоміжних 0,002). речовин і носіїв, N-[2-гідрокси-3-(1Ці результати показують, що після щоденного піперидиніл)пропокси]піридин-1-оксид-3лікування трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A) карбоксімідоїлхлорид або один з його стереоізосполукою А (10мг/кг; внутрішньочеревинно) спомерів, або сіль одного з них, одержану при додастерігається значне збільшення моторних одиниць ванні кислоти, як активні інгредієнти. та підвищення виживання моторних нейронів, а Фармацевтичні композиції можуть бути виготакож покращення функції м'язів задньої кінцівки товлені у формі твердого або рідкого препарату, на пізніх стадіях захворювання (120 днів). які загалом застосовуються для лікування. Можуть З огляду на значне покращення кількості мобути виготовлені таблетки без покриття або з поторних одиниць та підвищення виживання моторкриттям, драже, гранули, капсули, розчини або них нейронів, що спостерігається у лікованих сиропи для перорального введення. Ці лікарські трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A) у віці 120 засоби можуть бути одержані звичайними спосоднів, в окремій групі мишей ми досліджували, чи бами. Продукти можуть містити наповнювачі, такі лікування сполукою А буде мати вплив на триваяк мікрокристалічна целюлоза, крохмаль або лаклість життя трансгенних мишей лінії mSOD1(G93A). тоза, лубриканти, такі як стеаринова кислота або Нами було виявлено, що середня тривалість житстеарат магнію, покриваючі матеріали, такі як цутя нелікованих трансгенних мишей лінії кор, плівкоутворюючі матеріали, такі як гідрокси mSOD1(G93A) становила 125±1,8 днів (середнє знаметил целюлоза, ароматизатори або підсолоджучення ±S.E.M., n = 18), що визначалося за нездатвачі, такі як метилпарабен або сахарин, або барвністю покладеної на бік миші підвестися, а також ники. за втратою приблизно 20 % маси тіла. Однак, в Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601