Спосіб виробництва біологічно активних речовин селезінки – поліамінів
Номер патенту: 92225
Опубліковано: 11.08.2014
Автори: Грабовський Степан Степанович, Драчук Уляна Романівна
Формула / Реферат
Спосіб виробництва біологічно-активних речовин селезінки - поліамінів, що включає підготовку і витримку сировини 5-6 днів за температури 5-6 °С, зачистку і подрібнення селезінки, та екстрагування в дихлоретані 8 днів за температури 15-18 °С у співвідношенні 1:2, проведення другої екстракції дихлоретаном у співвідношенні 1:1 впродовж 4 годин, перемішуючи кожні 15 хвилин, відгонку дихлоретану, обробку екстракту спирту петролейним ефіром, відгонку спирту, висолювання спленіну, розведення водного залишку спленіну і консервування, опромінення бактерицидними лампами та стерильну фільтрацію і розлив, який відрізняється тим, що сировину (селезінку) додатково обробляють ультразвуком частотою 10-50 кГц впродовж 3 хвилин на 3 та 8 день екстрагування.
Текст
Реферат: Спосіб виробництва біологічно активних речовин селезінки - поліамінів включає підготовку і витримку сировини, зачистку і подрібнення селезінки та екстрагування в дихлоретані, проведення другої екстракції дихлоретаном у співвідношенні, відгонку дихлоретану, обробку екстракту спирту петролейним ефіром, відгонку спирту, висолювання спленіну, розведення водного залишку спленіну і консервування, опромінення бактерицидними лампами та стерильну фільтрацію і розлив. Сировину (селезінку) додатково обробляють ультразвуком частотою 10-50 кГц впродовж 3 хвилин на 3 та 8 день екстрагування. UA 92225 U (54) СПОСІБ ВИРОБНИЦТВА БІОЛОГІЧНО АКТИВНИХ РЕЧОВИН СЕЛЕЗІНКИ - ПОЛІАМІНІВ UA 92225 U UA 92225 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до фармацевтичної промисловості, зокрема до технології виготовлення біопрепаратів з природної сировини тваринного походження, а саме до способів виробництва "Спленіну" (поліамінів), сировиною для якого є подрібнена селезінка забійних тварин. "Спленін" являє собою небілковий препарат, який може бути використаний для лікування хронічних тендовагінітів, токсикозів на ранніх стадіях вагітності та профілактики переходу легких початкових форм токсикозу у важкі. Корисна модель може бути застосована на підприємствах із різними формами власності, що виробляють лікарські препарати, або на підприємствах м'ясної промисловості, в яких крім продукції основного профілю, виготовляють лікарські препарати. У відомому способі виробництва спленіну (АС СРСР № 111934, Способ получения препарата спленина для лечения токсикоза на ранних сроках беременности, В.П. Комисаренко. - М., 1957.) одержання препарату запропоновано наступним чином: 100 кг селезінки витриманої впродовж трьох днів при температурі 5-6 °C, подрібнюють, завантажують у екстракційний апарат та заливають 200 кг дихлоретану. Екстракцію проводять впродовж 6-8 днів за температури 15-18 °C. В перші чотири години екстракцію проводять при безперервному перемішуванні, а в подальшому перемішування проводять кожні 15 хвилин. У загальному, маса повинна перемішуватися не менше як 6 годин на добу. В останній день екстракції відстояний екстракт (дихлоретан як важчий буде внизу, а селезінкова масу вверху) випускають із екстракційного апарата через кран і фільтрують через нутч-фільтр. Для повторної екстракції відстояний екстракт селезінки заливають 100 кг дихлоретану. Екстракцію проводять в умовах аналогічних до першої впродовж 48 годин. Після цього екстракт зливають, змішують із першим маточним екстрактом. Для відділення дихлоретану від селезінкової маси при першій і другій екстракції екстракт пропускають через центрифуги, які розташовують так, щоб від центрифугований екстракт одразу ж попадав на нутч-фільтри. Недоліками цього способу є тривалий термін екстрагування та значні затрати енергії на перемішування: постійне - у перші чотири дні екстрагування, та періодичне - в подальші терміни проведення процесу екстракції. Препарат "Спленін" містить суміш біологічно-активних речовин поліамінів (путресцин-2НС1, спермідин-3НСЦ спермін-4НСЦ N1 - та N8 -ацетилспермідин, ацетилпутресцин, N1 ацетилспермін), які можливо одержати синтетичним способом (Н.А. Григоренко, Й. Вепсалайнен, А. Ярвинен, Т.А. Кейнанен, Л. Алхонен, Ю. Янне, A.M. Крицын, А.Р. Хомутов. Новый синтез α - метилспермидина. Биоорганическая химия, 2004. - Т. 30. №4. - С. 441-445). Проте недоліком цього способу є те, що синтетичний препарат, який є аналогом "Спленіну", у більшості випадків може викликати алергічні реакції та складніше засвоюється організмом. Найбільш близьким аналогом до запропонованого способу є спосіб виробництва спленіну (В.А. Гуров, М.А. Иноземцева, А.Б.Замиховский. Справочник по производству органопрепаратов. - М.: Изд-во "Пищевая промышленность", 1970. - С. 96-97), в якому виробництво проводять з селезінки забійних тварин. Заявлений спосіб і найближчий аналог мають спільні суттєві ознаки. Спосіб передбачає підготовку і витримку сировини 5-6 днів за температури 5-6 °C, зачистку і подрібнення селезінки, та екстрагування в дихлоретані 8 днів за температури 15-18 °C у співвідношенні 1:2, проведення другої екстракції дихлоретаном у співвідношенні 1:1 впродовж 4 годин, перемішуючи кожні 15 хвилин, відгонку дихлоретану, обробку екстракту спирту петролейним ефіром, відгонку спирту, висолювання спленіну, розведення водного залишку спленіну і консервування, опромінення бактерицидними лампами та стерильну фільтрацію і розлив. Недоліками найближчого аналога те, що застосування способу вимагає значних затрат виробничих потужностей на проведення процесу екстракції, при тому, процес екстракції відбувається протягом досить тривалого часу за відносно не високої ефективності, зокрема низького виходу загальної кількості діючої речовини - поліамінів. Запропонований спосіб дозволяє усунути вказані недоліки найближчого аналога і забезпечує більший сумарний вихід поліамінів за рахунок кращого доступу екстрагенту до сировини. В основу корисної моделі поставлено задачу створити зручний у застосуванні спосіб, який дозволив би за наявних затрат виробничих потужностей на перемішування, підвищити ефективність екстрагування спленіну з подрібнених частинок селезінки, за рахунок кращого доступу екстрагенту до цільового компоненту та відповідно досягнути інтенсивнішого виходу екстракту, зокрема збільшити кількість активних поліамінів. Поставлена задача вирішується тим, що сировину (селезінку) додатково обробляють ультразвуком частотою 10-50 кГц впродовж 3 хвилин на 3 та 8 день екстрагування. 1 UA 92225 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Технологічні схеми виробництва органопрепаратів є процесами складними, багатоступінчатими, енерговитратними (В.А. Гуров, М.А. Иноземцева, А.Б. Замиховский. Справочник по производству органопрепаратов. - М.: Изд -во "Пищевая промышленность", 1970. - С. 96-97). Найважливішим ступенем технологічного процесу в цілому є екстрагування активної діючої групи органопрепаратів з сировини тваринного походження. При цьому широко застосовується ультразвук, що як правило, не тільки значно пришвидшує у часі сам процес екстрагування, але й призводить до збільшення виходу основного продукту (Valachovic P., Towards the industrial production of medicinal tincture byultrasound assisted extraction / P. Valachovic, A. Pechova, T. J. Mason // Ultrasonics Sonochemistry. - 8 (2001). - 111-117). Ультразвук, як відомо, виявляє руйнівний та дробильний вплив на клітини органічної сировини. Крім цього, ультразвук надає екстрактам, емульсіям та суспензіям стерильності (Вернигора П. Ф. Методы ультразвуковой дезинтеграции в микробиологических исследованиях / П. Φ. Вернигора, Η. К. Литвинова, Е. П. Москаленко. - Акуст. журнал. - 1975. - Т. 21. - № 2. - С. 316317; Москаленко Е.П. Проблемы ультразвуковой дезинтеграции в микробиологии. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине. - Ульяновск, 1975. - Ч. 1. - С. 21-26; Шмакотина 3. В. Возможность применения ультразвука для стерилизации лечебно-профилактических сывороточных препаратов / 3. В. Шмакотина, Л. Н. Юхимеяко, О. И. Белинская. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине. - Ростов н/Д, 1972. - Т. 1. - С. 3-114). У звуковому та ультразвуковому діапазоні, який охоплює межі від 10 до 50 кГц, проявляються такі фізико-хімічні явища, як акустична кавітація, інтенсивне перемішування, перемінний рух часток, інтенсифікація масообмінних процесів. При цьому утворюються суспензії та емульсії, проходить селективне руйнування клітин. До того ж, такий діапазон не призводить до змін у структурі речовин, до дії на клітинному і субклітинному рівні, до електронного збудження та до магнітного і електроакустичного ефекту. Отже, наведені вище відомості свідчать, що застосування заявленого способу, який передбачає додаткову обробку сировини (селезінки) ультразвуком з частотою в діапазоні 10-50 кГц впродовж 3 хвилин на 3 та 8 день екстрагування, в технології виготовлення препарату спленіну інтенсифікує процеси дроблення тканин та руйнування клітин, перемішування часток, надає екстрактам стерильності та збільшує вихід кінцевого продукту - поліамінів. Реалізацію заявленого способу здійснюють наступним чином: свіжу або розморожену селезінку забійних тварин (ВРХ) піддають автолізу, витримуючи за температури +4 °C п'ять шість днів, зачищають і подрібнюють у м'ясорубці. Отриманий фарш поміщають порціями у реактор і заливають дихлоретаном у співвідношенні 1:2 та перемішують вісім днів за температури +18 °C. На третьому та восьмому дні екстрагування селезінку обробляють ультразвуком частотою 10-50 кГц впродовж 3 хв. Екстракт на 8 добу відстоюють, проціджують, переносять у вакуумно-випарний апарат і відганяють дихлоретан за температури +45 °C під вакуумом. До отриманого залишку водного екстракту добавляють дихлоретан у співвідношенні 1:1 та екстрагують впродовж 4 годин, перемішуючи кожні 15 хвилин. Відганяють дихлоретан та обробляють екстракт петролейним ефіром. Відганяють спирт і висолюють спленін за допомогою хімічно чистого хлориду натрію. Розводять водний залишок спленіну та консервують препарат спиртом. Опромінюють бактерицидними лампами, фільтрують дотримуючись стерильних умов і розливають. Отриманий таким чином небілковий препарат "Спленін" (поліаміни) представляє собою прозору рідину, жовтуватого кольору, солонуватого смаку, з різким запахом. Ефективність заявленого способу і його переваги у порівнянні з найближчим аналогом підтверджені прикладом конкретного виконання способу. В умовах лабораторії кафедри біохімії, біотехнології та загальної хімії ЛНУВМ та БТ ім. С.З. Ґжицького проводили екстрагування суміші поліамінів. Для цього 1 кг селезінки витримували за температури +4 °C п'ять шість днів, зачищали і подрібнювали у м'ясорубці. Подрібнену селезінку заливали 2 л дихлоретану в герметичному посуді та перемішували вісім днів за температури +18 °C. Перші чотири години екстракцію здійснювали при безперервному перемішуванні, потім перемішували безперервно 15 хв. щогодини. На восьму добу екстракт проціджували через грибок 6-8 шарів марлі і відганяли дихлоретаном за температури +45 °C під вакуумом (640 мм. рт. ст.) до повного видалення. Екстракт підігрівали в емальованому посуді за температури +40 °C і добавляли 70°спирту та 1 Μ розчин хлорної кислоти, залишаючи на добу у холодильнику. Після цього зразки центрифугували 30 хв. при 16000 g. З усіх проб відбирали надосадову фракцію та додавали до кожного зразка по 300 мкл діетилового ефіру. Інтенсивно перемішували та центрифугували 30 хв. при 16000 g. Для подальшої роботи відбирали по 300 мкл кислотної фракції. До відібраної 2 UA 92225 U 5 10 15 20 25 аліквоти додавали насичений розчин карбонату натрію з розрахунку 25 мкл карбонату на 100 мкл кислоти. Після цього до кожного зразка додавали по 0,4 мкл розчину 5-диметиламіно-1нафталін-сульфоніл хлориду (Serva, США) в ацетоні у концентрації 5 мг/мл. Залишали зразки на 20 год. за кімнатної температури у темному місці для дансилювання поліамінів. Потім до зразків додавали по 400 мкл циклогексану та інтенсивно перемішували для екстракції дансильованих поліамінів, центрифугували 10 хв. при 16000 g. Відбирали фракцію циклогексану та переносили її у тиглі для вакуумного сушіння. Процедуру із циклогексаном повторювали тричі. Циклогексанові фракції висушували у вакуумній сушарці за кімнатної температури без доступу світла. Осад, що залишився, розчиняли в 400 мкл метанолу та фільтрували через фільтр PTFE-25-2 фірми Supelco з розмірами пор 0,2 мкм. Після цього проводили аналіз зразків на хроматографі. Як стандарт застосовували еквімолярну суміш стандартних поліамінів (путресцин•2НС1,спермідин•3НСl, спермін•4НСl, N1- та Ν8-ацетилспермідин, ацетилпутресцин, N1-ацетилспермін) із розрахунку 25 нмоль на пробу. Суміш стандартів, попередньо розчинену в 1 Μ перхлорній кислоті, готували аналогічно дослідним зразкам. У роботі використовували розчинники та стандарти поліамінів фірми Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Рівень поліамінів розраховували у наномолях на 1 мг білка тканини. Нами було розроблено експериментальний пристрій ультразвукового екстрагування, який дає акустичну потужність 100 вт і працює у діапазоні 37 40 кГц. Резонансна чистота залежить від об'єму і густини речовини, що використовується. Була проведена додаткова обробка селезінки ультразвуком протягом 3 та 5 хв. на першому, третьому та восьмому дні екстрагування. Проведені дослідження показали, що при використанні ультразвуку концентрація загальної кількості активної діючої речовини спленіну - суміші поліамінів зросла у порівнянні із контрольними зразками одержаними без обробки селезінки ультразвуком (табл.). Таблиця Концентрація поліамінів в залежності від часу екстрагування та при використанні ультразвукового приладу (М±m, n=3) 3 хв. ультразвук на 1-ий день 4,72±0,061 0,423±0,004 0,296±0,028 5,44±0,46 5хв. ультразвук на 1-ий день 3 хв. 3 хв. ультразвук ультразвук на 3-ій день на 8-ий день Путресцин (нмоль/л) 4,973±0,037 7,823±0,055 8,48±0,022* Спермідин (нмоль/л) 0,315±0,004 0,321±0,007 0,245±0,005 Спермін (нмоль/л) 0,146±0,029 0,180±0,065 0,149±0,037 Загальна кількість поліамінів (нмоль/л) 5,43±0,015 8,323±0,025 8,87±0,026* контроль 7,410±0,013* 0,284±0,005 0,152±0,007 7,84±0,015* Примітка:*- різниця достовірна відносно контролю (Р
ДивитисяДодаткова інформація
Автори англійськоюDrachuk Uliana Romanivna
Автори російськоюДрачук Ульяна Романовна
МПК / Мітки
МПК: A61K 31/04, A61K 31/13, A61K 35/28
Мітки: біологічно, поліамінів, речовин, виробництва, селезінки, активних, спосіб
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/6-92225-sposib-virobnictva-biologichno-aktivnikh-rechovin-selezinki-poliaminiv.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб виробництва біологічно активних речовин селезінки – поліамінів</a>
Попередній патент: Розподільний пристрій вищої напруги трансформаторної підстанції
Наступний патент: Спосіб виявлення та відбору функціонально однорідних груп бугайців м’ясних порід великої рогатої худоби
Випадковий патент: Коробка швидкостей фрезерного верстата