Похідні пептидів, що є антагоністами речовини р та нейрокініну а

1, Производные пептидов общей фор мулы (I) о в которой R, представляет собой водород, фенил(низший)алкоксикарбонил, низший алканоил, С15-С2О алканоил, бенз-оил, тиенил(низший)алканоил, низший алкенилфенил(низший)алкеноил^ низший алкилфенил(низший)алканоил, R2 представляет собойсгидроксигруппу, R3 представляет собой карбоксигруппу или алкоксикарбонил, или R 2 и R 3 образ уют вмес те группу О - С О- , R4 представляет собой гидрокси-, низший алканоилокси-, бензилоксигруппу, R5 представляет собой гидрокси-, низший алканоилокси-, бензилоксигруппу,' R6 представляет собой гидрокси-, низший алканоилокси-, низший алкилокси-, бензилоксигруппу, «««представляет собой (Е)- или (Z)двойную или одинарную связь, или их фармацевтически приемлемые со ли, являющиеся антагонистами вещества Р и нейрокинина А. ' 2. Производные пептида по п. 1, от л и ч а ю щ и е с я тем, что R, представляет собой низший алкилфенил(низший)алканоил, R 2 и R 3 образ уют вместе группу О - С О- , R4 представляет собой гидроксигруппу, R5 представляет собой гидроксигруппу> R6 представляет собой гидрокси группу, ?~^™ представляет собой (Е)- или (Z)двойную связь. 3. Производные пептида по п. 2, о тл и ч а ю щ и е с я тем, что R, представляет собой 3-(2-пентилфенил)пропаноил 4. Производные пептида по п. 3, о тл и ч а ю щ е е с я тем, что оно представляет собой вещество формулы (II) С > ON 00 О он 26845 4 , ,-D-Phe Leu \ \llo Th r Данное изобретение касается новых тагонизм к нейрокинину А (вещество К) пептидных производных и их фармацевти- или аналогичным. чески приемлемых солей, которые обладают Таким образом, настоящее изобретефармакологической активностью. 25 ние предусматривает пептидные производные и их фармацевтически приемлеБолее конкретно оно касается новых мые соли, полезные для профилактики и пептидных производных и их фармацевтилечения астмы и т.д. чески приемлемых солей, которые облаПептидные производные согласно дают фармакологическими активностями, 30 изобретению могут быть представлены такими как антагонизм к веществу Р, анследующей формулой (I): 26845 где R 1 представляет собой водород или ацильную группу; R2 является гидроксигруппой и R 3 - карбоксигруппа или защищенная карбоксигруппа, или R2 и R3, соединенные вместе, преде- 5 тавляют собой группу формулы-о-С-» руппой; Re является гидроксигруппой, защищенной гидроксигруппой или низшей алкоксигруппой и *^™ представляет простую или двойную связь. Новые пептидные производные согласно настоящему изобретению формулы R4 является гидроксигруппой или защи- (I) могут быть получены различными спощенной гидроксигруппой; R3 является гид- собами. (Получение синтетическими спороксифуппой или защищенной гидроксиг- 10 собами): 6 Способ 1 или его соль I ; циклизация. ' 26845 Способ 2 оР (III) или его соль! і . CNH. циклизация .5 ' ' : ' ' . или его соль 26845 Способ 3 R (Ib) или его соль t Деацилирование .5 или его соль О CNH. 11 26845 Способ 4 12 5 NH. (Ic) или его реакционнзспособное производное по аминогруппе или его соль или его соль t3 Способ 5 26845 15 Способ 6 26845 16 17 18 26845 Способ 7 (If) или его соль | Сложная этерификация н CNH 2 19 Способ 8 20 26845 R (Ih) или его соль И 0 CNH. Восстановление 21 26845 22 II CNH. Способ 9 1 Алкилирование 26845 23 где R\ R2, R3, R4, R5, Re и —« каждый имеет определенные выше значения, R^ 1 является ацильной группой, Ra6 является ацилоксигруппой, R,* является сложно-этерифицированной карбоксигруппой, Rb1 представляет собой ар(низший)алкеноил, замещенный низшей алкенильной груп Способ А 24 пой, R,.1 означает ар(низшийЗ-алканоил, замещенный низшей алкильной группой и Rbe представляет собой низшую алкоксигруппу. Исходные соединения (II) и (III) являются новыми и могут быть получены следующими способами. \ или его соль 25 26 26845 (і) Реакция удаления амино защитной группы в Р8 (И) R" 1 (VI) или его соль или его соль 27 28 26845 (і) Реакция удаления амино защитной группы в Р9 сн (VII) {VIII) или его соль или его соль 29 26845 ЗО Рекция удаления амино защитной труппы в Р10 и карбокси защитной группы в Р 7 (її) или его соль >} 31 32 26845 Способ В ] сн. .12 (IX) или его соль (і)Реащия"удаления амино ' защитной группы в Р fi і О II CNH. О (X) Н или его соль 34 26845 зз (XI) или его соль (і) Реакция удаления амино защитной группы в Рв он 111) о «XII) или его соль 36 26845 35 (XIII) или его соль Реакция удаления амино защитной группы Р14 и карбокси защитной группы в рН NH (Ш) его соль или 37 * 26845 где R\ R4, R5, R6 и «*«« каждый имеет значения, определенные для них выше, R7 является защищенной карбоксигруппой, R8 защищенная аминогруппа, R9 - защищенная аминогруппа, R10 защищенная 5 аминогруппа, R11 - защищенная карбоксигруппа, R12 - защищенная аминогруппа, R13 защищенная аминогруппа, R14 - защищенная аминогруппа. Способы получения целевых и исход- 10 ных соединений согласно изобретению поясняются следующим образом. Процесс I (способ 1) Соединение (la) или его соль может быть получено, если подвергнуть соеди- 15 нение (II) или его соль реакции циклизации. Эту реакцию проводят традиционным методом синтеза циклических пептидов, таким как метод с использованием сме- 20 шанных ангидридов кислот, активированных сложных эфиров, карбодиимидный метод или тому подобные. Реакцию обычно проводят в тради ционном растворителе, таком как спирт, 25 тетрагидрофуран, этилацетат, N.N-диметилформамид» дихлорметан, хлороформ, или любой другой растворитель, который не оказывает отрицательного влияния на течение реакции. 30 Температура реакции не является критической, и реакцию обычно проводят при охлаждении и до нагревания. Способ 2 Соединение (la) или его соль можно 35 получить, подвергая соединение (III) или его соль реакции циклизации. Эту реакцию проводят традиционным методом синтеза циклических пептидов, таким как метод с использованием сме- 40 шанных ангидридов кислот, активированных сложных эфиров , карбодиимидный метод и тому подобные. Реакцию обычно проводят в тради•ционном растворителе, таком как спирт, 45 тетрагидрофуран, этилацетат, N.N-диметилформамид, дихлорметан, хлороформ или любой другой растворитель, который не влияет отрицательно на реакцию. Температура реакции не является кри- 50 тической и реакцию обычно проводят при температурах от охлаждения до нагревания. Способ 3 Соединение (Ic) или его соль можно 55 получить, подвергая соединение (Ib) или его соль реакции деацилирования. Подходящий метод такой реакции может включать обычный метод, такой как гидролиз, восстановление и тому подобные. 38 і) Гидролиз Гидролиз обычно предпочтительно проводят в присутствии основания или кислоты, включая кислоту Льюиса. Подходящее основание может включать неорганическое основание и органическое основание, такое как гидроокись, или карбонат, или бикарбонат щелочного металла (т.е. натрия, калия и так далее), щелочноземельного металла (т.е. магния, кальция и так далее), триалкиламин (т.е. триметиламин, триэтиламин и так далее), пиколин, 1,5-диазабицикло[4.3.0]-нон-5-ен, 1.4-диазабицикло[2.2.2]-октан, 1,8-диазабицикло-[5.4.0]-ундец-7-ен или тому подобные. Подходящая кислота может включать органическую кислоту (т.е. муравьиную кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, трихлоруксусную кислоту, трифторуксусную кислоту и так далее) и неорганическую кислоту (т.е. хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, хлористый водород, бромистый водород и так далее). Отщепление с использованием кислоты Льюиса, такой как тригалоидуксусная кислота (т.е. трихлоруксусная кислота, трифторуксусная кислота и так далее) или тому подобной предпочтительно проводят в присутствии улавливающих катионы агентов (т.е. анизол, фенол и так далее). Реакцию обычно проводят в растворителе, таком как вода, спирт (т.е. метанол, этанол и так далее), хлористый метилен, тетрагидрофуран, их смесь или любой другой растворитель, который не оказывает вредного воздействия на реакцию. Жидкое основание или кислота может быть также использовано в качестве растворителя. Температура реакции не является критической и реакцию обычно проводят при температурах от охлаждения до нагревания. 0) Восстановление Восстановление проводят традиционным методом, включающим химическое восстановление и каталитическое восстановление. Подходящими катализаторами для использования при химическом восстановлении, являются сочетание металла (т.е. цинка, железа и так далее) или металлического соединения (т.е. хлорида хрома, ацетата хрома и так далее) и органической или неорганической кислоты (т.е. муравьиной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, трифторуксусной кислоты, пара-толуолсульфокислоты, хлорис 39 26845 товодородной кислоты, б ром истов о дородной кислоты и так далее). Подходящими катализаторами, используемыми при каталитическом восстановлении, являются традиционные катализаторы, такие как платиновые катализаторы (т.е. платиновая пластинка, губчатая платина, платиновая чернь, коллоидная платина, окись платины, платиновая проволока и так далее), палладиевые катализаторы (т.е. губчатый палладий, палладиевая чернь, окись палладия, палладий на угле, коллоидный палладий, палладий на сульфате бария, палладий на карбонате бария и так далее), никелевые катализаторы {т.е. измельченный никель, окись никеля, никель Ренея и так далее), кобальтовые катализаторы (т.е. измельченный кобальт, кобальт Ренея и так далее), железные катализаторы (т.е. измельченное железо, железо Ренея и так далее), медные катализаторы (т.е. измельченная медь, медь Ренея, медь Ульмана и так далее) и тому подобные. Восстановление обычно проводят в традиционном растворителе, который не влияет отрицательно на реакцию, таком как вода, метанол, этанол, пропанол, N.Nдиметилформамид, тетрагидрофуран или их смесь. В дополнение в случае использования упомянутой выше кислоты в жидком виде, применяемой при химическом восстановлении, она может быть также использована в качестве растворителя. Температура реакции этого метода восстановления не является критической и реакции обычно проводят при температурах от охлаждения до нагревания. Способ 4 Соединение (Ib) или его соль могут быть получены, подвергая реакции ацилирования соединение (1с) или его реакционноспособное производное при аминогруппе или его соль. Подходящее реакционноспособное производное при аминогруппе соединения (1с) может включать основание Шиффа иминного типа или его таутомерный изомер енаминового типа, полученное при реакции соединения (1с) с карбонильным соединением, таким как альдегид, кетон и тому подобное; силильное производное, полученное взаимодействием соединения (Іс) с силильным соединением, таким как бис-(триметилсилил)-ацетамид, моно-(триметилсилил)-ацетамид, бис-{триметилсилил)-мочевина или тому подобными; производное, образованное при взаимодействии соединения (1с) с треххлористым фосфором или фосфогеном и тому подобными. 5 10 15 20 25 30 35 40 Подходящее ацилирующее средство, используемое в настоящей реакции ацилирования, может включать традиционное ацилирующее средство и может быть выражено формулой: RJ - ОН (XIV) (где Ra' имеет значение, определенное ранее) или его реакционноспособным производным или его солью. Подходящее реакционноспособное производное соединения формулы (XIV) может включать галоидангидрид, ангидрид кислоты, активированный амид, активированный сложный эфир и тому подобное. Подходящим примером может быть хлорангидрид; азид кислоты, смешанный ангидрид кислоты с кислотой, такой как замещенная фосфорная кислота (т.е. диалкилфосфорная кислота, фенилфосфорная кислота, дифенилфосфорная кислота, дибензилфосфорная кислота, галогенизированная фосфорная кислота и так далее), диалкилфосфористая кислота, сернистая кислота, тиосерная кислота, сульфокислота (т.е. метансульфокислота, и так далее), алкилуглекислота, алифатическая карбоновая кислота (т.е. пивалиновая кислота, валериановая кислота, изовалериановая кислота, 2-этилмасляная кислота или трихлоруксусная кислота и так далее) или ароматическая карбоновая кислота (т.е. бензойная кислота и так далее); симметрический ангидрид кислоты, активированный амид с имидазолом, 4-замещенный имидазол, диметилпиразол, триазол или тетразол; или активированный сложный эфир (т.е. цианометиловый сложный эфир, метоксиметиловый эфир, диметили+ 40 минометиловый эфир [(CH3)2N = СН-], виниловый эфир, пропаргиловый эфир, паранитрофениловый эфир, 2,4-динитрофениловый эфир, трихлорфениловый эфир, пентахлорфенилоеый эфир, метилсульфо45 нилфениловый эфир, фенилазофениловый эфир, фениловый тиоэфир, пара-нитрофениловый тиоэфир, пара-крезиловый тиоэфир, карбоксиметиловый тиоэфир, пираниловый эфир, пиридиловый эфир, пи50 перидиловый эфир, 8-хинолиловый тиоэфир, и так далее) или сложный эфир с N-гидроксисоединением (т.е. N.N-диметилгидроксиламин, 1 -гидрокси-2-( 1 Н)-пиридон, N-гидроксисукцинимид, N-гидроксиф55 талимид, 1-гидрокси-6-хлор-1Н-бензотиазол и так далее) и тому подобные. Эти реакционноспособные производные могут быть необязательно выбраны из них в соответствии с видом используемого соединения формулы (XIV). 41 26845 Реакцию обычно проводят в традиционном растворителе, таком как спирт, (т.е. метанол, этанол и так далее), ацетон, диоксан, ацетонитрил, хлористый метилен, тетрагидрофуран, М,Г\І-диметилформамид, пиридин или любой другой растворитель, который не влияет отрицательно на реакцию. Этот традиционный растворитель может быть также использован в смеси с водой. Если соединение (XIV) используют в форме свободной кислоты или в форме ее соли в этой реакции то реакцию предпочтительно проводят в присутствии традиционного конденсирующего средства, такого как Ы.Ы'-дициклогексилкарбодиимид, М-циклогексил-Ы'-морфолиноэтилкарбодиимид, Ы-циклогексил-Ы'-(4-диэтиламиноциклогексил)-карбодиимид, 1Ч,!Ч'-диэтилкарбодиимид, N, N1 -диизопропилкарбодиимид, г4-этил-1Ч'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, М,Ы-карбонилбис-(2-метилимидазол), пентаметиленкетон-1Ч-циклогексиламин, дифенилкетон-Ы-циклогексилимин. этоксиацетилен, 1-алкокси-1-хлорэтилен, триалкилфосфит, этилполифосфат, изопропиловый эфир полифосфорной кислоты, оксихлорид фосфора (хлористый фосфорил), треххлористый фосфор, хлористый оксалил, трифенилфосфин, хлористый тионил, соль 2-этил-7-оксибензизоксазолия, гидроокись 2-этил-5-(метасульфофенил)-изоксазолия, внутримолекулярная соль, 1-(лара-хлорбензолсульфонилокси)-6-хлор-1Н-бензотриазол, так называемый реактив Вильсмайера, полученный взаимодействием М,Ы-диметилформамида с хлористым тионилом, фосгеном, трихлорметиловым эфиром хлормуравьиной кислоты, оксихлоридом фосфора и так далее, или тому подобного. Реакция может быть также проведена в присутствии неорганического или органического основания, такого как бикарбо* нат щелочного металла, три (низший) алкиламин, пиридин, Ы-(низший) алкилморфолин, 1Ч,Ы-ди(низший)алкилбензиламин или тому подобного. Температура реакции не является критической и реакцию обычно проводят при температурах от охлаждения до комнатной температуры. Способ 5 Соединение (le) или его соль могут быть получены, подвергая соединение (Id) или его соль реакции ацилирования. 42 Соединение (If) или его соль можно получить, подвергая гидролизу соединение (la) или его соль. Эту реакцию гидролиза можно про-5 вести со ссылкой на упомянутый выше способ 3. Способ 7 Соединение (!д) или его соль можно получить, подвергая соединение (If) или 10 его соль реакции этерификации. Этерифицирующее средство, используемое в этой реакции, может включать одно из традиционных средств, такое как спирт или его реакционноспособный эквивалент 15 (т.е. галогенид, сульфонат, сульфат, диазосоединение и так далее) или тому подобное. Реакцию обычно проводят в традиционном растворителе, таком как ацетон, 20 диоксан, спирт, хлористый метилен, хлористый этилен, н-гексан, тетрагидрофуран, этилацетат, М,Ы-диметилформамид или любой другой растворитель, который не оказывает отрицательного воздействия 25 на реакцию. Температура реакции не является критической и реакцию обычно проводят при температурах от охлаждения до нагревания. 30 Способ 8 Соединение (И) или его соль можно получить, подвергая восстановлению соединение (Ih) или его соль. Подходящими катализаторами, исполь35 зуемыми при каталитическом восстановлении, являются традиционные восстановители, такие как платиновые катализаторы (т.е. платиновая пластинка, губчатая платина, платиновая чернь, коллоидная 40 платина, окись платины, платиновая проволока и так далее), палладиевые катализаторы (т.е. губчатый палладий, палладиевая чернь, окись палладия, палладий на угле, коллоидный палладий, палладий 45 на сульфате бария, палладий на карбонате бария и так далее), никелевые катализаторы (т.е. измельченный никель, окись никеля, никель Ренея и так далее), кобальтовые катализаторы (т.е. измельчен50 ный кобальт, кобальт Ренея и так далее), железные катализаторы (т.е. измельченное железо, железо Ренея и так далее), медные катализаторы (т.е. измельченная медь, медь Ренея, медь Ульмана и так 55 далее) и тому подобные. Реакцию обычно проводят в традиционном растворителе, таком как ацетон, На эту реакцию имеется ссылка в диоксан, спирт, тетрагидрофуран, этилапримерах 2, 4, 5, 7, 8, 17 и 18, описанных цетат, ди метил формамид, ди метил сульфокпозднее. сид или любой другой растворитель, коСпособ 6 43 26845 44 chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, 305, Japan) торый не влияет отрицательно на реакпод номером ГЕРМ ВР-1667 (дата депоцию. нирования: 20 января 1988 года). Температура реакции не является криПонятно, что продуцирование новых тической и реакцию обычно проводят при температурах от охлаждения до нагрева- 5 WS-9326A и WS-9326B не ограничивается описываемым здесь конкретным организния. мом, который приведен лишь в целях илСпособ 9 люстрации. Это изобретение включает такСоединение (Ij) или его соль можно же использование любых мутантов, котополучить, подвергая реакции алкилирования соединение (Id) или его соль. Эта 10 рые способны продуцировать WS-9326A и реакция описана далее со ссылкой на WS-9326B, включая природные мутанты, а пример 19. также искусственные мутанты, которые моСпособ А гут быть получены от описанного здесь Соединение (II) или его соль можно организма традиционными средствами, таполучить взаимодействием соединения (IV) 15 кими как облучение рентгеновскими лучаили его соли согласно схеме реакции, ми, ультрафиолетовым излучением, обрапоказанной в способе А. Каждая реакция ботка М-метил-М'-нитро-Ы-нитрозогуанидив этой схеме может быть проведена траном, 2-аминопурином и тому подобными. диционным методом, принятым в синтезе пептидов. Исходное соединение (IV) или 20 Streptomyces violaceoniger № 9326 его соль можно получить методами, опиимеет следующие морфологические, кульсанными позднее в разделе "Получение" туральные, биологические и физиологиили аналогичным образом. ческие характеристики. Способ В (1) Морфологические характеристики Соединение (III) или его соль можно 25 Были использованы методы, описан получить реакцией соединения (IX) или ные Ширлингом и Готлибом (Shirting E.B. его соли по схеме реакции, показанной в and D.Gotlieb. Методы для характеристики способе В. Каждая реакция в этой схеме видов, Streptomyces, International Journal может быть проведена традиционным ме- of Systematic Bacteriology 16, 313-340, тодом для пептидного синтеза. Исходное 30 1966) для этого таксономического исслесоединение (IX) или его соль можно подования. лучить методами, описанными в разделе Морфологические наблюдения были "Получение", описанном ниже, или анавыполнены на оптическом и электронном логичным способом. микроскопах на культуре, выращенной при (Получение ферментацией) 35 ЗО'С в течение 14 дней на агаре с дрожWS-9326B и WS-9326A согласно изобжево-солодовым экстрактом, на агаре из ретению можно получить ферментацией овсяной муки на агаре из крахмала и WS-9326A и/или WS-93268-продуцируюнеорганических солей. щих штаммов, принадлежащих к роду Вегетативный мицелий развит хорошо Streptomyces, такому как Streptomyces 40 без фрагментации. Воздушный мицелий violaceoniger № 9326 в питательной среразветвлен моногтолиально и образует спиде. ральные цепи спор с 10-30 спорами на Специфические микроорганизмы, исцепь. Споры имеют гладкую поверхность пользованные для получения WS-9326A и и овальную форму с размерами 0,6-0,8 х WS-9326B, будут описаны в дальнейшем. 45 хО,8-1,3 микроне. Отвердевших гранул, Микроорганизмы спорангия и зооспор не наблюдали. Микроорганизм, который может быть (2) Культуральные характеристики использован для продуцирования WS-9326A Культуральные характеристики наблюда и WS-9326B, является штаммом-продуценли на десяти видах сред, описанных Ширлинтом WS-9326A и/или WS-9326B, принад- 50 гом и Готлибом в упомянутом выше источнике лежащим к роду Streptomyces, из которои Ваксманом (Waksman S.A.:Actinomyces, го Streptomyces violaceoniger № 9326 неvol.2: Classification, identification and давно был выделен из образца почвы, description of genera and species. The Wiliams взятого в городе Сува префектура Нагаand Wiikins Co., Baltimore, 1961). но, Япония. 55 Выращивание проводили при ЗО'С в Лиофилизированный образец вновь течение 21 дня. Названия цвета, испольвыделенного Streptomyces violaceoniger № зованные в этом исследовании, взяты из 9326 депонирован в научно-исследоваколориметрического руководства Метуэна тельском институте агентства промышлен(Komereep A. and J.H. Wanscher. Handbook ных знаний и технологии (1-3, Higashi -1of Colour, Methuen, London, 1978). 45 26845 Результаты представлены в табл. 1. Воздушный мицелий имел окраску от серого до коричневато-се рога цвета. Часть колонии становилась черной и влажной, и показывала гигроскопические свойства на 5 большинстве агаровых сред. Обратная сторона культуры была желтовано-коричне-вая, коричневая и темно-коричневая. Пигмент мицелия обратной стороны не чувствителен к рН среды. Меланоидные пиг- 10 менты и другие растворимые пигменты не продуцирует. Анализ клеточных стенок был выполнен по методам Беккера и .соавторов (Becker В., М.Р. Lechevalier, R.E.Gordon 15 and H.A. Lechevalier: Быстрая дифференциация между Nocardia и Streptomyces хроматографией на бумаге цельного клеточного гидролизата": Appl. Microbiol. 12, 421-423, 1964) и Ямагуши (Jamagushi, Т.: "Срав- 20 нение состава клеточных мембран морфологически различных актиномицетов": J.Bacteriol. 89, 444-453, 1965). Анализ цельных клеточных гидролизатов штамма № 9326 показал присутствие LL-диамино- 25 пимелиновой кислоты. Следовательно, клеточная стенка этого штамма, по-видимому, типа I. (3) Биологические и физиологические свойства: 30 Физиологические свойства и усвоение источников углерода показаны в табл. 2 и 3 соответственно. Использование источников углерода определяли методами Придхема и Готли- 35 ба (Pridham T.G. and D.Gottlieb "Использо вание углеродных соединений некоторы ми актиномицетами, как вспомогательное средство определения видов": 56, 107114, 1948). 40 Морфология и химические характеристики штамма № 9326 позволяют четкое отнесение организма к роду Streptomyces. Штамм № 9326 сравнивали с видами Streptomyces, описанными в 8-м издании 45 руководства Бергея (Buchanan R.E. and N.E. Gibbons: Bergey's manual of determinative bacteriology, eight edition. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974), с видами Streptomyces, описанными в док- 50 ладах Ширлинга /(Sc hir ling E.B. and D.Gottlieb: "Совместное описание типичной культуры Streptomyces". 2. Описания видов по результатам первого исследования. Intern.J.Syst.Bacteriol. 18: 69189, 55 1968), {Schirling E.B. and D.Gottlteb: "Совместное описание типичной культуры Streptomyces. 3. "Дополнительные описания видов по результатам первого и второго исследова ний ". Inter n. J. System. 46 Bacteriol. 18: 279-392, 1968) и (Schierling E.B. and D.Gottlieb: "Совместное описание типичной культуры Streptomyces. 4. Описания видов по результатам второго, третьего и четвертого исследований. Intern.J.Syst.Bacteriol. 19: 391-512, 1969), с видами, внесенными а "Уточненные перечни названий бактерий" (Skerman, V.B.D.; McGovan & P.H.A.Sneath: Уточненный список бактериальных названий. Intem.J.Syst.Bacteriol 30: 225-420, 180) и с видами, описанными в других источниках (Williams S.T.: M.Goodfellow, G.Alderson, Е.М.H.Wellington, P.H.A.Sneath and MJ.Sackin: Численная классификация Streptomyces и родственных родов. J.Gen.Microbiol. 129: 1743-1813, 1983) и (Dietz, А.: "Критерии для характеристики гигроскопических штаммов, опубликованы в "Actinomycetes; The Boundary Microorganisms" стр. 183-191, изданный T.Arat 1976). В результате сравнений было установлено, что штамм № 9326 имеет близкое сходство со Streptomyces violaceoniger. Поэтому штамм № 9326 был идентифицирован как Streptomyces violaceoniger и назван Streptomyces viofaceoniger № 9326. Получение WS-9326A и WS-9326B Новые WS-9326A и WS-9326B согласно изобретению могут быть получены выращиванием штамма-продуцента WS-9326A и/или WS-9326B', принадлежащего к роду Streptomyces- (т.е. Streptomyces violaceoniger № 9326, FEPM ВР-1667 в питательной среде. В общем WS-9326A и WS-9326B могут быть получены выращиванием штамма-продуцента WS-9326A и/йли WS-9326B в водной питательной среде, содержащей источник усваимого углерода и азота, предпочтительно в аэробных условиях (т.е. встряхиваемая культура, погруженная культура и так далее). Предпочтительными источниками углерода в питательной среде являются углеводы, такие как глюкоза, ксилоза, галактоза, глицерин, крахмал, декстрин и тому подобные. Другими источниками, которые могут быть использованы, являются мальтоза, рамноза, рафиноза, арабиноза, манноза, салицин, сукцинат натрия и тому подобные. Предпочтительными источниками азота являются дрожжевой экстракт, пептон, клейковина, хлопковая мука, соевая мука, экстракт от замачивания кукурузы, пшеничные проростки, высушенные дрожжи, молотое перо, порошок земляного ореха и так далее, а также неорганические и органические соединения азота, такие как 47 26845 соли аммония (т.е. нитрат аммония, сульфат аммония, фосфат аммония и так далее), мочевина, аминокислоты и тому подобные. Источники углерода и азота, хотя и преимущественно используемые в сочетании, не обязательно используются в чистой форме, поскольку менее чистые материалы, которые содержат следы ростовых факторов и значительные количестваа минеральных питательных веществ, также пригодны для использования. Если желают, то они могут быть добавлены к минеральным солям среды, таким как карбонат натрия или кальция, фосфат натрия или капия, хлористый натрий или калий, йодистый натрий или калий, соли магния, соли меди, соли кобальта и тому подобные. Если необходимо, особенно когда культуральная среда сильно вспенивается, то могут быть добавлены антивспениватели, такие как жидкий парафин, жировое масло, растительное масло, минеральное масло или силикон. Как условия для получения WS-9326A и WS-9326B в больших количествах предпочтительны аэробные условия погруженной культуры. Для получения небольших количеств используют встряхиваемые или поверхностные культуры в колбах или бутылях. Кроме того, если выращивание проводят в больших резервуарах, то предпочтительно использование вегетативной формы организма для инокулирования в ферментационные емкости, чтобы избежать латентный период развития культуры в процессе получения WS-9326A и WS-9326B. Таким образом, желательно сначала получить посевную культуру организма инокулированием относительно малого количества культуральной среды спорами или мицеллами микроорганизма и выращиванием этой инокулированной среды и затем перенести выращенный вегетативный инокулят в асептических условиях в большие резервуары. Среда, в которой получен вегетативный инокулят, является аналогичной или отличается от среды, используемой для получения WS-9326A и WS-9326B. Перемешивание и аэрация культуральной смеси может быть осуществлена различными путями. Перемешивание может быть проведено лопастями винта или аналогичными механическими мешалками, вращением или встряхиванием бродильного чана, различными нагнетающими устройствами или пропусканием стерильного воздуха через среду. Аэрация может быть осуществлена путем пропускания стерильного воздуха через ферментационную среду. 48 Брожение обычно проводят при температуре от 20 до 40'С, предпочтительно при 25-351С в течение времени примерно от 50 до 150 часов, которые могут варьи-5 ровать в соответствии с условиями брожения и масштабами производства. 10 15 20 25 30 Полученные WS-9326A и WS-9326B могут быть затем выделены из культуральной среды традиционными средствами, которые обычно используются для выделения других известных биологически активных веществ. Полученные WS-9326A и WS-9326B были найдены в культуральном фильтрате и мицелии, и таким образом WS-9326A и WS-9326B могут быть выделены и очищены из фильтрата и мицелия, которые получены при фильтрации или центрифугирования культуральной жидкости традиционным методом, таким как концентрирование при пониженном давлении, лиофилизация, экстракция традиционным растворителем, регулирование рН, обработка обычной смолой (т.е. анионо- или катионообменная смола, неионогенная абсорбирующая смола и так далее), обработка традиционным абсорбентом (т.е. активированным углем, кремневой кислотой, силикагельцеллюлозой, глиноземом и тому подобными), кристаллизация, перэкристаллизация и тому подобные. WS-9326A, полученный описанным выше способом, обладает следующими фи-35 зическими и химическими свойствами. (1) форма и цвет: бесцветный порошок (2) цветная реакция: положительная: на сульфат церия, реакция на пары иода, реакция на хло40 ристое железо (3)-железо(3)цианистый ка лий; отрицательная: реакция на нингидрин, реакция Молиша, реакция на хлорис тое железо (3), реакция Эрлиха, реакция Паули. 45 (3) растворимость: растворим: метанол, этанол слабо растворим: ацетон, этилацетат нерастворим: вода, хлороформ (4) точка плавления: 187-190°С 50 (5) удельное вращение: /а/д 23 : -84* (С = 1,0,метанол) (6) спектр ультрафиолетового поглощения (метанол): Хиакс ~ 280 нанометров ( Е= 34.700) 55 ( 7) с пект р поглощения инфракрас но го излучения: (KBr) vMaKC = 3300, 3050, 2950, 2920, 2860, 1730, 1650, 1610, 1560, 1540, 1530, 1510, 1440, 1380, 1340, 1280, 1240, 1170, 1110, 1080, 1060,1040, 970, 880,860,830 см- 1' ~ ' 26845 49 (8) элементный анализ для CMH68NeO132H2O: вычислено: С 60,43; Н 6,76; N 10,44 стационарная фаза пластинка силикагеля (Merck Art 5715) пластинка RP-18 (Merck) (10) молекулярная формула: (11) молекулярный вес: ГАВ-массспектр: m/z 1037 (М+Н) + (12) свойства вещества: кислое ве щество (13) спектр ядерного магнитного ре зонанса на ядрах 13С: (100 МГц, СДРД), 6 : 175,69 (С), 174,70 (с), 173,73 (с), 173,38 (с), 172,89 (с), 171,04 (с), 170,45 (с), 167,79 (с), 167,15 (с), 159,20 (с), 140,05 (д), 139,12 (с), 138,71 (с), 135,27 (д), 135,85 (с), 132,11 (Д), 132,03 (с), 131,69 (д)х2, 130,70 (д), 129,90 (д), 130,70 (д), 129,90 (д), 129,61 (Д)х2, 128,55 (д), 128,04 (д), 129,99 (д), 127,38 (д), 126,09 (с), 123,70 (д), 115,63 (д), 73,46 (д), 71,34 (д), 62,80 (т), 59,53 (д), 56,91 (д), 56,76 (д), 55,55 (д), 53,64 (д), 52,10 (д), 39,85 (т), 37,18 (т), 37,09 (т), 34,58 (кв), 31,37 (т), 24,56 (д), 23,63 (Т), 22,71 (кв), 22,52 (кв), 21,17 (кв), 17,19 (кв), 14,13 (кв) (14) спектр ядерного магнитного резо нанса на ядрах 'Н, (400 МГц, СД-ОД) 5 : 7,80 (1Н,д, I = 8 Гц), 7,67 (1Н, д, I = =16 Гц), 7,45-7,14 (9Н, м), 7,06 (2Н, д, N = 8 Гц), 6,83 (1Н, с), 6,65 (2Н, д, N8 Гц), 6,59 (1Н, д, 1=12 Гц), 5,88 (1Н, дт, И12 и 7 Гц), 5,55 (1Н, м), 5,35 (1Н, широкий сигнал), 5,10 (1Н, дд, 1=3 и 9,5 Гц), 4,68 (1Н, д, N10 Гц), 4,55