Фармацевтична комбінація 1-(2-тетрагідрофурил)-5-фторурацилу та фенетилового ефіру кофеїнової кислоти для перорального лікування пухлин

Реферат: UA 100294 C2 (12) UA 100294 C2 Винахід стосується нової фармацевтичної комбінації фенольної сполуки, такої як фенетиловий ефір кофеїнової кислоти, і протиракового хіміотерапевтичного препарату, такого як 1-(2тетрагідрофурил)-5-фторурацил. Заявлений винахід також стосується способів для виготовлення такої комбінації та її застосування для оральної хіміотерапії пухлин, зокрема злоякісних, та в профілактиці та/або пригніченні метастазів пухлин. UA 100294 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Галузь техніки Даний винахід стосується нової фармацевтичної комбінації 1-(2-тетрагідрофурил)-5фторурацилу і фенольної сполуки для орального лікування пухлин; зокрема, він стосується неочікуваного синергічного протипухлинного ефекту комбінації фенольної сполуки і протипухлинного препарату в лікуванні раку. Даний винахід стосується також процесів для приготування такої композиції та її використання для оральної хіміотерапії пухлин, особливо злоякісних пухлин. Рівень знань Рак – це неконтрольований ріст і розповсюдження клітин, який може вражати майже будьяку тканину організму. Рак легенів, колоректальний рак і рак шлунку входять до п'яти найбільш поширених видів раку у світі як серед чоловіків, так і серед жінок. Серед чоловіків рак легенів і рак шлунку є найбільш поширеними пухлинами у всьому світі. Для жінок найпоширенішими видами раку є рак молочної залози і рак шийки матки. Діагноз раку ставлять більше ніж 11 мільйонам людей щорічно. За оцінкою, ближче до 2020 року щорічно будуть діагностувати 16 мільйонів нових випадків раку. Рак спричинює 7 мільйонів смертей щорічно або відповідає за 12,5 % смертей у всьому світі. Відповідно, велику кількість досліджень було здійснено для того, щоб знайти протипухлинні препарати, які можна було б використати в хіміотерапії злоякісних пухлин. Відомі різні протиракові препарати, і результати лікування раку поліпшуються з кожним роком; тим не менше, відчувається потреба в більш ефективних протипухлинних препаратах. Видалення первинних злоякісних пухлин хірургічним шляхом не завжди є можливим і в будь-якому випадку не попереджає метастазування пухлин з інвазією інших органів-мішеней, яка призводить до розвитку додаткових вторинних пухлин впродовж місяців або років після хірургічного втручання. Такі вторинні пухлини звичайно є основною причиною смерті пацієнта. Одним з протиракових препаратів є ТЕГАФУР. ТЕГАФУР, тобто 1-(2-тетрагідрофурил)-5фторурацил, є описаним в публікації GB 1 168 391 (Институт органического синтеза, опубліковано 22.10.1969) як проліки 5-фторурацилу, тобто 5-ФУ, і довів свою активність у веденні метастатичного колоректального раку. ТЕГАФУР метаболізується до 5-ФУ in vivo, головним чином у печінці, і повідомлялось, що він є менш токсичним і має більш високий терапевтичний індекс, ніж 5-ФУ (дивись "Cancer Research" 1995, vol.1, p.839-845). В патенті США № 4 328 229 (TAIHO PHARMACEUTICAL, опублікований 04.05.1982) описана протиракова композиція, що містить ТЕГАФУР і урацил. Ця композиція використовується для доставки 5-ФУ до пухлини, що є чутливою до 5-ФУ у теплокровної тварини. Описується, що цю композицію можна вводити одночасно за допомогою різних лікарських форм, включаючи оральну лікарську форму. Фенетиловий ефір кофейної кислоти (ФЕКК) – це фенольна сполука, яка міститься в прополісі, що є родовою назвою смолистого матеріалу з кори хвойних дерев, який переноситься бджолами до своїх вуликів (дивись статтю CHIAO, C. "Apoptosis and altered redox state induced by CAPE in transformed rat fibrolast cells", опубліковану в "Cancer Research" 1995, vol.55, no.3576, p.3583). Дослідження біологічної активності прополісу і ФЕКК показали, що ФЕКК також володіє протипухлинною активністю. В патенті США № 5 008 441 (UNIV COLUMBIA, опубліковано 16.04.1991) описано спосіб для отримання ФЕКК і спосіб, який суттєво пригнічує ріст трансформованих клітин без скількинебудь суттєвого пригнічення росту нормальних клітин. Цей процес включає обробку популяції клітин ефективною у відношенні пригнічення кількістю ФЕКК з тим, щоб суттєва пригнітити ріст клітин карциноми молочної залози людини, клітин меланоми людини, клітин карциноми товстої кишки і нирок людини. У статті MASAHIKO, W., et al., "CAPE Induces Apoptosis by Inhibition of NF and Activation of Fas in Human Breast Cancer MCF-7 Cells", опублікованій в "Journal of B Biological Chemistry" 2004, vol.279, no.7, p. 6017-6026, ФЕКК описується як фенольна сполука, що є біологічно активним інгредієнтом бджолиного прополісу і сильно пригнічує активацію NFкB. Більш того, було продемонстровано, що ФЕКК індукує апоптоз в різних лініях ракових клітин, наприклад в клітинах MCF-7 раку молочної залози людини. TAKEMA, N. et al. (дивись статтю "Selective antiproliferative activity of CAPE analogues on highly liver-metastatic murine colon 26-L5 carcinoma cell line", опубліковану в "Bioorganic&Medicinal Chemistry 2002, vol.10, p.3351-3359) встановили, що ФКЕЕ володіє вибірковою антипроліферативною активністю у відношенні високометастатичної лінії клітин карциноми 26-L5 товстої кишки мишей. В публікації WO 03/090681 (RES DEV FOUNDATION, опубліковано 11.06.2003) описані синергічні ефекти інгібіторів нуклеарного транскрипційного фактору NF-кB і антинеопластичних препаратів в лікуванні раку. В якості інгібітору NF-кB згадується ФЕКК, а в якості 1 UA 100294 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антинеопластичного препарату – 5-ФУ. Інгібітором NF-кB та антинеопластичним препаратом оброблялись клітинні лінії раку молочної залози людини MDA-MB 435 і MCF-7. В публікації WO 2005/105 086 (TAIHO PHARMACEUTICAL CO LTD, опубліковано 11.10.2005) описана комбінація трьох препаратів ТЕГАФУРУ, 2,4-дигідрокси-5-хлорпіридину і оксонової кислоти або її фармацевтично прийнятної солі в молярному співвідношенні 1:0,4:1, яка пропонується у вигляді капсул (торгова назва: S-1). SUZUKI IKUKATSU et al. в статті "Antitumor and Anticytopenic Effects of Aqueous Extracts of Propolis in Combination with Chemotherapeutic Agents", опублікованій в Cancer Biotherapy&Radiopharmaceuticals. 2002, vol.17, no.5, p.553-562, описали вплив CWSP (неочищений водорозчинний прополіс) і 5-FU на ріст пухлини впродовж 5-тижневого періоду. Як сказано в цій статті, CWSP складався з ~10 % моносахаридів, зокрема фруктози і глюкози, 4,2 % флавоноїду кверцетину і 8,4 % білку; жодної конкретної сполуки з CWSP описано не було. Сказано, що миші отримували підшкірний 5-ФУ окремо або в комбінації з оральним CWSP через день впродовж 5 тижнів, починаючи через 24 години після інокуляції пухлини. Різні дози 2-фторпіримідинів, таких як, вводились щоденно впродовж 7 днів пероральним шляхом мишам в моделі спонтанного метастазування, описаній ISHIKAWA, T. et al. в статті "Selective inhibition of spontaneous pulmonary metastasis of Lewis lung carcinoma by 5'-deoxy-5fluorouridine", опублікованій в International Journal of Cancer. 1995, vol.31, p.516-521. Сказано, що 5-ФУ був ефективним в лікуванні первинної пухлини тільки в токсичній дозі 0,4 ммоль/кг, але міг пригнічувати метастазування в легені, починаючи з дози 0,05-0,1 ммоль/кг. Опис винаходу Технічна проблема Додатковою ціллю даного винаходу є розробка ефективної альтернативної фармацевтичної комбінації, яка суттєво пригнічує метастазування пухлини. Технічне рішення Нами було неочікувано встановлено, що фармацевтична комбінація Тегафуру і ФЕКК достовірно краще лікує пухлину, зокрема злоякісну пухлину, ніж 6-ФУ, Тегафур, ФЕКК або фармацевтична комбінація 5-ФУ і ФЕКК. Намагаючись розробити фармацевтичну комбінацію для лікування злоякісних пухлин, що має низьку токсичність, ми неочікувано встановили, що дози, адекватні терапевтичним дозам, фармацевтичних композицій, що містять ТЕГАФУР і ФЕКК, приводять до сприятливих ефектів. Неочікуваним було те, що комбінація ТЕГАФУРУ і ФЕКК суттєво пригнічувала метастазування пухлини. При використанні фармацевтичної комбінації ТЕГАФУРУ і ФЕКК досягаються наступні позитивні ефекти: - фармацевтична комбінація Тегафуру і фенольної сполуки, такої як ФЕКК, володіє високою протиметастатичною активністю, на відміну від індивідуальних компонентів або фармацевтичної комбінації 5-ФУ і ФЕКК в еквімолярних дозах; - фармацевтична комбінація Тегафуру і ФЕКК володіє вираженою синергічною протиметастатичною ефективністю. Не існує якогось особливого обмеження у відношенні лікарської форми, яка може бути надана протипухлинній композиції за цим винаходом, у лікуванні злоякісних пухлин у ссавців. Дозована лікарська форма вибирається в залежності від цілі лікування. Прикладами її є оральна лікарська форма, така як таблетки, таблетки з покриттям, пігулки, порошки, гранули, капсули, розчини, суспензії, емульсії і т.д. Ці лікарські форми можуть готуватись звичайними фармацевтичними методами, відомими в цій галузі. В якості носія при формуванні у вигляді таблеток можуть використовуватись різноманітні допоміжні матеріали, такі як лактоза, сахароза, натрію хлорид, глюкоза, сечовина, крохмаль, кальцію карбонат, каолін, кристалічна целюлоза, кремнієва кислота і т.п.; зв'язувальні речовини, такі як простий сироп, розчин глюкози, розчин крохмалю, розчин желатину, карбоксиметилцелюлоза, шелак, метилцелюлоза, калію фосфат, полівінілпиролідон і т.п.; дезінтегратори, такі як сухий крохмаль, натрію альгінат, агаровий порошок, порошок ламінарану, натрію гідрокарбонат, кальцію карбонат, ефіри жирних кислот поліоксиетиленусорбітану, натрію лаурил сульфат, моногліцерид стеаринової кислоти, крохмаль, лактоза і т.п.; антидезінтегратори, такі як сахароза, стеаринова кислота, масло какао, гідрогенізована олія і т.п.; промотори всмоктування, такі як четвертинні основи амонію, натрію лаурил сульфат і т.п.; зволожувачі, такі як гліцерин, крохмаль і т.п.; адсорбенти, такі як крохмаль, лактоза, каолін, бентоніт, колоїдна кремнієва кислота і т.п.; і лубриканти, такі як очищений тальк, солі стеаринової кислоти, порошок борної кислоти, поліетилен гліколь і т.п. За необхідності, таблетки можуть бути у вигляді таблеток з покриттям, таких як таблетки, покриті цукром, 2 UA 100294 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 таблетки, покриті желатином, таблетки з ентеросолюбільним покриттям, таблетки з плівковим покриттям або дво- або багатошарові таблетки і т.п. Носій для надання форми пігулок включає, наприклад, різні допоміжні речовини, такі як глюкоза, лактоза, крохмаль, масло какао, стверділа рослинна олія, каолін, тальк і т.п.; зв'язувальні речовини, такі як порошок гуміарабіку, порошок трагакантової камеді, желатин і т.п.; і дезінтегратори, такі як ламінарна, агар і т.п. Носій для надання форми супозиторіїв включає, наприклад, поліетилен гліколь, масло какао, вищі спирти, ефіри вищих спиртів, желатин, напівсинтетичні гліцериди і т.п. Капсули отримують шляхом змішування фенольної сполуки, такої як ФЕКК, і ТЕГАФУРУ з будь-яким з носіїв, згаданих вище, і наповнення цією сумішшю твердих желатинових капсул, м'яких капсул або інших капсул. Для отримання паст, кремів і гелів використовуються розріджувачі, такі як, наприклад, білий вазелін, парафін, гліцерин, похідні целюлози, поліетилен гліколі, силікон, бентоніт і т.п. Найкращий спосіб здійснення винаходу Даний винахід далі буде описаний більш докладно з посиланням на фармакологічні тести і приклади, що ілюструють приготування композицій, які потенціюють протипухлинний ефект, за цим винаходом і містять ФЕКК і ТЕГАФУР. Приклад Фармацевтична активність орально введених 5-ФУ, Тегафуру, ФЕКК та їх комбінацій досліджувалась з використанням моделі спонтанного метастазування, для чого мітогенним мишам C57BL/6 вводили внутрішньом'язову ін'єкцію клітин карциноми легень Льюїс (LLC). Клітинна лінія – карцинома легень Льюїс (LLC). 6 Клітини LLC (10 клітин в 0,1 мл розчину Хенкса) вводились внутрішньом'язовим шляхом (в.м.). Протипухлинна активність 5-ФУ, Тегафуру, ФЕКК та їх комбінацій визначалась шляхом їх введення самкам мишей C57BL/6 (вага 19-21 г; вік від 2 до 2,5 місяців). Доза Тегафуру і 5-ФУ вибиралась в субоптимальному діапазоні, як його встановлено для 5ФУ в статті ISHIKAWA, T., et al. "Selective inhibition of spontaneous pulmonary metastasis of Lewis lung carcinoma by 5'-deoxy-5-fluorouridine", опублікованій в International Journal of Cancer. 1995, vol.31, p.516-521. Мишей випадковим чином розподілили на 6 груп по 11 мишей в кожній: Перша група: Контрольна група отримувала носій, який складався з 4,8 % етилового спирту, 7,5 % 1М NaOH, 7,5 % 1M HCl і дистильованої води; Друга група: ФЕКК 0,18 ммоль/кг в носієві; Третя група: Тегафур 0,06 ммоль/кг в носієві; Четверта група: ФЕКК 0,18 ммоль/кг і Тегафур 0,06 ммоль/кг в носієві; П'ята група: 5-ФУ 0,06 ммоль/кг в носієві; Шоста група: ФЕКК 0,18 ммоль/кг і 5-ФУ 0,06 ммоль/кг в носієві. Терапія включає оральне введення (за допомогою зонду) тестових препаратів (або їх комбінацій) впродовж 5 послідовних днів з наступними 2 днями без препаратів (схема 5 днів на тиждень) на протязі 3 тижнів (14 введень), з початком через 2 дні після інокуляції ракових клітин. В кінці експериментів тварин забивали. Розмір метастатичних вузликів і їх кількість на поверхні п'яти легеневих доль кожної миші визначались за допомогою бінокуляру з розмірним склом. 3 Загальний об'єм легеневих метастазів (Vm, мм ) обчислювався за формулою:  Vm  * ( ni * dm3 (i)); 6 i dm (i)  0.5 * i де ni – це кількість метастазів з діаметром dm(i) мм. Непараметричний U тест Манна-Уїтні використовувався для порівняльного статистичного аналізу. Двосторонній рівень значимості р, менший ніж 0,05, вважався свідченням достовірності. Протиракова ефективність тестових препаратів виражена як коефіцієнт пригнічення об'єму метастазів (MVI) обчислювалась за наступною формулою: V (treatment )  Vmet (control) MVI  100 * met (%), Vmet (control) де Vmet. (тобто значення об'єму метастазів) в контрольних групах (control) і експериментальних групах (treatment). 3 UA 100294 C2 5 10 Таблиця 1. Вплив 5-ФУ, Тегафуру, ФЕКК або їх комбінацій на загальний об'єм легеневих метастазів LLC. *) p