Гідрохлорид 3-(31,51-дитретбутил-41-гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5н-піроло[1,2-a]імідазолу, що має протипухлинні властивості

Реферат: 1 1 1 Гідрохлорид 3-(3 ,5 -дитретбутил-4 -гідроксифеніл)б,7-дигідро-5Н-піроло[1,2-а]імідазолу, що має протипухлинні властивості. Винахід стосується органічної, фармацевтичної хімії та медицини, а саме фармакологічно активних речовин. Зазначена сполука проявляє протипухлинну активність та може бути використана при лікуванні меланоми, раку нирок та пухлини молочної залози. Дослідження протипухлинної активності проведено in vitro на 60 лініях ракових клітин (лейкемії, легень, товстого кишечника, ЦНС, меланоми, яєчників, нирок, простати, молочної залози). -5 Заявлена сполука у концентрації 10 моль/л виявила здатність пригнічувати ріст клітин раку, що охоплюють практично весь спектр онкологічних захворювань людини. Показано що найбільш ефективною зазначена сполука є відносно клітин меланоми SK-MeL-5(88,80 %), клітин раку нирки RXF-393 (-53,31 %) та раку молочної залози MDA-MB-468(-21,31 %). UA 107517 C2 (12) UA 107517 C2 N N HCl O H UA 107517 C2 Винахід належить до органічної, фармацевтичної хімії та медицини, а саме до одержання 1 1 1 біологічно активного гідрохлориду 3-(3 ,5 -дитретбутил-4 -гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5Нпіроло[1,2-а]імідазолу, що має формулу: N N HCl OH 5 10 15 . Зазначена сполука проявляє протипухлинну активність та може бути використана при лікуванні меланоми, раку нирок та пухлини молочної залози. Перелік сучасних фармацевтичних субстанцій, що призводить до досягнення паліативного ефекту та зменшення пухлини і відповідно до клінічної ремісії, досить широкий і налічує понад 40 протипухлинних препаратів, активних при різних формах злоякісних утворень. Відомі протипухлинні препарати мають різний механізм дії і застосовуються у відповідних схемах лікування. При цьому виражений клінічний ефект складає від 20 % до 80 %. В окремих випадках ремісія складає до 2 років, а понад 10 % хворих мають ремісію понад 3 роки. Широке застосування набули детіцен, метатрексат, вінкристин, адріабластин. Лікарські засоби, що перелічені, мають необхідні лікувальні властивості, але проявляють значні побічні ефекти, що супроводжується розвитком патологічних процесів в організмі. Так, лікарський засіб детіцен є похідним імідазолу, а саме: 5-диметиламіноазо-3Н-імідазол4-карбоксамідом формули: N N N N N O NH2 20 25 30 35 . Він виявляє активність проти меланоми, лімфогранулематозу, саркоми матки, раку легенів та щитовидної залози [1]. Застосування детіцену може супроводжуватися розладами травної системи, а саме: зниженням апетиту, стоматитом, нудотою, блювотою, діареєю. В окремих випадках він викликає гепатонекроз, що обумовлений оклюзією внутрішньопечінкових вен; можливі, навіть, летальні випадки. Крім вищезазначених побічних проявів, застосування препарату може викликати анемію, гранулоцитопенію, тромбоцитопенію, лейкопенію головний біль, порушення зору, судороги, астенію, тощо. При тривалому застосуванні збільшується ризик виникнення новоутворень. Цей препарат стає активним після метаболізму в печінці внаслідок вивільнення діазометану, який ковалентно зв'язується з SH-групами біомолекул. За рахунок утворення комплексів з карбонієвими іонами він блокує синтез РНК та ДНК, що, в свою чергу, призводить до зупинки мітозу клітин. В основу винаходу поставлена задача пошуку нової речовини, що проявляє високу протипухлинну активність - здатність пригнічувати ріст клітин раку нирки А498, RXF 393, ТК-10 молочної залози, зокрема клітин MDA-MB-468 та меланоми SK-MeL-5. Поставлена задача вирішується шляхом синтезу нової хімічної речовини - гідрохлориду 31 1 1 (3 ,5 -дитретбутил-4 -гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5Н-піроло[1,2-а]імідазолу. Заявлену сполуку одержують з високими виходами шляхом конденсації 2-метокси-4,5дигідро-3Н-піролу [3] з гідрохлоридом -аміно(3,5-дитретбутил-4-гідроксифеніл)ацетофенону [4] та подальшої циклізації кип'ятінням в водному розчині (схема 1): 1 UA 107517 C2 5 10 15 20 25 30 Приклади конкретного виконання. Приклад 1 1 1 1 Гідрохлорид 3-(3 ,5 -дитретбутил-4 -гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5Н-піроло[1,2-а]імідазолу: Суміш 9,0 г (0,03 моля) гідрохлориду -аміно(3,5-дитретбутил-4-гідроксифеніл)ацетофенону та 9,0 мл 2-метокси-4,5-дигідро-3Н-піролу ретельно перемішують та витримують 24 години при температурі 20 °C. Після цього реакційну суміш розтирають з етером та відфільтровують. Осад, що утворився, без додаткового очищення розчиняють в 100 мл води, додають 3 мл концентрованої хлоридної кислоти і кип'ятять із зворотним холодильником протягом 2 годин. Після чого суміш упарюють досуха і кристалізують із пропанолу-2. Вихід - 6,59 г (63 %), Тпл.=150-152 °C. Знайдено, %: N - 7,95 Cl - 10,4 C20H29ClN2O. Вирахувано, %: N - 8,03 Сl - 10,2. Спектр ПМР (CF3COOH, TMC): 1,53 (м, 18Н, 2С(СН3)3), 3,02 (м, 2Н, 6-СН2), 3,36 (т, 2Н, 7СН2), 4,46 (с, 2Н, 5-СН3), 7,33 (с, 1Н, 2-СН), 7,41 (с, 2Н, С6Н2). Приклад 2 1 1 1 Для визначення протипухлинної активності гідрохлориду 3-(3 ,5 -дитретбутил-4 гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5Н-піроло[1,2-а]імідазолу дослідження проведено in vitro на 60 лініях ракових клітин (лейкемії, легень, товстого кишечника, ЦНС, меланоми, яєчників, нирок, -5 простати, молочної залози) при дії речовини в концентрації 10 моль/л за стандартною процедурою [2] оцінки мітотичної активності нових потенційних біологічно активних сполук методом флуоресцентного зафарбування (барвник - сульфородамін Б), виконаних у Національному інституті раку США (National Cancer Institute of Health, USA) в рамках Development Therapeutic Program. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку у порівнянні з контролем - 5-фторурацилом. Наведені у таблиці значення показують на скільки досліджувана сполука є більш ефективною у пригніченні росту ракових клітин у порівнянні з 5-фторурацилом. -5 В умовах експерименту заявлена сполука у концентрації 10 моль/л виявила здатність пригнічувати ріст клітин раку, що охоплюють практично весь спектр онкологічних захворювань людини (таблиця). Найбільш ефективною зазначена сполука є відносно клітин меланоми SKMeL-5 (значення складає -88,80), клітин раку нирки RXF-393 (значення складає -53,31) та раку молочної залози MDA-MB-468 (значення складає -21,31). Від'ємні значення свідчать не лише про пригнічення росту і поділу клітин, а й про їх знищення. 2 UA 107517 C2 Таблиця Протипухлинна активність сполуки формули 4 in vitro на -5 лініях клітин раку при дії речовин в концентрації 10 моль/л Лінії ракових клітин Лейкемія MOLT-4 ВТ-549 T-47D MDA-MB-468 NCI-H226 NCI-H522 786-0 А498 ACHN RFX393 ТК-10 UO-31 КМ12 IGROV1 OVCAR-3 OVCAR-8 SK-OV-3 SF-295 SF-539 SNB-19 LOX IMVI MDA-MB-435 SK-MEL-28 SK-MEL-5 Рак молочної залози Дрібноклітинний рак легенів Рак нирок Рак товстого кишечника Рак яєчників Рак кори головного мозку Меланома 5 10 15 20 % росту 67,13 -11,01 53,76 -21,31 56,84 -13,88 -26,11 -37,80 79,70 -53,31 -31,31 64,74 63,13 62,87 -10,66 53,02 61,79 42,91 -0,14 37,53 48,08 -1,08 -13,38 -88, 80 Визначення проводили високочутливим флюорометричним методом, кількісно оцінюючи інтенсивність кольору флуоресцентного випромінювання (барвник - сульфородамін Б) через 48 год. опромінення клітини зі сполукою, що тестується. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку до контролю. Використана система відбору та вивчення сполук з потенційною протипухлинною активністю in vitro базується на визначенні відсотку росту клітин пухлини (PG) під впливом сполуки, що тестується. Таким чином, запропонована нова біологічно активна сполука яка може бути потенційним протипухлинним засобом. Джерела інформації: 1. Serrone L, Zeuli M, Sega F M et al: Dacarbazine-bazed chemotherapy for metastatic melanoma: Thirty year experience overview. J Exp Clin 1 Cancer Res 19:21-34, 2000. 2. Beverly A. Teicher, Paul A. Andrews. Anticancer drug development guide: preclinical screening, clinical. - Medical.-2004. - V. 1.-450 p. 3. Граник В.Г., Жидкова A.M., Курятов Н.С. и др. Ацетали лактамов. VII. Исследование алкилирования N-метиллактамов и лактимных эфиров диметилсульфатом//ХГС - 1973. - № 11. - С. 1532-1535. 4. Isomura, Yasuo; Sakamoto, Shuichi; Ito, Noriki; Homma, Hiroshige; Abe, Tetsushi; Kubo, Kazuo Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 1984, vol.32, # 1 p. 152-165. 3 UA 107517 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 1 1 1 Гідрохлорид 3-(3 ,5 -дитретбутил-4 -гідроксифеніл)-6,7-дигідро-5Н-піроло[1,2-а]імідазолу N N 5 HCl OH , що має протипухлинні властивості. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4