Спосіб генетичної діагностики неалкогольної жирової хвороби печінки

Реферат: Спосіб генетичної діагностики неалкогольної жирової хвороби печінки включає вимірювання у хворих антропометричних параметрів з розрахуванням індексу маси тіла (ІМТ), визначення інсулінорезистентності (IP) за результатами біохімічних досліджень крові, оцінку вмісту жиру у печінці за даними інструментального методу досліджень та молекулярно-генетичний аналіз зразків ДНК за методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) з визначенням генетичних варіантів поліморфного гену рецептора адипонектину 1 (ADIPORl(rs 666089)). Оцінку вмісту жиру у печінці здійснюють у хворих як з IP, так і без IP, при цьому проводять ультразвукове дослідження органів черевної порожнини, у ході виконання якого оцінюють ехощільність печінки (Mh) і ехощільність нирки (Mr), обчислюють ультразвуковий гепаторенальний індекс (Ігр) за інноваційною формулою, запропонованою авторами: Iгp=Mh/Mr, додатково за результатами біохімічних досліджень у сироватці крові визначають концентрацію адипонектину, і у хворих з IP та без IP, у котрих визначена наявність GG генотипу у поліморфному гені ADIPORl (rs 666089), концентрація адипонектину у сироватці крові знижена, у порівнянні з встановленою нормою, не менш ніж у 1,5 разу, а розраховане значення Ігр не більше 2-х, діагностують ранній розвиток неалкогольної жирової хвороби печінки, який обумовлений генетично детермінованим порушенням регуляції ліпогенезу і відкладенням жиру у печінці UA 75197 U (12) UA 75197 U UA 75197 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до терапії (гастроентерології), ендокринології та може бути використана для визначення генних особливостей та ранньої діагностики неалкогольної жирової хвороби печінки у пацієнтів з різним ступенем інсулінорезистентності. Неалкогольна жирова хвороба печінки (НАЖХП) є найбільш розповсюдженою хворобою печінки, що зустрічається серед 20 % загальної популяції. В багатьох дослідженнях було встановлено, що патогенетичною основою розвитку НАЖХП є адипоцитокіни та синдром інсулінорезистентності (IP) (Polyzos S.A. Adipocytokines in insulin resistance and non-alcoholic fatty liver disease: the two sides of the same coin / S.A. Polyzos, J. Kountouras, C. Zavos et al. // Med. Hypotheses. - 2010. - № 74(6). - P. 1089-1090). У останні роки активно вивчають механізми розвитку НАЖХП. Відомо, що суттєве значення у розвитку НАЖХП відіграє непропорційний жиророзподіл в організмі, надмірний розвиток вісцеральної жирової тканини, а також відкладення жиру в печінці (стеатоз), причому останнє може бути обумовлено дією генетичних чинників. Однак дія генетичних чинників та механізм реалізації спадкової схильності залишаються нез'ясованими (Lall С. Nonalcoholic fatty liver disease / C.G. Lall, A.M. Aisen, N. Bansal et al. // AJR. - 2008. - Vol. 190. - P. 993-1002), що спонукає дослідників до необхідності визначення генних особливостей та пошуку додаткових діагностичних критеріїв для ранньої діагностики НАЖХП у пацієнтів з різним ступенем IP. Відомі дослідження (Stefan N., Machicao F., Staiger H. et al. Polymorphisms in the gene encoding adiponectin receptor 1 are associated with insulin resistance and high liver fat // Diabetologia. - 2005. - V.48. - p. 2282-2291), у яких прийняло участь 502 пацієнта з інсулінорезистентністю (IP), без цукрового діабету (ЦД), які вибрані за прототип. Під час дослідження проводять загальноприйняті клінічні та біохімічні дослідження, вимірюють антропометричні параметри, визначають індекс маси тіла (ІМТ), IP за відомими формулами. За даними протонної магнітно-резонансної спектроскопії визначають відсотковий вміст жиру у печінці. Виконують молекулярно-генетичне тестування зразків ДНК за методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), визначають варіанти поліморфізму у гені рецептора адипонектину 1 (ADIPOR1) та їх взаємозв'язок з метаболізмом глюкози, ліпідами, атерогенним профілем ліпідограми та маркерами запалення. В ході дослідження було встановлено, що у пацієнтів з IP відсутній зв'язок між показниками ліпідного та поліморфного гена ADIPOR1(rs 666089). При цьому вірогідно доказано, що у пацієнтів, які є носіями АА генотипу у поліморфному гені ADIPOR1(rs 666089), наявні підвищення відсотка жиру у печінці (середнє значення становить 2,4±0,8 %) та величини IP (середнє значення становить 5,33±0,44). У дослідженнях використовують метод магнітно-резонансної спектроскопії, який має високу роздільну здатність, яка має першорядне значення у наукових та клінічних дослідженнях. Метод дозволяє одержувати об'єктивну кількісну оцінку стану печінки на тканинному рівні. Але цей метод пов'язаний з опромінюванням пацієнта у ході обстеження, дорогий та дотепер не має широкого використання у практиці лікаря, що потребує пошуку більш небезпечних та доступних методів оцінки стану печінки. Крім цього можна вважати недоліком те, що у дослідженнях не забезпечується можливість оцінки генетичних особливостей у пацієнтів без синдрому IP, оскільки ця категорія хворих у дослідження не включена. Задача корисної моделі - розробити такий спосіб генетичної діагностики НАЖХП, у якому вибір додаткових діагностичних критеріїв забезпечить об'єктивно, але більш доступно та безпечно, оцінювати вміст жиру у печінці, а наявність асоціації між виявленим варіантом поліморфного гена рецепторів 1 адипонектину (ADIPOR1(rs 666089)) та вмістом жиру у печінці дозволить здійснювати у пацієнтів як з IP, так без IP ранню діагностику НАЖХП. А це, в свою чергу, дозволить більш ефективно відбирати хворих для призначення патогенетично обґрунтованої терапевтичної стратегії. Задача вирішуються у способі генетичної діагностики неалкогольної жирової хвороби печінки, який включає вимірювання у хворих антропометричних параметрів з розрахуванням індексу маси тіла (ІМТ), визначення інсулінорезистентності (IP) за результатами біохімічних досліджень крові, оцінку вмісту жиру у печінці за даними інструментального методу досліджень та молекулярно-генетичний аналіз зразків ДНК за методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) з визначенням генетичних варіантів поліморфного гена рецептора адипонектину 1 (ADIPOR1(rs 666089)). Відмінними, у порівнянні з прототипом, ознаками є такі: - оцінку вмісту жиру у печінці здійснюють у хворих як з IP, так і без IP, при цьому проводять ультразвукове дослідження органів черевної порожнини, у ході виконання якого оцінюють 1 UA 75197 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ехощільність печінки (Mh) та ехощільність нирки (Mr), обчислюють ультразвуковий гепаторенальний індекс (Ігр) за інноваційною формулою, запропонованою авторами: Iгр=Mh/Mr; - додатково за результатами біохімічних досліджень у сироватці крові визначають концентрацію адипонектину; - і у хворих з IP та без IP, у котрих виявлена наявність GG генотипу у поліморфному гені ADIPOR1(rs 666089), концентрація адипонектину у сироватці крові знижена, у порівнянні з нормою, не менш ніж у 1,5 разу, а розраховане значення Ігр не більше 2-х, діагностують ранній розвиток неалкогольної жирової хвороби печінки, який обумовлений генетично детермінованим порушенням регуляції ліпогенезу і відкладенням жиру у печінці. Додатковою ознакою є те, що ультразвуковий гепаторенальний індекс обчислюють автоматично за комп'ютерною програмою. Вибір додаткових діагностичних критеріїв обумовлено наступним: За останніми даними відомо, що адипонектин, як продукт жирової тканини, приймає участь не тільки у прогресуванні, але й в ініціації накопичення жиру у печінці (Balmer M.L. Significance of serum adiponectin levels in patients with chronic liver disease / M.L. Balmer, J. Joneli, A. Schoepfera// Clinical Science. - 2010. V.119. - P. 431-436). Припускають, що адипонектин стимулює окислення жирних кислот у печінці, а також, що функціональна активність генів рецепторів ADIPOR1 здатна впливати на накопичення жиру у печінці (Kantartzis К., Fritsche A., Machicao F. Upstream transcription factor 1 gene polymorphisms are associated with high antilipo-lytic insulin sensitivity and show gene-gene interactions // Journal of Molecular Medicine. - 2007. - V.85. - P.55-61). Автоматичне обчислення за комп'ютерною програмою (свідоцтво про реєстрацію авторського права на комп'ютерну програму № 39572, дата реєстрації 10.08.2011 р.) та за інноваційною формулою, запропонованою авторами, ультразвукового гепаторенального індексу дозволяє у пацієнтів як з IP, так і без IP, виявляти навіть незначні зміни ехощільності печінки. А це дозволяє виявляти патологію на ранніх стадіях і проводити моніторинг стану хворого в динаміці лікування. Визначена наявність асоціації між виявленим GG генотипом у поліморфному гені ADIPOR1(rs 666089) та процесом відкладення жиру у печінці дозволяє виявити генетичні особливості у хворих як з IP, так і без IP і діагностувати ранній розвиток НАЖХП. У відомому рівні розвитку даної проблеми відсутні відомості щодо виявлення генетичних чинників для ранньої діагностики НАЖХП у цієї категорії хворих. Новим є те, що у пацієнтів як з IP, так і без IP, більш доступним і безпечним методом, у порівнянні з прототипом, забезпечується об'єктивна оцінка вмісту жиру у печінці, а наявність асоціації між виявленим, згідно з корисною моделлю, варіантом поліморфного гена рецепторів 1 адипонектину (ADIPOR1(rs 666089)) та накопичення жиру у печінці дозволяє здійснювати ранню діагностику НАЖХП у цієї категорії пацієнтів. А це, в свою чергу, дозволить більш ефективно відбирати хворих для призначення патогенетично обґрунтованої терапевтичної стратегії. Дослідження за запропонованою корисною моделлю були проведені у відділі захворювання печінки та шлунково-кишкового тракту ДУ "Інститут терапії ім. Л.Т. Малої НАМН України". В дослідження були включені 102 хворих чоловічої та жіночої статі з IP (52 хворих) та без IP (50 хворих) у віці 30-55 років. Контрольну групу склали 30 здорових донорів аналогічної вікової категорії чоловічої та жіночої статі. За результатами досліджень ранній діагноз НАЖХП поставлений 64 хворим з IP та 48 хворим без наявності IP. Статистична обробка даних виконувалася за допомогою пакета статистичних програм "STATISTIKA-6.0", "SPSS 13.0". Розбіжності між порівнюваними показниками були достовірні, якщо значення були більше або дорівнюють 95 % (р