Екстракт із рослинної сировини з високим вмістом поліфенолу, спосіб його одержання

1. Спосіб одержання композицій, що містять поліфенол, що включає екстракцію рослинної сировини, де рослинна сировина являє собою листя какао, лушпину стручків какао, зелений чай або листя кави, однофазною сумішшю води і щонайменше першого органічного розчинника при перемішуванні для того, щоб одержати перший екстракт із високим вмістом олігомерів поліфенолу, і екстракцію щонайменше частини першого екстракту біфазною сумішшю води і щонайменше другого органічного розчинника при перемішуванні для того, щоб одержати другий екстракт із високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу. 2. Спосіб за п.1, в якому перший органічний розчинник являє собою спирт або кетон. 3. Спосіб за п.2, в якому однофазна суміш додатково містить кислоту. 4. Спосіб за п.2, в якому однофазна суміш містить від 50 до 80 об'ємних % першого органічного розчинника, від 20 до 50 об'ємних % води і від 0 до 3 об'ємних % кислоти. 5. Спосіб за п.4, в якому перший органічний розчинник являє собою метанол, етанол, ацетон або метилетилкетон. 2 (19) 1 3 96776 4 того, щоб одержати другий екстракт, збагачений мономерами, димерами і тримерами поліфенолу. 14. Продукт харчування, що містить поліфеноловмісну композицію, збагачену мономерами, димерами і тримерами поліфенолу, одержану згідно з п.13, в якому поліфеноловмісна композиція включена до складу продукту харчування. 15. Продукт харчування за п.14, в якому продукт харчування вибраний із шоколадного продукту, напою какао, продукту, що містить какао, продукту, що містить шоколад, напою кави, продукту, що містить каву. 16. Лікарський засіб, що містить поліфеноловмісну композицію, збагачену мономерами, димерами і тримерами поліфенолу, одержану за п.13, в якому поліфеноловмісна композиція включена до складу лікарського засобу. 17. Косметичний продукт, що містить поліфеноловмісну композицію, збагачену мономерами, димерами і тримерами поліфенолу, одержану за п.13, в якому поліфеноловмісна композиція включена до складу косметичного продукту. Даний винахід стосується способів для одержання композицій, що містять поліфенол із високим вмістом поліфенольних олігомерів і/або з високим вмістом поліфенольних мономерів, димерів і тримерів. Даний винахід також стосується композицій, що одержуються такими способами. Існує зростаюча зацікавленість у поліфенолів внаслідок їх захисного впливу на здоров'я людини. Зокрема, виявлене зниження поліфенолами ризику хронічних захворювань, таких як серцевосудинні захворювання і злоякісні пухлини. Отже, можна намагатися використовувати поліфеноли у функціональних продуктах харчування або як лікарські засоби. їх антиоксидантний ефект може додатково обумовлювати до їх застосування в косметичних засобах. Традиційно, вивчені поліфеноли з какао-бобів, але й інші рослини, такі як шавлія, зелений чай, інші продукти какао, багато-які інші рослини також містять значну кількість зазначених природних речовин. Внаслідок збільшення пошкодження натуральних антиоксидантів та інших продуктів, пов'язаних зі здоров'ям, існує постійна необхідність знаходити нову сировину. Недавні дослідження виявили, що ефекти різні у поліфенолів із різним ступенем полімеризації (dp). Наприклад, тетрамери проціанідинів (dp=4), окремий клас поліфенолів, достовірно найбільш ефективні для пригнічення АСЕ в ендотеліальних клітинах пупкової вени людини (Ottaviani et al., Biochimie 88, 2006, 359-265), тетрамери, пентамери і гексамери проціанідинів демонструють високий переважний АСЕ вплив у клітинах ізольованих легень кролика (Actis-Goretta et al., FEBS Letters 555, 2003, 597-600), і захист від окислення зростає зі збільшенням довжини олігомерів проціанідинів (від dp=1 до dp=5) у моделі ліпосом (тобто, пентамери проціанідину демонструють кращий ліпосомальний захист, ніж мономери проціанідину (Lotito et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 276, 2000, 945-951)). Більше того, пентамери проціанідинів пригнічують експресію тирозинкінази ЕгЬВ2 і зменшують клітинну проліферацію ендотеліальних клітин аорти людини (Kenny et al., Experimental biology and Medicine 229, 2004, 255-263). Мономери, димери і тримери проціанідинів, на протилежність, мають різні фармакокінетичні профілі в порівнянні з олі гомерами, такими як тетрамери, пентамери і гексамери проціанідів. Osman et al., Food Chemistry 86, 2004, 41-46, описують, що композиції харчових продуктів і напоїв, багаті фенолами, можуть зменшувати ризик серцевих захворювань, сповільнювати прогресування атеросклерозу, діючи у ролі антиоксидантів стосовно ліпопротеїдів низької щільності. Osman et al. також одержали екстракти листя какао і визначили їхній антиоксидантний потенціал. Однак Osman et al. не обговорює проціанідини; також виявлено, що загальний вміст поліфенолів, виділеним способом, застосованим Osman et al. був низьким. У Патенті Японії 2000-060485А, екстракти одержали екстракцією водою/хлороводнем протягом 30 хвилин при 90 °C. Однак, проціанідини та їхня композиція не були охарактеризовані; також виявлено, що загальний вміст поліфенолів був низьким. Екстракція проціанідинів із бобів какао описана в Патенті США 6627232. Таким чином, відсутні способи, описані в попередньому рівні техніки, що дозволяють регулювання відносних кількостей мономерів, димерів і тримерів у порівнянні з вищими олігомерами проціанідинів, які демонструють різні фізіологічні властивості. Додатково, олігомери виявляють наявність в'яжучої дії, що значно зросла у порівнянні з мономерами, димерами і тримерами. Більше того деякі рослинні речовини містять істотні кількості теоброміну, який також може спричиняти збільшення гіркоти. Отже, будуть корисні способи, що дозволяють зменшити вміст теоброміну при використанні рослинних екстрактів в їжу. Завдання надання способу для одержання композицій, що містять поліфенол із високим вмістом олігомерів поліфенолів або з високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу ще не вирішене. Способи, які дозволяють регулювання відносного вмісту мономерів, димерів і/або тримерів і вищих олігомерів проціанідину (dp= від 4 до 6) і в той час зменшують вміст теоброміну не були відомі до даного винаходу. Даний винахід надає спосіб для одержання композицій, що містять поліфенол із високим вмістом олігомерів поліфенолів або з високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу. Автори даного винаходу удосконалили спосіб для одер 5 жання композицій, що містять поліфенол, який дозволяє здійснити специфічне регулювання вмісту мономерів, димерів і/або тримерів і вищих олігомерів проціанідину. Більше того даний винахід значно зменшує вміст теоброміну. Відповідно до даного винаходу, наданий спосіб для одержання поліфенольних композицій, що включає першу стадію екстракції рослинної сировини однофазною сумішшю води і щонайменше першого органічного розчинника при перемішуванні, щоб одержати перший екстракт із високим вмістом олігомерів поліфенолу. Також наданий спосіб, який додатково включає другу стадію екстракції щонайменше частини першого екстракту двофазною сумішшю води і щонайменше другого органічного розчинника при перемішуванні, щоб одержати другий екстракт із високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу. Один окремий варіант здійснення, що стосується даного винаходу, стосується способу для одержання поліфеноловмісних композицій, що включає першу стадію екстракції рослинної сировини однофазною сумішшю води і щонайменше першого органічного розчинника при перемішуванні, щоб одержати перший екстракт із високим вмістом олігомерів поліфенолу і другу стадію екстракції щонайменше частини першого екстракту двофазною сумішшю води і щонайменше другого органічного розчинника при перемішуванні, щоб одержати другий екстракт із високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу. Додатковий варіант здійснення способу для одержання композицій, що містять поліфенол відповідно до даного винаходу використовує обробку парою, сушіння і/або знежирювання рослинної сировини як вихідного матеріалу. В альтернативному варіанті здійснення, відповідно до даного винаходу, спосіб додатково включає необов'язкову стадію, таку як ліофілізацію або розпилювальне сушіння водного розчину або суспензії, одержаних екстракцією рослинної сировини на першій стадії. Більше того, також надані композиції, що містять поліфенол, які одержують зазначеними способами, так само як і харчові продукти, що одержують включенням до їх складу композицій. Більше того, даний винахід стосується використання композицій у ролі харчового інгредієнта, лікарського засобу і косметичного продукту. Спосіб, що відповідає даному винаходу, надає рішення для вищезгаданої проблеми, в якому специфічно регулюють вміст мономерів, димерів і/або тримерів і вищих олігомерів проціанідину і зменшують вміст теоброміну. Рослинна сировина, використана в способі даного винаходу може бути будь-якою рослинною сировиною, що містить поліфеноли. Зокрема, може бути використана будьяка рослинна сировина, що містить проціанідин. Рослинна сировина може бути будь-якою із групи, вибраної з фруктів, зернових, бобових, горіхів, спецій, чаю і т.д. Окремий переважний клас поліфенолів, що відповідають даному винаходу являє собою проантоціанідини, такі як проціанідини. "Проціанідини" у контексті даного винаходу включають проантоціанідини на основі катехіну і на 96776 6 основі епікатехіну, так само як і катехіни. Переважні поліфеноли також включають поліфенол-оглікозиди (наприклад, флавонол-О-глікозиди, флавон-О-глікозиди), поліфенол-С-глікозиди (наприклад, флавон-С-глікозиди), катехіни, N(гідроксифенілпрпеноїл)Ь-амінокислоти, антоціаніни, кловамід і дидіоксикловамід. Приклади форм фруктів, які можуть бути використані в даному винаході, включають цілі фрукти, шматочки фруктів, пюре, соки, концентрати соків і їхні суміші. Приклади фруктів включають серцевину артишоку, журавлину, чорницю, сливу, чорну смородину, полуниці, яблука, зелений виноград, аґрус, персики, червону смородину і зелену грушу. Зернові включають суцільне або подрібнене зерно або матеріали на основі муки. Бобові включають цілі або подрібнені бобові і споріднену рослинну сировину. Зернові і бобові включають какао, листя какао, лушпину стручків какао, sumac sorghum, квасолю, червону квасолю і ячмінь. Горіхи включають фундук, пекан, фісташки, мигдаль і волоські горіхи. Прянощі включають корицю. Чай включає зелений чай. Більше того, рослинна сировина що відповідає винаходу включає листя кави, стручки кави та ягоди кави. Переважні приклади рослинної сировини включають листя какао, лушпину стручків какао, зелений чай і листя кави. Рослинна сировина може бути у формі порошку або в іншій формі, що є придатною для екстракції. Відповідно до даного винаходу, рослинну сировину екстрагують на першій стадії, використовуючи однофазну суміш води і щонайменше першого органічного розчинника при перемішуванні. Перший органічний розчинник, який використовують спільно з водою в однофазній суміші, відповідно до способу даного винаходу може бути будьяким органічним розчинником, який здатний змішуватися з водою. Переважно, перший органічний розчинник являє собою будь-який розчинник, вибраний із групи, що складається зі спиртів і кетонів. Спирти, що відповідають даному винаходу включають ацетон і метилетилкетон. Переважно, як перший розчинник на першій стадії, відповідно до даного винаходу, використовують ацетон. Рослинна сировина, що використовується для способів, відповідно до даного винаходу, може бути оброблена парою, висушена і/або знежирена. Обробку парою, відповідно до винаходу, здійснюють загальноприйнятими способами, використовуючи водяну пару. Переважно, обробку парою здійснюють протягом приблизно 5 хвилин при 98 °C для зменшення активності поліфенолоксидази і збільшення загального виходу поліфенолу. Сушіння здійснюють протягом декількох годин при підвищеній температурі, переважно до 40 °C. Необов'язкову стадію знежирювання можуть виконувати, використовуючи неполярний розчинник. Переважно, неполярні розчинники, такі як гексан, використовують для знежирювання, і знежирювання може бути виконане в обладнанні Soxhlet. Однофазна суміш, що використовується на першій стадії способу, відповідно до даного винаходу, містить від 50 до 80 об'ємних %, переважно від 60 до 80 об'ємних % і переважніше від 65 до 75 7 об'ємних % органічного розчинника і від 20 до 50 об'ємних %, переважно від 25 до 40 об'ємних % і переважніше від 27 до 35 об'ємних % води. В окремому переважному варіанті здійснення, однофазна суміш крім того містить кислоту, наприклад, у кількості до 5 об'ємних %, переважно до З об'ємних %. Кислота сприяє попередженню окислення і полімеризації проціанідинів. Кислоти для здійснення першої стадії даного винаходу, включають будь-які з мурашиної кислоти, оцтової кислоти, соляної кислоти і фосфорної кислоти. Оцтова кислота являє собою окремий переважний приклад кислот. Першу стадію екстракції рослинної сировини однофазною сумішшю виконують при температурі від 10 до 60 °C, переважно при температурі від 20 до 50 °C і переважніше при температурі від 35 до 45 °C. Крім того, першу стадію переважно виконують при нормальному тиску протягом від 10 хвилин до 4 годин, переважно протягом від 30 хвилин до 2 годин. Перший екстракт, таким чином одержаний, може бути сконцентрований випарюванням і/або ліофілізацією, або сушінням розпиленням. Спосіб одержання композицій, що містять поліфенол, відповідно до даного винаходу, що включає першу стадію екстракції рослинної сировини однофазною сумішшю при перемішуванні, дає в результаті перший екстракт із високим вмістом олігомерів поліфенолу. Олігомери поліфенолу, відповідно до даного винаходу, являють собою тетрамери, пентамери і гексамери проціанідину (тобто, ступінь полімеризації від 4 до 6). Перший екстракт, який багатий олігомерами поліфенолу, містить від 15 до 25 мас. %, переважно від 18 до 23 мас. % тетрамерів поліфенолу, від 18 до 30 мас. %, переважно від 20 до 25 мас. % пентамерів поліфенолу і від 10 до 20 мас. %, переважно від 11 до 18 мас. % гексамерів поліфенолу, виходячи із загальної концентрації проціанідину. Перший екстракт, який багатий олігомерами поліфенолу, може містити до 10 мас. % мономерів проціанідину (наприклад, катехін і епікатехін), до 20 мас. % димерів проціанідину і до 25 мас. % тримерів проціанідину, виходячи із загальної концентрації проціанідину. У переважному варіанті здійснення, перший екстракт містить не більше, ніж від 3 до 8 мас. % мономерів проціанідину, не більш, ніж від 12 до 19 мас. % димерів проціанідину і не більш, ніж від 15 до 20 мас. % тримерів проціанідину, виходячи із загальної концентрації проціанідину. Відповідно до даного винаходу, перший екстракт або його частина, яка багата олігомерами поліфенолу, може бути екстрагована біфазною сумішшю води і щонайменше другого органічного розчинника при перемішуванні, для одержання другого екстракту з високим вмістом мономерів і димерів поліфенолу. Другий екстракт містить від 10 до 30 мас. %, переважно більше, ніж 13 мас. % мономерів проціанідину, від 20 до 35 мас. %, переважно від 23 до 30 мас. % димерів проціанідину, також від 18 до 28 мас. %, переважно від 20 до 25 мас. % тримерів проціанідину, виходячи із загальної концентрації проціанідину. Крім того, другий екстракт може містити до 20 мас. % тетрамерів проціанідину, до 15 мас. % пен 96776 8 тамерів проціанідину і до 10 мас. % гексамерів проціанідину, виходячи із загальної концентрації проціанідину. Переважно, другий екстракт містить не більше, ніж 19 мас. % тетрамерів проціанідину, не більше, ніж 12 мас. % пентамерів проціанідину і не більше, ніж 7 мас. % гексамерів проціанідину, виходячи із загальної концентрації проціанідину. Біфазна суміш води і щонайменше другого органічного розчинника, який використовують відповідно до даного винаходу, на необов'язковій другій стадії екстракції першого екстракту може містити будь-який органічний розчинник, який утворює біфазну суміш із водою. Зазначений другий органічний розчинник переважно вибраний із групи, що складається з етилацетату, дихлорметану, хлороформу, діетилового ефіру, петролейного ефіру, гексану та їхньої суміші. Другу стадію екстракції першого екстракту проводять при температурі від 10 до 40 °C, переважно при температурі від 15 до 3 5 °C і найпереважніше при температурі від 20 до 25 °C. Крім того, зазначену другу стадію переважно виконують при нормальному тиску, і об'єм другого органічного розчинника, що використовується для екстракції, складає від 0,1 до 3, переважно від 0,2 до 2 і переважніше від 0,3 до 1, виходячи з об'єму водної фази біфазної суміші. Однак, інше об'ємне співвідношення може бути застосовним, залежно від розчинності поліфенолів у другому органічному розчиннику. Екстракція може бути повторювана, і таким чином одержаний екстракт може бути сконцентрований випарюванням і/або ліофілізацією або сушінням розпиленням. Іншими словами, наданий спосіб одержання композицій, що містять поліфенол, який включає першу стадію екстракції рослинної сировини, такої як листя какао, однофазною сумішшю води і щонайменше першого органічного розчинника при перемішуванні, в якому однофазна суміш може містити кислоту, таку як оцтова кислота, таким чином надавати перший екстракт, який збагачений олігомерами поліфенолу в перекладі на загальний вміст поліфенолу. "Збагачений олігомерами поліфенолу" у контексті даного винаходу, означає, що екстракт містить більше олігомерів проціанідину, ніж мономерів проціанідину, димерів проціанідину і тримерів проціанідину. Крім того, наданий спосіб, який додатково включає другу стадію екстракції першого екстракту або його частини сумішшю води і щонайменше другого органічного розчинника, який формує двофазну систему з водою, таким чином, надає другий екстракт, який збагачений мономерами проціанідину, димерами проціанідину і тримерами проціанідину, виходячи із загального вмісту поліфенолу. "Збагачений мономерами проціанідину, димерами проціанідину і тримерами проціанідину" у контексті даного винаходу, означає, що екстракт містить більше мономерів проціанідину, димерів проціанідину і тримерів проціанідину, ніж олігомерів проціанідину. Крім того, другий екстракт демонструє зменшений вміст теоброміну. У переважному варіанті здійснення, відповідно до даного винаходу, вміст теоброміну у другому екстракті зменшенийдо по 9 ловини вмісту теоброміну в першому екстракті. В окремому переважному варіанті здійснення, відповідно до даного винаходу, другий екстракт містить тільки приблизно третину вмісту теоброміну в першому екстракті. Винахід також надає композиції, що містять поліфенол, та які одержують зазначеними способами. Крім того, винахід також спрямований на продукти харчування, такі як шоколад, напої какао, напої кави, продукти, що містить какао, продукти, що містять шоколад, продукти, що містять каву, і напої або освіжаючі напої, які одержують введенням до їх складу зазначених композицій, так само як і на їхнє використання у ролі харчового інгредієнта, на використання їх як лікарського засобу або як косметичного засобу. Фіг.1 ілюструє спосіб одержання композицій, що містять поліфенол, відповідно до даного винаходу. Фіг.2 зображує відносний профіль поліфенолу проціанідину екстракту листя какао відповідно до даного винаходу. Фіг.3 зображує відносний профіль поліфенолу проціанідину екстракту лушпини стручків какао відповідно до винаходу. Далі представлені специфічні варіанти здійснення винаходу, що ілюструють способи і композиції, відповідно до даного винаходу. Визначення відносної концентрації олігомеру проціанідину (% загальної, нормалізована) Екстракти відповідно до даного винаходу концентровані, використовуючи паралельний випарний пристрій, і очищені за допомогою твердофазної екстракції (SPE) на Sephadex LH20 обладнанні для відділення цільового аналіту від не поліфенольних сполук (наприклад, цукру та алкалоїдів). Очищені екстракти досліджені способами HPLC, використовуючи силікагелеву колонку з прямою фазою. Речовини, що аналізуються, визначили, використовуючи флуоресцентний детектор. Результуючі значення обчислені з використанням зовнішніх стандартів (виділених із листя какао) і виражені в одиницях мг/100 г. Відносні концентрації олігомерів проціанідину потім обчислили і виразили, як відсоток загального вмісту проціанідину. Зазначений спосіб, у загальному випадку, оснований на Gu et al., J Agric Food Chem 50, 2002, 48524860 і Hammerstone et al., J Agric Food Chem 47, 1999,490-496. Визначення вмісту поліфенолу, відповідно до методу Фоліна-Чикальтеу Екстракти, що містять поліфенол, одержали відповідно до даного винаходу. Вміст поліфенолу екстракту визначили вступанням екстракту в реакцію з фосфомолібденовим/фосфовольфрамовим кислотним комплексом (реактив ФолінаЧикальтеу) для утворення хромогенів при лужному рН. Блакитний забарвлений розчин виміряли фотометрично і визначили кількість за допомогою зовнішнього калібрування зі стандартами галієвої кислоти. Результати виразили у вигляді мас. відсотків "еквівалентів галієвої кислоти" (GAE) в одиницях г/100 г. Даний спосіб загалом описаний Singleton et al., Methods in Enzymology (Oxidants and Antioxidants, Part A) 299, 1999, 152-178. 96776 10 Листя какао Листя какао одержали з рослин какао в Еквадорі, транспортували в умовах підвищеної вологості і використали відразу ж після холодильного зберігання. Листя обробили парою протягом 5 хвилин при 98 °C, сушили протягом ночі при 40 °C і подрібнили, використовуючи подрібнювач Retsch (SM 100, тричі 2 секунди при 9000 об/хв). Подрібнене листя знежирили гексаном в обладнанні Soxhlet, охолодили при кімнатній температурі і висушили в кристалізаторі. Одержання з листя какао першого екстракту, з високим вмістом олігомерів поліфенолу Приблизно 30г порошку знежиреного листя какао суспендували в 500мл розчинника для екстракції (ацетон/вода/оцтова кислота: 70/29,5/0,5, об'єм/об'єм/об'єм) у круглій колбі. Суспензію екстрагували струшуванням колби при 40 °C протягом 1 години при тиску навколишнього середовища. Після фільтрації, екстракцію повторили. Розчинники, сумісні з екстрактами, видалили при зниженому тиску при 40 °C, використовуючи роторний випарник. Кінцевий водний розчин висушили ліофілізацією протягом ночі. Таким чином одержаний перший екстракт багатий вмістом олігомерів поліфенолу (Фіг.2). Одержання другого екстракту з високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу Приблизно 2г першого екстракту суспендували в 500мл дистильованої води в ультразвуковій ванні при кімнатній температурі. Водну суспензію екстрагували в роздільній лійці, використовуючи етилацетат (тричі по 200мл). Розчинник сумісної органічної фази видалили при зниженому тиску при 40 °C. Додали дистильовану воду до суспензії і висушили ліофілізацією протягом ночі. Таким чином, одержаний другий екстракт мав несподівано високий вміст поліфенолу 47 мас. % (визначили відповідно до методу Фоліна-Чикальтеу), що містить 20 мас. % проціанідинів, виходячи із загального вмісту поліфенолу. Відносний профіль проціанідинів продемонстрований на Фіг.2. Лушпина бобів какао Боби какао одержали з рослин какао в Еквадорі, транспортували за умов навколишнього середовища і лушпину бобів відділили від м'якоті і зерен. Лушпину стручків нарізували на маленькі шматки, сушили протягом 50 годин при 40 °C і подрібнили, використовуючи подрібнювач Retsch (SM 100, десять разів по 5 секунд при 5000об/хв). Подрібнене листя знежирили гексаном в апараті Соксклета, охолодили до кімнатної температури і висушили в кристалізаторі. Одержання з лушпини стручків какао першого екстракту, із високим вмістом олігомерів поліфенолу Приблизно 30г порошку лушпини стручків какао суспендували в 500мл розчиннику для екстракції (ацетон/вода/оцтова кислота: 70/29,5/0,5, об'єм/об'єм/об'єм) у круглій колбі, об'ємом 1л. Суспензію екстрагували струшуванням колби при 40 °C протягом 1 години при тиску навколишнього середовища. Після фільтрації, екстракцію повто 11 рили. Розчинники сумісних екстрактів видалили при зниженому тиску при 40 °C, використовуючи роторний випарник. Кінцевий водний розчин висушили ліофілізацією протягом ночі. Таким чином, одержаний перший екстракт багатий вмістом олігомерів поліфенолу (Фіг.2). Одержання другого екстракту з високим вмістом мономерів, димерів і тримерів поліфенолу Перший екстракт (приблизно 2г) суспендували у 250мл дистильованої води в ультразвуковій ванні при кімнатній температурі. Водну суспензію екс 96776 12 трагували в роздільній лійці, використовуючи етилацетат (тричі по 100мл). Розчинник об'єднаної органічної фази видалили при зниженому тиску при 40 °C. Додали дистильовану воду до суспензії і висушили ліофілізацією протягом ночі. Таким чином, одержаний другий екстракт мав несподівано високий вміст поліфенолу 49 мас. % (визначили відповідно до методу Фоліна-Чикальтеу), що містить 13 мас. % проціанідинів, виходячи із загального вмісту поліфенолу. Відносний профіль проціанідинів продемонстрований на Фіг.3. 13 Комп’ютерна верстка Н. Лисенко 96776 Підписне 14 Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601