Високоактивні повні і часткові агоністи та антагоністи рецептора ноцицептину/орфаніну fq

1. Пептид, що має загальну формулу (І): Xaa1- -Gly2-Gly3-Xbb4-Thr5-Gly6-Xcc7-Arg8-Lys9Ser10-Xdd11-Arg12-Lys13-Xee14-Xff15-R, (I) де: Хаа1 вибраний з групи, яку складають Phe та Nбензилгліцин (Nphe); являє собою зв'язок між першими двома залишками амінокислот, який вибраний з групи, яку складають CO-NH, CH2-NH та СН2-О; Xbb4 - Phe або pXPhe, де "Х" вибраний з групи, яка включає Н, Сl, Вr, І, F, NO2, CN і "р" вказує параположення у фенільному циклі Phe; Хсс7 вибраний з групи, яку складають 2-аміно-2метилпропіонова кислота (Aib); 2-аміно-2метилмасляна кислота (Iva); 2-аміно-2етилмасляна кислота (Deg); 2-аміно-2пропілпентанова кислота (Dpg); (СаСН3)Leu; (СаСН3)Vаl; 1-аміноциклопропанкарбонова кислота (Ас3с); 1аміноциклопентанкарбонова кислота (Ас5с) та 1аміноциклогексанкарбонова кислота (Ас6с); Xdd11 вибраний з групи, яку складають Аlа; 2аміно-2-метилпропіонова кислота (Aib); 2-аміно-2метилмасляна кислота (Iva); 2-аміно-2етилмасляна кислота (Deg); 2-аміно-2пропілпентанова кислота (Dpg); (СаСН3)Leu; (СаСН3)Vаl; 1-аміноциклопропанкарбонова кислота (Ас5с); 1-аміноциклопентанкарбонова кислота (Ас3с) та 1аміноциклогексанкарбонова кислота (Ас6с); Хее14 та Xff15 вибрані з групи, яку складають Arg, Lys, Оrn, oмoArg, діаміномасляна кислота, діамінопропіонова кислота та Тrр; R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2 або Asn-GlnOH чи амінокислоту Asn з амідною (-NH2) або карбоновою (-ОН) кінцевою групою чи аміновою (NН2) або гідроксильною (-ОН) кінцевою групою, та його фармацевтично прийнятні солі. 2. Пептид за п. 1, вибраний з групи, яка включає: UA (21) a200709286 (22) 15.02.2006 (24) 10.09.2010 (86) PCT/EP2006/050958, 15.02.2006 (31) FE2005A000003 (32) 15.02.2005 (33) IT (46) 10.09.2010, Бюл.№ 17, 2010 р. (72) ГУЕРРІНІ РЕМО, IT, САЛЬВАДОРІ СЕВЕРО, IT, КАЛО ДЖІРОЛАМО, IT, РЕГОЛІ ДОМЕНІКО, IT (73) ЮЕФПЕПТІДС С.Р.Л., IT (56) Chang Min et al.:"Structure-activity studies on different modifications of nociceptin/orphanin FQ: identification of highly potent agonists and antagonists of its receptor", Regulatory peptides, 15 Sep 2005, vol. 130, no. 3, 15 September 2005 (200509-15), pages 116-122, XP005023706, ISSN:01670115. CN A 1634980, 06.07.2005 (ABSTRACT). EP A 1422240, 26.05.2004. WO A 03093294, 13.11.2003. Guerrini remo et al.:"N- and C-terminal modifications of nociceptin/orphanin FQ generate highly potent NOP receptor ligands", Journal of medicinal chemistry, 10 MAR 2005, vol. 48, no. 5, 10 March 2005 (2005-03-10), pages 1421-1427, XP002392114, ISSN: 0022-2623. ZHANG CHONGWU ET AL: "Novel, potent ORL-1 receptor agonist peptides containing alpha-Helixpromoting conformational constraints." JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY. 21 NOV 2002, vol. 45, no. 24, 21 November 2002 (2002-11-21), pages 52805286, XP002341923 ISSN: 0022-2623. WO A1 2005004896, 20.01.2005. TANCREDI TEODORICO ET AL: "The interaction of highly helical structural mutants with the NOP receptor discloses the role of the address domain of nociceptin/orphanin FQ." CHEMISTRY (WEINHEIM AN DER BERGSTRASSE, GERMANY) 18 MAR 2005, vol. 11, no. 7, 11 February 2005 (2005-02-11), 2 (19) 1 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 Хаа1 Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH СН2-NH CH2-O CO-NH CO-NH СН2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH СН2-NH CH2-O CO-NH CO-NH СН2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-0 CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH 91844 Xbb4 Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pF)Phe (pF)Phe (pF)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Хсс7 Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Iva Iva Iva 4 Xdd11 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Ala Ala Ala Хее14 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Xff15 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys R Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe Nphe Phe Phe Phe 5 CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O CO-NH CO-NH CH2-NH СН2-O CO-NH CO-NH CH2-NH СН2-O CO-NH CO-NH CH2-NH CH2-O (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe (pNO2)Phe та його фармацевтично прийнятні солі. 3. Пептид за п. 1, де: Xaa1 - Phe; Xbb4 - (pX)Phe, де "X" вибраний з групи, яку складають Н, F, NO2 і "р" вказує пара-положення у фенільному циклі Phe; Xcc7 вибраний з групи, яку складають 2-аміно-2метилпропіонова кислота (Aib), 1аміноциклопентанкарбонова кислота (Ас5с) і 2аміно-2-метилмасляна кислота (Iva); Xdd11 вибраний з групи, яку складають Аlа; 2аміно-2-метилпропіонова кислота (Aib); 1аміноциклопентанкарбонова кислота (Ас5с), 2аміно-2-метилмасляна кислота (Iva); Xee14 - Arg; Xff15 - Lys і R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2 або Asn-NH2 чи аміногрупу (-NH2); та його фармацевтично прийнятні солі. 4. Пептид за п. 3, де - CO-NH; "X" - F; Xcc7 - 2аміно-2-метилпропіонова кислота (Aib); Xdd11 - Ala, a R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2; та його фармацевтично прийнятні солі. 5. Пептид за п. 3, де - CH2-NH; "X" - F; Хсс7 - 2аміно-2-метилпропіонова кислота (Aib); Xdd11 - Ala, a R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2; та його фармацевтично прийнятні солі. 6. Пептид за п. 2, де: Хаа1 - N-бензилгліцин (Nphe); - CO-NH; Хbb4 - Phe; Хсс7 вибраний з групи, яку складають 2-аміно-2метилпропіонова кислота (Aib) та 2-аміно-2метилмасляна кислота (Iva); Xdd11 вибраний з групи, яку складають Ala; 2аміно-2-метилпропіонова кислота (Aib) або 2аміно-2-метилмасляна кислота (Iva); і R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2 або аміногрупу (-NН2); та його фармацевтично прийнятні солі. 91844 Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Ala Ala Ala Ala Ala Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Aib Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Iva Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 6 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 Asn-Gln-NH2 -NH2 -NH2 -NH2 -NH2 7. Пептид за п. 6, де Хсс7 - 2-аміно-2метилпропіонова кислота (Aib); Xdd11 - Ala і R являє собою дипептид Asn-Gln-NH2; та його фармацевтичнo прийнятні солі. 8. Композиції, що містять пептиди за пп. 1-7. 9. Фармацевтична композиція, що містить як активну речовину пептиди за пп. 1-7 у поєднанні із фармацевтично прийнятними носіями та/або наповнювачами. 10. Фармацевтична композиція за п. 9 для введення пероральним, місцевим, респіраторним, ректальним, інтраспінальним, підоболонковим, внутрішньоміхуровим або парентеральним шляхами. 11. Фармацевтична композиція за п. 10, де введення здійснюють підоболонковим та парентеральним шляхом. 12. Застосування пептиду за пп. 1-7 для виготовлення лікарського засобу, призначеного для застосування для лікування або запобігання порушення неврологічних функцій та функцій чуттєвої іннервації. 13. Застосування пептиду за пп. 3-5 для одержання лікарського засобу для лікування або запобігання гіпертензії, тахікардії, розладів, пов'язаних із затримкою води, гіпонатремії, серцевої недостатності, порушення скорочувальної здатності гладеньких м'язів шлунково-кишкового тракту, дихальних шляхів та сечостатевого тракту, запальних станів, периферичної чи спинномозкової анестезії, лікування хронічного болю та ослаблення кашлю. 14. Застосування за п. 13, причому порушення скорочувальної здатності гладеньких м’язів включає нетримання сечі у разі нейрогенного сечового міхура, гіперактивність сечового міхура, дисфункцію дихальної системи. 15. Застосування пептиду за п. 12 для виготовлення транквілізатора або лікарського засобу для лікування або запобігання анорексії. 16. Застосування пептиду за пп. 6, 7 для виготовлення лікарського засобу для лікування розладів, пов'язаних зі споживанням їжі або для лікування ожиріння. 7 Галузь техніки, до якої належить винахід Цей винахід має відношення до аналогів пептидів ноцицептину/орфаніну FQ (N/OFQ), здатних до модулювання активності рецептора пептидів N/OFQ (рецептор NOP), фармацевтичних композицій, що містять згадані аналоги пептидів та їх застосування для лікування дисфункцій, патологічних розладів та патологічних станів, що залучають згаданий рецептор. Рівень техніки У 1994 році було клоновано новий рецептор, який одержав назву ORL1, тобто структурно подібний до опіоїдних рецепторів; за нещодавніми рекомендаціями IUPHAR (Міжнародна спілка основної та клінічної фармакології), найвідповіднішою назвою для цього рецептора є NOP. Ендогенний ліганд цього рецептора (N/OFQ), ідентифікований на кінець 1995 року, являє собою гептадекапептид, подібний до деяких опіоїдних пептидів (наприклад, динорфіну А), який, однак, не зв'язує класичних опіоїдних рецепторів типів мю (МОР), дельта (DOP) або каппа (KОР). Клітинні ефекти, що опосередковуються рецептором NOP, є подібними до ефектів, що викликаються класичними опіоїдними рецепторами. Із структурної точки зору та з точки зору передачі сигналів, система пептид/рецептор N/OFQ-NOP належить до опіоїдної родини, хоча і являє собою відгалуження, що відрізняється у фармакологічному відношенні. Декілька досліджень, що були здійснені у період між 1996 та 1998 роками, показали, що N/OFQ можуть модулювати декілька функцій як на рівні центральної нервової системи (біль, тривога, навчання, пам'ять, зловживання лікарськими засобами, апетит), так і на периферичному рівні (кров'яний тиск, ритм серця, функції нирок, шлунковокишкового, сечостатевого трактів та дихальних шляхів) (додаткові подробиці дивись Массі (Massi) та інші, Peptides 21, 2000). Розпочинаючи з 1996 року, автори цього винаходу здійснювали дослідження системи N/OFQNOP, унаслідок яких були ідентифіковані конкретні ліганди рецептора NOP, а саме: і) N/OFQ(1-13)NH2, який являє собою мінімальний функціональний фрагмент із тією самою активністю, що і природний ліганд N/OFQ (Кало (Calo) та інші, Eur. J. Pharmacol. 311, R3-5, 1996), іі) N/OFQ-NH2, який викликає, зокрема in vivo, інтенсивніший і триваліший вплив порівняно з N/OFQ (Ріцці (Rizzi) та інші, Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 363, 161165. 2001), iii) [Tyr1]N/OFQ(1-13)-NH2, змішаний агоніст, який діє на NOP та на класичні опіоїдні рецептори (Кало (Calo) та інші, Can. J. Physiol. Pharmacol. 75, 713-718, 1997; Варані (Varani) та інші, Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 360, 1 2 270-277, 1999), iv) [Phe (CH2-NH)Gly ]N/OFQ(113)-NH2, селективний ліганд рецептора NOP, який поводиться як чистий антагоніст, частковий агоніст або навіть як повний агоніст, у залежності від досліджуваного препарату/аналізу (Герріні (Guerrini) та інші, Br. J. Pharmacol. 123, 163-165, 1998; Окава (Okawa) та інші, Br. J. Pharmacol. 127, 123-130, 91844 8 1999) - виходячи з докладного аналізу фармакологічної дії [Phe1 (CH2-NH)Gly2]N/OFQ(1-13)-NH2, дані якого були повідомлені Кало (Calo) та іншими (Peptides 21, 935-947, 2000), виявляється, що ця сполука дійсно є частковим агоністом NOP, v) [Nphe1]N/OFQ(1-13)-NH2, перший чисто конкурентний антагоніст рецептора NOP (Кало (Calo) та інші, Br. J. Pharmacol. 129, 1183-1193, 2000; Герріні (Guerrini) та інші, J. Med. Chem. 15, 2805-2813, 2000). Характеристика дії цих лігандів була визначена у декількох in vitro та in vivo аналізах (дивись Кало (Calo) та інші, Br. J. Pharmacol. 129, 12611283, 2000). Нещодавно залишок Phe4 було замінено на (pF)Phe або (pNO2)Phe, із одержанням унаслідок цього активних агоністів NOP селективної дії (Герріні (Guerrini) та інші, J. Med. Chem. 44, 3956-3964, 2001). Інша цікава сполука, [Arg14,Lys15]N/OFQ, була ідентифікована як високоактивний агоніст (у 17 разів активніший за N/OFQ), з селективністю дії відносно людських рекомбінантних рецепторів NOP, що експресуються клітинами НЕK293 (Окада (Okada) та інші, Biochem. Biophys. Res. Commun. 278, 493-498, 2000). Характеристика дії цього ліганду була додатково визначена in vitro із застосуванням виділених тканин, чутливих до N/OFQ, та in vivo на мишах (Ріцці (Rizzi) та інші, J. Pharmacol. Exp. Ther. 300, 57-63, 2002). Окрім того, Чжан (Zhang) та інші, (Чжан (Zhang) та інші, J. Med. Сhеm., 45, 52805286, 2002) описав аналоги N/OFQ, які характеризуються залишком 2-аміно-2-метилпропіонової кислоти (Aib) у положенні 7 та/або 11, із заміною залишків Ala і спричиненням підвищення ступеня спорідненості і активності ліганду. Опис аналогів N/OFQ було наведено у WO 99/07212, WO 97/07208, WO 99/03491, WO 99/03880 та ЕР 1422240. Повідомлялось про придатність цього ліганду для лікування/запобігання захворювань, пов'язаних із гіпералгезією, функціонуванням нейроендокринних залоз, стресом, руховою активністю та тривогою. Далі, еталонна послідовність пептиду N/OFQ має такий вигляд: H-Phe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Ala-Arg-Lys-Ser-AlaArg-Lys-Leu-Ala-Asn-Gln-OH. Опис фігур Фіг. 1: Вплив інтрацеребровентрикулярного (i.c.v., як показано на верхніх графіках) або підоболонкового (i.t, як показано на нижніх графіках) введення N/OFQ (10 нмоль/миша) та UFP-112 (0,1 нмоль/миша) у тесті на відсмикування хвоста (посилання: Кало (Calo) та інші, Br. J. Pharmacol. 125, 375-378, 1998). Контрольні тварини одержували одну i.c.v. ін'єкцію фізіологічного розчину (2 мкл/миша). Кожна точка представляє середнє значення±середня квадратична помилка щонайменше 4 експериментів. Фіг. 2: Тривалість впливу N/OFQ (10 нмоль/миша) та UFP-112 (0,1 нмоль/миша), які були введені інтрацеребровентрикулярним (i.c.v.) шляхом, на спонтанну рухову активність у мишей (посилання: Ріцці (Rizzi) та інші, Naunyn 9 91844 10 Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 363, 161-165, нової кислоти або Тrp; R являє собою дипептид 2001). Контрольні тварини одержували одну i.c.v. Asn-Gln-NH2 або Asn-Gln-OH чи амінокислоту Asn ін'єкцію фізіологічного розчину (2 мкл/миша). Кожз амідною (-NH2) або карбоновою (-ОН) кінцевою на точка представляє середнє значення±середня групою чи аміновою (-NH2) або гідроксильною (квадратична помилка щонайменше 4 експерименОН) кінцевою групою. тів. На додаток до цього, винахід включає фармаФіг. 3. Кінетика дії та зворотності впливу однацевтично прийнятні солі цих сполук (І), зокрема, ково ефективних концентрацій N/OFQ та UFP-112 солі органічних і мінеральних кислот, наприклад, на vas deferens миші після електростимуляції. гідрохлорид, гідробромід, фосфати, сульфати, Скорочення vas deferens, індуковане електростиацетати, сукцинати, аскорбати, тартрати, глюконамуляцією, пригнічується у присутності UFP-112 ти, бензоати, малеати, фумарати і стеарати. або N/OFQ. Сполуки за цим винаходом, які підпадають під Докладний опис винаходу формулу І, мають доведену фармакологічну актиТерміни, вжиті у цьому патенті, мають значенвність, навіть у 100 разів вищу за пептидні ліганди, ня, відоме у цій галузі техніки, як, наприклад, у відомі у цій галузі. Таким чином можна висунути IUPHAR on Receptor Nomenclature and Drug гіпотезу про синергічний ефект пермутацій за фоClassification (Міжнародний фармакологічний комірмулою І: для положень 1, 4, 7, 11, 14 та 15 і зв'язтет з номенклатури рецепторів та класифікації ку між першими двома залишками амінокислот. лікарських засобів), Pharm. Rev. (2003) том 55, № Більш висока активність сполук формули І і, зок4, стор. 597, як повідомляється у цьому описі: рема, сполук, яким віддається перевага, за варіанЕфективність - поняття, що виражає ступінь, том, якому віддається перевага, агоністів, і за вадо якого різні агоністи викликають різні реакції, ріантом, якому віддається більша перевага, навіть у тому разі, коли вони займають однакову [(pF)Phe4,Aib7,Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2, демонстручастину рецепторів. ється відносно спорідненості, активності, стійкості Активність - проявлення активності сполуки, до протеаз, in vitro кінетики дії і, більш над усе, що визначається через концентрацію або кількість, тривалості їхньої дії in vivo. необхідну для спричинення визначеного впливу. Сполуками, яким віддається перевага, є споАктивність визначають як pEC50 для агоністів та як луки формули (І), де - CO-NH або CH2-NH чи рА2 для антагоністів. СН2-О, Хаа1 - Phe або Nphe, Xbb4 - Phe або Предметами цього винаходу є аналоги пепти(pX)Phe, де "(рХ)" відповідає вищенаведеному дів N/OFQ загальної формули (І): визначенню, Хсс7 та Xdd11 відповідає вищенаведеному визначенню, Хее14 та Xff15 - Arg, Lys, Orn, 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Xaa - -Gly -Gly -Xbb -Thr -Gly -Xcc -Arg -Lys oмoArg або Тrр; R - -NH2 або -ОН чи Asn-NH2 чи (І) Ser10-Xdd11-Arg12-Lys13-Xee14-Xff15-R, Asn-OH чи Asn-Gln-NH2 чи Asn-Gln-OH. Більша перевага віддається тим сполукам фоде рмули (І), де - CO-NH або CH2-NH чи СН2-О; Хаа1 - Phe або N-бензилгліцин (Nphe); являє Хаа1 - Phe або Nphe; Xbb4 - Phe або (pF)Phe чи собою зв'язок між першими двома залишками амі(pNO2)Phe; Хсс7 та Xdd11 - Ala; 2-аміно-2нокислот, вибраний з-посеред CO-NH, CH2-NH та метилпропіонова кислота (Aib); 2-аміно-2СН2-О; Xbb4 - Phe або (pX)Phe, де "X" являє собою метилмасляна кислота (Iva); 2-аміно-2Н, СІ, Br, I, F, NO2, CN, і "р" вказує пара-положення етилмасляна кислота (Deg); 2-аміно-2у фенільному циклі Phe; Xcc7 та Xdd11 вибрані зпропілпентанова кислота (Dpg); (СаСН3)Lеu; посеред: Ala; 2-аміно-2-метилпропіонової кислоти (СаСН3)Vаl; 1-аміноциклопропанкарбонова кисло(Aib); 2-аміно-2-метилмасляної кислоти (Iva); 2та (Ас3с); 1-аміноциклопентанкарбонова кислота аміно-2-етилмасляної кислоти (Deg); 2-аміно-2(Ас5с) та 1-аміноциклогексанкарбонова кислота пропілпентанової кислоти (Dpg); (СаСН3)Lеu; (Ac6c); Хее14 та Xff15 - Arg або Lys; R - Asn-Gln-NH2 (СаСН3)Vаl; 1-аміноциклопропанкарбонової кислоабо -NH2. ти (Ас3с); 1-аміноциклопентанкарбонової кислоти Ще більша перевага віддається аналогам пеп(Ас5с) та 1-аміноциклогексанкарбонової кислоти тидів, що мають формулу (І), де варіабельні зали(Ас6с); Хее14 та Xff15 вибрані з-поміж Arg, Lys, Orn, шки мають значення, вказане у наведеній нижче омoArg, діаміномасляної кислоти, діамінопропіотаблиці. 11 91844 12 13 91844 14 15 Ще більша перевага з-посеред них віддається сполукам, де - CO-NH або CH2-NH чи СН2-О; Хаа1 - Phe або Nphe; Xbb4 - Phe або (pF)Phe чи (pNO2)Phe; Хсс7 та Xdd11 - Ala; 2-аміно-2метилпропіонова кислота (Aib); 2-аміно-2метилмасляна кислота (Iva); Хее14 - Arg; Xff15 Lys; R - Asn-Gin-NH2 або -NH2, представленим наведеними нижче формулами: a) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; b) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; c) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; d) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; e) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; f) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-GlnNH2; g) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-GlnNH2; h) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; i) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; l) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Ala-Aig-Lys-Arg-Lys-NH2; m) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; n) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; o) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; p) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Ala-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; 91844 16 aa) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; bb) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; cc) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; dd) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; ее) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; ff) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-GlnNH2; gg) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-GlnNH2; hh) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; ii) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; ll) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; mm) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-GlyAib-Aig-Lys-Ser-Aib-Aig-Lys-Arg-Lys-NH2; nn) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; oo) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; pp) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Aib-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; aaa) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-LysSer-Iva-Arg-Lys-Axg-Lys-Asn-Gln-NH2; bbb) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-ArgLys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; ccc) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-ThrGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-GlnNH2; 17 91844 18 Наприкінці синтезу пептиди можуть бути ddd) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Glyочищені і видалені шляхом обробки придатними Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; розчинниками та хроматографування, наприклад, eee) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aibшляхом високоефективного рідинного хроматогArg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln-NH2; рафування. Аналоги пептидів за цим винаходом fff) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thrдіють на рецептор NOP як і) повні агоністи, коли Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Glnвони представляють структуру [Phe1 (CONH2; NH)Gly2], ii) часткові агоністи, коли вони предстаggg) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thrвляють структуру [Phe1 (CH2-NH)Gly2] або Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-Asn-Gln[Phe1 (CH2-O)Gly2], і як чисті агоністи, коли вони NH2; hhh) H-Nphe-Gly-Gly-Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-Lysпредставляють структуру [Nphe1 (CO-NH)Gly2]. Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; На додаток до цього, цей винахід має відноiii) H-Phe-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Gly-Aib-Arg-Lysшення до фармацевтичних композицій, що місSer-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; тять аналоги пептидів, опис яких наведено, можlll) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thr-Glyливо, у комбінації із фармацевтично прийнятними Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; носіями і наповнювачами. Композиції за цим винаходом можуть бути введені пероральним чи mmm) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pF)Phe-Thrпарентеральним шляхом або респіраторним, Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; ректальним, спінальним шляхом; підоболонкоnnn) H-Phe-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thr-Gly-Aibвим, внутрішньоміхуровим або місцевим шляхаArg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; ми, як препарат для ін'єкцій, капсула, таблетка, ooo) H-Phe- (CH2-NH)-Gly-Gly-(pNO2)Pheгранула, розчин, суспензія, сироп, супозиторій, Thr-Gly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2; назальний спрей, крем, мазь, гель, препарат ppp) H-Phe- (CH2-O)-Gly-Gly-(pNO2)Phe-Thrпролонгованої дії тощо. Принципи і способи одеGly-Aib-Arg-Lys-Ser-Iva-Arg-Lys-Arg-Lys-NH2. ржання фармацевтичної композиції добре відомі Аналоги пептидів за цим винаходом можуть фахівцям у цій галузі і описані, наприклад, у бути синтезовані різними способами, відомими у Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 Edition, літературі, наприклад, Шредер (Schroeder) та Mack Publishing Company, Easton, штат Пенсільінші, "The Peptides" том 1, Academic Press, 1965; ванія, 1990. Фармацевтичні композиції за цим Боданскі (Bodanszky) та інші, "Peptide Synthesis" винаходом будуть містити ефективну кількість Interscience Publisher, 1966; Барані (Barany), Мепептидів (або їхніх похідних), як правило, у межах рріфілд (Merrifield), "The peptides; Analysis, від 0,001 мг до 100 мг, за варіантом, якому віддаSynthesis, Biology", 2, Academic Press, 1980; E. ється перевага, у межах від 0,01 мг до 10 мг. ДоАтерон (Ε. Atheron), P.K. Шеппард (R.C. бова доза буде змінюватись у залежності від типу Sheppard), "Solid Phase Peptide Synthesis" IPL патології/дисфункції, віку, статі та маси тіла хвоPress at Oxford University Press 1989; Дж. Джонс рого, загального стану здоров'я та інших змінних, (J. Jones), "The Chemical Synthesis of Peptides", які необхідно оцінювати індивідуальним чином. Claredon Press, Oxford 1994. Ці способи включаПриймаючи до уваги профіль активності, ють твердофазний синтез пептидів або рідкофазпродемонстрований пептидами за цим винахоний синтез пептидів, методи синтезу органічної дом у біологічних тестах, фармацевтичні компохімії або будь-яку комбінацію вищезгаданого. зиції, що містять згадані пептиди, можуть застоЗрозуміло, що вибір схеми синтезу буде залежасовуватись для лікування дисфункцій, розладів ти від складу даного пептиду. За варіантом, якоабо патологічних станів, у тому числі порушень му віддається перевага, застосовуються способи неврологічних функцій та функцій чуттєвої іннерсинтезу, основу яких становлять відповідні комбівації. Бажано забезпечити активну та тривалу нації твердофазних способів і класичних рідкоактивацію рецептора NOP для лікування розлафазних способів, які залучають низькі витрати дів, що супроводжуються тривогою, анорексії, виробництва, зокрема, у промисловому масштагіпертензії, тахікардії, розладів, пов'язаних із забі. Докладно, згадані способи включають: тримкою води, гіпонатремії, застійної серцевої і) синтез у розчині фрагментів ланцюга пепнедостатності, порушення рухових функцій глатиду шляхом послідовного сполучення Nденьких м'язів шлунково-кишкового тракту, дихазахищених амінокислот, відповідним чином актильних шляхів та сечостатевого тракту (зокрема, вованих, з амінокислотою або С-захищеним ланнетримання сечі у разі нейрогенного сечового цюгом пептиду, з виділенням проміжних хімічних міхура), запальних станів або периферичної чи продуктів, із подальшим селективним відщепленспинномозкової анестезії, зокрема, для лікування ням захисних груп N- та С-кінців згаданих фрагхронічного болю, або, навіть більше, усунення ментів, та їх відповідним сполученням до одеркашлю. Більш того, буде можливим застосування жання бажаного пептиду. У разі необхідності, від антагоністів для лікування розладів пам'яті, дебічних ланцюгів відщеплюють захисні групи; пресії, рухової активності (наприклад, хвороби іі) твердофазний синтез ланцюга пептиду з СПаркінсона), розладів, пов'язаних зі споживанням кінця у напрямку N-кінця на нерозчинній полімерїжі (наприклад, булімія) або, у більш загальному ній основі. Пептид видаляють зі смоли шляхом плані, для лікування ожирілих хворих. Висока гідролізу за допомогою безводної фтористоводмолекулярна маса цих сполук і присутність у їхневої кислоти або трифтороцтової кислоти з одньому складі залишків, які можуть бути позитивно ночасним відщепленням захисних груп від бічних зарядженими при фізіологічному рН, майже виланцюгів. ключає можливість перетинання ними гематоен 19 91844 20 цефалічного бар'єру. Згадані сполуки можуть Спектрометричний 1Н-ЯМР аналіз напівпровпливати на центральну нервову систему після дуктів деяких пептидів здійснювали за допомогою місцевого введення, незважаючи навіть на те, що 200 МГц приладу компанії Bruker. вони демонструють переважно периферичний 1.2. Методика розподіл. Наприклад, сполуки-агоністи можуть Аналоги пептидів b), с) та d), опис яких було індукувати аналгезію на рівні центральної нервонаведено вище, одержали за методиками, опис вої системи після підоболонкового або спінальнояких наведено нижче. го введення. Смолу Rink-Amide MBHA (0,65 ммоль/г, 0,2 г) Експериментальна частина обробляли розчином піперидину (20%) у DMF і 1. Синтез пептидів конденсували за допомогою Fmoc-Gln(Trt)-OH з 1.1. Загальна схема синтезу активуванням карбонової функціональної групи Пептиди за цим винаходом одержували шляза допомогою HATU. Наведені нижче Fmoc аміхом твердофазного синтезу із застосуванням 4нокислоти послідовно приєднували до подовжу(2',4'-диметоксифеніл-Рmосваного пептидного ланцюга: Fmoc-Asn(Trt)-OH, амінометилфеноксіацетамідо-норлейцилової Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmocсмоли (смола Rink-Amide MBHA). Fmoc амінокисLys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Ala-OH, лоти (фторметилметоксикарбоніл) конденсували Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmocза допомогою [О-(7-азабензотриазол-1-іл)Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc1,1,3,3-тетраметилуронійгексафторфосфату] Thr(tBu)-OH, Fmoc-(pF)Phe-OH, Fmoc-Gly-OH, (HATU) як реактиву для активування карбонової Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe-OH. Усі Fmoc амінокисфункціональної групи. Fmoc групи видаляли за лоти (4 еквіваленти) приєднували до подовжувадопомогою 20% розчину піперидину у DMF (диного пептидного ланцюга за допомогою розчину метилформамід), а смолу, зв'язану із захищеним HATU (4 еквіваленти) та діізопропілетиламіну (4 пептидом, обробляли реактивом K для одержанеквіваленти) у DMF; реакцію сполучення здійсня неочищеного пептиду. Сполуки, що містили нювали впродовж 1 год. Для оптимізування вихомодифікований пептидний зв'язок між першими ду на стадії синтезу і полегшення очищення сполук, залишок Aib потребував подвійного часу двома залишками амінокислот [Phe1 (CH2сполучення і ацилювання впродовж 1 год. Для NH)Gly2] або [Phe1 (CH2-O)Gly2], одержали шлявидалення Fmoc груп на кожній стадії застосовухом конденсування Boc-Phe-CHO на захищеному вали розчин піперидину (20%) у DMF. Після відпептиді (2-17) або (2-16) чи (2-15), який зв'язувавщеплення захисних груп на останній Na-Fmoc ся зі смолою на останній стадії синтезу, з відновгрупі, пептидну смолу промивали метанолом і ленням, таким чином, in situ проміжної "імінової" сушили під вакуумом з одержанням похідної з NaBH3CN, або шляхом конденсування [(pF)Phe4,Aib7,Arg14,Lys15]-N/OFQ(1-17)-Rinkфрагмента Boc-[Phe1 (CH2-O)Gly2]-OH (який Amide МВНА-захищеної смоли. Цю захищену одержали за способами, описаними у літературі: пептидну смолу обробляли реактивом K Балбоні (Balboni) та інші, J. Chem. Soc. Perkin (ТРА/Н2О/фенол/етандитіол/тіоанізол Trans I, 1998, стор. 1645-1651) на захищеному 82,5:5:5:2,5:5 у об'ємному відношенні; 10 мл/0,2 г пептиді (3-17) або (3-16) чи (3-15), який зв'язувавсмоли) впродовж 1 год при кімнатній температурі. ся зі смолою на останній стадії синтезу, із застоПісля фільтрування вичерпаної смоли розчинник суванням HATU як конденсувального агента. концентрували під вакуумом, і залишок подрібАналітичний контроль як неочищених, так і нювали у простому діетиловому ефірі. Неочищекінцевих продуктів здійснювали шляхом аналітиний пептид очищали препаративною високоефечного високоефективного рідинного хроматограктивною рідинною хроматографією з оберненою фування на системі Beckmann System Gold 168 із фазою з одержанням після ліофілізування порозастосуванням колонки Alltech С-18 (150 4,6 мм, шку білого кольору. 5 мкм). Сполуки аналізували за допомогою поСинтез [Phe1 (CH2двійної елюювальної системи, яка складалась з 2 4 7 14 15 NH)Gly ,(pF)Phe ,Aib ,Arg ,Lys ]-N/OFQ-NH2 (перозчинника А: 35 мМ розчин NaH2PO4 (pH 2,1) і птид с) здійснювали, розпочинаючи з напівпродурозчинника В: 59 мМ розчин NaH2PO4 (pH 2,1) кту, смоли [(pF)Phe4,Aib7Arg14,Lys15]-N/OFQ-(2ацетонітрил (60:40, у об'ємному відношенні), із 17), яка була синтезована як описано вище. Цей програмуванням градієнта відповідно до фізиконапівпродукт (0,2 г, 0,65 ммоль/г, 0,13 ммоль) хімічних властивостей сполук, які піддавали анаресуспендували і витримували з набуханням у лізу, із швидкістю потоку 1 мл/хв та довжиною метанолі, що містив 1% (у об'ємному відношенні) хвилі 220 нм. Неочищений пептид очищали за оцтової кислоти (2 мл). Через 20 хв додавали допомогою системи хроматографування Water розчин Boc-Phe-CHO (0,065 г, 0,26 ммоль) та preparative HPLC Delta Prep 4000 із застосуванNaBH3CN (0,033 г, 0,52 ммоль) у метанолі (0,8 ням 40 мм колонки Water radial packing column мл), і реакційну суміш перемішували впродовж Delta-LC (30 40 см, С18, 300 A, 15 мкм), яку 1,5 год. Смолу після цього промивали метанолом елюювали тією самою рухомою фазою, що і заі обробляли реактивом K, як було описано вище. стосована для аналітичного високоефективного Синтез [Phe1 (CH2рідинного хроматографування, та з градієнтом, 2 4 7 14 15 O)Gly ,(pF)Phe ,Aib ,Arg ,Lys ]N/OFQ-NH2 (пепякий програмували за аналітичним профілем нетид d) здійснювали, розпочинаючи з напівпродукочищених продуктів реакції. Молекулярну масу ту, смоли [(pF)Phe4,Aib7Arg14,Lys15]-N/OFQ(3-17), кінцевої сполуки визначили засобами масяка була синтезована, як описано вище. Цей наспектрометрії з електророзпилюванням на припівпродукт (0,2 г, 0,65 ммоль/г, 0,13 ммоль) ациладі Micromass ZMD2000. 21 91844 22 лювали на останній стадії за допомогою Bocгалі, сполуки зі структурою [Phe1 (CO-NH)Gly2] Phe[ (CH2-O)]Gly-OH (4 еквіваленти, 0,16 г, 0,52 демонстрували більш високу спорідненість, аніж ммоль) з активуванням карбонової функціональсполуки, що мали структуру [Phe1 (CH2-NH)Gly2], ної групи за допомогою HATU за тих самих умов, і значно більшу спорідненість, аніж сполуки, що що і описані для стадій нормального ацилюванмали структуру [Nphe1 (CO-NH)Gly2]. На додаток ня. У подальшому, смолу промивали метанолом і до цього, сполуки, що мали комбіновані модифіобробляли реактивом K, як описано вище. кації [(pF)Phe4,Aib7,Arg14,Lys15], продемонструва2. Фармакологічні випробування ли більш високий ступінь спорідненості, аніж спо2.1. Матеріали і методи луки, що мали одну модифікацію. Згадані сполуки випробували in vitro на мемУ функціональних випробуваннях, що вклюбранах овоцитів хом'яка, що експресують людсьчали стимулювання зв'язування GTP S, і у викий рекомбінантний рецептор NOP (CHOhNOP) пробуваннях, що включали пригнічення судомно(експерименти зі зв'язуванням рецептора та ексго скорочення, індукованого перименти зі стимулюванням зв'язування електростимулюванням мишачого vas deferens, GTP S), та на мишачому vas deferens після елексполуки, що мали структуру [Phe1 (CO-NH)Gly2], тростимулювання. Опис умов, що застосовуваімітували вплив N/OFQ і, зокрема, індукували лись для вивчення впливу згаданих сполук під подібний максимальний вплив, діючи, таким чичас проведення біологічних експериментів (vas ном, як повні агоністи, у той час як сполуки, що deferens мишей), наведено у роботі Бігоні (Bigoni) мали структуру [Phe1 (CH2-NH)Gly2], діяли як та інших (Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. часткові агонiсти, оскільки їхній максимальний 359, 160-167, 1999), у той час як опис умов, що вплив був нижчим, аніж у разі N/OFQ. Нарешті, застосовувались для вивчення впливу на клітисполуки, що мали структуру [Nphe1 (COнах CHOhNOP, наведено у роботі Макдональд (Me NH)Gly2], не мали ніякого впливу perse, але діяли Donald) та інших (Naunyn Schmiedebergs Arch. як конкурентні антагоністи N/OFQ. Pharmacol, 367, 183-187, 2003). У кожній серії Для спрощення, у Таблиці 1 наведено реекспериментів активність нових сполук порівнюзультати, які були одержані зі сполуками вали з активністю природного пептиду N/OFQ. [(pF)Phe4,Aib7Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 (UFP-112), 2.2. Результати [Phe1 (CH2Під час проведення експериментів зі зв'язуNH)Gly2,(pF)Phe4,Aib7Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 ванням рецептора, усі випробувані сполуки до(UFP-113), [Nphe1,Aib7Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 вели здатність до повного заміщення міченого (UFP-111) та з еталонним пептидом N/OFQ. тритієм N/OFQ на людському рекомбінантному рецепторі NOP. Сполуки демонстрували дуже різний ступінь спорідненості до рецептора (pKi) у залежності від різних хімічних модифікацій. ВзаТаблиця 1 Біологічна активність [(pF)Phe4,Aib7,Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 (UFP-112), [Phe1 (CH2NH)Gly ,(pF)Phe4,Aib7,Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 (UFP-113), [Nphe1,Aib7,Arg14,Lys15]N/OFQ-NH2 (UFP-111) та еталонного пептиду Ν/OFQ 2 Мембрана клітин CHOhNOP Зв'язування рецептора N/OFQ UFP-112 UFP-113 UFP-111 PKi 9,50 10,55 10,26 9,75 Мишачий vas deferens Пригнічення судомного скорочення, індуСтимулювання зв'язування GTP S кованого електростимулюванням Агоніст Антагоніст Агоніст Антагоніст РЕС50 Emах РА2 РЕС50 Emах РА2 9,04 100±9% ND 7,39 -84±3% ND 10,55 118±9% ND 9,48 -85±2% ND 9,72 79±3% ND Змінний агоністичний вплив 9,28 Активності не зареєстровано 8,68 Активності не зареєстровано 7,46 Результати являють собою середнє значення (медіану) 4-6 визначень. ND - не піддається визначенню, оскільки сполука демонструє агоністичний вплив. Як показано у Таблиці 1, сполука UFP-113 поводить себе як частковий агоніст рецептора NOP із спричиненням максимального впливу, який є нижчим за вплив N/OFQ як у разі аналізу GTP S, так і у аналізі пригнічення скорочення, індукованого електростимулюванням мишачого vas deferens. Сполука UFP-111 виявилась чистим і активним антагоністом із селективною дією відносно рецептора NOP. Результати аналізу, який був проведений Шілд (Schild) (здійснений як у експериментах із GTP S, так і у системі мишачого vas deferens), показують, що згадана сполука поводить себе як конкурентний антагоніст рецептора NOP зі значеннями активності (які виражено як рА2) 8,68 та 7,46, відповідно (дивись Таблицю 1). 2.3. Селективність дії сполуки UFP-112 Вплив сполуки UFP-112 опосередковується активацією рецептора NOP, свідченням чого є той факт, що дія цього пептиду на мишачий vas 23 91844 24 deferens не модифікувалась у присутності налокбіологічні дії UFP-112 обумовлюються лише засону (антагоніст неселективної дії класичних опіовдяки взаємодії з рецептором NOP. їдних рецепторів, але не рецептора NOP), але Сполуку [О-Pen2,О-Pen5]енкефалін, DPDPE виявилась ефективно антагонізованою сполукою (посилання: Life Sci. 1983; 33 Додаток 1:447-450), UFP-101, яка являє собою антагоніст рецептора агоніст DOP селективної дії, застосовували як 1 14 15 NOP селективної дії ([Nphe ,Arg ,Lys ]N/OFQпозитивний контроль. Цей контроль показує ті NH2, Кало (Саlo) та інші, Br. J. Pharmacol. 136, тканини, одержані від мишей з "нокаутованим" 303-311, 2002). Сполука UFP-101, яка була зарецептором NOP, які, як правило, реагують на стосована у конкурентному випробуванні зі спопригнічувальні стимули, які не застосовують релукою UFP-112, продемонструвала значення акцептор NOP. тивності (рА2 6,81), подібне до значення, яке 2.4. Фармакологічні випробування селективодержали у разі її застосування у конкурентному ної дії сполук за цим винаходом випробуванні з ендогенним агоністом N/OFQ (рА2 Згадані сполуки випробували in vitro на мем6,91). Це свідчить про те, що три згадані молекубранах овоцитів хом'яка (СНО), що експресують ли (N/OFQ, UFP-112 та UFP-101) взаємодіють з людський рекомбінантний рецептор NOP одним рецептором: рецептором NOP. Це додат(CHOhNOP), як у параграфі 2.1, за Макдональд (Mc ково підтверджується результатами, які одержаDonald) та іншими (Naunyn Schmiedebergs Arch. ли з тканинами "нокаутованої" миші (посилання: Pharmacol, 367, 183-187, 2003). Ніші М. (Nishi Μ.) та інші, Unrestrained nociceptive Дослідження селективності дії цих сполук response and disregulation of hearing ability in mice щодо рецептора NOP здійснювали шляхом проlacking the nociceptin/orphaninFQ receptor. Embo J. ведення експериментів зі зв'язуванням рецепто16 (8): 1858-1864, 1997) з гена рецептора NOP ра на мембранах клітин СНО, трансфікованих (NOP-/-) (дивись Таблицю 2). людськими рекомбінантними опіоїдними рецепторами типу мю (МОР), дельта (DOP) та каппа Таблиця 2 (KОР) із застосуванням тієї самої методики, що і у разі CHOhNOP. Дослідження селективності дії Вплив агоніста N/OFQ і UFP112 та агоніста DOP, здійснювали шляхом проведення конкурентних [D-Реn2,О-Реn5]енкефаліну (DPDPE), на vas експериментів за методиками, опис яких наведеdeferens мишей дикого типу (NOP+/+) та "нокаутоно у роботі Макдональд (Me Donald) та інших ваних" мишей з рецептора NOP (NOP-/(Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol, 367, 183-187, 2003). Для визначення pKi N/OFQ, мічений тритієм N/OFQ застосовували як радіоактивNOP+/+ NOP-/ний ліганд, у той час як для класичних опіоїдних Сполука pEC50 Emах PEC50 Emах рецепторів застосовували [3Н]-діпренорфін. АкN/OFQ 7,47 84±4%