Сукцинат моно/(2-диметиламіно)-етилового ефіру/ янтарной кислоти, якій має адаптогенну та стреспротективну активність

Изобретение касается производных кислот, в частности сукцината моно [(2-диметиламинр) этилового э&иоа]> янтарной кислоты (СЯК),который обладает адаптогенным истресспротективным действием и может быть использован в медицине. Цель изобретения создание активны:, веществ указанного класса с низкой токсичностью. Синтез СЯК ведут из моно (2-диметиламнно)этилового эфира]янтарной кислоты я янтарной кислоты при нагревании в среде этанола. Выход 84% и т.пя. 134-136 С. Испытания показывают, что СЯК существенно увеличивает эффект адаптации к замерзанию и продолжительности жизни до замерзания. Токсичность СЯК - l»Dje = =10000 мг/кг, т.е. в 2 раза выше тонибрала (4500 мг/кг). 6 табл. СО СО СП 1 . 1433957 Изобретение относится к новому химичэскому соединению, а именно к сукцинату моно[(2-диметиламино)эти сн г -соосн г сн 2 к(сн 3 ) сн г — с оон лового эфира] янтарной кислоты форму 0,5 сн 2 -соон с н г - соон вия. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно за 1 ч до помещения в холодовую камеру. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор. Полученные результаты представлены в табл. to Влияние на содержание субстратов энергетического обмена и активность дегидрогеназ в миокарде при дозированном холодовом воздействии. Исследование проводили на мышахсамцах массой 18-20 г в сравнении с тонибралом. Исследуемые соединения вводили за 1 ч до помещения экспериментальных животных* в холодовую камеру с температурой -14°С. Содержание субстратов энергетического обмена и активность дегидрогеназ в миокарде определяли между 2 и 3 часом холодового воздействия общепринятыми методами ї содержание глюкозы в крови о-толудиновым методом, гликогена в печени и миокарде - по методике Ло и соавторов, адениновые нуклеотиды миокарда и креатинфосфат определяли энзиматически, активность дегидрогеназ оценивали на криостатных срезах миокарда общепринятыми гистохимичес. Рассчитано» %: С 48,38; Н 7,25; кими методами. Соединение I вводили N 5,64. 'в дозе 80 мг/кг, тонибрал в дозе , ; Адаптогенное и етресспротективное 40 64 мг/кг. действие соединения I было изучено в Полученные результаты представлеопытах in vivo на мышах и крысах по ны в табл. 2 и 3, целому ряду тестов. Как видно из данных табл. 2-3, Влияние на резистентность к остропредварительное введение соединения му холодовому воздействию. 45 I способствует большей сохранности Исследование проводили на мышахсодержания глюкозы и гликогена в миосамцах, тетрагибридах» с массой тела карде, повышает содержание адениловых 18-20 г в сравнении с известным нуклеотидов и креатинфосфата в миокарструктурным аналогом - моно[(2-диде и существенно повышает активность МеТНЛаМИНо) ЭТИЛОВЫМ Э ф и р о м ] ЯНГарНОЙ g/j ключевых ферментов цикла Кребса.Этот кислоты (тонибралом) и сукцинатом .фактор может иметь существенное знанатрия. чение при выживаемости, так как одЭкспериментальных животных помещаной из причин гибели при остром охли в холодовую камеру при (-15)лаждении является сердечная недоста-(-'17) С в отдельных пластмассовых 55 точность. _ клетках, несколько ограничивающих обладающему адаптогенным и стрессJQ протективным действием, который может найти применение в эксперимеитапьной биологии и медицине. Цель изобретения - изыскание новых производных янтарной кислоты,об- 15 ладакщих выраженным адаптогенным и стресспротективным действием в сочетании с низкой токсичностью. •Поставленная цель достигается соединением формулы X; 20 П р и м е р . 18,9 г (0,1 моль) ;.моно [(2-диметиламино) этилового эфира . , янтарной кислоты растворяют при нагревании в 100 мл этанола,'К полученному раствору прибавляют раствор 25 5,9 г (0,05 моль) янтарной кислоты в 50 мл этанола. Реакционную смесь t '. оставляют на 12 ч при 20°С, выпавший белый мелкокристаллический осадок отфильтровывают и перекристаллизозы- 30 вают из этанола. Б итоге получают 22,0 г (84%)' I с т.пл. 134-136 D C; R г 0,37 ("Силуфол 'UV-25411, н-бутанолуксусная кислота - вода, 5:2:4). , Найдено,%: С 48,18; Н 7,47; 35 N 5,71; их активность. В опытах оценивали выживаемость животных в условиях длительного (6 ч) холодового воздейст Влияние на феномен адаптации к холодовому воздействию. , . з 1433957 4 схеме в дозе 5 мг/кг, проводили по Исследование влияния соединения комплексу показателей, характеризуюІ на феномен адаптации к холодовому щих функциональную активность ЦНС, воздействию проводили по методу Ла физическую выносливость и развитие Бланка на мышах-самцах с массой тела основных проявлений стресс-синдрома. 18-20 г. Пребывание контрольных животных Экспериментальных животных помев медленновращающемся барабане на щали в холодовую камеру при -17°С на протяжении 48 ч приводили к сущест10 мин каждый час на протяжения 9венному ухудшению всех исследуемых 10 ч. Через 1 сут исследовали максипоказателей, особенно показателей мальную длительность жизни животных высшей нервной деятельности (обучепри -17 С, содержание глюкозы в крови ние) , и развитию стресс-синдрома. Сои гликогена в органах при дозированстояние контрольных животных характеном (2,5 ч при -14 С) холодовом воздействии Соединение I и тонибрал вво-15 ризовалось снижением общей поведенческой активности по тесту "открытое дили сразу после серии кратковременполе" (37+15%) от уровня пассивного ного холодового воздействия в дозах контроля, снижением скорости услов80 и 64 мг/кг соответственно. Б части ного рефлекса избегания (УРИ) в водопытов соединение I вводили за 1 ч до тестирующего холодового воздейст- 20 ном лабиринте (58+15%), увеличением количества ошибок за время обучения ВИЯ. (175+25%), снижением предельной фиПолученные результаты представлены зической выносливости по тесту плавав табл. 4 и 5, ние с грузом, равным 10% от массы Как видно из данных, приведенных в табл. 4-5, введение соединения I 25 тйла, (70+17%), гипертрофии надпочечников (146+16%), атрофией тимуса существенно увеличивает эффект адап(49+9%) и образованием,язв слизистой тации, что проявляется в увеличении оболочки желудка (5,25+1,0%). длительности жизни мышей до замерзания и в значительно большей сохранноИсследование соединения І в услости уровня глюкозы в крови и глико- 30 виях двигательного стресса выявило гена в органах при кратковременном его выраженное защитное действие в (2,5 ч) холодовом воздействии. отношении как показателей функциональной активности ЦНС, так и в отноСтресспротективная активность. шении развития целого ряда патофизиСтресспротективная активность предлагаемого соединения была изуче- 35 ологических проявлений стресс-синдрома. Введение соединения I повысило обна на модели двигательного стресса щую поведенческую активность (85+10%), с использованием методики лишения физическую выносливость (143+28%), экспериментальных животных сна, пищи снизило язвообразование на слизистой и воды в медленно вращающемся барабане. Исследование проводили на 42 бес- (д оболочке желудка (4,8+1,5%) я полностью защитило высшую нервную деятельпородных крысах-самцах в сравнении ность в отих условиях (100+9%). Анас тонибралом и известным транкливилогичные исследования были проведены затором диазепамом. Параллельно исс тонибралом и диазепамом. следовали 4 группы животных. I и II Полученные результаты представлегруппы помещали на 48 ч в барабан, 45 ны в табл. 6, вращающийся со скоростью 0,2 км/ч, Как видно из данных, приведенных а III и IV группы находились в обычв табл. 6, соединение I обладает отных условиях и были лишены только четливо выраженной стресспротективіпищи и воды. Соединение L и тонибрал вводили внутрибрюшинно в дозе 10мг/кг 50 ной активностью и превосходит по активности тонибрал. Предлагаемое сое2 раза в сутки в объеме 2,5 мл в услодинение имеет преимущества по сраввиях двигательного стресса (I группа нению с аналогом по действию - диазеживотных) и в обычных условиях (III памом: на фоне соединения I сущестгруппа), Контрольные животные - II группа (активный контроль) и IV груп- 55 венно выше поведенческая активность, значительно меньше нарушаются процеспа (пассивный контроль) получали фисы обучения и воспроизведения навыка, зиологический раствор. Оценку эффекзначительно выше физическая вынослитивности соединения I, тонибрала и вость на Фоне стрессорного воздейстдеазепама, который вводили по той же 1433957 внутрибрюшинном введении для соедивия. На фоне диаэепама в большей нения I ЛД ^0= 3040 + 102 мг/кг, а мере предупреждается язвообразование для тонибрала 2650 ±248 мг/кг. и меньше снижается весовой коэффиВ результате проведенных исследоциент тимуса, хотя гипертрофия надваний установлено, что предлагаемое почечника больше, чем при введении соединение обладает выраженным адаптосоединения I. генным и стресспротективным действиТоксичность. ем в сочетании с низкой токсичностью. Острая токсичность соединения X и тонибрала была изучена на мышах енутрибрюшинном и пероральном введеФ о р м у л а и з о б р е т е н и я нии. Значения величин Щ$ъ были рассчитаны по методу Беренса. При пероСукцинат моно[(2-диметиламино) этиральном введении ЛД 5 0 для соединения лового эфира^янтарной кислоты формуЇ превышает величину 10000 мг/кг, для тонибрала ЛД50=* 4500 мг/кг, при лы . СН?-СООСН2СН?"Ы(СН3Ъ •I СН7—СООН СН2-С00Н • 0,5 | СН2-С00Н, тективным действием. обладающий адаптогенным и сгресспро Т а б л и Влияние на выживаемость мышей охлаждении Доза, Выживаемость • мг/кг %, через ч Соединение 1 і • •= " -• 2 з ц а . 1 при остром в ходе опыта, •' [ Г ~] ^ 5 6 Соединение I 80 100 100 100 90 70 70 Тонибрал 64 100 90 70 50 . 20 10 Сукцинат натрия 17 100 80 70 40 10 0 Т а б л и ц а 2 Изменение биохимических показателей у мышей при дозированном холодовом воздействии на фоне исследуемых соединений Биохимический субстрат Интактное Контроль животное Соединение І Глюкоза крови (мг Z). Гликоген сердца (мг/г) 79+3 3,6+0,2 42+4 80+4* 1,8tO,1 2,2±0,1 I І Тонибрал 64+2 1,9+0,1 Ї433957 8 Продолжение табл. 2 Биохимический субстрат Интактное животное Соединение Контроль I I Тонибрал Гликоген печени (мг/кг) 35,2+4,5 8,1+0,6 9,8+1,2 2,2+0,3 1,5+0,1 1,9±0,2* АТФ (мкм/г) 6,7-fO,8 АДФ (мкм/г) 0,78+0,03 0,49+0,02 0,86+0,04* АМФ (мкм/г) 0,51+0,02 0,45+0,01 0,32+0,02* Креатинфос фат (мкм/г) 3,7+0,3 1,2+0,08 2,3+0,1* 1,4+0,04 Различия с контрольной группой статистически достоверны. Т а б л и ц а 3 Влияние исследуемых соединений на активность дегидрогеназ в миокарде при дозированном холодовом воздействии Активность- дегидрогеназ в миокарде, отн.ед. Дегидрогеназа Контроль Соединение I Тонибрал Сукцинатдегидрогеназа 72,3+1,6 90,2+1,8* 75,6+2,4 Изоцитратдегидрогеназа 49,5+1,2 60,4+1,6^ 58/2±1,4 Глутаматдегидрогенаэа 68,8+1,5 78,3+1,7* 72,4+0,6 Пируватдегидрогеназа 56,6+1,1 68,9+1,3* 62,6+3,5 НАД Н^-дегидрогенаэа 69,8+1,5 73,4+2,;О 70,8+2,7 72,1+1,4 85,9+1,7 76,4+2,7 57,3+1,3 67,4+1,5* 60,2+1,4 НАДФ Н^-дегидрогеназа г Г-6-Ф-дегидро геназа Различия с контрольной группы статистически достоверны і у, 9 1433957 Ю ' Т а б л и ц а 4 Максимальная длительность жизни мышей при тестирующем холодовом воздействии Длительность жизни, ч Вариант воздействия Число животных. Интактное животное 12 3,4+0,4 Предварительная адаптация 12 6,0+0*3 Предварительная адаптация + соединение I 12 10,3+0,6 Предварительная адаптация + тонибрал 12 6,2+0,4 Соединение I за 1 ч до холодового воздействия 12 7,8+0,3 . Т а б л и ц а 5 Влияние исследуемых соединений на биохими' ческие показатели при дозированном холодовом воздействии Вариант воздействия Глюкоза крови» мг/% Сердце 79+4 3,6+0,4 35,0+2,1 37+6 1,7+0,2 6,7*0,4 Адаптация 60+4** 2,4+0,3 Адаптация + соединение I (сразу после адаптации) 88±2** 2,9+0,2** 18,2+2,1 Адаптация + тонибрал (сразу после адаптации) 75+4** 2,4+0,2 10,2+2,7' Адаптация + соединение 1 (за 1 ч до холодового воздействия) 78±6* 2,6+0,4" 11,7±2,4' Интактные животные*" Гликоген, мг/г Печень Контррль (2,5 ч при Соединение I (за 1 ч до холодового воздействия) 59+2,6** 2,2±3,4** • * • 7,1+2,6 *Интактные животные содержались при 20°С; Различия с контролем статистически достоверны. * * # II 12 433957 Т а б л и ц а Влияние исследованных соединений на показатели функциональной активности ЦНС, физическую выносливость и проявления стресс-синдрома в условиях двигательного стресс Показатель Соединение Контроль Тонибрал Количество попыток достижения критерия обученности (водный лабиринт) ' Длительность плавания, с Количество язв на слизистой оболочке желудка Весовой коэффициент надпочечника, г/кг исходной массы тела Весовой коэффициент тимуса,' г/кг исходной массы 4,75+0,5 6 2,75±0,25* 4,10+0,38 Диаэепам 7,25+_0,80* '244+26 499+98* 325+15* 210+45 5,25+1,0 2,5±0,8^ 4,2+0,6 1,0+0,5* 1,246 +0,028 1,83+0,016*1,42+0,08 0,95+0,18 1,25+0,95 1,08+0,14 *,010±0,015 2,26+0,15 Различия с контролем статистически достоверны. Редактор Н.Киштулинец Составитель Л.Иоффе Техред А.Кравчук Корректор С.Шекмар Заказ 5515/27 Тираж 370 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4