Циклопептиди як інгібітори адгезії та спосіб їх одержання

1. Циклопепти ды как ингибиторы адгезии формулы (I): цикло-(Arg-B-Asp-X-Y), где В = Gl y, Ala, -NH-Q-CO-, причем Q = (С1-С6) алкилен; X = Phe, D-Phe, D-(4-Hal-Phe), D-Lys, D-Orn, D-Pro, D-Tic, D-Nal, D-Phg; Y = Gl y, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Phe, D-Phe, Leu, DLeu, Nle, Lys, Lys(Ac), L ys(AcSH), Orn, D-Orn; Ac = алканоил с 1-10-С атомами; Hal = хлор, фтор, бром, йод, или их физиологически приемлемые соли. C2 (54) ЦИКЛОПЕПТИДИ ЯК IНГIБIТОРИ АДГЕЗIЇ ТА СПОСIБ ЇХ ОД ЕРЖАННЯ 34436 роза, воспалений, апоплексии, стенокардии, опухолевых заболеваний, остеолитических заболеваний, в особенности остеопороза, антиогенеза и рестеноза после ангиопластики. Далее, соединения можно использовать для улучшения заживления ран. К то му же, соединения пригодны в качестве анти микробных биологически активных ве ществ, которые предотвращают инфекции, которые возбуждаются, например, бакте риями, грибками или дрожжами. Вещества можно использовать в качестве сопутствующи х анти микробных биологически активных веществ при вмешательстве в организмы, во время которых используются чужеродные вещества, как, например, биоматериалы, имплантаты, катетеры или электрости муляторы сердца. Они действуют как анти септики. Наиболее предпочтительными, согласно изобретению, являются циклопептиды фор мулы I, представляющие собой (a) Циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Lys-Val); (b) Циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys); (c) Цикло-(Агg-Gl у-Asp-D-Phe-Gly); (d) Цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Phe); (e) Циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu); (f) Циклo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Leu). Выше- и нижеуказанные сокращения аминокислотных остатков обозначают остатки следующи х аминокислот: Abu 4 - аминомасляная кислота Aha 6 - аминогексановая кислота Аlа аланин Asn аспарагин Asp аспарагиновая кислота Asp (OR) аспарагиновая кислота ( b-сложный эфир) Arg аргинин Cha 3-циклогексилаланин Cit литруллин Cys цистеин Dab 2,4-диаминомасляная кислота Gln глутамин Glu глутаминовая кислота Gly глицин His гистидин Ile изолейцин Leu лейцин Lys лизин Lys (Ac) N e - алканоиллизин Lys (AcNH 2) Ne - аминоалканоиллизин Lys (AcSH) N e - меркаптоалканоиллизин Met метионин Nal 3-/2-нaфтил/-aлaнин Nle норлейцин Orn орнитин Phe фенилаланин H-Hal-Phe 4-галоген-фенилаланин Phg фенилглицин Pro пролин Pya 3-/2-пиридил/-аланин Ser серин Tia 3-/2-тиенил/-аланин Tic тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота Thr треонин Тrр триптофан Туr ти розин Val ва лин Далее, в последующем вводятся следующие обозначения: ВОС трет.-бутоксикарбонил CBZ бензилоксикарбонил DCCI дициклогексилкарбодиимид ДМФ диметилфор мамид ЕДСl N-этил-N'-/3-диметиламинопропил/карбодиимидгидрохлорид Et этил Fmoc 9-флуо ренилметоксикарбонил HOBt 1-гидроксибензотриазол Me метил Mtr 4-метокси-2,3,6-триметилфенил-сульфонил OBut трет.-бутиловый сложный эфир ОМе метиловый сложный эфир OEt этиловый сложный эфир РОА феноксиацетил TBTV 2-/1Н-бензотриазол-1-ил/-1,1,3,3-тетраметилуро нийтетрафторборат ТФК три фторуксусная кислота Поскольку выше указанные аминокислоты могут находиться в нескольких энантиомерных формах, то включаются выше- и нижеуказанные, например, в виде составной части соединений формулы (I), все эти формы и также их смеси (например, DL -формы). Далее, аминокислоты, например, в виде составной части соединений формулы (I), могут содержать соответствующие само по себе известные защитные группы. Предметом изобретения, далее, является способ получения соединения формулы (I) или одной из его солей, заключающийся в том, что пептид фор мулы (II): H-Z-OH, где Z обозначает -Arg-B-Asp-X-Y; B-Asp-X-Y-Arg; -Asp-{X-Y-Arg-B; -X-Y-Arg-B-Asp или Y-Arg-B-Asp-X-, или реакционноспособное производное такого пептида, которые представляют собой активированный сложный эфир и которые обрабатывают циклизующим агентом, и/или основное или кислое соединение формулы (I), которые обрабатывают кислотой или основанием и получают одну из его солей. Указанные выше и ниже остатки В, X, Y и Z имеют указанные для формул (I) и (II) значения, если не указано ничего другого. В вышеприведенных фор мулах "алкил" предпочтительно обозначает метил, этил, изопропил или трет.-бутил. Группа В предпочтительно представляет собой Gly, однако, также -HN-/-CH2/2-CO-; -HN-/CH2/3CO-; -HN-/CH2/5-CO или Аlа. "D" предпочти тельно представляет собой Phe, в особенности D-Phe, однако также 4-HaI-Phe, особенно 4-I-Phe, а также Pro, Tic, Lys, Nal или Phg, причем особенно предпочти тельны D-формы. Соответственно этому предметом изобретения являются в особенности те сое динения формулы (I), в которых по меньшей мере один из указанных остатков имеет одно из вышеуказанных предпочтительных значений. Предпочти тельная группа соединений характеризуется частичной формулой (Iа), которая обычно соответствуе т формуле (I), где, однако: 2 34436 В = Gly, -HN-(CH 2)2-CO-, -HN-(CH 2)3-CO-, -HN- (CH2)5-CO- или Ala X = D-Pro, D-Tic, Phe, D-Nal, D-Phg oder 4-IPhe и Y = Val, Lys, Gly, Ala, Phe, Leu, Lys(Ac) или Nle Другая предпочтительная группа соединений может характеризоваться частичной формулой (Iб), которая обычно соответствует формуле (I), где, однако, В = Gly; X = D-Phe; Y = Val, Lys или Gly. Соединения формулы (I) и также исходные вещества для их получе ния, впрочем, получают известными методами, которые описаны в литературе (например, в классических работах, как Губен-Вейл "Методы органической химии", изд. Georg-Thieme, Штутгарт), а именно при реакционных условиях, которые известны и пригодны для указанных превращений. При этом также можно использовать известные, здесь подробнее не упомянутые ва рианты. Исходные вещества, если желательно, также можно получа ть in situ, так что их не выделяют из реакционной смеси, а тотчас вводят во взаимодействие далее до получе ния соединений формулы (I). Соединения формулы (I) можно получать тем, что их высвобождают из их функциональных производных путем сольволиза, в особенности гидролиза, или путем гидрогенолиза. Предпочти тельными исходными веществами для сольволиза, соответственно, гидрогенолиза, являются такие, которые вместо одной или нескольких сво бодных амино- и/или гидроксильных групп содержат соответствующие защищенные амино- и/или гидроксильные группы, предпочтительно такие, которые вместо Н-атома, который связан с N-атомом, содержат защитную для амино-группы группу, например такие, которые соответствуют формуле (I), однако вместо NH-группы содержат NHR'-гpyппy (где R' обозначает защитную для амино-груп пы группу, например, ВОС или CBZ). Далее, предпочтительны исходные вещества, которые вместо Н-атома гидроксильной группы содержат защитную для гидроксильной группы груп пу, например такие, которые соответствуют формуле (I), но вместо гидроксифенильной группы содержат R"O-фенильную гр уппу (где R" обозначает защитную для гидроксильной группы группу). Также в молекуле исходного вещества может быть несколько - одинаковых или разных - защищен ных амино- и/или гидроксильных гр упп. В случае, если имеющиеся защитные группы отличны друг от др уга, во многи х случаях и х можно селективно отщеплять. Выражение "защитная для амино-группы груп па" общеизвестно и относится к группам, которые пригодны для защиты (блокирования) аминогруппы от химических превращений, и которые, однако, легко удаляются, после того как произошла желательная химическая реакция в других местах молекулы. Типичны для таких групп незамещенные или замещенные ацильные, арильные, аралкоксиметильные или аралкильные группы. Так как защитные группы удаляются после желательной реакции или последовательности реакции, то их род и размер, впрочем, не критические; предпочтительные, однако, группы с 1-20, в особенности с 1-8 С-атомами. Выражение "ацильная группа" в связи с настоящим способом нужно понимать в самом широком смысле. Оно охватывает производимые ацильные группы алифатических, аралифати ческих, ароматических или гетероциклических карбоновых или сульфо новых кислот, а также, в особенности, алкоксикарбонильные, арилоксикарбонильные и, прежде всего, аралкоксикарбонильные группы. Примерами такого рода ацильных групп являются алканоил, как ацетил, пропионил, бутирил; аралканоил, как фенилацетил; ароил, как бензоил или толуол; арилоксиалканоил; алкоксикарбонил, как метоксикарбонил; этоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, ВОС, 2-иодэтоксикарбонил; аралкилоксикарбонил, как CBZ ("карбобензокси"); 4-метоксибензилоксикарбонил, FMOC; арилсульфо нил, как Mtr. Предпочтительными защитными для аминогруппы группами являются ВОС и Mtr далее, CBZ, Fmосбензил и ацетил. Выражение "защитная для гидроксильной груп пы группа" также общеизвестно и относится к груп пам, которые пригодны для защиты гидроксильной группы от хи мических взаимодействий и которые, однако, легко удаляются после того, как произошла желательная химическая реакция в других местах молекулы. Типичны для таких групп вышеуказанные незамещенные или замещенные арильные, аралкильные или ацильные группы; далее, также алкильные группы. Природа и величина защитных для гидроксильных групп групп не критические, так как их после желательной химической реакции или последовательности реакций снова удаляют; предпочтительны группы с 120, в особенности с 1-10 С-атомами. Примерами защитных для гидроксильной группы групп являются, между прочим, бензил, п-нитробензоил, птолуолсульфо нил, трет.-бутил и ацетил, причем особенно предпочтительны бензил и трет.-бутил, СООН-груп пы в аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте предпочти тельно защи щаются в форме их сложных трет.-бутиловых эфиров (например, Asp [OBut]). Используемые в качестве исходных ве ществ функциональные производные соединения формулы (I) можно получать обычными методами синтеза аминокислот и пептидов, которые описаны, например, в указанных классических работах в патентных заявках, например, также по твердофазному способу согласно Merrifield [B.F. Gysin и R.B. Merrifield, J.Am. Chem. Soc. 94, 3102 и последующие (1972)]. Высвобождение соединений формулы (I) из их функциональных производных осуществляется - в за висимости от используемой защитной группы, - например, с помощью сильных кислот, целесообразно с помощью ТФК или хлорной кислоты, однако также с помощью других сильных неорганических кислот, как соляная кислота или серная кислота; сильных органических карбоновых кислот, как трихлоруксусная кислота; или сульфокислот, как бензо- или п-толуол-суль фокислота. Возможно присутствие дополнительного инертно 3 34436 го растворителя, однако не всегда требуется. В качестве инертных растворителей предпочтительно пригодны органические, например карбоновые, кислоты, как уксусная кислота; простые эфиры, как тетрагидрофуран или диоксан, амиды, как ДМФ, га логенированные углеводороды, как дихлорметан; да лее, также спирты, как метанол, этанол или изопропанол, а также вода. Далее, принимают во внимание смеси выше указанных растворителей. ТФК применяется предпочтительно в избытке, без добавки другого растворителя; хлорная кислота используется в виде смеси из уксусной кислоты и 70 %-ной хлорной кислоты в соотношении 9:1. Температуры реакции для расщепления составляют целесообразно примерно СНООС, предпочти тельно работают при температуре 15-30°С (комнатная температура). Группы ВОС, OBut и Mtr можно отщеплять, например, предпочтительно с помощью ТФК в дихлорметане или с помощью примерно 3-5 и НСl в диоксане при 15-30°С; ГМОС-группу можно отщеплять с помощью примерно 5-50 %-ного раствора диметиламина, диэтиламина или пиперидина в ДМФ при 15-30°С. Гидрогенолитически удаляемые защитные груп пы (например, как CBZ или бензил) можно отщеплять, например, путем обработки водородом в присутствии катализатора (например, катализатора на основе благородного металла, как палладий, целесообразно на носителе, как уголь). В качестве растворителя при этом пригодны вышеуказанные, в особенности, например, спирты как метанол или этанол, или амиды, как ДМФ. Гидрогенолиз, как правило, осуществляют при температурах примерно 0-100°С и давлениях примерно 1-200 бар, предпочтительно при 20-30°С и 1-10 барах. Гидрогенолиз CBZ-группы хорошо протекает, например, на 5-10 %-ном палладии-на-угле в метаноле или с помощью формиата аммония (вместо водорода) на Pd-C в смеси метанола с ДМФ при 20-30°С. Соединения формулы (I) также можно получать путем циклизации соединений формулы (II) при условиях пептидного синтеза. При этом целесообразно работают по обычным методам синтеза пептидов, которые описаны, например в Губен-Вейль, цитировано выше, том 15/11, с. 1-806 (1974). Реакцию предпочтительно осуществляют в присутствии дегидратирующего средства, например карбодиимида, как ДОСl или EDCl: далее, ангидрида пропанфосфо новой кислоты (см. Angew. Chem. 92, 129(1980)), дифенилфосфорилазида или 2-этокси-N-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина, в инертном раство рителе, например в галогенирован ном углеводороде, как дихлорметан; простом эфире, как тетрагидрофуран или диоксан; амиде, как ДМФ или диметилацетамид; нитриле, как ацетонитрил; или в смесях эти х растворителей; при температурах примерно от -10°С до 40°С, предпочти тельно при 0-30°С. Для то го чтобы способствовать вн утримолекулярной циклизации перед межмолекулярным связыванием пепти да, целесообразно работать в разбавленных растворах (п ринцип разбавления). Вместо соединений формулы (II) также можно использовать в реакции пригодные реакцион носпособные производные этих веществ, например, также в которых реакционноспособные группы промежуточно блокированы за счет защитных групп. Аминокислотные производные формулы (II) можно применять, например, в виде их активированных сложных эфиров, которые целесообразно получают in situ, например, благодаря добавке HOBt или N-гидроксисукцинимида. Исходные вещества формулы (II) как правило являются новыми. Их можно получать известными способами, например вышеуказанными методами синтеза пептидов и отщепления защитных гр упп. Как правило, сначала синтезируют защищенные пентапептидные сложные эфиры формулы R'Z-OR", например, BOC-Z-OMe или BOC-Z-OЕt, которые прежде всего омыляют до кислот формулы R'-Z-OH, например, ВОС-Z-OH; от них отщепляют защитную группу R', благодаря чему получают свободные пептиды формулы H-Z-OH (II). Основание формулы (I) с помощью кислоты можно переводить в соответствующую соль присоединения кислоты. Для этого превращения принимают во внимание в особенности кислоты, которые дают физиологически приемлемые соли. Так, можно применять неорганические кислоты, например, как серная кислота; азотная кислота; галогенводородные кислоты, как соляная кислота или бромоводородная кислота, фосфорные кислоты, как орто фосфорная кислота; сульфа миновая кислота; далее, органические кислоты, в особенности алифа тические, алициклические, аралифати ческие, ароматические или гетероциклические одно- или многоосновные карбеновые, сульфо новые или серные кислоты, например, как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, пивалиновая кислота, диэтилук сусная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, яблочная кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, 2- или 3-фенилпропионовая кислота, ли монная кислота, глюконовая кислота, аскорбиновая кислота, никотиновая кислота, изоникотиновая кислота, метан- или этансуль фокислота, этандисульфокислота, 2-гидроксиэтансульфокислота, бензолсульфо кислота, п-то луолсульфокислота, нафталин-моно- и -ди-сульфо кислоты, лаурилсерная кислота. Для выделения и/или очистки соединений формулы (I) можно применять соли фи зиологически неприемлемых кислот, например пикраты. С другой стороны, кислоту фор мулы (I) путем введения во взаимодействие с основанием можно переводить в одну из ее физиологически приемлемых солей металлов или аммония. В качестве солей при этом принимают во внимание в особенность соли натрия, калия, магния, кальция и аммония; далее, замещенные аммониевые соли, например, как диметил-, диэтил- или диизопропиламмониевые соли; моноэтанол-, диэтанол- или триэтанол-аммониевые соли; циклогексил-, дициклогексил-аммониевые соли; дибензилэтилендиаммониевые соли; далее, например, соли с N-метилD-глюкамином или с аргинином или лизином. Новые соединения формулы (I) и их фи зиологически приемлемые соли можно применять для 4 34436 получе ния фармацевтических препаратов тем, что их в эффективном количестве вместе по меньшей мере с одним носителем или вспомогательным веществом и, если желательно, вместе с одним или несколькими другими биологически активными веществами доводят до пригодной дозировочной формы. Таким образом получен ные композиции можно использовать в качестве лекарственного средства в медицине или ветеринарии. В качестве носителей принимают во внимание, например, неорганические вещества, которые пригодны для энтерального (например, орального или ректального), парентерального (например, внутривенной инъекции) или локального (например, топического, а также через кожу, глаза или нос) введения или для введения в форме ингаляционных препаратов и не реагируют с новыми соединениями, например, как вода или водный изотонический раствор хлорида натрия, низшие спирты, растительные масла, бензиловые спирты, полиэтиленгликоли, триацетат целлюлозы и другие глицериды жирных кислот, желатина, соевый лецитин; углеводы, как лактоза или крахмалы, стеарат магния, тальк, целлюлоза, вазелин. Для орального применения служат в особенности таблетки, драже, капсулы, си ропы, соки или капли; специальный интерес представляют лакированные таблетки и капсулы с резистентными к желудочному соку покрытиями, соответственно оболочками капсул. Для ректального применения служат свечи; для парентерального вве дения служат растворы, предпочтительно масляные или водные растворы, далее, суспензии, эмульсии или имплантаты. Для топического применения пригодны, например, растворы, которые можно применять в виде глазных капель; далее, например, суспензии, эмульсии, кремы, мази или аэрозоли. Для применения в виде ингаляционных препаратов можно применять пульверизаторы, которые содержат биологически активное вещество либо растворенным, либо суспендированным в рабочем газе или смеси рабочих га зов (например, СО2 или фторхлоруглеводороды). При этом целесообразно применяют биологически активное вещество в микронизированной форме, причем можно добавлять один или несколько дополнительных, фи зиологически приемлемых растворителей, например этанол. Растворы для ингаляций можно вводить с помощью обычных ингаляторов. Новые соединения можно также лиофилизировать и получен ные лиофилизаты применять, например, для приготовления препаратов для инъекции. При этом инъекции можно осуществлять дозированно или в виде непрерывного вли вания [например, внутривенно, внутримышечно, подкожно или внутрь ликворного пространства]. Указанные композиции могут быть стерилизованы и/или могут со держать вспомогательные вещества, как консерванты, ста билизаторы и/или смачиватели, эмульгаторы, соли для влияния на осмотическое давление, буферные вещества, красители и/или ароматизирующие вещества. Если желательно, они могут со держать также одно или несколько других биологически активных веществ, например один или несколько витаминов. Предлагаемые, согласно изобретению вещества, как правило, можно вводить по аналогии с другими известными, имеющимися в продаже пептидами, в особенности по аналогии с описанными в патенте США № А-4 472305 соединениями, предпочтительно в дозах примерно 0,05-500, в особенности 0,5-100 мг на дозировочную единицу. Суточная доза составляет предпочти тельно примерно 0,01-2 мг/кг веса тела. Специальная доза для каждого определенного пациента зависит, однако, от самых различных факторов, например от эффективности используемого соединения, возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола, стоимости, момента и пути введения, скорости выделения, комбинации лекарственных веществ и тяжести соответствующего за болевания, которое имеет значение для терапии. Предпочти тельно парентеральное введение. Далее, новые соединения формулы (I) можно применять в качестве интегриновых лигандов для изго товления колонок для аффинной хроматографии с целью получе ния чисты ми интегринов. Лиганд, т.е. пептидное производное формулы (I), при этом за счет анкерных функций ковалентно связывается с полимерным носителем. В качестве полимерных носителей пригодны само по себе известные в хи мии пептидов полимерные твердые фазы предпочтительно с гидрофильными свойствами, например поперечно сшитые полисахара, как целлюлоза, сефароза или сефадекс® акриламид, полимеры на основе полиэтиленгликоля или Tentakel- полимеры ®. В качестве анкерных функций, которые связаны с полимерными носителями, пригодны предпочти тельно линейные алкиленовые цепи с 2-12 С-атомами, которые одним своим концом непосредственно связаны с полимером, а на другом конце содержат функциональную гр уппу, как, например, гидроксил, амино, меркапто, малеинимидо или -СООН, и поэтому пригодны для связывания с С-или N-концевым отрезком соответствующего пептида. При этом возможно, что пептид связывается с анкером полимера непосредственно или также через вторую анкерную функцию. Далее, возможно, что пептиды, которые содержат аминокислотные остатки с функционализированными боковыми цепями, через них связываются с анкерной функцией полимера. Сверх то го, определенные аминокислотные остатки, которые представляют собой составную часть пептидов фор мулы (I), можно модифицировать в и х бо ковых цепях таким образом, чтобы они были доступны для связывания через, например, SH-, ОН-, NH2 - или СООН-группы с анкером полимера. При этом возможны необычные аминокислоты, как, например, производные фенилаланина, которые в 4-положении фенильного кольца содержат меркаптогидрокси-, амино- или карбоксиалкильную цепь, причем функциональная группа находится на конце цепи. Примерами аминокислотных остатков, боковая цепь которых может служить непосредственно в качестве анкерной функции, являются, например, Lys, Orn, Arg, Dab, Asp, Asn, Glu, Gln, Ser, Thr, C ys, Cit или Туr. 5 34436 Примерами N-концевых анкеров являются такие остатки, как, например, -CO-CnH2n-NH2; -CO-CnH2n-OH; -CO-CnH2n-SH или -СО-СnН2n-СООН с "n"=2-12, причем длина алкиленовой цепи не критическая и в случае необхо димости она может быть заменена также, например, соответствующими арильными или алкиларильными остатками. С-концевые анкеры могут представлять собой, например, -O-CnН2n-SH; -O-CnH2n-OH; -O-CnH2n-NH2; -O-CnH2n-COOH, -NH-CnH2n-SH; -NH-CnH2n-OH; -NH-CnH2n-NH2 или -NH-CnH2n-COOH, причем "n", а также алкиленовая цепь имеют уже указанное в предыдущем абзаце значение. N- и С-концевые анкеры также могут служить в качестве анкерных звеньев уже функционализированной боковой цепи аминокислотного остатка. Здесь принимают во внимание, например, аминокислотные остатки, как Lуs (CO-C5H10-NH2), Asp (NH-С3Н6-СООН) или Cys (С3Н6-NH2), причем анкер всегда связан с функциональной группой боковой цепи. Получение материалов для аффин ной хроматографии для очистки интегрина осуществляют при условиях, которые сами по себе известны для конденсации аминокислот. Температура указана в градуса х Цельсия. В нижеприведенных примерах "обычная обработка" обозначает: добавляют, если необхо димо, воду; нейтрализуют; экстрагируют эфиром или дихлорметаном; отделяют, сушат органическую фа зу над сульфа том натрия; отфильтровывают; вы паривают и очи щают п утем хроматографии на силикагеле и/или путем кристаллизации. RZ=время удерживания (минуты) при ВЭЖХ на Lichrosorb® RP Select В (250-4,7 мкм)-колонке; растворитель: 0,3% ТФК в во де; изопропанольный градиент 0-80 объемн. % за 50 мин при скорости 1 мл/мин. Истечение и детекти рование при 215 нм. M+ = молекулярный пик в масс-спектре; получают согласно методу "бомбардировки быстрыми атомами" (FAB). Пример 1. Раствор 0,2 г H-Arg-Gly-Asp-D-Pro,-Val-ONa [например, получен из Fmoc-Arg-Gly-Asp-D-ProVal-O-Wang, причем -O-Wang обозначает используемый в модифицированном способе Merrifield остаток 4-оксиметил-феноксиметил-полистирольной смолы, путем отщепления Fmoc-группы с помощью пиперидина в ДМФ и отщепления смолы с помощью ТФК в СН2Сl2 (1:1)] в 15 мл ДМФ разбавляют с помощью 85 мл дихлорметана и смешивают с 50 мг бикарбоната натрия. После охлаждения в смеси сухого льда с ацетоном добавляют 40 мкл дифенилфосфорилазида. После стояния в течение 16 часов при комнатной температуре раствор концентрируют. Концентрат подвергают гель-фильтрации (Сефадекс GIO-колонка в смеси изопропанола с водой в соотношении 8:2) и затем очищают как обычно с помощью ВЭЖХ. Получают цикло- (Arg-Gl y-Asp-DPro-Val); PZ =13,4; М+ = 525. Аналогичным образом, путем циклизации соответствующих линейных пептидов получают цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Tic-Val); RZ = 18,4; М+ 587; цикло - (Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Val); М+ 575; цикло - (Arg-Gl y-Asp-D-Lys-Val); RZ = 6,8; М+ 556; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys); RZ = 10,9; M+ 604; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Gly); RZ = 13,1; М+ 533; цикло - (Arg-Gl y-Asp-D- Phe-Ala); RZ = 14,3; М+ 547; цикло - (Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Phe); RZ = 22,0; M+ 623; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu); RZ =21,2; M+ 589; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Nal-Val); RZ = 24,7; М+ 625; цикло - (Arg-Gl y-Asp-D-Phg-Val); RZ = 16,5; М+ 561; цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-Gly); RZ = 13,2; М+ 533; цикло - (Arg-Gl y-Asp-Phe-D-Ala); RZ = 14,8; М+ 547; цикло - (Arg-Gl y-Asp-Phe-D-Phe); RZ = 20,2; M+ 623; цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-D-Leu); RZ= 21,4; М+ 589; цикло - (Arg-(Mtr)-Gl y-Asp-D-Phe-Lys); RZ = =23,4; М+ 816; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (Н3С-СО); RZ= = 17,0; М+ 646; цикло - (Arg(Mtr)-b-Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = =28,2; М+ 801; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Nle); RZ = 22,0; M+ 589; цикло - (D-Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = =17,5; M+ 575; цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-D-Gly); RZ = =18,7; M+ 575; цикло - (Arg-D-Ala-Asp-D-Phe-Val); RZ = 18,9; M+ 589; цикло - (Arg-D-Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = 19,1; M+ 589; цикло - (Arg-Aha-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,8; M+ 631; цикло - (Arg-Abu-Asp-Phe-D-Val); RZ = 17,2; M+ 603; цикло - (Arg-Aha-Asp-Phe-D-Val); RZ = 19,8; M+ 631; цикло - (Arg-Abu-Asp-D-Phe-Val); RZ = 17,8; M+ 603; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-(4-I-Phe)-Val); RZ = =23,3; M+ 701; цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-Val); RZ =21,8; M+ 575; цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,7; M+ 575; цикло - (D-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Val); RZ = 20,8; M+ 575; цикло - (D-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val); RZ = 21,9; M+ 575; цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,7; M+ 575; Пример 2. Раствор 0,28 г цикло -(Arg[Mtr]-b-Ala-AspPhe-D-Val) [получен путем циклизации согласно примеру 1] в 8,4 мл ТФК, 1,7 мл дихлорметана и 0,9 мл тиофенола выдерживают 4 часа при комнатной температуре, затем концентрируют и после разбавления водой подвергают сушке вымораживанием. Гель-фильтрация на Сефадексе G10 (уксусная кислота/вода 1:1) и последующая очист 6 34436 ка путем препаративной ВЭЖХ в указанных условиях дают циклo-(Arg-b-Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = 17,0; М+ 589. Аналогичным образом получают: Из цикло- (Arg(Mtr)-Gl y-Asp-D-Phe-Lys): цикло -(Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Lys); RZ = 10,9; М+ 604 из цикло -(D-Arg(Mtr)-Gl y-Asp(OBut)-D-Phe-Val): цикло -(D-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val); из цикло-(Arg(Mtr)-Gl y-D-Asp(OEt)-D-Phe-Val): цикло -(Arg-Gl y-D-Asp-D-Phe-Val); из цикло -(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Phe-D-Nal): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Phe-D-Nal); из цикло -(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Phe-D-Leu): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Phe-D-Leu); из цикло -(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Phe-D-Ser): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Phe-D-Ser); из цикло -(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-D-Nal-Leu): цикло -(Arg-Gl y-Asp-D-Nal-Leu); из цикло-(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Nal-D-Val): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Nal-D-Val); из цикло -(Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Phg-D-Val): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Phg-D-Val); из цикло -Arg(Mtr)-Gl y-Asp-Trp-D-Val): цикло -(Arg-Gl y-Asp-Trp-D-Val). Пример 3. 80 мг циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) растворяют 5-6 раз в 0,01 М HCl и после каждого процесса растворения подвергают сушке вымораживанием. Последующая очистка с помощью ВЭЖХ дает циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)×HCl; RZ = =20,6; М+ 589. Аналогичным образом получают из циклo(Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Val): цикло-(Arg-Gl y-Asp-D-PheVal)×HCl; RZ = 18,4; М+ 575; из цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) : цикло (Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Leu).HCl; из цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) путем обработки уксусной кислотой; цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) • Н3ССООН; RZ = 19,2; M+ 589, из циклo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) путем обработки азотной кислотой, цикло -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) - HNO3; RZ = =20,4; М+ 589. Пример 4. Для приготовления аффинных фаз 0,9 г Nмалеинимидо-(СН2)5-СО-NН-(СН2)3-полимера [получен путем конденсации N-малеинимидо-(СН2)3, -СООН с H2N-(CH2)3-полимером] суспендируют в 10 мл 0,1 М натрийфосфатного буфера при рН = 7 и при 4°С добавляют 1 эквивалент цикло-[Arq-GlyAsp-D-Phe-Lys (CO(CH 2)2SH)]. Перемешивают в течение 4-х часов при одновременном нагревании реакционной смеси до комнатной температуры, отфильтровывают твердый остаток и промывают дважды по 10 мл буферным раствором (рН=7) и затем трижды по 10 мл водой. Получают цикло[Arg-Gl y-Asp-D-Phe-Lys-/СО/СН2/2S-3-(N-малеинимидо-(СН2)5-СONH(СН2)3-полимер)]. Пример 5. Аналогично примеру 1, путем конденсации полимер-O-(СН2)3-NH2-(выпускается в продажу) с циклo-(Arg-Gly-As p -D -Pro -L ys(C O)CH 2 ) 4 -C OOH ) получается путем конденсации алипиновой кислоты с циклo-[Arg-Gly-Asp-D-Pro-Lys] при указанных условиях] получают сле дующую полимерную фазу: цикло-[Arg-Gl y-Asp-D-Pro-Lys-/CO/CH 2/4-CO-NH/CH2/3-О-пoлимep]. Аналогичным образом, путем конденсации циклo-[Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-/CO-/CH 2/5 -NН2/] с НООС-СН2-О-полимером получают цикло-[Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-/CO-/CH 2/5-NH-CO-CH2-O-полимер/]. Нижеприведенные примеры относятся к фармацевтическим композициям: Пример А. Стеклянные пузырьки с препаратом для инъекции В растворе из 100 г циклопептида формулы (I) и 5 г динатрийгидрофосфа та в 3 л бидистиллированной воды с помощью 2 н. соляной кислоты устанавливают рН=6,5, стерильно фильтруют, разливают в стеклянные пузырьки для препаратов для инъекции, лиофилизируют в стерильных условиях и сте рильно закрывают. Каждый пузырек с препаратом для инъекции содержит 5 мг биологически активного вещества. Пример Б. Свечи Смесь 20 г биологически активного вещества формулы (I) со 100 г соевого лецитина и 1400 г масла какао расплавляют, выливают в формы и оставляют охлаждаться. Каждая свеча содержит 20 мг биологически активного вещества. Пример В. Раствор Готовят раствор из 1 г биологически активного вещества формулы 1, 9, 38 г NaH2PО4×2H2О, 28,48 г Na2НРO4×12Н2О и 0,1 г бензальконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. Устанавливают рН = 6,8, доливают до 1л и стерилизуют п утем облучения. Этот раствор применяют в форме глазных капель. Пример Г. Мазь Смешивают 500 мг биологически активного вещества фор мулы I с 99,5 г вазелина в асептических условиях. Пример Д. Таблетки Смесь 100 г циклопептида формулы (I), 1 кг лактозы, 600 г микрокристаллической целлюлозы, 600 г кукурузного крахмала, 100 г поливинилпирролидона, 80 г талька и 10 г стеарата магния обычным образом прессуют в таблетки так, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг биологически активного вещества. Пример Е. Драже Прессуют таблетки, как указано в примере Д, и затем их покрывают обычным образом покрытием из сахарозы, кукурузного крахмала, талька, траганта и красителя. 7 34436 Пример Ж. Капсулы Обычным образом твердые желатиновые капсулы заполняют биологически активным веществом формулы (I) так, чтобы каждая капсула содержала 5 мг биологически активного вещества. Пример 3. Ингаляционный пульверизатор 14 г биологически активного вещества формулы (I) растворяют в 10 л изотонического раствора NaCl и раствор заливают в продажные сосуды для распыления с помощью насоса. Раствор можно распылять в рот или в нос. Один впрыск (при мерно 0,1 мл) соответствует дозе примерно 0,14 мг. Результа ты фармакологических испытаний представлены далее. Способ: 1 мг мл-1 биотин-лиганды были инкубированы с 1 мг мл-1 вы деленных рецепторов в присутствии многократно рaзве денного раствора EMD пептидов. После 3 часов выдерживания при температуре 30°С связанные лиганды измеряли с помощью детектора анти-биотин-алкалин-фосфатазы. Результа ты фармакологических тестов. IС50 для свя зывания биотинилированных лигандов с человеческими плацентальными avb3 i плателальными allb b3. Соединение, № M ++1 (FAB)/ RT[Min] (HPLC) Последовательность 65493 525/13.4 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPro-Val) 65494 587/18.4 66203 66541 66542 Пример Фармакол. данные IC50 [nMol/l]; VN: allbb 3 IC50 [nMol/l] FGN:avb 1 575 >1000 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DTic-Val) 1 125 >1000 575/— Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Val) x HCI 1,3 4,87 >1000 556/6.8 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DLys-Val) 1 135 604/10.9 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Lys) 1,2 4,20 >1000 6543 66544 66545 533/13.1 547/14.3 623/22.0 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Gly) Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Ala) Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Phe) 1 1 1 8,10 9,70 10,75 >1000 800 >1000 66546 589/21.2 Cyclo-(Arg-Gl y-A5p-DPhe-Leu) 1 6,80 67301 625/24.7 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DNal-Val) 1 4,00 >1000 67302 67303 561/16.5 533/13.2 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhg-Val) Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-Phe-Gly) 1 1 1,70 15,00 90 125 67304 547/14.8 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-Phe-DAIa) 1 49,00 375 67305 623/20.2 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-Phe-DPhe) 1 227 750 67306 67675 589/21.4 801/28.2 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-Phe-DLeu) Cyclo-(Arg(Mtr)-OAIa-Asp-Phe-DVal) 1 1 18,00 261 345 >1000 67711 589/22.0 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Nle) 1 12,80 >1000 68222 68274 589/19.2 589/20.4 Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Leu) x Ac Cyclo-(Arg-Gl y-Asp-DPhe-Leu) x 3 3 8,90 7,10 >1000 >1000 (VN = Ви тронектин; FGN = Фибриноген) . Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03 8