Спосіб інгібування станів, пов’язаних з нейропептидом y

1 Способ ингибирования физиологического расстройства, связанного с избытком нейропептида Y, заключающийся в том, что вводят нуждающемуся в этом человеку, эффективное количество соединения формулы (I) 0СНгСН2~-R1 •(1) 1 з где R и R независимо представляют водород, СНз, О -С (Ст~С(г а л к и л ) b 1 или Аг представляет необязательно замещенный фенил, ° , где Нейропептид Y является пептидом, присутствующим в центральной и периферической нервных системах Пептид существует совместно с норадреналином во многих нейронах и действует как нейротрансмиттер сам по себе или синергически вместе с ноадреналином Волокна, содержа или его хлористоводородную соль 5 Способ по п 1, отличающийся тем, что состоянием, связанным с избытком нейропептида Y, является тревога 6 Способ по п 1, отличающийся тем, что состоянием, связанным с избытком нейропептида Y, является ожирение 7 Способ по п 1, отличающийся тем, что состоянием, связанным с избытком нейропептида Y, является депрессия 8 Способ по п 1, отличающийся тем, что состоянием, связанным с избытком нейропептида Y, является боль или восприятие повреждающих воздействий нервными центрами щие нейропептид Y, окружают в большом количестве артерии в сердце, но найдены также вокруг артерий в дыхательных путях, желудочнокишечном тракте и мочеполовых путях Нейропептид Y присутствует также в головном мозге, оказывая влияние на кровяное давление, пищевое О 1 (О 46744 ет с семейством близко родственных рецепторов Эти рецепторы обычно классифицируют на несколько подтипов на основе способности различных тканей и рецепторов связывать различные фрагменты неиропептида Y и близко родственного пептида YY Рецептор подтипа Y1, видимо, является основным рецептором сосудистого неиропептида Y Рецепторы подтипов Y2 могут также появляться постсинаптически на гладкой мышце кровеносного сосуда Пока еще не выделенным рецептором подтипа Y3 является, по-видимому, неиропептида специфический, не связывающий нейропептид YY Этот рецептор, вероятно, присутствует в тканях надпочечника, мозгового вещества, сердца и ствола мозга, а также в других местах [В отношении обзора, касающегося неиропептида Y и рецепторов неиропептида Y, смотри например, С Wahlestedt and D Reis, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 33 309-352 Нейропептид Y и другие представители этого (1993)] семейства пептидов отличаются третичной структурой, состоящей из N -концевой полипропиленоВвиду большого количества заболеваний, вой спирали и амфифильной и а - спирали, сосвязанных с избытком неиропептида Y, создание единенной с р - витком с образованием антагонистов рецепторов неиропептида Y обеспешпильковидной петли, которую иногда называют чит возможность контролирования этих болезненпанкреатической полипептидной (РР) складкой ных состояний Наиболее ранними антагонистами Спирали удерживаются вместе благодаря гидротаких рецепторов были производные пептидов фобным взаимодействиям От шпильковидной Как было доказано, эти антагонисты имеют ограпетли выступает амидированиая С - концевая ниченную фармацевтическую полезность из-за их часть метаболической нестойкости После обнаружения неиропептида Y было усВ соответствии с настоящим изобретением тановлено, что он является наиболее распрострапредлагается, по существу, класс мощных непепненным пептидом в центральной нервной систетидных антагонистов рецепторов неиропептида Y ме, включая кору головного мозга, мозговой ствол, Благодаря их непептидной природе соединения гиппокамп, гипоталамус, миндалевидное тело и по настоящему изобретению не имеют недостатталамус, а также присутствует в нервной перифеков, известных пептидных антагонистов рецепторической системе в симпатических нейронах и ров неиропептида Y в отношении метаболической хромаффинных клетках надпочечника нестойкости Нейропептид Y, по-видимому, полностью Настоящее изобретение охватывает способы удовлетворяет нейротрансмиттерным критериям, лечения или предупреждения физиологического поскольку он хранится в симпатических гранулах, расстройства, связанного с избытком неиропептивысвобождается при электрической стимуляции да Y, включающие введение млекопитающему, нерва и действует как специфические рецепторы нуждающемуся в указанном лечении, эффективОчевидно, что нейропептид Y по праву является ного количества соединения формулы 1 важным переносчиком, вероятно в мозге, где нейропептид Y, видимо, ингибирует активность аденилатциклазы и вызывает повышение внутриклеточных уровней кальция Центральная инъекция неиропептида Y приводит к изменениям кровяного давления, увеличению питания, повышенному накоплению жира, повышенному содержанию сахара и инсулина в крови, снижению двигательной активности, пониженной температуре тела и каталепсии где R1 и R3 независимо представляют водоНейропептид Y (а также его химические род° О ственники) действует на зависимые от гуаниннук-СНо.-С-ГС-С,) . -С-Аг л леотидов рецепторы мембран, известные как G6 род, \ і ь/ алкил) или • где Аг протеин - связанные рецепторы Протеины G явпредставляет необязательно замещенный фенил, ляются семейством мембранных протеинов, котоR2 выбран из группы, состоящей из пирролирые становятся активированными только после дино, гексаметиленимино и пиперидино, и его связывания гуанозинтрифосфата Активированфармацевтически приемлемых солей и сольватов ные протеины G в свою очередь активируют ферНастоящее изобретение касается открытия мент-усилитель на внутренней поверхности мемтого, что выбранная группа 2-фенил-Збраны, после чего фермент преобразует ароилбензотиофенов, формулы 1, полезна для молекулы предшественника во вторые переносчиингибирования физиологического расстройства, ки связанного с избытком неиропептида Y Нейропептид Y, по-видимому, взаимодействуТерапевтическое и профилактическое лечеповедение и высвобождение различных гормонов Изменения концентраций неиропептида Y в головном мозге причастны к этиологии психиатрических расстройств Нейропептид Y был открыт и выделен и определены его последовательности примерно десять лет тому назад, когда его выделили из свиного мозга с определением последовательности в ходе общего скрининга с целью обнаружения амидированных пептидов с концевыми карбоксигруппами, и был назван нейропептидом Y из-за его выделения из нервной ткани и присутствия тирозина в виде аминокислоты, как с концевыми аминогруппами, так и с концевыми карбоксигруппами Нейропептид Y является представителем семейства панкреатических пептидов и находится в одном гомологическом ряду с панкреатическим полипептидом и пептидом YY 46744 ния по настоящему изобретению осуществляют ароматические кислоты, алифатические и аромапутем введения нуждающемуся в этом человеку тические сульфоновые кислоты Таким образом, дозы соединения формулы 1 или его фармацевфармацевтически приемлемые соли включают тически приемлемой соли или сольвата, эффекацетат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, тивной для ингибирования физиологического расаскорбат, бензоат, хлорбензоат, динитробензоат, стройства, связанного с избытком нейропептида гидроксибензоат, метокс и бензоат, метилбензоат, Y, или его симптомов о-ацето кс и бензоат, нафталин-2-бензоат, бромид, изобутират, фенилбутират, р-гидроксибутират, Термин "ингибирование" имеет обычное прибутин-1,4-диоат, гексин-1,4-диоат, капрат, капринятое значение, включающее исключение возлат, хлорид, циннамат, цитрат, формиат, фумаможности, предупреждение, ограничение и зарат, гликоллат, гептаноат, гиппурат, лактат, малат, медление, прекращение или обеспечение малеат, гидроксималеат, малонат, манделат, мообратного хода болезни или вызванного ею симзилат, никотинат, изоникотинат, нитрат, оксалат, птома Как таковой предлагаемый способ охватыфталат, терафталат, фосфат, моногидрофосфат, вает по потребности лечение как терапевтичедигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, проское, так и профилактическое пиолат, пропионат, фенилпропионат, салицилат, Предпочтительным соединением настоящего себакат, сукцинат, суберат, сульфат, бисульфат, изобретения является ралоксифен, представпиросульфат, сульфит, бисульфит, сульфонат, ляющий собой гидрохлорид (соль) соединения 1 2 бензолсульфонат, п-бромфенилсульфонат, хлорформулы 1, где R и R представляют водород и бензолсульфонат, этансульфонат, 2R2 представляет 1-пиперидинил Как правило, по крайней мере одно соединегидроксиэтансульфонат, метан сульфонат, нафтание формулы 1 смешивают с обычными наполнилин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, птелями, разбавителями или носителями и престолуолсульфонат, ксилол сульфонат, тартрат и суют в таблетки или изготавливают в виде тому подобное Предпочтительной солью являетэликсиров или растворов для удобного пероралься гидрохлорид ного введения или вводят внутримышечно или Фармацевтически приемлемые кислотновнутривенно Соединения могут быть введены аддитивные соли обычно получают взаимодейстчрезкожно или могут быть изготовлены в виде вием соединения формулы 1 с эквимолярным или лекарственных форм отсроченного действия и избыточным количеством кислоты Реагенты тому подобное обычно смешивают в совместном растворителе, таком, как диэтиловый эфир или бензол Соль Соединения, используемые в способах по наобычно выпадает из раствора в осадок в пределах стоящему изобретению, могут быть получены в примерно от одного часа до 10 дней и может быть соответствии с разработанными технологическиотделена путем фильтрования или путем отгонки ми процессами, такими, как подробно описанные в растворителя обычным образом патентах США №4133814, №4418068 и №4380635, которые включены в данное описание в качестве Основания, широко используемые для обрассылки Обычно процесс начинают, взяв в качестзования солей, включают гидроксид аммония и ве исходного соединения бензоло[в] тиофен, гидроксиды и карбонаты щелочных и щелочнозеимеющий 6-гидроксильную группу и группу 2- (4мельных металлов, а также алифатические и пергидроксифенпл) Исходное соединение защищают, вичные, вторичные и третичные амины, алифатиацилируют и освобождают от защиты, получив в ческие диамины Основания, особенно пригодные результате соединения формулы 1 Примеры подля получения аддитивных солей, включают гидлучения таких соединений даны в указанных выше роксид аммония, карбонат калия, метиламин, дипатентах США Термин "необязательно замещенэтиламин, этилендиамин и циклогексиламин ный фенил" охватывает фенил и фенил, замеФармацевтически приемлемые соли обычно щенный один или два раза С-і-Сє алкилом, С1-С4 имеют лучшие характеристики растворимости, но алкокси, гидрокси, нитро, хлором, фтором или три сравнению с соединением, из которого их получа(хлор или фтор)метилом ют, и потому они больше подходят для изготовления лекарственных форм в виде жидкостей или Соединения, используемые в способах по наэмульсий стоящему изобретению, образуют фармацевтически приемлемые кислотно- и основно-аддитивные Фармацевтические препараты могут быть изсоли с самыми разнообразными органическими и готовлены известными в данной области техники неорганическими кислотами и основаниями и способами Например, соединения можно смешивключают физиологически приемлемые соли, ковать с обычными наполнителями, разбавителями торые часто используют в фармацевтической хиили носителями и изготавливать в виде таблеток, мии Такие соли тоже являются частью настоящекапсул, суспензий, порошков и тому подобное го изобретения Типичные неорганические Примерами наполнителей, разбавителей и носикислоты, используемые для получения таких сотелей, подходящих для изготовления таких лекарлей, включают хлороводородную, бромоводородственных форм, являются наполнители и сухие ную, иодоводородную, азотную, серную, фосфорразбавители, такие, как крахмал, сахара, маннит и ную, гипофосфорную и тому подобные кислоты производные кремния, связывающие вещества, Могут быть также использованы соли, полученные такие, как карбоксиметилцеллюлоза и другие произ органических кислот, таких, как алифатические изводные целлюлозы, альгинаты, желатин и помонои дикарбоновые кислоты, фенилливинил пиррол идон, увлажняющие вещества, замещенные алкановые кислоты, гидроксиалканотакие, как глицерин, разрыхляющие вещества, вые кислоты и гидроксиалкановые дикислоты, такие, как карбонат кальция и бикарбонат натрия, 8 46744 зиологического расстройства, связанного с избытвещества для замедления процесса растворения, ком нейропептида Y, или его симптомов в такие, как парафин ускорители всасывания, тасоответствии с настоящим изобретением, зависит кие, как четвертичные соединения аммония, поот тяжести состояния, способа введения и других верхностно-активные вещества, такие, как цетиподобных факторов по усмотрению лечащего враловый спирт, глицеринмоностеарат, ча Приемлемые эффективные суточные дозы адсорбционные носители, такие, как каолин и бенобычно составляют от примерно 0,1 до примерно тонит, и смазывающие вещества, такие, как тальк, 1000мг в сутки, и более предпочтительно от пристеарат кальция, стеарат магния и твердые полимерно 50 до примерно 200мг в сутки Такие дозы этиленгликоли вводят больному один-три раза в сутки или чаще в Соединения могут быть приготовлены в виде случае более эффективного лечения или предуэликсиров или растворов для удобного пероральпреждения состояния или симптома(ов) ного введения или в виде растворов, подходящих для парентерального введения, например внутОбычно является предпочтительным вводить римышечного, подкожного или внутривенного соединение формулы 1 в виде кислотноКроме того, соединения вполне пригодны для изаддитивной соли, как принято при введении леготовления лекарственных форм отсроченного карственных веществ, несущих основную группу, действия и тому подобное Состав лекарственных такую, как пиперидиновое кольцо Для таких целей форм может быть таким, чтобы он обеспечивал годятся следующие пероральные лекарственные высвобождение активного компонента только или формы предпочтительно в конкретной части желудочноПрепараты кишечного тракта, возможно в течение некоторого В следующих ниже составах препаратов "Акпериода времени Могут быть изготовлены покрытивный компонент" означает соединение формулы тия, оболочки и защитные матрицы, например, из 1 полимерных веществ и восков Состав 1 Желатиновые капсулы Конкретная доза соединения формулы 1, неТвердые желатиновые капсулы изготавливаобходимая для обеспечения ингибирования фиют, используя следующее Ингредиент Активный ингредиент Крахмал, NF Ингредиент Крахмал в виде сыпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов Количество (мг/капсулу) 0,1-1000 0-650 Количество (мг/капсулу) 0-650 0-15 Ингредиенты смешивают, пропускают сквозь сито № 45 меш стандарта США и заключают в твердые желатиновые капсулы Примеры конкретных капсульных препаратов ралоксифена, которые были изготовлены, представлены ниже Состав 2, Капсула с ралоксифеном Ингредиент Ралоксифен Крахмал, N F Крахмал в виде сыпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов Количество (мг/капсулу) 1 112 225,3 1,7 Состав 3, Капсула с ралоксифеном Ингредиент Ралоксифен Крахмал, N F Количество (мг/капсулу) 5 108 Ингредиент Крахмал в виде сыпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов Количество (мг/капсулу) 225,3 Продолжение 1,7 46744 10 Состав 4 Капсула с ралоксифеном Ингредиент Ралоксифен Крахмал,N F Крахмал в виде сыпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов Состав 5 Капсула с ралоксифеном Количество (мг/капсулу) 10 103 225,3 1,7 Ингредиент Ралоксифен Крахмал, N F Крахмал в виде сыпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов Количество (мг/капсулу) 50 150 397 3,0 Составы представленных выше конкретных препаратов можно в разумных пределах изменять Препарат в форме таблеток изготавливают, используя следующие ингредиенты Состав 6 Таблетки Ингредиент Активный компонент Целлюлоза, микрокристаллическая Диоксид кремния, тонкодисперсный Стеариновая кислота Количество (мг^аблетку) 0,1-1000 0-650 0-650 0-15 Компоненты смешивают и прессуют в таблетки Альтернативно таблетки, содержащие каждая 0,1-ЮООмг активного ингредиента, изготавливают следующим образом Состав 7 Таблетки Компонент Активный компонент Крахмал Целлюлоза, микрокристаллическая Поливинилпирролидон (в виде 10%-ного раствора в воде) Натрий - карбоксиметилцеллюлоза Стеарат магния Тальк Количество (мг^аблетку) 0,1-1000 45 35 4 4,5 0,5 1 ляют натрий-карбоксиметил целлюлозу, стеарат магния и тальк, ранее пропущенные сквозь сито № 60 (стандарт США), и после перемешивания полученную смесь прессуют на таблеточной машине для получения таблеток Суспензии, содержащие каждая 0,1-ЮООмг активного ингредиента на 5мл дозу, изготавливают следующим образом Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают сквозь сито №45 меш по стандарту США и тщательно смешивают Полученный порошок смешивают с раствором пол и вин ил пиррол идина, после чего смесь пропускают сквозь сито № 14 меш (стандарт США) Полученные при этом гранулы высушивают при 5О-60°С и пропускают сквозь сито № 18 меш Затем к гранулам добавСостав 8 Суспензии Компонент Активный компонент Натрий карбоксиметилцеллюлоза Сироп Раствор бензойной кислоты Корригент Красящее вещество Очищенная вода до Количество (мг/5 мл) 0,1-ЮООмг 50мг 1,25мг 0,1мл по усмотрению по усмотрению 5мл 11 Активный ингредиент пропускают сквозь сито № 45 меш (стандарт США) и, смешав с натрийкарбоксиметилцеллюлозой и сиропом, получают однородную пасту Раствор бензойной кислоты, корригент и красящее вещество разбавляют некоторым количеством воды и добавляют в пасту с перемешиванием Затем для получения требуемого объема добавляют достаточное количество воды Соединения по настоящему изобретению связываются с рецепторами, специфическими для нейропептида Y, а также близко родственных пептидов В отношении обзора рецепторов нейропептида Y смотри D Gehlert, Life Sciences, 55 551-562 (1994) Рецепторы для нейропептида Y и пептида YY имеют значительное перекрытие, а панкреатический полипептид, по-видимому, имеет свой индивидуальный набор, рецепторов Многие (но не все) эффекты нейропептида Y можно воспроизвести, используя пептид YY Первоначально были предложены два подтипа рецепторов для нейропептида Y на основе сродства 13-36 фрагмента нейропептида при использовании препарата симпатической нервной системы Хотя они являются наилучшими обнаруженными рецепторами для нейропептида Y, но имеется много доказательств, что существуют дополнительные подтипы рецепторов Наилучшим из обнаруженных является рецептор Y -3, который восприимчив к нейропептид Y, но не к пептиду YY Недавно был описан другой рецептор, который связывается с пептидом YY с высоким сродством и нейропептидом Y с более низким сродством Фармакология "пищевой" реакции на нейропептид Y, по-видимому, связана с действием рецептора Y- 1, но был предложен и отдельный "пищевой рецептор" Рецептор Y -1 является единственным рецептором, успешно клонированным на сегодняшний день Далее кратко изложена имеющаяся информация об известных подтипах рецепторов нейропептида Y и их возможной роли в физиологической функции Y - 1 Рецептор Y-1 Рецептор является наиболее характеризованным рецептором для нейропептида Y Этот рецептор обычно считают постсинаптическим, и он является медиатором многих известных действий нейропептида Y на периферии Первоначально этот рецептор был описан как имеющий низкое сродство с С-концевыми фрагментами нейропептида Y, такими, как 13-36 фрагмент, но он с одинаковым сродством взаимодействует с нейропептидом Y и пептидом YY, имеющими полную длину С Wahlestedt et al, Regulatory Peptides, 13 307-318 (1986), С Wahlestedt et al , Neuronal Messengers in Vas cular Eunc t ion, 231-241 (Nobm et al , изд 1987) Замещение аминокислоты в положении 34 пролином (Pro34) дает в результате белок, специфический для Y-1 рецептора Е К Potter et al , European Journal of Pharmacology, 19315-19 (1991) Этот способ использовали для установления роли Y-1 рецептора в самых разнообразных функциях Думается, что рецептор связывается с аденилатциклазой с проявлением ингибирующего действия 46744 12 в коре головного мозга, клетках гладких мышц кровеносных сосудов и SK - N - MS [Смотри В J McDermot et al , Cardiovascular Researcg, 27 893905 (1993)] Этому действию препятствует применение токсина коклюша, подтверждающего роль G-белок-связанного рецептора Y-1 Рецептор является медиатором мобилизации внутриклеточного кальция в клетках гладких мышц кровеносных сосудов свиньи и эритролейкозных клетках человека Клонированный человеческий Y - 1 рецептор можно связать либо с гидролизом фосфотидилинозитола, либо с ингибированием аденилатциклазы, в зависимости от типа клетки, в которой осуществляется экспрессия рецептора Н Herzog et al , Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 89 5794-5798 (1992) Как было сообщено, Y -1 рецептор связан либо с системой вторых переносчиков при исследовании с использованием тканевых препаратов, либо с линиями клеток, естественно экспрессирующими рецептор Упомянутый выше D Gehlert, стр 553 Таким образом, У-1 рецептор нельзя отличить только на основе связи с единственным вторым переносчиком Y-2 Рецептор Как и Y -1 рецептор, этот подтип рецептора был первоначально описан с использованием препаратов кровеносных сосудов Фармакологически Y-2 рецептор отличается от Y -1 проявлением сродства по отношению к С-концевым фрагментам нейропептида Y Рецептор чаще всего дифференцируют, используя нейропептид Y (1336), хотя 3-36 фрагмент нейропептида Y и пептида YY обеспечивает улучшенные сродство и избирательность Y Dumont et al , Society for Neuroscience Abstracts, 19 726(1993) Подобно Y-1 рецептору, этот рецептор связывают с ингибированием аденилатциклазы, хотя в некоторых препаратах он может не быть восприимчивым к токсину коклюша Как было обнаружено, Y -2 рецептор снижает внутриклеточные уровни кальция в синапсе путем избирательного ингибирования кальциевых каналов N -типа Как и Y -1 рецептор, рецептор Y -2 может проявлять различное связывание с вторым переносчиком Y -2 Рецепторы обнаружены в самых разных зонах головного мозга, включающих гиппокамп, substantia nigralaterahs, таламус, гипоталамус и ствол На периферии Y-2 обнаружен в периферической нервной системе, такой, как симпатическая, парасимпатическая, и сенсорных нейронах Во всех этих тканях Y -2 рецепторы являются медиаторами уменьшения высвобождения нейротрансмиттеров Y-3 Рецептор Этот рецептор является самым новым и наименее изученным из обнаруженных подтипов рецепторов нейропептида Y Нейропептид Y - это вполне эффективный агонист в этом семействе рецепторов, в то время как пептид YY малоэффективен Это фармакологическое свойство используют для определения этого рецептора Рецептор, имеющий фармакологию, как у Y -3 рецептора, был идентифицирован в области САЗ гиппокампа с использованием электрофизиологи 13 46744 14 ческих методов Этот рецептор может усиливать Research Bulletin, 26 309-311 (1991) возбудительную реакцию указанных нейронов на Биологическую активность соединений по наN-метил- D -аспартат (NMDA) F P Monnet et al , стоящему изобретению оценивали путем первоEuropean Journal of Pharmacology, 182 207-208 начального скрининга, при котором быстро и точно (1990) измеряли связывание испытуемого соединения с известными клеточными рецепторами нейропепНаличие этого рецептора лучше всего устатида Y Испытания, пригодные для оценки антагонавливается в стволе головного мозга крысы, в нистов рецепторов нейропептида Y, хорошо изчастности в ядре одиночного пути (nucleus tractus вестны в данной области медицины Смотри, sohtanus) Введение нейропептида Y в эту зону например, патент США № 5284839, выданный 8 обеспечивает зависящее от дозы снижение крофевраля 1994г, который включен в данное описавяного давления и частоты сердечных сокращение в качестве ссылки Смотри также М W Walker ний В эту зону головного мозга могут внести суet al , Journal Neurosciences, 8 2438-2446 (1988) щественный вклад также и рецепторы Y-1 и Y-2 Неиропептид Y также ингибирует вызванное ацеИспытание на связывание с неиропептидом Y тилхолином высвобождение катехоламинов из Проверяли способность соединений настоямозгового вещества надпочечника, по-видимому, щего изобретения связываться с неиропептидом Y через Y-3 рецептор С Wahlestedt et al, Life Sciметодом, описанным у М W Wat at al , см выше ences, 50 PL7-Pbl4 (1992) В этом испытании использовали клеточную линию SK-N-MC Эта клеточная линия была получена из Рецептор, предпочитающий пептид YY лечебного учреждения Sloane-Kettermg Memorial Был уже описан и четвертый рецептор, оказыHospital, Нью-Йорк Эти клетки культивировали в вающий умеренное предпочтение пептиду YY по колбах Т-150, используя незаменимые минимальсравнению с неиропептидом Y Этот рецептор был ные питательные среды Дульбекко (D MEM) с допервоначально выявлен в тонкой кишке крысы и бавлением 5%-ной плодной сыворотки теленка описан как имеющий в 5-10 раз более высокое Клетки вручную извлекали из колб путем выскабсродство по отношению к пептиду YY, чем к нейливания, таблетировали и хранили при -70°С ропептиду Y U Laburthe et al, Endocinology 118 1910-1917 (1986) Затем этот рецептор был Таблетки вновь суспендировали, используя обнаружен в адипоците и линии клеток проксистеклянный гомогенизатор, в 25мМ буфера НЕмальных почечных канальцев Этот рецептор свяPES (рН 7,4), содержавшего 2,5мМ хлорида кальзан с возможностью ингибирующего действия с ция, 1мМ хлорида магния и 2мг/л бацитрацина аденилатциклазой и восприимчив к коклюшному Инкубацию осуществляли в конечном объеме токсину 200мкл содержащем 0,1нМ 1251-пептида YY (2200 Сі /ММОЛЬ) И 0,2-0,4МГ белка, в течение примерно В кишке этот рецептор осуществляет мощное двух часов при комнатной температуре ингибирование секреции жидкости и электролита Рецептор локализован в клетках крипты, где, поНеспецифическое связывание определяли в видимому, имеет место кишечная секреция хловиде величины радиоактивности, оставшейся свярида Рецептор, предпочитающий пептид YY в занной с тканью после инкубации в присутствии адипоцитах является медиатором уменьшения 1мкМ нейропептида Y В нескольких эксперименлиполиза посредством циклический аденозинмотах в инкубационную смесь включали различные нофосфат ( цАМФ, сАМР) -зависимого механизма концентрации соединений "Пищевой рецептор" Инкубацию заканчивали быстрым фильтрованием через стекловолоконные фильтры, предваОдним из наиболее рано обнаруженных осрительно пропитанные 0,3%-ным полиэтилениминовных эффектов нейропептида 1 было значином, использовав устройство для сбора тельное увеличение приема пищи, которое накультивированных клеток с 96 ячейками Фильтры блюдалось после введения пептида в гипоталамус промывали 5 мл 50 мМ Трис (рН 7,4) при 4°С и крыс Реакция была наибольшей при вливании быстро высушивали при 60°С Затем обрабатывапептида в околос водную область гипоталамуса ли фильтры наплавляемыми сцинтилляционными В G Stanley etal, brain Research 604 304-317 листами и считали радиоактивность, оставшуюся (1993) Фармакология этой реакции подобна такона фильтрах Результаты анализировали, испольвой у У-1 рецептора, но фрагмент 2-36 нейропепзовав различные комплекты программного обестида Y был значительно более мощным, чем неипечения Концентрацию белков измеряли с поморопептид 32 Кроме того, щью стандартных реактивов для белкового интрацеребровентрикулярный неиропептид Y (2анализа, использовав в качестве стандартов бы36) в полной мере стимулирует питание, но не чий сывороточный альбумин снижает температуру тела, как это делает неиропептид Y полной длины F В Johcoeur et al , Brain Ri СНз Н Н Н Н Н Заместители R2 1-пиперидин 1-гексаметиленимиио 1-пиперидин 1-пиперидин 1-пирролидин 1-пирролидин 1С5о (мкМ) R3 н н н н Н Н X - гидрохлорид (соль) Yi -12 -20 -10 -10* -17 -10* 15 46744 16 Так как соединения формулы 1 являются эфсостояния, связанные с повышенной активнофективными антагонистами рецепторов нейростью симпатических нервов, например, во время пептида Y, то эти соединения полезны для лечеили после хирургической операции на коронарных ния самых разных клинических состояний, сосудах и манипуляций и хирургической операции которые характеризуются наличием избытка нейв желудочно-кишечном тракте, ропептида Y Поэтому, в соответствии с настояболезни головного мозга и заболевания, свящим изобретением, предлагается способ лечения занные с центральной нервной системой, такие, или предупреждения физиологического расстройкак инфаркт головного мозга, нейродегенерация, ства, связанного с избытком нейропептида Y, эпилепсия, удар и состояния, связанные с ударом, включающий в себя введение млекопитающему, церебральный вазоспазм и кровоизлияние, денуждающемуся в таком лечении, эффективного прессия, тревога, шизофрения и слабоумие, количества соединения формулы 1 или его фарсостояния, связанные с болью или восприятимацевтически приемлемой (ого) соли, сольвата ем повреждающих воздействий нервными ценили пролекарства Термин "физиологическое растрами, стройство, связанное с избытком нейропептида " заболевания, связанные с аномальной мотоохватывает те расстройства, которые связаны с рикой желудочнокишечного тракта и аномальным несоответствующей стимуляцией рецепторов выделением, такими, как различные формы иленейропептида Y независимо от действительного уса, недержание мочи и болезнь Крона, количества нейропептида Y, присутствующего в аномальное питье и расстройства приема пиместе действия щи, такие, как ожирение, анорексия, булемия, и метаболические расстройства, Эти физиологические расстройства могут включать заболевания, связанные с сексуальной дисфункцией, и репродуктивные расстройства, расстройства или заболевания сердца, кровеносных сосудов или почечной системы, такие, как состояния или расстройства, связанные с восвазоспазм, сердечная недостаточность, шок, гипалением, пертрофия сердца, повышенное кровяное давлереспираторные заболевания, такие, как астма ние, стенокардия, инфаркт миокарда, внезапная и состояния, связанные с астмой, и сужение проостановка сердца, аритмия, заболевание перифесвета бронхов, и заболевания, связанные с аноррических кровеносных сосудов и анормальные мальным выделением гормонов, таких, как лютеипочечные состояния, такие, как нарушенный ток низирующий гормон, гормон роста, инсулин и жидкости, анормальный массоперенос или почечпролактин ная недостаточность, ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71