Застосування антипрогестинів для профілактики і лікування гормонозалежних захворювань

1. Застосування антипрогестину (19) (21) 2003054404 (22) 17.10.2001 (24) 15.05.2006 (86) PCT/EP01/12005, 17.10.2001 (31) 00250341.5 (32) 18.10.2000 (33) EP (31) 60/240,998 (32) 18.10.2000 3 75615 4 додатковій терапії раку молочної залози, його вили побічні дії, наприклад, встановлено, що міфепкористання як агента для хіміопревентивної тераристон виявляє виражені побічні антиглюкокортипії є проблематичним, оскільки було встановлено, коїдні дії [див. L.M. Kettel і ін., Fertil. Steril, вересень що таке лікування приводить до збільшення кіль1991, 56(3), стор.402-407; X. Bertagna, кості випадків виникнення різних типів раку ендоPsychoneuroendocrinology 1997; 22 додаток 1, метрію [I.N. White, Carcinogenesis, 20(7): 1153стор.51-55] і крім того, у клінічних дослідах він мав 1160, 1999]. лише невелику активність [див. процитовану вище Антипрогестини являють собою відносно ностаттю D. Perrault і ін., J. Clin. Oncol, жовтень 1996, вий і перспективний клас терапевтичних агентів, 14(10), стор.2709-2712]. Щодо побічних дій інших які можуть мати велике значення для лікування уже згаданих вище методів лікування, заснованих раку молочної залози. Хоча антипрогестини спона використанні гормонів, слід зазначити, що ввечатку були розроблені для медичного нехірургічнодення тамоксифену може приводити до зростання го припинення вагітності (ЕР 129499), виявилося, кількості випадків захворювання раком ендометрію що деякі антипрогестини мають велике значення, [I.N. White, Carcinogenesis, 20(7): 1153-1160, 1999]. для ендокринної терапії таких типів раку молочної Ще однією проблемою, пов'язаною з відомими залози, які відрізняються наявністю рецепторів з існуючого рівня техніки антипрогестинами, є їх прогестерону [Т. Maudelonde і ін., у: J.G.M. Klijn і низька біологічна доступність при пероральному ін., Hormonal Manipulation of Cancer: Peptides, введенні. Внаслідок цього їх необхідно вводити, як Growth Factors and New (Anti) Steroidal Agents, видправило, у високих дозах, що приводить до виникво Raven Press, New York, 1987, стор.55-59]. Ця нення небажаних побічних дій. Крім того, пероранова стратегія ендокринної терапії заснована на льне введення потрібно узгоджувати з комфортом даних про те, що антипрогестини мають протипухі дотриманням пацієнтом запропонованого режилинну активність in vitro у відношенні ліній клітин му. пухлини молочної залози людини, що мають рецеКрім того, існує необхідність у створенні споптор прогестерону, і in vivo у відношенні деяких лук, які мають ефективність не тільки у відношенні типів гормонозалежних пухлин молочної залози лікування, але і профілактики раку молочної заломишей і щурів. Зокрема, механізм протипухлинної зи й інших гормонозалежних захворювань. Збільактивності таких антипрогестинів, як онапристон і шення кількості випадків виникнення раку ендомеміфепристон (RU 486) уже був вивчений з викоритрію в результаті застосування тамоксифену станням моделі гормонозалежної пухлини молочробить цю сполуку непридатною для профілактичної залози лінії МХТ миші, а також на моделях пуного застосування для здорових жінок, однак інхлини молочної залози, індукованої канцерогеном ших придатних для цієї мети сполук нема [див. L. ДМБА (7,12-диметилбенз(а)антрацен) і НММ (NBergman і ін., The Lancet, т.356, Sept. 9, 2000; 881метилнітрозосечовина) [М. R. Schneider і ін., Eur. J. 887]. Cancer Clin. Oncol, т.25, №4, стор.691-701, 1989; Η. Задача даного винаходу полягає в усуненні Michna і ін., Breast Cancer Research and Treatment або зменшенні недоліків існуючих методів попере14:275-288, 1989; H. Michna, J. Steroid. Biochem. дження або лікування гормонозалежних захворют.34, №№1-6, стор.447-453, 1989]. Однак внаслідок вань, таких як рак молочної залози. Найбільш ванизької активності і побічних впливів, наприклад, жливим є розробка способів попередження і міфепристону, цю сполуку не можна рекомендувалікування гормонозалежних захворювань, таких як ти як єдиний агент для лікування раку молочної рак молочної залози, заснованих на введенні визалози (D. Perrault і ін.,. J. Clin. Oncol. 1996 Oct, сокоефективних агентів, які за своєю ефективності 14(10), стор.2709-2712]. перевищують відомі методи, включаючи оваріекАнтипрогестини можна застосовувати для інітомію, і використовувані в даний час агенти. Так, ціації абортів і тим самим для контролю фертильзокрема, дуже важливою є розробка способу лікуності в період після злягання, як контрацептиви вання гормонозалежних захворювань, таких як рак для жінок (WO-A 93/23020, WO-A 93/21927), а тамолочної залози, який дозволяє уникнути серйозкож для лікування гормональних розладів, для ного хірургічного втручання, яке супроводжується ініціації менструації і для ініціації пологів. Їх можна ризиком, і пов'язаного з оваріектоміей. Крім того, застосовувати також для гормонзамісної терапії існує необхідність у виявленні агента для застосу(WO-A 94/18983), для лікуванняпорушень, пов'явання відповідно до винаходу, який має менші заних з дисменореєю і для лікування ендометріозу побічні дії, ніж агенти, які використовуються у ві(ЕР-А 0266303), а також міом. домих або запропонованих у даний час методах лікування гормонозалежних захворювань, таких як 17 -фторалкілстероїди, які мають виражену рак молочної залози. антипрогестинну активність, а також методи їх Ще однією задачею даного винаходу є ствоодержання, описані в WO 98/34947. рення фармацевтичних композицій, які містять Відомі з існуючого рівня техніки антипрогестивисокоефективні протипухлинні агенти, які признани, які раніше тестувались або використовувалися чені для профілактики і лікування раку молочної завдяки їх протипухлинній дії, найчастіше мали залози й інших гормонозалежних захворювань. багато недоліків. При створенні винаходу несподівано було Наприклад, незважаючи на те, що відомі з ісвстановлено, що ці задачі можна вирішувати шлянуючого рівня техніки антипрогестини мали антипхом застосування антипрогестинів за даним винарогестагенну активність, ці сполуки виявилися неходом і фармацевтичних композицій і лікарських придатними для лікування гормонозалежних засобів, які містять такі антипрогестини. З цього захворювань, таких як рак молочної залози. Зокпогляду найбільш переважним є антипрогестин рема, відомі з існуючого рівня техніки сполуки ма 5 75615 6 на Фіг.4 - інгібуюча ріст пухлини дія антипроге11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2стину (І) у дозах 0,5 і 1,0мг/кг у досліді на щурах з пентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он або його фаріндукованою НММ карциномою молочної залози, у мацевтично прийнятне похідне або аналог. порівнянні з контролем, обробкою онапристоном Ще однією задачею даного винаходу було ви(5мг/кг) і оваріектомією; явлення антипрогестинів, таких як антипрогестин на Фіг.5 - інгібуюча ріст пухлини дія антипроге11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2стину (І), яка вводиться в дозі 10мг/кг s.c, у віднопентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он або його фаршенні ксенотрансплантату людської пухлини лінії мацевтично прийнятне похідне або аналог, які T47D у безтимусних мишей у порівнянні з контронайбільш придатні для перорального введення. лем і оваріектомією; Основою даного винаходу послужило несподіна Фіг.6 - інгібуюча ріст пухлини дія антипрогеване встановлення нового факту, що певні антипстину (І), яка вводиться в дозі 10мг/кг s.c, у віднорогестини, зокрема 11 -(4-ацетилфеніл)-17 шенні ксенотрансплантату людської пухлини лінії гідрокси-17 -(1,1,2,2,2-пентафторетил)естра-4,9MCF7 у безтимусних мишей у порівнянні з контродієн-3-он або його фармацевтично прийнятне полем і оваріектомією. хідне або аналог, мають високу активність у відАнтипрогестин (І), тобто 11 -(4-ацетилфеніл)ношенні попередження і зменшення росту пухлини 17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2-пентафторетил)естрапри дослідженні на моделях раку молочної залози, 4,9-дієн-3-он, представлений нижче формулою (І): індукованого ДМБА (7,12-диметилбензантрацен) і НММ (Ν-метилнітрозосечовина). Дійсно, антипрогестин 11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 (1,1,2,2,2-пентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он (І) має набагато більшу ефективність у відношенні попередження розвитку раку молочної залози, ніж тамоксифен і оваріектомія. Відповідно до цього в даному винаході запропонований спосіб профілактики і лікування раку молочної залози й інших гормонозалежних захворювань у ссавців, зокрема, у людини, що потребує такого лікування, який полягає у введенні пацієнту фармацевтично ефективної кількості антипрогесАнтипрогестин (І) (або його фармацевтично тину, зокрема 11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідроксиприйнятне похідне або аналог, які мають порів17 -(1,1,2,2,2-пентафторетил)естра-4,9-дієн-3-ону нянну активність) являє собою фармацевтичний або його фармацевтично прийнятного похідного агент, що має велике значення, який має виражеабо аналога. ну антипрогестинну активність. Антипрогестин (І), Крім того, у даному винаході запропоновані а також інші антипрогестини можна застосовувати фармацевтичні композиції, які містять антипрогесвідповідно до даного винаходу для профілактики і тин, зокрема 11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідроксилікування раку молочної залози та інших гормоно17 -(1,1,2,2,2-пентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он залежних захворювань. або його фармацевтично прийнятне похідне або У контексті даного винаходу поняття "антипроаналог, у кількості, достатній для профілактики гестин" стосується насамперед всіх сполук, які або лікування раку молочної залози або інших мають здатність конкурентно інгібувати рецептори гормонозалежних захворювань. прогестерону. Однаквоно включає також сполуки, Переважним антипрогестином є 11 -(4які мають здатність інгібувати біосинтез прогестинів. ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2У контексті даного опису фармацевтично припентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он, який у даному йнятні похідні або аналоги антипрогестину (І) моописі позначений як «антипрогестин (І)». жуть включати, наприклад, будь-яку зі сполук, заяНа наведених нижче фігурах представлено: влених у WO 98/34947. на Фіг.1 - дія антипрогестину (І) у відношенні У контексті даного винаходу поняття «залежні попередження розвитку пухлини в шурів з індуковід гормонів захворювання» може включати, але ваною ДМБА карциномою молочної залози, у поріне обмежуючись ними, рак молочної залози, рак внянні з контролем, обробкою тамоксифеном і яєчника, рак ендометрію, мієлому, ановуляторну оваріектомією; безплідність, менінгому, тобто захворювання, які в на Фіг.2 - інгібуючі ріст пухлини дії антипрогесосновному зумовлені або на які впливає наявність тину (І) залежно від дози в досліді на щурах з індурецепторів гормонів і/або залежних від гормонів кованою ДМБА карциномою молочної залози в шляхів метаболізму. порівнянні з контролем, обробкою онапристоном, а Якщо розглядати переваги даного винаходу в також з оваріектомією. Дослід проводили з викопорівнянні з існуючим рівнем техніки, то слід сперистанням доз антипрогестину (І) 0,5, 2,0, 5,0 і ціально відзначити, наприклад, що побічні дії у 10,0мг/кг, які вводяться підшкірно (s.c); відношенні ендокринної системи при використанні на Фіг.3 - дія антипрогестину (І) у відношенні антипрогестину (І) згідно із даним винаходом на попередження розвитку пухлини в щурів з індуковідміну від дії, наприклад, андрогену, естрогену ваною НММ карциномою молочної залози, у поріабо глюкокортикоїду, є дуже слабкими або взагалі внянні з контролем, обробкою антиестрогенами відсутні. Завдяки високій біологічній доступності ралоксифеном і тамоксифеном, інгібітором аромаантипрогестину (І) його можна вводити орально, тази летрозолом, а також з оваріектомією; 7 75615 8 тим самим створюючи максимальну зручність для Gebiete, вид-во Cantor KG, Aulendorf in пацієнта, який потребує такого лікування. Ще одніWürttemberg, 1971]. єю перевагою є те, що антипрогестин (І) має хоАнтипрогестини, які можна застосовувати для рошу переносимість і його можна вводити в порівцілей даного винаходу, переважно антипрогестин няно малих дозах у порівнянні з дозами лікарських (І) або його фармацевтично прийнятне похідне або засобів, що використовуються при загальноприйаналог, можна включати до складу фармацевтичнятих методах лікування, зменшуючи тим самим них композицій за допомогою відомих методів принебажані побічні дії, такі як підвищення частоти готування галенових форм для орального або павиникнення раків ендометрію, пов'язані з введенрентерального, наприклад, ням тамоксифену [див. I.N. White, Carcinogenesis, внутріошньочеревинного, внутрішньом'язового, 20(7): 1153-1160, 1999; L. Berman і ін., The Lancet, підшкірного або черезшкірного введення. їх можна т.356, Sept. 9, 2000, 881-887], а також антиглюкотакож імплантувати у тканину. Імплантати можуть кортикоїдні дії і деякі токсичні дії, пов'язані з ввемістити інертні матеріали, наприклад, біорозкладні денням міфепристону [див. D. Perrault і ін., J. Clin. полімери і синтетичні силікони, такі, наприклад, як OncoI, 1996 Oct., 14(10), стор.2709-2712; L.M. силіконовий каучук. Kettel і ін., Fertil. Steril, 1991, Sep., 56(3), стор.402Їх можна вводити у формі таблеток, пігулок, 407; X. Bertagna, Psychoneuroendocrinology,1997, драже, гелевих капсул, гранул, супозиторіїв, ім22 додат.1; стор.51-55]. плантатів, ін'єкованих стерильних водних або масЩе одна перевага даного винаходу в порівляних розчинів, суспензій або емульсій, мазей, нянні з існуючим рівнем техніки полягає в розробці кремів, гелів або інтравагінальних (наприклад, ефективного способу профілактики гормонозалевагінальних кілець) або внутрішньоматкових сисжних захворювань, таких як рак молочної залози, тем (наприклад, діафрагм, петель). який дозволяє здійснювати заздалегідь лікування Для приготування фармацевтичних композипацієнтів, для яких існує високий ризик розвитку цій, призначених для орального введення, описані або рецидиву гормонозалежних захворювань, з вище антипрогестини, придатні для застосування метою попередження таких захворювань. згідно із даним винаходом, можна змішувати із Одним з об'єктів даного винаходу є спосіб широко відомими і загальноприйнятими допоміжпрофілактики або лікування раку молочної залози ними речовинами і носіями, такими, наприклад, як або інших гормонозалежних захворювань, який гуміарабік, тальк, крохмаль, цукри, такі, наприклад, полягає в тім, що ссавцю, переважно людині, що як маніт, метилцелюлоза, лактоза, желатин, повепотребує такої профілактики або лікування, вворхнево-активними речовинами, стеаратом магнію, дять принаймні один антипрогестин, переважно водними або неводними ексципієнтами, похідними антипрогестин (І) або його фармацевтично прийнпарафіну, зшиваючими агентами, розпушувачами, ятне похідне або аналог. емульгаторами, замаслювачами, консервантами і Наступним об'єктом даного винаходу є застокоригентами (наприклад, ефірними оліями). У фасування вказаних вище антипрогестинів, переважрмацевтичній композиції антипрогестин може знано антипрогестину (І) або його фармацевтично ходитися в диспергованому стані у вигляді мікроприйнятного похідного або аналога, для приготучастинок, наприклад, у вигляді наночастинок. вання лікарського засобу, призначеного, зокрема, Для додаткового підвищення біологічної досдля профілактики або лікування раку молочної тупності діючої речовини описані вище антипрогезалози або інших гормонозалежних захворювань. стини, придатні для застосування згідно із даним Ще одним об'єктом даного винаходу є фармавинаходом, можна включати до складу препаратицевтичні композиції, які містять принаймні один вної форми також у вигляді циклодекстринових вказаний вище антипрогестин, переважно антипклатратів, піддаючи їх взаємодії з -, - або рогестин (І) або його фармацевтично прийнятне циклодекстринами або їх похідними відповідно до похідне або аналог. Антипрогестин (І) необов'язкометоду, описаному в РСТ/ЕР95/02656. во можна застосовувати в сполученні з іншими Для парентерального введення описані вище агентами, які мають фармацевтичну активність. антипрогестини, придатні для застосування згідно Наприклад, антипрогестин можна застосовувати в із даним винаходом, можна розчиняти або суспенсполученні з цитотоксичним агентом для лікування дувати у фізіологічно прийнятному розріджувачі, шляхом зв'язування з рецептором гормону. такому, наприклад, як олії, разом із солюбілізатоПриготування лікарських засобів можна здійсрами, поверхнево-активними агентами, диспергунювати за допомогою методів, відомих у даній вальними агентами або емульгаторами або без галузі. Можна застосовувати широко відомі і заганих. Прикладами олій, які можна застосовувати льноприйняті допоміжні речовини, а також інші (але не обмежуючись ними), є маслинова олія, прийнятні носії або розріджувачі. Як прийнятні ноарахісова олія, бавовняна олія, соєва олія, рицисії і допоміжні речовини можна використовувати нова олія і кунжутна олія. сполуки, рекомендовані для застосування у фарПризначена для введення кількість (тобто мацевтиці, косметиці і споріднених галузях, які «фармацевтично ефективна кількість») змінюється описані в: [Ullmann's Encyclopedia of Technical в широких межах і залежить від стану, який підляChemistry, т.4, (1953), стор.1-39; Journal of гає лікуванню, і шляху введення. Вона може являPharmaceutical Sciences, т.52 (1963), стор.918 і ти собою будь-яку кількість, яка є ефективною для далі; H.v.Czetsch-Lindenwald, "Hilfsstoffe fur здійснення потрібного лікування. Визначення «фаPharmazie und angrenzende Gebiete"; Pharm. Ind.2, рмацевтично ефективної кількості» знаходиться в 1961, стор.72 і далі; Dr. H.P. Fiedler, Lexikon der компетенції фахівця в даній галузі. Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Одна стандартна доза може містити приблиз 9 75615 10 но від 0,1 до 100мг діючих(ої) речовин(и). Для введнів здійснювали наступні види обробки: 1) обробдення людині добова доза діючих(ої) речовин(и) ка розчинником як контроль, 2) оваріектомія перед становить приблизно від 0,1 до 400мг, переважно початком досліду, 3) тамоксифен 1мг/кг s.c, 4) анвід 10 до 100мг, найбільш переважно 50мг. типрогестин (І), 3мг/кг s.c. протягом 6 днів на тижФармацевтичні композиції за винаходом мождень. Щотижня шляхом пальпації здійснювали на вводити також шляхом ін'єкції депо, імплантату виявлення пухлин молочної залози в щурів. Як або ВМС (внутрішньоматковий протизаплідний критерій оцінки профілактичної дії приймали відзасіб), який необов'язково забезпечує уповільнене носну кількість випадків розвитку пухлини (кільвивільнення діючих(ої) речовин(и). кість тварин з пухлиною/групу, у %). Більш доклаПереважним шляхом введення є оральне введний опис і оцінка моделі, призначеної для дення. Антипрогестини, придатні для застосування вивчення запобігання розвитку індукованих ДМБА і відповідно до винаходу, зокрема, антипрогестин (І) НММ пухлини, наведені в [R.G. Metha, European або його фармацевтично прийнятне похідне або Journal of Cancer 36 (2000), стор.1275-1282]. аналог, найбільш переважно вводять оральним Результати: шляхом. У контрольній групі у всіх щурів протягом 10 Згідно з усіма об'єктами даного винаходу притижнів після обробки відбувалося утворення пухнаймні один з описаних вище антипрогестинів, лин молочної залози (зустрічальність 100%) і спозокрема, антипрогестин (І) або його фармацевтичстерігався прогресивний ріст пухлини. Профілакно прийнятне похідне або аналог, можна застосотичне лікування антипрогестином (І) повністю вувати також у сполученні принаймні з одним анзапобігало розвитку пухлини протягом 12 тижнів, а тиестрогеном, оскільки для багатьох після закінчення експерименту через 22 тижні пухгормонозалежних захворювань, зокрема для раку лина була виявлена лише в одного щура (зустрімолочної залози, характерна наявність не тільки чальність 10%). У 40% щурів, підданих оваріекторецепторів прогестерону, але також і рецепторів мії, до моменту закінчення експерименту були естрогену. Антиестроген можна вводити як одновиявлені розвинуті пухлини. У порівнянні з цими часно, так і послідовно з антипрогестином, і, зокданими обробка антиестрогеном тамоксифеном рема, з антипрогестином (І) або його фармацевтиприводила до зниження кількості випадків розвитчно прийнятним похідним або аналогом. Кількість ку пухлини тільки до 60%. антипрогестину й антиестрогену можуть бути одВисновки: наковими або один з компонентів може бути приПри дослідженні на моделі індукованої ДМБА сутнім у більшій кількості, ніж інший, наприклад, пухлини молочної залози шурів антипрогестин (І) співвідношення антипрогестин:антиестроген може повністю пригнічував розвиток пухлини в інтактних становити від 1:50 до 50:1, переважно від 1:30 до тварин протягом більш ніж 12 тижнів після початку 30:1, і найбільш переважно від 1:15 до 15:1. обробки. Дані, наведені на Фіг.1, свідчать про те, Прикладами антиестрогенів, які можна застощо ефективність антипрогестину (І) при профілаксовувати відповідно до винаходу, є нестероїдні тичному лікуванні перевищує ефективність звиантиестрогени, такі як тамоксифен і нафоксидин, а чайно застосовуваного для лікування раку молочтакож ралоксифен і ЕМ800 і стероїдний антиестроної залози агента тамоксифену і навіть ген фаслодекс. Прикладами стероїдних антиестефективність стандартної терапії, заснованої на рогенів є сполуки, описані в ЕР 0348341 А і сполудепривації естрогену (оваріектомія). Таким чином, застосування антипрогестину (І) є більш ефективки, описані в WO 98/07740, зокрема, 11 -фтор-7 ним у порівнянні з загальноприйнятою стандарт{5-[Ν-метил-Ν-3-(4,4,5,5,5ною терапією у відношенні попередження раку пентафторпентилтіопропіламіно]пентил}естрамолочної залози в жінок, які мають високий ризик 1,3,5(10)-триєн-3,17 -діол, або сполуки, описані в розвитку захворювання (профілактична терапія з WO 99/33855, зокрема, 11 -фтор-7 -{5-[метилвикористанням тамоксифену). (7,7,8,8,9,9,10,10,10Ці і наведені далі результати свідчать про те, нонафтордецил)аміно]пентил}естра-1,3,5(10)що застосування антипрогестину (І) для профілактриєн-3,17 -діол або їх фармацевтично прийнятні тики і лікування раку молочної залози є більш похідні або аналоги. Як антиестрогени можна заефективним у порівнянні з загальноприйнятими стосовувати також інгібітори ароматази, які мають стандартними терапевтичними методами лікуванантиестрогенну активність, такі, наприклад, які ня. описані на [стор.7-8 ЕР 0495825 В1]. Приклад 2: Нижче винахід проілюстрований на прикладах. Модель індукованого ДМБА раку молочної заСлід мати на увазі, що наведені нижче приклади лози в щурів (експеримент з вивчення терапевтичне обмежують обсяг винаходу. ної дії/вивчення залежності реакції від дози) Приклади Матеріали і методи Приклад 1: Дане дослідження проводили на статевонезріМодель індукованого ДМБА раку молочної залих самках щурів лінії Sprague-Dawley (віком 49-51 лози в щурів (вивчення попередження розвитку день; 10тварин/групу). Пухлини молочної залози раку) індукували шляхом однократного перорального Матеріали і методи введення 10мг 7,12-диметилбенз[а]антрацену Дане дослідження проводили на статевонезрі[ДМБА, фірма Serva, Гейдельберг]. Щурів, у яких лих самках щурів лінії Sprague-Dawley (віком 49-51 була виявлена принаймні одна пухлина, яка має день; 10тварин/групу). Канцероген 7,12розмір, що перевищує 150мм2, протягом 4 тижнів диметилбенз[а]антрацен (ДМБА) вводили перорапіддавали наступним обробкам: 1) розчинник (конльно у вигляді однократної дози (10мг). Через 20 11 75615 12 троль), 2) оваріектомія перед початком досліду, 3) лин молочної залози (зустрічальність 100%, див. антипрогестин (І), 0,5мг/кг s.c, 4) антипрогестин (І), Фіг.3) і спостерігався прогресивний ріст пухлини. 2мг/кг s.c, 5) антипрогестин (І), 5мг/кг s.c, 6) антипПрофілактичне лікування антипрогестином (І) поврогестин (I), 10мг/кг s.c. щодня і 7) онапристон, ністю запобігало розвитку пухлини протягом 12 5мг/кг, s.c. Як критерій для оцінки інгібування росту тижнів, а після закінчення експерименту через 27 використовували зміну площі пухлини (у % по відтижнів пухлина була виявлена лише в одного щуношенню до вихідного розміру пухлини), яку оціра (зустрічальність 10%). У порівнянні з цими данювали шляхом щотижневого вимірювання за доними обробка іншими антиестрогенами або інгібіпомогою циркуля. Для статистичного аналізу тором ароматази летрозолом приводила до відмінностей середніх значень між групами викозниження кількості випадків розвитку пухлини лиристовували критерій Крускала-Уолліса. ше до 20-60%. Наприкінці експерименту 20% щуРезультати: рів, підданих оваріектомії, мали розвинуті пухлини. У інтактних контрольних тварин був виявлений Висновки: прогресивний ріст пухлини, у той час як у 90% підПри дослідженні на моделі індукованої НММ даних оваріектомії тварин був виявлений істотний пухлини молочної залози в щура антипрогестин (І) регрес пухлини. Лікування антипрогестином (І) у повністю пригнічував ріст пухлини в інтактних твадозах, що дорівнюють або перевищують 2мг/кг, рин протягом більш ніж 12 тижнів після початку приводило до істотного інгібування росту пухлини лікування. Ефективність профілактичного лікуванв порівнянні з контролем (див. Фіг.2). У цьому виня антипрогестином (І) з погляду зменшення кільпадку виявлена виражена залежність реакції від кості випадків виникнення пухлини і росту пухлини дози. У той час як лікування з використанням перевищувала ефективність лікування антиестро0,5мг/кг антипрогестину (І) не приводило до істотгенами, які звичайно застосовують для лікування ного інгібування росту пухлини, при використанні раку молочної залози (тобто ралоксифеном, тамодози 2мг/кг спостерігалися максимальне інгібуванксифеном), і інгібітором ароматази летрозолом, а ня росту. У цій групі в 50% щурів був виявлений також ефективність стандартної терапії, засноваповний регрес пухлини. Вплив максимальної виної на депривації естрогену (оваріектомія). вченої в даному експерименті дози антипрогестиЯк і у випадку моделі пухлини, індукованої ну (І) (10мг/кг), виявився порівнянним із впливом ДМБА (див. приклад 1), ці результати свідчать про дози 2мг/кг. Онапристон (5мг/кг, s.c.) виявився істе, що ефективність антипрогестину (І) у віднототно менш ефективним, ніж антипрогестин (І), при шенні попередження розвитку пухлин молочної застосуванні в порівнянних дозах. залози перевищує ефективність стандартного Висновки: профілактичного лікування, наприклад, з викорисПри дослідженні на моделі індукованої ДМБА танням тамоксифену. пухлини молочної залози в щурів антипрогестин (І) Приклад 4: повністю пригнічував ріст пухлини в інтактних тваМодель індукованого НММ раку молочної зарин. Було встановлено, що максимальна дія на лози в щурів (вивчення терапевтичної дії) ріст пухлини досягався при використанні дози анМатеріали і методи типрогестину (І), що становить 2мг/кг. ЕфективСамкам щурів лінії Sprague-Dawley [отриманих ність антипрогестину (І) істотно перевищувала від фірми Tierzucht Schonwalde, вік 50-55 днів] інефективність онапристону. дукували пухлини шляхом однократної внутрішПриклад 3: ньовенної ін'єкції НММ (нітрозометилсечовина, Модель індукованого НММ раку молочної за50мг/кг). Через 10 днів щурів, у яких була виявлелози в щурів (вивчення попередження розвитку на принаймні одна пухлина, піддавали протягом 4 раку) тижнів наступним обробкам: 1) розчинник (контМатеріали і методи роль), 2) оваріектомія перед початком досліду, 3) У самок щурів лінії Sprague-Dawley [отриманих антипрогестин (І), 1,0мг/кг/день, 4) антипрогестин від фірми Tierzucht Schonwalde, вік 50-55 днів] ін(І), 0,5мг/кг/день і 5) онапристон, 5мг/кг. дукували пухлини шляхом однократної внутрішЯк критерій для оцінки інгібування росту виконьовенної ін'єкції НММ (нітрозометилсечовина, ристовували зміну площі пухлини (у % по відно50мг/кг). Через 10 днів тварин піддавали наступшенню до вихідного розміру пухлини), яку оцінюним обробкам: 1) розчинник (контроль), 2) оваріеквали шляхом щотижневого вимірювання за томія перед початком досліду, 3) тамоксифен, допомогою циркуля. Для статистичного аналізу 3мг/кг s.c, 4) антипрогестин (І), 3,0мг/кг s.c, 5) летвідмінностей середніх значень між групами викорозол 3мг/кг s.c, 5) ралоксифен, 3мг/кг s.c. шість ристовували критерій Крускала-Уолліса. разів на тиждень. Щотижня щурів обстежували у Результати: відношенні наявності пухлин шляхом пальпації. Як У інтактних контрольних тварин був виявлений критерій для оцінки профілактичної дії приймали прогресивний ріст пухлини, у той час як оваріектовідносну кількість випадків розвитку пухлини (кільмія приводила до повного інгібування росту пухликість тварин з пухлиною/групу, у %). Більш доклани. Введення антипрогестину (І) у дозах 0,5 або дний опис і оцінка моделі, призначеної для ви1,0мг/кг приводило до істотного інгібування росту вчення запобігання розвитку індукованої ДМБА і пухлини в порівнянні з контролем (див. Фіг.4). НММ пухлини, наведені в [R.G. Metha, European Онапристон (5мг/кг) виявився значно менш ефекJournal of Cancer 36 (2000), стор.1275-1282]. тивним, ніж антипрогестин (І), який вводиться в Результати: істотно меншій дозі 0,5мг/кг. У контрольній групі у всіх щурів протягом 10 Висновки: тижнів після обробки відбувалося утворення пухУ дослідах на моделі індукованої НММ пухли 13 75615 14 ни молочної залози в щурів встановлено, що ан(оваріектомії), яка у даний час вважається метотипрогестин (І) повністю пригнічував ріст пухлини в дом інгібування росту пухлини молочної залози інтактних тварин. Було встановлено, що антипропри використанні даної моделі, який має максимагестин (І), який вводиться в дозі 1,0мг/кг і навіть у льну ефективність. дозі, що становить лише 0,5мг/кг, істотно впливав Приклад 6: на ріст пухлини. Таким чином, ефективність антиКсенотрансплантат клітин людської пухлини прогестину (І) перевищує ефективність відомих лінії MCF7 (вивчення терапевтичної дії) антипрогестинів, таких як онапристон. Матеріали і методи: Приклад 5: Самкам безтимусних мишей лінії Fox Chase Ксенотрансплантат клітин людської пухлини [фірма М&В] вводили пелети естрадіолу [фірма лінії T47D (вивчення терапевтичної дії) Innovative Research of America]. Клітини лінії MCF7 Матеріали і методи раку молочної залози, отримані з клітинної культуСамкам безтимусних мишей лінії Fox Chase ри і суспендовані в матригелі, імплантували s.c. у [фірма М&В] вводили пелети естрадіолу [фірма пахвинну ділянку мишей. Обробку починали після Innovative Research of America]. Клітини лінії T47D того, як пухлини досягали розміру приблизно раку молочної залози, отримані з клітинної культу25мм2. Обробку продовжували доти, поки продоври і суспендовані в матригелі, імплантували s.c. у жувався розвиток пухлини. В експерименті викопахвинну ділянку мишей. Обробку починали після ристовували наступні групи тварин: 1) контрольна того, як пухлини досягали розміру приблизно група (оброблена носієм), 2) група, піддана оваріе25мм2. Обробку продовжували доти, поки продовктомії, 3) група, яка оброблена антипрогестином жувався розвиток пухлин. В експерименті викорис(І), 10мг/кг s.c. Площу пухлини визначали за допотовували наступні групи тварин: 1) контрольна могою циркуля. Для статистичного аналізу відмінгрупа (оброблена носієм), 2) група, піддана оваріеностей середніх значень між групами використовуктомії, 3) група, яка оброблена антипрогестином вали критерій Крускала-Уолліса. (І), 10мг/кг s.c. Площу пухлини визначали за допоРезультати: могою циркуля. Для статистичного аналізу відмінУ дослідах з використанням моделі раку молоностей середніх значень між групами використовучної залози лінії MCF7 оваріектомія приводила до вали критерій Крускала-Уолліса. істотного інгібування росту пухлини в порівнянні зі Результати: швидким ростом у контролі. Дані, наведені на У дослідах з використанням моделі раку молоФіг.6, свідчать про те, що введення антипрогестичної залози T47D оваріектомія приводила до істону (І) s.c. у дозі 10мг/кг також приводило до інгібутного інгібування росту пухлини в порівнянні зі вання росту пухлини, практично порівнянному з швидким ростом у контролі. Дані, наведені на дією звичайної терапії, призначеної для депривації Фіг.5, свідчать про те, що введення антипрогестиестрогену (оваріектомії). ну (І) у дозі 10мг/кг s.c. також викликає інгібування Висновки: росту пухлини, практично порівнянне з дією звиДія антипрогестину (І) у відношенні інгібування чайної терапії, заснованої на депривації естрогену росту клітин лінії MCF7 раку молочної залози лю(оваріектомія). дини, ксенотрансплантованих безтимусним мишам Висновки: лінії Fox Chas, виявилася порівнянною з дією звиДія антипрогестину (І) у відношенні інгібування чайної терапії, призначеної для депривації естроросту клітин T47D раку молочної залози людини, гену (оваріектомії), яка у даний час вважається ксенотрансплантованих безтимусним мишам лінії методом інгібування росту пухлини молочної залоFox Chas, виявилася порівнянною з дією звичайної зи при використанні даної моделі, який має макситерапії, призначеної для депривації естрогену мальну ефективність. 15 Комп’ютерна верстка О. Гапоненко 75615 Підписне 16 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601