Склад альтернативного субстрату для вирощування лікувального гриба ganoderma lucidum (curt:fr) p. karst

Реферат: Склад альтернативного субстрату для вирощування лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt:Fr) P. Karst, компоненти якого ретельно подрібнюють і щільно утрамбовують у блоки, які автоклавують протягом двох годин при Ρ=2 атм, охолоджують та додають поживне середовище, знов автоклавують 0,5 години при Ρ=0,5 атм, потім інокулюють зерновим міцелієм другої генерації, проводять інкубацію у термостатованому приміщенні при температурі 2628 °C. Як компоненті субстрату використовують солому різних злакових культур. Як поживне середовище містить гречане борошно, гіпс. UA 79338 U (12) UA 79338 U UA 79338 U 5 10 15 20 25 30 35 Склад альтернативного субстрату для вирощування лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt:Fr) P. Karst. Корисна модель належить до біотехнології, а саме до вирощування лікувального гриба Ganoderma lucidum (G. Lucidum) з метою одержання плодових тіл, що використовуються у фармокології. Лікувальний гриб G. lucidum один з відомих базидіальних грибів, який за своїми характеристиками не поступається відомим лікувальним рослинам, таким як женьшень, звіробій, календула. Плодові тіла, міцелій та спори G. lucidum містять приблизно 400 різних біологічно активних компонентів, які переважно включають тритерпеноїди, полісахариди, нуклеотиди, стероли, стероїди, жирні кислоти, флавоноїди, кумарини, протеїни та інші речовини. [S. Wasser Reishi or Ling Zhi (Ganoderma lucidum) / Enciclopedia of dietary supplements.-2005]. Гриб G. lucidum належить до дереворуйнуючих базидіоміцетів, що утворюють білу гниль деревини. Плодові тіла гриба синтезують цілий ряд біологічно активних речовин, що мають лікарські властивості, а також мультиферментний комплекс, що приймає участь у деградації лігніну. [Королева О.В. Лакказы базидиомицетов: свойства, структура, механизм действия и практическое применение/Диссертация доктора биологическх наук. - Москва, 2006. - С. 1-2]. При культивуванні лікувального гриба G. lucidum, з метою отримання плодових тіл, використовують різноманітні субстрати різного складу. Оскільки основними виробниками цього гриба у великих обсягах та препаратів на його основі є країни Східної Азії (Китай, Японія, В'єтнам), використовувані у цих країнах субстрати не можуть вироблятися в умовах України, яка має іншу структуру рослинництва та сільського господарства. Тому для вирощування лікувального гриба G. lucidum на Україні, необхідно створити нові субстрати з компонентів, що вирощуються у наших природних умовах. Досягнутий рівень у даній галузі характеризується наступними прикладами. Відомий спосіб отримання плодових тіл на целюлозовмісних рештках лушпиння соняшнику. [Гриб вешенка. Технология выращивания / Медведев В.Α. // Москва.-1993, -С. 10-17]. Цей метод здійснюють таким чином: спочатку відварюють лушпиння протягом 20-25 хвилин, автоклавують, фасують субстрат, повторно автоклавують та інокулюють маточною культурою, яку попередньо вирощують на середовищі сусло-агар. Недоліком способу є те, що лушпиння соняшника, незважаючи на технологічність і відсутність необхідності подрібнення - складний субстрат. Лушпиння треба використовувати свіже, тому що при тривалому зберіганні воно сильно інфікується і стає непридатним для культивування грибів. Негативним також є те, що влітку через сильний нагрів блоку у середині, міцелій гине і працювати на цій сировині можна лише з жовтня по травень. У зв'язку з цим, вирощування G. lucidum на цьому субстраті недоцільне. Відомі субстратні суміші для інтенсивного культивування цього гриба [Морозов А.И. Лекартсвенные грибы. - Μ.: ACT; Донецк: Сталкер, 2003] (прототип) представлені у таблиці 1. Таблиця 1 Варіант 1. Основа, % Тирса листяних порід Склад субстратної суміші Поживні додатки, % 80 Мінеральні додатки, % Гіпс, 1 Висівки зернових культур 18 сахароза 1 2. Тирса, щепа 50 25 Висівки зернових культур 20 Гіпс 3. Тирса, льону 50 35 Висівки, просо, ячмінь костра 5 5 Гіпс 2-5 2 3 40 45 В природних умовах врожай грибів залежить від живильних властивостей і фізичної структури деревини. Ці ж параметри впливають на ріст G. lucidum при його інтенсивному культивуванні. Тирсові субстрати промивають у проточній воді, кип'ятять, відціджують, охолоджують, автоклавують 2 години при 2 атм, додають поживні додатки, фасують, повторно автоклавують, після чого інокулюють зерновим міцелієм. Недоліком цих сумішей є те, що субстрати на основі деревини досить коштовні, крім того бідні поживними речовинами, тому формування плодових тіл відбувається досить повільно. Цей період досягає чотирьох місяців з моменту інокуляції субстрату. 1 UA 79338 U 5 10 15 20 25 30 35 Задачею, на рішення якої спрямована пропонована корисна модель, є розробка складу альтернативного субстрату, який би відповідав усім вимогам процесу вирощування лікувального гриба G. Lucidum, зменшував термін виробництва та забезпечував зниження собівартості продукту. Поставлена задача вирішується складом альтернативного субстрату для вирощування лікувального гриба G. lucidum, компоненти якого ретельно подрібнюють і щільно утрамбовують у блоки, які автоклавують протягом двох годин при Ρ = 2 атм, охолоджують та додають поживне середовище, знов автоклавують 0,5 години при Ρ = 0,5 атм, потім інокулюють зерновим міцелієм другої генерації, проводять інкубацію у термостатованому приміщенні при температурі 26-28 °C, який відрізняється тим, що як компоненти субстрату використовують солому різних злакових культур у наступному співвідношенні, мас. %: солома пшениці - 50, солома вівса - 20, солома ячменю - 20, а як поживне середовище, мас. %: гречане борошно - 8, гіпс - 2, що дозволяє прискорити ріст і підвищити врожайність лікувального гриба G. lucidum у 2 рази. Спільними ознаками з прототипом є процес підготовки блоків із субстратом: фасування у блоки, автоклавування, інокуляція - внесення маточної культури, яку попередньо вирощують на щільному зерновому субстраті. Відмінними ознаками винаходу є те, що у субстраті використовують солому злакових культур, яку можна використовувати протягом усього року, у той час як тирсу - тільки у холодні місяці року. Є можливість тривалого зберігання соломи, тоді як тирсу деревини потрібно використовувати одразу, через її нестійкість до зараження чужорідними мікроорганізмами. Запропонований склад субстрату для отримання плодових тіл реалізується наступним чином. Складові субстрату беруть у співвідношеннях, мас. %: солома пшениці - 50, солома ячменю - 20, солома вівса - 20, гречане борошно - 8, гіпс - 2. Солому дрібно нарізають та щільно утрамбовують у блоки, автоклавують протягом 2 годин при Ρ = 2 атм, охолоджують до кімнатної температури та додають поживні додатки - гречане борошно та гіпс, знов автоклавують при Ρ = 0,5 атм, 0,5 год. Блоки охолоджують до 23-25 °С та інокулюють посівним міцелієм другої генерації. Інокуляцію проводять перемішуванням маточної культури з солом'яним субстратом, або вкладанням посівного міцелію в розрізи на поверхні блоків (вміст зернового міцелію 3-5 % від ваги субстрату). Інокуляцію міцелієм, вирощеним на рідкому середовищі здійснюють шляхом Ін'єкцій його всередину та по периметру блоку. Проінокульовані блоки з субстратом витримують у термостатному приміщенні, температурний режим якого 26-28 °C є оптимальним для росту вегетативного міцелію. Після повної колонізації грибом субстрату, параметри культивування змінюють на такі, що необхідні для формування примордіїв та стимуляції утворення І росту плодових тіл. Дані по культивуванню наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Період росту Ріст міцелію Утворення примордіїв Утворення плодових тіл Вологість, % 60-70 80-90 80-90 Освітлення, люкс 0 100-200 150-200 Т, °C 25-28 20-25 20-25 Час, доба 18-22 7-10 20-26 40 45 50 Лабораторні дослідження по використанню пропонованого альтернативного субстрату проводились на кафедрі мікробіології, вірусології та біотехнології Одеського національного університету ім. І.І. Мечникова. Після інокуляції в лабораторних умовах солом'яних блоків ознаки обростання їх міцелієм спостерігалися через 10-14 діб. На фото 1 видно обростання блоку міцелієм G. lucidum на 10 добу, а повне заростання усього блоку міцелієм спостерігалось через 22 доби. Міцелій був білого кольору, монолітний, шкіроподібний, з грибним ароматом. Наприкінці 26 доби на поверхні міцелію з'явилися примордії, ріст яких був у середньому 0,5-1 см на добу. На фото 2 відображено утворення примордіїв через 40 діб. На фото 3, 4 відображено утворення та ріст плодових тіл через 50 діб. На фото 5 відображено блок пропонованого субстрату з плодовими тілами G. lucidum, через 60 діб, що готові для збирання, З блоку вагою 10 кг через 60 діб було знято 115 плодових тіл різних розмірів. Їх вага у сирому вигляді складала 970 г. 2 UA 79338 U Врожайність ганодерми обраховували визначенням відношення маси свіжих плодових тіл до маси субстрату, вона склала 97 г/кг. У той час як середня врожайність G. lucidum складає 5-6 % від маси субстрату, наш врожай був на рівні майже 10 %, тобто удвічі більше. 5 10 15 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Склад альтернативного субстрату для вирощування лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt:Fr) P. Karst, компоненти якого ретельно подрібнюють і щільно утрамбовують у блоки, які автоклавують протягом двох годин при Ρ=2 атм, охолоджують та додають поживне середовище, знов автоклавують 0,5 години при Ρ=0,5 атм, потім інокулюють зерновим міцелієм другої генерації, проводять інкубацію у термостатованому приміщенні при температурі 26-28 °C, який відрізняється тим, що як компоненти субстрату використовують солому різних злакових культур у наступному співвідношенні, мас. %: солома пшениці - 50, солома вівса - 20, солома ячменю - 20, а як поживне середовище, мас. %: гречане борошно - 8, гіпс - 2, що дозволяє прискорити ріст і підвищити врожайність лікувального гриба G. lucidum у 2 рази. 3 UA 79338 U 4 UA 79338 U 5 UA 79338 U Комп’ютерна верстка С. Чулій Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6