Комплекс бромелайну з арабіногалактаном, який має антитромбну активність

Реферат: UA 83596 U UA 83596 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до харчової промисловості, зокрема до комплексу бромелайну з арабіногалактаном, який має антитромбну активність. Даний комплекс може бути використано як дієтична добавка. Відома дієтична добавка, що містить у складі арабіногалактан із дигідрокверцетином та аскорбіновою кислотою - препарат Діквертокс. За рахунок такого компонентного складу препарат має комплексний механізм захисної дії при грипі та ГРВІ, у тому числі імуностимулюючу, і ангіопротекторну дію. Останнє особливо важливо у випадку грипозної інфекції, оскільки головною ланкою в патогенезі грипу є ураження судинної системи, що приводить до геморагічних проявів та набряку легень. (Заявка РФ на изобретение № 2008135221/15). Відомий також наноструктурований напівсинтетичний гепариноїд -"Агсулар", що представляє собою сульфатований арабіногалактан у вигляді калієвої солі. Препарат є антикоагулянтом прямої дії і гіполіпідемічним засобом. "Агсулар", має не тільки гіполіпідемічну дію, а й антиатеросклеротичний ефект, що полягає в профілактиці утворення атеросклеротичних бляшок в аорті. (Заявка РФ на изобретение № 2008738075). Окрім того, відомий комплекс ніфедепіну з арабіногалактаном (див. патент РФ № 2391980). Але відомий комплекс не має антитромбної активності. З науково-технічної і патентної літератури заявнику невідомо комплекс бромелайну з арабіногалактаном. В основу корисної моделі поставлено задачу створити новий, раніше не відомий комплекс бромелайну з арабіногалактаном, який має антитромбну активність. Поставлена задача вирішена створенням комплексу бромелайну з арабіногалактаном сосни Pinus silvestris при їх масовому співвідношенні рівному 1:1, який має антитромбну активність. Як на Україні так і за її межами такий комплекс з антитромбною активністю відсутній. Комплекс арабіногалактану з протеолітичним ферментом бромелайном отримували, варіюючи масову частку бромелайну в розчині від 0,1 до 1,0 %, арабіногалактану - від 0,1 до 2,5 % при співвідношенні об'ємів водних розчинів ферменту та полісахариду (1-2):(2:1), при t=22 °C. Отримані зразки висушували. Для визначення тривалості процесу комплексоутворення контролювали активність ферменту в складі комплексу через кожні 15 хвилин протягом години. Арабіногалактан одержували біотехнологічним способом із тирси сосни Pinus silvestris. Приклад. Готували 0,5 %-ні розчини арабіногалактану й бромелайну шляхом розчинення наважок у 3 дистильованій воді при 22 °C і перемішуванні. До розчину арабіногалактану 100 см додавали 3 при перемішуванні 100 см розчину бромелайну. Суміш витримували при температурі 22 °C протягом 30 хвилин. Комплекс висушували при температурі 40 °C, використовуючи конвекційну сушку. Отримано 0,975 г. В отриманому комплексі співвідношення арабіногалактану:бромелайн 1:1 (на суху речовину). Активність ферментної складової комплексу сягає 80 % від активності нативного ферменту. рН оптимум вільного бромелайну знаходиться біля 6 од. Оптимальне значення рН для бромелайну в складі комплексу знаходиться в межах 6-8 (рис. 1). Термооптимум складає 50 °C (рис. 2). Термостабільність ферменту в отриманому продукті визначали при фізіологічних значеннях температури (37 °C) та температурі 50 °C. Бромелайн при зазначених температурах має сталу активність. У комплексі з арабіногалактаном за цих умов його активність поступово зростає до максимальної (рис. 3, 4). При 37 °C максимальної активності фермент у комплексі досягає при 4,5 год. (рис. 3), у той час як при 50 °C - за 3 год. (рис. 4). Це свідчить, що комплекс проявляє пролонговану дію. Додатковим підтвердженням утворення комплексу арабіногалактан - бромелайн є результати дослідження отриманого продукту методами гель-хроматографії, ІЧ-спектроскопії, ЯМР-спектроскопії. Вихідні криві елюції арабіногалактану та ферменту на сефадексі G-75 представлено на рис. 5, 6, а продукту їх взаємодії - на рис. 7. Піки полісахаридної та білкової складових сумісні, і об'єм їх виходу відповідає значенню молекулярної маси блакитного декстрану 90 kDa і є адитивною величиною молекулярних мас арабіногалактану (65 kDa) та бромелайну (33 kDa). У порівнянні з ІЧ-спектрами вихідних сполук, у спектрі продукту взаємодії арабіногалактан бромелайн має місце зміщення смуги поглинання карбонільних груп у низькочастотну область; смуги поглинання гідроксильних груп - у високочастотну; смуга поглинання груп NH 2 у спектрі -1 комплексу знаходиться при 3305-3345 см , тоді як відповідна смуга поглинання в ІЧ-спектрі -1 бромелайну складає 3290-3417 см (рис. 8). 1 UA 83596 U 5 Отже, інтерпретація спектрів поглинання комплексу та його складових в інфрачервоній області показала, що взаємодія арабіноглактану з бромелайном супроводжується значними змінами в ІЧ-спектрі. 13 Комплексоутворення білка з полісахаридом підтверджено спектрами ЯМР С (рис. 9). Дієтичну добавку для покращення реологічних властивостей крові вживають перорально. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Комплекс бромелайну з арабіногалактаном сосни Pinus silvestris при їх масовому співвідношенні рівному 1:1, який має антитромбну активність. 2 UA 83596 U 3 UA 83596 U 4 UA 83596 U 5 UA 83596 U Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6