Застосування водного екстракту листя червоного винограду для попередження або затримки переходу від клінічно незначних ранніх стадій до і, іі або ііі стадії хронічної венозної недостатності

1. Застосування водного екстракту листя червоного винограду для приготування фармацевтичної або дієтичної композиції для попередження або затримки переходу від клінічно незначних ранніх стадій хронічної венозної недостатності (ХВН) до І, II або III стадії ХВН, де застосування включає введення ефективної кількості особі, яка цього потребує. 2. Застосування за п.1, у якому композиція є формою, придатною для перорального введення. 3. Застосування за п.1 або 2, у якому зазначений екстракт листя червоного винограду містить 2-20% флавоноїдів. 4. Застосування за п.3, у якому зазначений екстракт листя червоного винограду містить 2-10% флавоноїдів. 5. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, у якому флавоноїди містяться в діапазоні від 0,1 до 15% від загальної маси композиції. 2 (19) 1 3 85548 Винахід стосується способу покращення кровообігу і/або постачання киснем нижніх кінцівок. Хронічна венозна недостатність (XBH) є прогредієнтним захворюванням й у багатьох пацієнтів приводить, особливо при відсутності лікування, до набряків, вінцевої флебектазії (стадія І за Widmer), гіперпігментації, індурації, ліподерматосклерозу, білої атрофії шкіри (стадія II за Widmer) або варикозних виразок ніг (стадія III за Widmer). Гемодинаміка глибоких і поверхневих вен, що порушується хронічно через обструкцію венозних сегментів або недостатність клапанів звичайно приводить до шкірних захворювань на внутрішній стороні щиколоток. Розлад мікроциркуляції в шкірі, як передбачається, є основною причиною змін у шкірі, пов'язаних із хронічною венозною гіперволемією та підвищеним венозним кров'яним тиском [Int Angiol 14, 1995, сс.18-22.; Int J Місгосіrс 16, 1996, сс.259265]. Очевидно, що шкірна мікроангіопатія клінічної значимості, наприклад, розширені, звивисті капіляри, оточені мікро-набряками, сприяє ураженням шкіри в нижніх кінцівках і визначає курс XBH [Int Angiol 14, 1995, сс.18-22; Int J Місгосіrс 16, 1996, сс.259-265]. Застосування лазерного допплерівського методу при венозних розладах добре проілюстровано [Microvasc Res 58, 1999, сс.83-88; World J Surg 12, 1988, сс.724-731]. Були розроблені різні способи дослідження мікроциркуляції у дво х функціонально різних шарах шкіри: більш глибокому, переважно теплорегулюючому шарі, та поверхневому живильному шарі. Порушення мікроциркуляції в поверхневому живильному шарі вкрай важливі для трофічних змін у шкірі [World J Surg 12, 1988, сс.724-731; Eur J CHn Invest 29, 1999, сс.708-716]. [У патенті GB 934554] описано, що капілярна резистентність у морських свинок, що страждають від недостачі вітамінів, може бути підвищена шляхом внутрішньочеревного введення спиртового екстракту виноградного листя. [У заявці на патент WO 01/28363] описаний спосіб попередження або зменшення дискомфорту, що пов'язаний з слабкою або середньою хронічною венозною недостатністю нижніх кінцівок, за допомогою водних екстрактів листя червоного винограду. У ході клінічних досліджень несподівано було виявлено, що мікроциркуляція та постачання киснем переважно порушуються в області щиколоток у пацієнтів із XBH і можуть істотно покращитись в результаті перорального введення водних екстрактів листя червоного винограду. У зв'язку з цим, даний винахід стосується способу посилення кровообігу і/або доставки кисню до нижніх кінцівок, у якому передбачене введення ефективної кількості фармацевтичної або дієтичної композиції, що містить водний екстракт листя червоного винограду, суб'єкту, що потребує цього. Іншим об'єктом даного винаходу є спосіб попередження змін у шкірі, включаючи попередження появи кров'яних згустків у венах або запальних реакцій у малих судинах, асоційованих із хроніч 4 ною венозною недостатністю, хронічної венозної гіперволемії і/або підвищеного венозного кров'яного тиску в нижніх кінцівках; спосіб включає введення ефективної кількості фармацевтичної або дієтичної композиції, що містить водний екстракт листя червоного винограду, суб'єкту, що потребує цього. Даний винахід також стосується способу попередження або затримки переходу від клінічно несуттєвих ранніх стадій хронічної венозної недостатності (XBH) до стадій XBH І, II або III; спосіб включає введення ефективної кількості фармацевтичної або дієтичної композиції, що містить водний екстракт листя червоного винограду суб'єкту, що потребує цього. Фіг.1 показує схему проведеного клінічного дослідження. Фіг.2 показує вплив екстракту листя винограду на мікроциркуляцію, яка вимірюється лазерною допплерівською флоуметрією (ЛДФ 10-37 кГц). 360мг AS195 плацебо. Фіг.3 показує вплив екстракту листя винограду на черезшкірний парціальний тиск кисню (птО2). 360мг AS195 плацебо. Композиція відповідно до даного винаходу переважно містить рослинні інгредієнти, які одержані шляхом водної екстракції листя червоного винограду (folia vitis viniferae; Extractum Vitis viniferae e folium spissum et siccum) та придатний носій. Такий екстракт містить флавон(ол)-глікозиди, глюкуроніди та флавоноїди, серед яких основними активними інгредієнтами є кверцетин-3-O-b-Dглюкуронід та ізокверцитрин (кверцетин-3-О-βглюкозид). Діапазон їх фармакологічної активності ще повністю не з'ясований, але в дослідженнях in vitro встановлено, що вони мають антиоксидантні та протизапальні властивості та інгібують агрегацію тромбоцитів і гіалуронідазу, а також зменшують набряклість, можливо за рахунок зниження проникності капілярів. Передклінічні експерименти in vivo виявили протизапальну дію і дію, спрямовану на потовщення стінок капілярів. У кращому варіанті здійснення даного винаходу композиція представлена у формі, придатній для перорального введення, зокрема у твердій дозовій формі, наприклад, у формі капсули або таблетки, і містить від 20 до 60% водного екстракту листя червоного винограду з високим вмістом флавоноїдів - 2-15%. Іншою кращою дозовою формою є краплі, що містять від 3 до 90% екстракту. Також прийнятними формами для введення можуть бути таблетки з покриттям, сиропи і т.п.Найбільш кращими є капсули та таблетки з плівковим покриттям. Враховуючи вищесказане, основним об'єктом даного винаходу є композиція для попередження хронічної венозної недостатності нижніх кінцівок у слабкій або помірній формі, а також для зниження пов'язаного з нею дискомфорту. Також об'єктом даного винаходу є композиція для попередження слабкої або помірної форми 5 85548 хронічної венозної недостатності нижніх кінцівок і/або зниження пов'язаного з нею дискомфорту, що включає рослинні інгредієнти; композицію одержують відповідно до контрольованого процесу, що дозволяє зберегти цілющі властивості рослинних інгредієнтів. Ще одним об'єктом даного винаходу є композиція, що попереджує і/або зменшує дискомфорт, пов'язаний із хронічною венозною недостатністю нижніх кінцівок у слабкій або помірній формі. Крім того, об'єктом даного винаходу є композиція, що попереджує і/або зменшує дискомфорт, пов'язаний із хронічною венозною недостатністю нижніх кінцівок у слабкій або помірній формі, що включає рослинні інгредієнти й має мінімальні побічні ефекти, або не має їх, і тому безпечна для прийому усередину. Основне завдання даного винаходу полягає в приготуванні композиції для перорального введення, що містить водний екстракт, приготовлений із сухи х листя червоного винограду. Сухе листя винограду містить велику кількість біологічно активних флавоноїдів - від 2 до 20%, переважно від 2 до 10%. У контексті даного винаходу поняття «суб'єкт, що потребує цього» означає суб'єкта, у якого є присутнім хронічна венозна недостатність (XBH) на ранній, що клінічно не оцінюється як значима, стадії - І або II за Widmer. Як правило, такі пацієнти є дорослими людьми у віці від 30 до 80 років, краще від 32 до 76 років, середній вік становить (± середньоквадратичне відхилення) 55,2±7,7 років. Для більш докладного пояснення даного винаходу нижче приводяться приклади. Ці приклади приводяться тільки як ілюстрації варіантів здійснення даного винаходу та не призначені для будьякого обмеження його меж. Приклади, що далі приводяться, є ілюстративними і, за рішенням спеціаліста в даній галузі, конкретні умови можуть бути модифіковані, якщо, щодо окремих композицій, у цьому є потреба. Матеріали, що використовуються в тестах, які нижче приводяться, або комерційно доступні, або можуть бути ле гко приготовлені спеціалістом у даній галузі з комерційно доступних матеріалів. Основу композиції складає водний екстракт листя червоного винограду (foliae Vitis viniferae L.). Листя червоного винограду, що є ви хідним матеріалом для приготування екстракту, збирають під час оптимального вмісту флавоноїдів. Звичайно цей час збігається зі збором винограду. Листя ретельно висушують, і подрібнюють. Для екстракції листя ріжуть на шматочки, розмір яких переважно становить від 5 до 10 мм. Для досягнення високого вмісту флавоноїдів екстракцію проводять при підвищеній температурі, краще при температурі від 60° до 80°, впродовж, щонайменше, від 6 до 10год. Кращим є спосіб, що дозволяє здійснювати повну екстракцію. Одержуваний у ході екстракції так називаний рідкий екстракт можна безпосередньо використовувати для приготування рідких дозових форм. Для того, щоб одержати більш концентрований екстракт, бажано видаляти частину розчинника шляхом використання прийнятного випарника. 6 Густий екстракт, одержуваний на цій стадії, також можна безпосередньо використовувати для приготування рідких дозових форм. Для приготування твердих дозових форм густий екстракт висушують, наприклад, за допомогою камерного вакуумного сушіння або вакуумного конвеєра для висушування. Носії або ексципієнти можуть додаватися в ході сушіння для полегшення подальшої переробки екстракту. Такими носіями або ексципієнтами можуть бути діоксид кремнію, мальтдекстрин, глюкозний сироп, целюлоза та ін. Композицію для перорального введення одержують за допомогою звичайних те хнологій, що застосовуються у харчовій і фармацевтичній промисловості. Кращими формами для введення є таблетки, включаючи таблетки з покриттям, або капсули. Однак також можуть застосовуватися рідкі препарати, краще краплі. Найбільш кращими є таблетки з плівковим покриттям, що містять від 300 до 500 мг, краще від 320 до 400мг, найбільш краще приблизно 360 мг висушеного водного екстракту листя червоного винограду (4-6:1) (extractum vitis viniferae foliae aquosum siccum) і наступні ексципієнти: гіпромелоза, тристеарат гліцерину, діоксид титану (E171), тальк, червоний оксид заліза (E172), мікрокристалічна целюлоза, кроскармелоза натрію, кальцій фосфорнокислий двозаміщений (безводний), колоїдний кремній (безводний), стеарат магнію. У тексті даного винаходу нижче таблетки з плівковим покриттям називаються «AS 195». Для посилення кровообігу і/або доставки кисню до нижніх кінцівок композицію слід застосовувати в дозах, що містять від 80 до 1000мг екстракту, краще 300-800мг, найбільш краще 350-750 мг на добу. Загальна добова кількість екстракту може бути представлена в складі від 1 до 3 капсул або таблеток (або у вигляді еквівалентної дози в рідкій формі). Добову дозу слід застосовувати однократно, краще ранком. Виражене покращення симптомів можна очікувати не пізніше ніж через 6 тижнів постійного застосування. Оптимальний результат досягається або підсилюється при більш тривалому застосуванні. Методи Пацієнти Залучалися чоловіки та жінки у віці 18 років і більше з установленим діагнозом XBH або XBH І за Widmer, підтвердженим не менше року тому. Супутніх істотних захворювань не було. Не залучалися пацієнти, які застосовують лікарські засоби для полегшення симптомів XBH впродовж 4 тижнів або які лікувалися теофілліном, діуретиками, серцевими глікозидами, інгібіторами ангіотензінконвертуючого ферменту (АКФ) або антагоністами кальцію впродовж 8 діб до першого дослідження. Компресійний бандаж або супутня терапія при хворобах вен були заборонені під час участі в дослідженні. Схема та методи Було проведено подвійним сліпим методом рандомізоване з плацебо-контролем перехресне дослідження на основі принципів Гельсінської де 7 85548 кларації та Міжнародної конференції з гармонізації сумлінної клінічної практики. Кожен пацієнт бере участь у дослідженні впродовж 17 тижнів: один тиждень лікарські засоби не приймають (приймають плацебо), потім 6 тижнів займає період лікування (в 1 групі починають приймати AS 195, в 2 групі починають приймати плацебо), впродовж наступних 4 тижнів лікарські засоби не приймають (приймають плацебо) і потім впродовж 6-тижнів триває другий період лікування (в 1 гр упі продовжують приймати плацебо, в 2 гр упі AS 195). AS 195 (таблетки з плівковим покриттям, що містять по 360мг сухого екстракту листя червоного винограду) або таблетки плацебо беруть по рандомізованій схемі у вигляді однократної дози, що приймається вранці. Таблетки обох типів ідентичні за розміром, формою, вагою, виглядом внутрішнього вмісту та смаку. Для лазерної допплерівської флоуметрії устаткування було поставлено фірмою LMTB, Берлін, Німеччина (Lasermedizin 12, 1996, сс.163-171). Устаткування являє собою оснащений комп'ютером мобільний блок із частотою генерації лазера 785нм. Лазерний зонд фіксують на внутрішній поверхні щиколотки найбільш ураженої ноги на відстані 3,5см. Для адаптації до кімнатної температури пацієнти сидять впродовж 30хв., потім стоять впродовж 10хв., після чого починають проводити вимірювання (256 точок вимірювань, тривалість вимірювань: приблизно 0,4сек.). Відбите світло поглинається двома діодами в діапазоні частот між 0,2 та 37,2кГц. Дані обробляються за допомогою швидкого перетворення Фур'є. У підсумку забезпечується пропускна здатність частот у діапазоні від 0,2 до 10,0кГц для судин ретикулярного венозного сплетення (більші, переважно теплорегулюючі, судини з діаметром більше ніж 30мкм) і в діапазоні частот від 10,1 до 37,2кГц для капілярів у підсосочковому венозному сплетенні (поверхневі малі живильні судини діаметром від 6 до 30мкм). Черезшкірний тиск кисню (птО2) вимірюють, використовуючи модифіковані полярографічні електроди Кларка, що містять катоди із благородного металу та аноди з срібла/хлориду срібла (TCM 3, фірма Radiometer Copenhagen, BrØnshØj, Данія). Нагрівальний елемент, що знаходиться рядом з анодом, підтримує температуру тіла 43°C. При цій температурі артеріоли максимально розширені, птО2 наближається до птО2 артеріальній крові (World J Surg 12, 1988, сс.724-731). Електрод приєднують до поверхні шкіри за допомогою сполучного кільцевого пристрою, запов 8 неного фізіологічним розчином, на відстані 3,5см від лазерного допплерівського зонда. Для адаптації до кімнатної температури пацієнти сидять впродовж 30хв., потім стоять впродовж 10хв., після чого починають проводити вимірювання. Вимірювання займають приблизно 15хв. Значення птО2 виражають у мм ртутного стовпчика (мм.рт.ст.). Нормальні значення для верхньої поверхні стопи пацієнтів, що не мають XBH, варіюються у діапазоні від 40 до 80мм.рт.ст. Локальна температура тіла вимірюється за допомогою терморезистора, що закріплюється поруч із електродом кисню в області щиколотки. Для мінімізації ефектів шкірної перфузії вимірювання лазерної допплерівської фло уметрії (ЛДФ) та птО2 проводять при локальній температурі шкіри в діапазоні від 28 до 32°C. Окружності ікр і щиколоток вимірювали за допомогою сантиметра. Вимірювання щиколотки проводять у латеральному та медіальному напрямках, ікру заміряють посередині. Суб'єктивні симптоми XBH (утомлені важкі ноги, почуття напруженості, почуття поколювання та біль) вимірюють, використовуючи умовну шкалу в 10см, за якою 0см означає «зовсім ні», а 10см означають «дуже сильно». В цілому ефективність лікування оцінюється пацієнтами та дослідниками за 4-бальною умовною шкалою (гарна, задовільна, незадовільна та погана) наприкінці кожного періоду лікування. Загальна переносність оцінюється пацієнтами та дослідниками за 4-бальною умовною шкалою (гарна, задовільна, незадовільна та погана). При кожному візиті пацієнтів опитують про самопочуття в загальних термінах. Лабораторні захисні обстеження (гематологічні, клінічної біохімії та аналіз сечі) і загальний фізичний стан визначають під час дослідження двічі. Кров'яний тиск і пульс при сидячому положенні пацієнта визначають при кожному візиті. Результати Сімдесят один пацієнт, жінки та чоловіки у віці від 32 до 76 років, у яких була виявлена XBH І та II стадії за Widmer, включені в дослідження. Середній вік (± середньоквадратичне відхилення) становить 55,2±7,7 років; 55 жінок та 16 чоловіків. Флебологічний статус показує помірний або важкий варикоз в 47 (67,1%), пігментацію в 27 (38,6%), набряк щиколоток в 26 (37,1%) і набряк ніг в 25 (35,7%) пацієнтів. Слабкі ознаки атрофії спостерігаються в 13 пацієнтів (18,6%), випадків екземи не було (Табл. 1). Таблиця 1 Демографічні і показники та в ихідний рів ень XBH AS 195/плацебо (n=36) Плацебо/AS 195 (n=35) Безперерв ні в ипадков і в еличини (середнє значення (область значень, що замірюються) Вік (у роках) 66 (32-76) 66 (37-76) Ріст (см) 168(150-186) 165(150-191) Вага (кг) 76,5 (48-97) 73 (55-120) Індекс маси тіла (кг/м 2) 27,6 (20,6-32,0) 26,7(20,1-42,5) Систолічний тиск (мм.рт.ст) 130(100-150) 135 (120-140) Діастолічний тиск (мм.рт.ст.) 80 (60-90) 80 (65-90) 9 85548 10 Продов ження таблиці 1 Жінки Що курять І стадія II стадія Варикоз Пігментація Атрофія Екзема Набряк щиколоток Набряк нижніх кінців ок Категорійні змінні (п(%)) 24 (66,7) 4(11,1) Стадія XBH 26 (72,2) 10 (27,8) Флебологічний статус (помірний або в ажкий) 26 (72,2) 11 (30,6) 0 (0,0) 0 (0,0) 13 (36,1) 12 (33,3) Один 76-літній чоловік помер від серцевого нападу під час гри в теніс (одержував плацебо). Цей пацієнт був виключений з дослідження. У пацієнтів, що залишилися, не було зафіксовано порушень протоколу. Таким чином, всі 70 пацієнтів, що залишилися, продовжили дослідження (Фіг.1). Виходячи з характеристик пацієнтів, вони були рівномірно розподілені на дві групи (1 група та 2 31 (88,6) 1 (2,9) 23 (65,7) 12 (34,3) 22 (62,9) 17 (48,6) 0 (0,0) 0 (0,0) 14 (40,0) 14 (40,0) група), за винятком полової ознаки (12 чоловіків у групі 1, 4 чоловіків у групі 2) (табл. 1). Вихідні показники для лазерних допплерівських параметрів, черезшкірної оксиметрії та суб'єктивні симптоми зіставляють для групи 1 і групи 2 (табл. 2). Відповідність становила приблизно 100% в обох серіях лікування. Таблиця 2 Середні базов і показники (± середньокв адратичні в ідхилення) кожного періоду лікув ання 10-37кГц < 10 кГц Щиколотка Ікра Утомлені/в ажкі ноги Біль у ногах Почуття напруженості Почуття поколюв ання Період 1 Період 2 AS 195 (n=36) Плацебо (n=34) AS 195 (n=34) Плацебо (n=36) Лазерна допплерів ська флоуметрія (AU) 303,5 (135,2) 333,5 (153,0) 275,4 (126,4) 293,3(119,9) 352,7 (87,7) 370,8 (120,0) 174,7 (77,0) 189,4(67,6)Черезшкірна оксиметрія (птО2, мм.рт.ст.) 32,1 (7,0) 32,3 (6,4) 30,1 (6,2) 30,8 (6,4) Окружність (см) 20,3 (2,2) 20,4 (2,4) 20,2 (2,6) 20,3 (2,2) 34,7(3,1) 34,2 (3,0) 34,0(3,1) 34,6 (3,2) Суб'єктив ні симптоми (см) 4,3 (2,8) 3,7 (2,9) 4,6 (2,9) 5,2 (2,6) 4,0 (3,2) 3,2(3,1) 4,5 (2,7) 4,9(3,1) 4,5 (2,9) 4,1 (2,8) 4,5 (2,6) 5,1 (2,5) 3,3 (3,1) 2,7 (2,9) 3,7 (2,6) 4,2 (2,8) Результати вимірювань методом лазерної допплерівської флоуметрії при частоті 10-37кГц були вибрані як основна кінцева точка. Ці частоти розглядають як такі, що визначаються числом еритроцитів та їх р ухом (швидкістю потоку) у капілярах верхнього шару шкіри ніг. Через 6 тижнів лазерні допплерівські частоти (10-37кГц) зросли в групі, у якій приймали AS 195 (плюс 241,8±18,7 AU), але знизилися в гр упі, у якій приймали плацебо (мінус 41,0±18,7 AU, р